藿香提取液对大鼠小肠一氧化氮合酶分布的影响

目的 探讨藿香煎液促进小肠运动的可能机制。方法 32只Wistar大鼠随机分为藿香组及对照组，分别给大鼠灌服藿香水提取液或蒸馏水1小时、6小时后，用免疫组织化学的方法观察空、回肠组织一氧化氮合酶（NOSI）的分布变化。结果 灌服藿香水提液1小时后，空、回肠中NOSI阳性神经仍明显减少（P＜0.01或P＜0.05)，6小时后空肠肌间神经丛NOSI阳性神经仍明显减少（P＜0.05)，回肠中NOSI阳性神经无明显变化。结论 藿香对小肠动力的促进作用可能与空、回肠NOSI的分布减少有关。     

诱生型一氧化氮合酶抗体的制备与初步应用

目的制备诱生型一氧化氮合酶 (iNOS)特异性抗体并应用于iNOS检测。方法将iNOSN端片段装入原核表达载体pET 2 8a(+) ,在大肠杆菌BL2 1中表达 ,两步法纯化目的蛋白 ,使用纯化蛋白制备iNOS多克隆抗体。获得的抗血清用于小鼠巨噬细胞及小鼠脑缺血模型中iNOS的检测。结果得到具有较高表达量的融合蛋白 ,经两步纯化获得iNOSN端融合蛋白纯品 ,将此蛋白免疫家兔 ,得到iNOS多克隆抗体 ,Westernblot分析表明该抗体不与nNOS、eNOS交叉反应 ,而能检测组织、细胞中的iNOS。结论原核表达iNOSN端片段制备的iNOS抗体具有很好的反应性及特异性     

免疫比浊法测定抗环瓜氨酸肽抗体的临床应用研究

目的研究免疫比浊法(LATEX)测定抗环瓜氨酸肽抗体(Anti-CCP)对类风湿关节炎(RA)的临床诊断价值。方法选择2016年9月～2018年4月于我院就诊的疑似RA患者182例为研究对象,采集所有人员血清,分别采用LATEX和酶联免疫吸附法(ELISA)检测Anti-CCP水平,并比较结果。结果 LATEX对RA诊断准确率为93.96%(171/182),与金标准结果一致性较好(Kappa=0.837),灵敏度为98.50%,特异度为81.25%,阳性预测值93.62%;ELISA对RA诊断准确率为91.21%(166/182),与金标准结果一致性较好(Kappa=0.761),灵敏度为97.01%,特异度为75.00%,阳性预测值91.55%;LATEX检测高水平总变异系数(2.01%)低于ELISA法总变异系数(2.51%); LATEX检测低水平总变异系数(2.11%)低于ELISA法总变异系数(2.66%)。结论 LATEX检测Anti-CCP准确率高,敏感度和特异度好,有利于RA早期诊断。     

硝基精氨酸—赖氨酸三肽合成及其对一氧化氮合酶的抑制作用

液相合成法合成了由左旋精氨酸、左旋赖氨酸组成的硝基精氨酸-赖氨酸三肽HCl．Arg(NO     

症状性子宫肌瘤子宫内膜中一氧化氮合酶的表达及意义

目的 检测上皮型一氧化氮合酶(eNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在症状性子宫肌瘤子宫内膜腺上皮细胞中的表达,探讨NO/NOS在症状性子宫肌瘤中的作用.方法观察组71例中49例为症状性子宫肌瘤患者,22例无症状子宫肌瘤患者,32例正常子宫内膜组织,应用免疫组织化学SP法检测eNOS和iNOS在子宫内膜组织中的表达.结果 症状性子宫肌瘤子宫内膜中的eNOS和iNOS的表达在增生期和分泌期均明显高于对照组;eNOS和iNOS在症状性子宫肌瘤组的表达高于无症状性子宫肌瘤组.结论 eNOS和iNOS在症状性子宫肌瘤内膜组织中呈持续性过强表达,提示NO/NOS可能是造成子宫肌瘤月经改变的原因.     

神经生长因子在培养的大鼠脑皮质神经细胞抑制谷氨酸引起的一氧化氮合酶基因表达及一氧化氮释放(英文)

目的研究神经生长因子(NGF)对谷氨酸引起的原代培养的神经细胞一氧化氮(NO)释放和原生型一氧化氮合酶(cNOS)基因表达的影响。方法测定神经细胞的生存力来分析NGF的作用。用荧光分析法测定细胞上清液NO含量 ,用Northernblot杂交法观察cNOSmRNA表达。结果谷氨酸(0.5～2.0mmol/L)引起神经元大量死亡 ,NO过量释放。NOS抑制剂L_NAME(100μmol/L)及NGF(100μg/L)显著抑制谷氨酸引起NO释放及细胞死亡。NGF(50,100μg/L)显著降低谷氨酸引起的cNOSmRNA的高表达。结论NO介导了谷氨酸对皮质神经元的毒性 ,NGF通过抑制cNOS活性 ,降低NO释放来保护大脑皮质细胞对抗谷氨酸毒性     

高糖抑制牛主动脉内皮细胞诱导型和结构型一氧化氮合酶的表达

目的:研究高糖对新生小牛主动脉内皮细胞(BAEC)一氧化氮合酶(NOS)表达的影响。方法:BAEC培养并传代于含正常葡萄糖(5.5mmol·L~(-1),NGBAEC),高糖(25 mmol·L~(-1),HG-BAEC)或高渗(葡萄糖5.5 甘露醇19.5 mmol·L~(-1),Mann-BAEC)的无酚红M1640培养基.Griess反应检测脂多糖(LPS)诱导的一氧化氮(NO)产生.Westem blot法检测结构型NOS(ecNOS)及诱导型NOS(iNOS)表达。结果:LPS(0.25-2 mg·L~(-1))剂量依赖性刺激BAEC产生NO,并在LPS 1 mg·L~(-1)达峰值。高糖显著抑制LPS诱导的NO产生(亚硝酸μmol·L~(-1):HG-BAEC 43±8,vs NG-BAEC 71±11,Mann-BAEC 70±9,n=4,P<0.01)。同样,与NG-和Mann-BAEC相比,HG-BAEC iNOS表达下降39.9％和39.3％,ecNOS表达下降28％和24％,而NG-与Mann-BAEC之间,LPS诱导的NO产量和iNOS和ecNOS的表达无差别。结论:高糖抑制BAEC NO的释放,与NOS的低表达有关。     

神经系统疾病脑一氧化氮、一氧化氮合酶的变化

目的 通过测定癫痫患者及格林巴利综合征患者脑内NO及NOS的变化探讨NO的可能作用。方法 采集复杂部分性发作病人发作3日内及格林巴利综合征患者脑脊液测定NO及NOS的含量。结果 病性发作3日内脑内NO水平247.5000±79.6829μmol/L,NOS为1.6088±0.1831U/ml,格林巴利综合征病人NO水平为478.9024±180.2927μmol/L,NOS活性为1.2648±0.2308U/ml,均显著高于对照组。结论 NO参与了某些神经系统疾病的发病过程,在复杂部分性发作及格林巴利综合征中具有不同的作用机制。     

诱导型一氧化氮合酶抑制剂的特性:临床治疗展望(英文)

Nitric oxide (NO ) is a ubiquitous, naturallyoccurring molecule found in a variety of cell types andorgan systems. It is a double-edged sword, beneficialas a messenger or modulator and for immunology self-defense, but potentially toxic. The formation andsignal function of nitric oxide are mainly modulated bynitric-oxide synthase (NOS ). Up to the present, anumber of diseases, including circulatory shock,atherosclerosis, cardiac allograft rejection, chronicinflammation, cardiac infarction, cancer and so on,have been demonstrated that their pathogenesis may beinvolved in the sustained production of large quantities     

Anti-epitope antibody, a novel site-directed antibody against human acetylcholinesterase

AIM: To construct synthetic antigens using the epitope of human brain acetylcholinesterase (hbAChE) for induc- tion and detection of the specific antibody against the epitope, and to analyse the immunogenicity of the antibody. METHODS: The epitope (RTVLVSMNYR, amino acids 143-152) of hbAChEwas chemically synthesized, coupled with the carrier protein keyhole limpet hemocyanin (KLH) to construct an artificial immunogen (KLH-epitope), and injected into rabbits to raise antibody. T…     

β肾上腺素受体激动对人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶磷酸化的影响

目的：观察血管内皮β肾上腺素受体激动对内皮一氧化氮合酶（eNOS）蛋白表达及磷酸化水平的影响,阐明β受体激动后eNOS调节的分子机制。方法：异丙肾上腺素（ISO）1μmol/L与培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）孵育30min后,裂解细胞并用免疫沉淀法分离eNOS蛋白,运用同位素两步色谱法（L-[^3H]精氨酸转化法）检测eNOS活性;蛋白免疫印迹增强化学发光法检测eNOS表达水平和eNOS蛋白丝氨酸磷酸化水平,并观察高选择性β1或β2肾上腺素受体阻断剂对上述作用的影响。结果：ISO与内皮细胞孵育30min引起eNOS活性增高;不影响eNOS蛋白表达,但丝氨酸磷酸化水平明显增加;选择性β2受体阻断剂ICI 118551可完全阻断ISO的作用,而选择性β1受体阻断剂CGP 20712A无影响。结论：ISO通过提高eNOS丝氨酸磷酸化水平增加eNOS活性,这种作用是通过β2肾上腺素受体介导的。     

人m3受体单克隆抗体的研制

目的：制备抗人m3受体肽链的单克隆抗体。方法：人工合成人m3受体亚型特异的细胞外氨基端肽链段,与血蓝蛋白偶联,免疫Balb/c小鼠,制备m3受体的单克隆抗体。用PEG－6000二步沉淀法与Sephadex G-50柱层析分离纯化技术。用ELISA、免疫组织化学和放射配基法鉴定抗体的特异性。结果：抗体与m3肽链、大鼠唾液腺及大脑皮质膜蛋白发生特异性的结合,不与m4肽链发生结合。抗体能抑制^3H-QNB与大鼠唾液腺膜蛋白的结合,不抑制^3H-QNB与大鼠心肌的结合,也不抑制^3H-PZ与大鼠大脑皮质膜蛋白结合。免疫组织化学结果显示唾液腺呈棕色阳性反应,而心肌呈阴性反应。结论：本研究制备的人m3受体单克隆抗体具有高的特异性,可专一性识别m3受体。     

携带人内皮一氧化氮合酶基因的AAV重组表达载体的构建

目的：构建一个新型的携带有人内皮一氧化氮合酶(eNOS)cDNA的质粒载体并研究其体外表达,以用于基因治疗．方法：eNOS cDNA插入到腺相关病毒质粒pSNAV-1的EcoR I位点．该质粒的启动子为CMV启动子,并携带有腺相关病毒的末端重复序列．构建好的质粒转染到两种哺乳动物细胞BHK和C2C12细胞中,通过PCR和RT—PCR分别检测eNOS cDNA和mRNA．结果：限制性内切酶分析证明,eNOS cDNA以正确的方向插入到pSNAV-1质粒中．PCR检测表明pSNAV—eNOS被转入BHK和C2C12细胞中．RT—PCR检测表明转染有pSNAV—eNOS的细胞可表达eNOS mRNA．结论：成功构建的pSNAV—eNOS可在体外培养的哺乳动物细胞中表达人eNOS mRNA．     

丙型肝炎病毒单克隆抗体的制备及其鉴定

目的：以基因工程表达的丙型肝炎病毒抗原蛋白（HCAg）为抗原，建立分泌单克隆抗体（McAb）的杂交瘤细胞系．并对其分泌的McAh进行鉴定。方法：用纯化HCV基因工程表达抗原（HCAg）免疫Balb／c小鼠，取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备McAb。采用ELISA及分片断鉴定技术进行鉴定。结果：筛选出5株能稳定分泌特异性抗-HC的McAb杂交瘤细胞株，经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体，特异性强，效价高。与不同抗原蛋白的ELISA反应呈特异性阳性反应。分片断鉴定结果显示，所获5株McAb主要为抗HCV核心蛋白和非结构蛋白NS3。结论：此5株丙肝杂交瘤细胞株分泌的抗体对丙肝抗原具有特异亲和性，为丙型肝炎病毒抗原诊断试剂的研制提供了关键技术基础。     

抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的产生

将SP 2/O-Ag 14/小鼠骨髓瘤细胞和用乙酰胆碱脂酶免疫的Balb/c小鼠脾细胞在PEG-1000作用下进行融合,获14株分泌抗乙酰胆碱酯酶单克隆抗体的杂交瘤细胞系。用酶联免疫吸附试验(ELISA)对其分泌的抗体滴度进行了检测,其免疫鼠腹水滴度最高可达1:2 560 000。对其中5株杂交瘤分泌的滴度很高的抗体做了特异性交叉免疫试验,仅与乙酰胆碱脂酶发生特异反应,与其它4种酶(胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶及胰蛋白酶)无交叉反应;对其中12株杂交瘤分泌的抗体还进行了免疫球蛋白类型鉴定及染色体检查。上述杂交瘤细胞经3～6个月稳定传代后冻存于液氮中1年多后复苏,其抗体水平未见下降。     

力平脂对兔粥样硬化血管壁组织内内皮素-1和一氧化氮合酶mRNA表达的影响(英文)

目的:探讨力平脂消退动脉粥样硬化的作用机制民。方法:给兔喂饲高脂饲料8周,加腹主动脉内皮损伤造成腹主动脉粥样硬化模型,然后用力平脂15mg·kg~(-1)·d~(-1)治疗16周。粥样硬化血管壁组织中内皮素(ET)-1和一氧化氮合酶(NOS)mRNA的表达分别采用原位杂交和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定。结果:力平脂治疗16周后,ET-1 mRNA表达明显减少,其阳性杂交颗粒的积分光密度(IOD)和面积分别由粥样硬化组的(65188±10113)和(3028±352)μm~2下降至(49113±16868)和(2448±621)μm~2。力平脂也可降低诱导型NOS mRNA的表达,使IOD和面积分别下降25.5％和53.3％,但通过RT-PCR测得的内皮型NOS mRNA表达增加。结论:恢复ET-1 mRNA/NOS mRNA的平衡可能是力平脂消退动脉粥样硬化的机制之一。