细胞外基质降解酶系和肾间质纤维化

肾间质纤维化(RIF)是慢性肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同途径。大量的研究表明，细胞外基质降解酶系统的异常在RIF的发生发展中起着重要的作用。有关于基质降解酶系统在RIF发生发展过程中的确切作用机制的认识，对认识和了解RIF的细胞分子机制，寻找治疗或者预防RIF的新方法，将会产生重要影响。     

细胞外基质降解酶系和肾间质纤维化

肾间质纤维化 (RIF)是慢性肾脏疾病进展到终末期肾功能衰竭的共同途径。大量的研究表明 ,细胞外基质降解酶系统的异常在RIF的发生发展中起着重要的作用。有关于基质降解酶系统在RIF发生发展过程中的确切作用机制的认识 ,对认识和了解RIF的细胞分子机制 ,寻找治疗或者预防RIF的新方法 ,将会产生重要影响。     

基质金属蛋白酶1组织抑制剂短发夹式RNA对肾小球系膜细胞凋亡及细胞外基质的影响

目的 构建靶向基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达载体，并观察其对大鼠肾小球系膜细胞的凋亡和细胞外基质分泌的影响。方法 构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA， 利用该载体介导两个TIMP-1 shRNA，分别为TIMP-1 shRNA1和TIMP-1 shRNA2。用荧光显微镜观察EGFP的表达。采用 RT-PCR和Western 印迹测定宿主细胞TIMP-1在基因和蛋白水平的沉默效果。用 ELISA检测细胞外基质成份的表达。以流式细胞仪检测细胞的凋亡情况。 结果 (1)测序证实成功构建了针对TIMP-1的shRNA表达载体pEGFP-1/TIMP-1 shRNA；(2)荧光显微镜下，转染组细胞内均见绿色荧光；未转染组未见绿色荧光；(3)基因和蛋白水平的检测显示，与阴性对照组相比，TIMP-1 shRNA1组的TIMP-1明显受抑制(P < 0.05)，TIMP-1 shRNA2组抑制效果不明显；(4)ELISA结果显示， 正常对照组FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达不随时间的延长而变化；未转染组和阴性对照组在高糖诱导下， FN、Ⅳ型胶原蛋白和 LN的表达随时间的延长而增加；48、72 h的shRNA1组、抗体组和反义组对 FN、Ⅳ型胶原蛋白、LN表达明显低于阴性对照组，以shRNA1组最明显；(5)流式细胞仪结果显示，高糖诱导的各组细胞凋亡率随时间的延长而升高。在同一时间点shRNA1组细胞的凋亡率最高，反义组细胞的凋亡率次之，48 h和72 h的shRNA1组细胞的凋亡率与其他各组比较， 差异有统计学意义(P < 0.05)。 结论 pEGFP-1介导的TIMP-1 shRNA1能更加有效的抑制大鼠肾小球系膜细胞中TIMP-1的表达，促进肾小球系膜细胞的凋亡并使细胞外基质的成份表达下降。     

内皮素1对人肾小球基质金属蛋白酶3及其组织抑制剂1表达的影响

内皮素1(ET-1)是一种强烈的缩血管活性肽，能够促进肾小球系膜细胞增殖及多种细胞外基质(ECM)组分的合成，但ET-1对ECM降解代谢的影响还不甚清楚。基质金属蛋白酶3(MMP-3)是一种基质溶解酶，能够降解多种ECM组分，活性受其组织抑制物1(TIMP-1)所抑制。本实验通过研究ET-1与MMP-3／TIMP-1的关系探讨ET-1对肾小球ECM降解代谢的影响。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物—1,—2及凝？…

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI1640培养12h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

补肾活血汤治疗系膜增生性肾炎的临床研究

目的:探讨活血化瘀中药补肾活血汤对系膜增生性肾炎的疗效及其作用机制.方法:将96例经皮肾穿刺活检证实的系膜增生性肾炎患者分成两组,两组患者在接受一般及对症治疗的同时,治疗组50例用补肾活血汤加苯那普利(洛汀新)治疗,对照组46例加用苯那普利治疗.治疗前及治疗2月后分别观察24 h尿蛋白定量、血尿素氮、肌酐、尿红细胞、尿纤维蛋白原降解产物(FDP)、尿补体C3、尿N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG)及尿β2-微球蛋白(β2-MG)的变化.结果:两组治疗前、后24 h尿蛋白定量及尿红细胞均有显著下降.补肾活血汤治疗组总有效率明显高于苯那普利对照组(P＜0.05).治疗组经治疗后尿FDP、尿NAG及尿β2-MG有明显下降,而对照组则下降不明显.结论:补肾活血汤对系膜增生性肾炎具有治疗作用,其作用机制可能与降低尿中FDP有关.     

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响

肝素对肾小球系膜细胞和细胞外基质的影响王宗谦周希静近年来，单纯肝素或肝素并用激素治疗肾病综合征获良好疗效。Ｐｕｒｋｅｒｓｏｎ等报道，Ｎ－Ｄｅｓｕｌｆａｔｅｄ／ＡｃｅｔｙｌａｔｅｄＨｅｐａｒｉｎ可能延缓肾衰进程，但机理尚未明。我们通过观察肝素对体外培养...     

血管内皮生长因子调节小鼠系膜细胞基质金属蛋白酶及其组织抑制物的表达

目的：研究血管内皮生长因子（VEGF）对体外培养的小鼠系膜细胞表达基质金属蛋白酶（MMPs)和金属蛋白酶组织抑制物（TIMPs)的调节作用。方法：对体外培养的小鼠系膜细胞应用人重组VEGF孵育12h，应用蛋白质印迹法检测细胞培养液MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2的蛋白质水平；应用白明胶酶谱法检测MMP2、MMP9的活性；应用RT－PCR检测系膜细胞TIMP1、TIMP2 mRNA表达。结果：VEGF（10ng/ml)可提高小鼠系膜细胞MMP2和MMP9蛋白质释放（和对照组相比分别提高43％和34％，P＜0．05），MMP2和MMP9活性分别提高17％和26％（P＜0．05）。同时，VEGF可呈剂量依赖地下调小鼠系膜细胞TIMP1和TIMP2蛋白质和mRNA的表达，VEGF（25ng/ml)可减少小鼠系膜细胞TIMP1和TIMP2蛋白质释放分别为43％和67％（P＜0．05）；并抑制TIMP1和TIMP2 mRNA的表达（分别下降41％和59％，P＜0．01）。结论：VEGF使系膜细胞MMPs蛋白质表达增加、活性增强，同时下调TIMPs mRNA和蛋白质的表达，可能在增生性肾小球肾炎的发病机制中起一定的作用。     

肾脏细胞增殖与细胞外基质的关系

肾脏细胞增殖与细胞外基质，是当今肾病界研究的热点之一。深入探讨它们之间的关系，有助于阐明肾小球肾炎进展为小球硬化的发病机理，为阻止肾单位的丧失提供新的治疗方法。     

滋肾清热活血方治疗大鼠系膜增生性肾炎报告

系膜增生性肾小球肾炎 (含ＩｇＡ介导的ＭｓＰＧＮ )是我国肾小球疾病中常见的病理类型。 1985年南京报道占5 7% ,北京占 6 9.9%。日本在 2 0年的观察中发现 ,超过30 %的ＩｇＡ介导的ＭｓＰＧＮ病人进展到终末肾功衰。系膜细胞增生和系膜基质的增多最终导致肾小球硬化。大量研究显示中医药对肾脏病有巨大潜力和良好治疗前景 ,本课题采用ＳＤ大鼠ＭｓＰＧＮ模型 ,以肾小球培养上清中白细胞介素 - 1,肿瘤坏死因子 -α的活性等指标观测滋肾清热活血方对ＭｓＰＧＮ的防治作用 ,从细胞因子水平为中医药防治ＭｓＰＧＮ进行性恶化提供实验依据。材…     

连黄降浊颗粒对5/6肾切除大鼠肾功能和肾皮质细胞外基质积聚的影响

目的：观察连黄降浊颗粒对5/6肾切除大鼠肾功能和肾皮质细胞外基质（ECM）积聚的影响。方法：将45只Wistar大鼠随机取8只为正常对照组,余用5/6肾切除法建立慢性肾衰竭（CRF）动物模型,将造模成功后的大鼠随机分为模型组、尿毒清颗粒组（对照组）、连黄降浊颗粒低剂量组（低剂量组）、连黄降浊颗粒高剂量组（高剂量组）,分别给予相应浓度和剂量的药物。实验期间测定大鼠的肾功能、尿蛋白,治疗12周后观察其肾脏病理改变,免疫组化法检测肾小球Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤连蛋白（FN）和肾皮质基质金属蛋白（MMP-2）和金属蛋白酶组织抑制物（TI MP-2）蛋白表达。结果：连黄降浊颗粒能明显改善CRF大鼠肾功能、减少尿蛋白的排出（P〈0.05～0.01）,减轻肾脏病理损害;连黄降浊颗粒能下调TI MP-2蛋白表达,增加MMP-2活性,抑制了FN、ColⅣ在肾组织的表达（P〈0.01）,减轻ECM积聚。结论：连黄降浊颗粒可明显改善肾功能,增加肾脏MMP-2活性,降低TI MP-2表达,增加ECM降解,减轻肾小球硬化。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

良性前列腺增生组织细胞外基质的研究

利用组织化学和免疫组织化学的方法系统地观察了细胞外基质成分Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原和纤维粘连蛋白在正常前列腺和良性前列腺增生组织中的分布情况。结合计算机辅助图像分析方法对其表达量进行定量分析。结果表明，Ⅰ、Ⅲ型胶原主要分布于前列腺组织的间质部分，纤维粘连蛋白（ＦＮ）和Ⅳ型胶原除呈线状分布于基底膜外，间质中亦可见较多的ＦＮ和Ⅳ型胶原的表达。Ⅳ型胶原和ＦＮ在正常前列腺组织中的相对含量分别为０．１０１±０．０３１和０．０８６±０．０２７，它们在ＢＰＨ组织中的相对含量则分别为０．１６５±０．０３４和０．１１０±０．０２２，两组之间有显著性差异（Ｐ＜０．０１）。     

降糖通脉片对人肾小球系膜细胞及细胞外基质影响的实验研究

目的：探讨降糖通脉片对人肾小球系膜细胞（MC）及其细胞外基质（ECM）的影响。方法;采用血清药理学方法和体外人肾小球系膜细胞培养技术,观察具有清热化瘀,滋阴补气作用的中药降糖通脉片对MC增殖及其ECM成分的影响。结果：降糖通脉片具有抑制MC增殖及ECM成分中纤维连接蛋白（FN）,层粘连蛋白（LN）和IV型胶原（ColIV)的作用,该抑制作用具有一定的量效关系。结论：MC是降糖通脉片发挥治疗作用的 重要靶细胞,抑制MC增殖和ECM的产生可能是该方延缓肾小球硬化的重要机制之一。     

阿托伐他汀对系膜增殖性肾炎大鼠肾组织细胞外基质和纤溶酶原激活剂抑制物-1表达的影响

目的：观察阿托伐他汀对系膜增殖性肾炎（MsPGN）大鼠肾组织细胞外基质（ECM）和纤溶酶原激活剂抑制物-1（PAI-1）表达的影响，探讨其肾脏保护作用的机制。方法：采用抗胸腺细胞血清诱发的MsPGN大鼠模型，将SD大鼠随机分为正常对照组、肾炎模型组、小剂量阿托伐他汀治疗组（8mg·kg^-1·d^-1）和大剂量阿托伐他汀治疗组（16mg·kg^-1·d^-1）。治疗12d后。检测各组大鼠血总胆固醇（CHOL）、甘油三酯（TG）、血肌酐（Scr）和24h尿蛋白，以及肾组织Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）、纤维结合蛋白（FN）和PAI-1的表达。结果：阿托伐他汀治疗组大鼠24h尿蛋白、肾组织Col Ⅳ、FN和PAI-1 mRNA的表达明显下降。肾组织病理改变明显改善，与模型组相比有统计学差异（P〈0．05），且呈剂量依赖关系。其中肾炎模型组尿蛋白（30．34±0．62）mg／d。阿托伐他汀小剂量治疗组（21．17±0．79）mg／d，大剂量治疗组（9．77±0．54）mg／d。同时，各组血脂水平无明显差异（P〉0．05）。结论：阿托伐他汀可显著改善MsPGN大鼠肾脏病变，抑制肾组织ECM成分和PAI-1的表达。     

肾康注射液与苯那普利对肾小球系膜细胞外基质抑制作用的血清学对比研究

目的：探讨肾康注射液与苯那普利对人肾小球系膜细胞外基质（ECM）不同成分的抑制作用强度,方法：采用体外培养的人肾小球系膜细胞（MC）技术和血清药理学方法,观察具有降逆泄浊,益气活血作用的中药肾康注射液及苯那普利对ECM不同成分的影响。结果：肾康注射液与苯那普利对ECM中纤维连接蛋白（FN）,层粘连蛋白（LN）和IV型胶原（CoⅣ）均具有一定抑制作用,但在等效剂量浓度下,肾康注射液对MC的抑制作用估于苯那普利,结论：MC是肾康注射液发挥治疗作用的重要靶细胞之一,抑制ECM聚积可能是该方延缓肾小球硬化的机制之一。     

基质金属蛋白酶9、3和金属蛋白酶组织抑制物1在原发性膜性肾病肾小球内的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶3（MMP-3）和金属蛋白酶组织抑制物1（TIMP-1）在原发性膜性肾病（IMN）患者肾小球内的表达变化及其与蛋白尿、Scr的关系。方法用免疫组织化学技术分别检测44例IMN患者（IMN组）与6例正常对照者（对照组）肾小球内MMP-9、MMP-3和TIMP-1的表达。结果MMP-9及MMP-3在对照组正常肾组织的肾小管上皮细胞、肾间质和肾小球足细胞有少量表达；在IMN组肾小球足细胞、系膜细胞、肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN组肾小球内MMP-9及MMP-3的表达均较对照组显著增强（P〈0．05）。TIMP-1在对照组正常肾组织的肾小管上皮细胞有少量表达，肾小球内无表达；在IMN组肾小球足细胞、肾小管上皮细胞有表达。IMN组肾小球内TIMP-1的表达较对照组显著增强（P〈0．01）。IMN组24h尿蛋白定量显著高于对照组（P〈0．01）。Ⅱ期MN组肾小球MMP-9／TIMP-1及MMP-3／TIMP-1比值较Ⅰ期MN组明显下降（P〈0．01）。IMN组肾小球内MMP-9的表达与Scr呈负相关（r=-0．02，P〈0．05）；TIMP-1的表达与Scr呈正相关（r=0．34，P〈0．05）。结论MMP-9与TIMP-1从正反两方面影响IMN患者肾功能的改变。MMP-9、MMP-3的异常表达与IMN患者蛋白尿之间可能相关；IMN患者肾小球MMP／TIMP比值失衡可能与IMN患者肾小球基底膜增厚相关。     

转化生长因子-β对人肾小球系膜细胞结缔组织生长因子及细胞外基质成分表达的影响

目的:探讨转化生长因子-β(TGF-β)对人肾小球系膜细胞(HMCs)结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质(ECM)成分表达的影响.方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹技术,观察不同时间TGF-β1对HMCs CTGF mRNA及其蛋白质表达的影响,同时观察对Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原和纤维结合蛋白(FN)mRNA表达的影响.结果:在正常培养情况下,HMCs有CTGF mRNA及其蛋白质的表达.HMCs在TGF-β1刺激后,CTGFmRNA表达明显增加,6 h达到高峰,可持续增高到24 h;CTGF蛋白表达12 h达到高峰,可持续增高至24 h.Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原mRNA表达逐渐增加,24 h明显增加并达到高峰.FN mRNA12 h达到高峰,24 h后开始回落.结论:HMCs可表达CTGF.TGF-β可诱导体外培养的HMCsCTGF及ECM成分高表达.     

地塞米松及环磷酰胺对系膜细胞一氧化氮合成酶及细胞外基质的影响

系膜细胞(Mc)在肾小球疾病的发生和发展过程中起到了非常重要的作用。近年来发现一氧化氮(N0)是引起肾脏疾病的重要介质之一，一氧化氮及其合成酶(iNOS)与肾小球硬化密切相关。地塞米松(Dx)、环磷酰胺(cTx)是临床上用于治疗肾小球疾病的常用药。2者是否具有减轻肾小球硬化的作用、其作用机制是否与N0有关?我们从细胞、分子水平来探讨上述问题。     

低分子量肝素对肾小球系膜细胞及细胞外基质作用的研究

目的：探讨低分子量肝素（LMWH）对体外,体内肾小球系膜细胞及细胞外基质增生的影响。方法：体外试验在培养人肾小球系膜细胞中进行;以氮蓝四唑盐方法测定LMWH对系膜细胞增殖的影响;间接竞争抑制酶联免疫吸附法观察LMWH对细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）的影响。体内试验在大鼠抗Thy1.1系膜增生性肾小球肾炎模型（MnsPGN)中进行,用定量病理分析观察LMWH对系膜细胞增殖和系膜基质增殖的影响。结果：体外试验显示,LMWH明显抑制血清刺激的系膜细胞增殖（与对照组比较,P＜0．05）,呈量依赖关系;并减少系膜细胞培养上清及细胞层的FN含量（与对照组比较,P＜0．05）,体内试验中,MsPGN大鼠LMWH治疗组第5及第14d的系膜细胞增殖,系膜基质蓄积均明显减轻（与对照组比较P＜0．05）,结论LMWH能够抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质增生。