细菌脂蛋白诱导脂多糖交叉耐受及与细胞骨架蛋白的关系

目的观察小剂量细菌脂蛋白（BLP）是否可诱导人单核-巨噬细胞株（THP-1）对脂多糖（LPS）产生交叉耐受以及小剂量脂多糖（LPS）是否可诱导THP-1对BLP产生交叉耐受，并初步探讨细胞骨架actin在其中的可能作用。方法采用THP-1建立小剂量BLP诱导THP-1对BLP耐受的细胞模型以及小剂量LPS诱导THP-1对LPS耐受的细胞模型。采用ELISA试剂盒测定相关的炎症因子浓度。结果大剂量BLP（100ng／ml）及大剂量LPS（100ng／m1）均可激活THP-1细胞，使培养上清液中TNF—α、IL-1β、1L-6的浓度显著增加；小剂量BLP（10ng／ml）并不能诱导THP-1细胞的炎症激活；采用小剂量BLP（10ng／ml）预处理THP-1细胞后，大剂量BLP（100ng／ml）和LPS（100ng／ml）均不能诱导THP-1细胞的炎症激活，TNF—α、IL-1β、IL-6的合成无明显改变；采用小剂量LPS（10ng／ml）预孵育THP-1细胞12h可显著抑制大剂量LPS（100ng／ml）对THP-1细胞的炎症激活，TNF—α、IL-1β、IL-6生成均明显减低；采用小剂量LPS（10ng／ml）预处理THP-1 12h后再用大剂量BLP（100ng／ml）进行刺激，在预处理后6，24h，除TNF—α外，炎症因子IL-1β、IL-6均无明显改变。actin骨架聚集破坏剂[鬼笔环肽（phalloidin）]可取消BLP耐受、BLP交叉耐受及LPS耐受。结论小剂量BLP可诱导THP-1细胞对LPS的交叉耐受，而小剂量LPS仅可部分诱导THP-1细胞对BLP的交叉耐受，其产生机制与actin骨架有关。     

131I治疗Graves病血清sFas、TNF-α和sTNFR2水平的观察

Graves病（GD）属于器官特异性自身免疫性疾病，其引发甲状腺功能亢进（甲亢）的病因至今尚不完全清楚．发病机制与细胞凋亡被抑制和免疫功能缺陷有关。^131I是治疗GD甲亢患者有效的手段之一，利用其β射线对患者甲状腺滤泡集中照射达到治疗目的。本研究试图通过监测^131I治疗前后GD患者血循环中可溶性细胞凋亡相关蛋白（sFas）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α）及可溶性肿瘤坏死因子受体2（sTNFR2）的含量变化，观察^131I治疗对GD患者甲状腺细胞凋亡相关指标的影响。     

雌激素对紫外线照射后人角质形成细胞DNA损伤及分泌细胞因子IL-10、IL-6和TNF-α的影响

目的探讨雌激素（17β-estradiol,17β-E2）对B段紫外线（UVB）辐射引起皮肤损伤的保护作用及其保护机制。方法体外培养人永生化角质形成细胞（HaCaT）,并将其随机分为4组：对照组、UVB组、E2组和E2＋UVB组,分别给予不同的处理,经UVB照射后6 h,收集各组细胞上清液,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）方法检测UVB照射后6 h各组细胞上清液中白细胞介素10（IL-10）、白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌量的变化;UVB照射后12 h,收集各组细胞,采用单细胞凝胶电泳技术检测各组细胞的DNA损伤程度。结果与对照组相比较,UVB组IL-10、IL-6和TNF-α的含量显著升高（P〈0.05）;经E2预处理后,E2＋UVB组细胞上清液中IL-10、IL-6和TNF-α的含量均显著降低（P〈0.05）。单细胞凝胶电泳检测结果显示,UVB组和E2＋UVB组均出现彗星样拖尾,应用CASP和SPSS软件分析统计后得出,UVB组细胞尾部DNA百分含量、尾长和尾矩与对照组相比具有统计学意义;经E2预处理后,UVB对细胞损伤程度明显降低,具有统计学意义（P〈0.05）。结论雌激素可降低UVB引起的IL-10、IL-6和TNF-α的产生,并能对抗UVB照射对细胞DNA的损伤,从而减轻紫外线辐射引起的皮肤损伤。     

脂多糖对受照小鼠血清IL-10、IL-6和TNF-α水平的影响

目的 探讨6 Gy137Csγ射线一次性全身照射后,小鼠血清中白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-o)水平的变化及对脂多糖刺激反应性的远期影响.方法 将实验小鼠分为假照射组和照射组,假照射组不接受照射,照射组给予6Gyγ射线照射.照射后10周,将假照射组和照射组小鼠按组别分别提前24 h和1h腹腔注射脂多糖(20 mg/kg),对照组注射生理盐水(100μl/只).取小鼠外周血,利用酶联免疫吸附技术检测小鼠血清中IL-10、IL-6和TNF-t的水平.结果 假照射组小鼠在给予脂多糖刺激1h后,血清中IL-10、IL-6和TNF-α水平与其对照组相比均显著升高(t=7.31、2.71和15.09,P分别为＜0.01、＜0.05和＜0.01).照射组小鼠在给予脂多糖刺激1h后,血清中IL-10、IL-6和TNF-α水平与其对照组相比均显著升高(t=4.14、7.18和5.14,P均＜0.01).与假照射组相比,照射组小鼠在给予脂多糖刺激24h后,TNF-α和IL-6水平无明显变化,IL-10水平升高了19.9％(t=2.84,P＜0.05).结论 经6Gyγ射线照射后10周,小鼠免疫调节功能尚未完全恢复;在接受脂多糖刺激后,假照射组和照射组小鼠的抗感染能力也有差异.脂多糖对辐射后小鼠血清中IL-10、IL-6和TNF-α水平的影响及其意义仍需进一步研究.     

CD40L、MMPs和a-GMP-140在急性冠脉综合征致病中的作用

目的探讨CD40L、MMPs和a—GMP-140在急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）致病中的作用。方法选择ACS患者131例,按照冠状动脉狭窄评分（coronary artery score,CAS）,分为轻度36例,中度53例,重度42例,选择对照组60例。采用酶联法测定各组CD40L、血小板聚集率（platelet aggregation,PAR）、基质金属蛋白酶（MMP—s）、a-血小板颗粒膜蛋白（a-GMP-140）。结果ACS患者各组CD40L、MMP～s、a—GMP-140和PAR等指标较对照组均显著升高。各组CD40L、MMP—S、a—GMP-140和PAR等指标随冠状动脉狭窄程度的加重而增高。结论CIMOL、MMP—S、a-GMP-140等分子在促进冠状动脉炎性损害,斑块基质纤维帽破裂,血栓形成中形成链式反应,该反应水平的增高在ACS的致病作用中有着重要意义。     

内毒素／感染性休克时循环血中TNF的动态变化及其发生机制

探讨不同休克条件下循环血中肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的动态变化规律及其可能的发生机制。实验发现内毒素休克时ＴＮＦ呈陡直的单峰曲线，持续时间较短（３～４小时）；绿脓杆菌败血症休克时ＴＮＦ呈平坦的单峰曲线，持续时间较长（６小时）；阑尾结扎穿孔（ＡＬＰ）感染性休克时ＴＮＦ呈前峰极低、后峰较高的双峰曲线，持续时间更长（１６小时）。结合不同剂量脂多糖（ＬＰＳ）在体外对肝Ｋｕｐｆｆｅｒ细胞释放ＴＮＦ的影响以及不同休克条件下血浆ＴＮＦ的变化特点，结果提示内毒素、绿脓杆菌败血症、ＡＬＰ感染性休克时循环血中ＴＮＦ不同动态变化特点可能主要取决于循环血中ＬＰＳ的不同浓度和不同持续时限。     

子宫内膜异位症患者腹水中TNF-α、TNF-β的测定

目的：了解子宫内膜异位症（内异症）患者腹水中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和肿瘤坏死因子-β（TNF-β）的水平。方法：应用ELISA法,检测42例内异症患者（Ⅰ-Ⅱ期22例、Ⅲ-Ⅳ期20例）腹水TNF-α、TNF-β的浓度,并与对照组40例非内异症患者进行比较,分析TNF-α、TNF-β的浓度与内异症的相关性。结果：内异症组患者腹水中TNF-α、TNF-β的浓度明显高于对照组（P〈0.01和P〈0.01）,特别是Ⅲ、Ⅳ期比Ⅰ、Ⅱ期增高更明显（P〈0.01）,且两者的浓度呈正相关,相关系数为0.963。结论：内异症患者腹水中TNF-α、TNF-β明显增高,且与疾病严重程度相关。     

肿瘤坏死因子对胃癌细胞的作用及机理研究

 为探讨肿瘤坏死因子(TNF)对胃癌细胞的作用及其机理,运用细胞克隆抑制实验、细胞毒性实验、<'3>H-TdR掺入实验、流式细胞术及电镜技术,观察了TNF对胃癌细胞的作用及特点,同时观察TNF与化疗药物联合运用的抗肿瘤作用特点.结果显示:TNF在低浓度下即能抑制胃癌细胞克隆形成,浓度大于3×10<'4>U/ml时,细胞毒性作用明显,且对胃癌细胞DNA合成有抑制作用,均呈浓度依赖性.透射电镜超微结构观察发现TNF促使胃癌细胞坏死、溶解.流式细胞术显示TNF能抑制胃癌细胞增殖,阻止其由G<,2>M期进入G<,0>/G<,1>期.TNF与化疗药物合用,细胞毒作用成倍提高.提示:TNF能抑制胃癌细胞克隆形成;能抑制胃癌细胞DNA合成;具有细胞毒作用;能阻止其由G<,2>M期进入G<,0>/G<,1>期;促使胃癌细胞坏死而实现其抗肿瘤作用.与化疗药合用有协同作用.     

肿瘤坏死因子对胃癌细胞增殖周期的作用研究

 为探讨肿瘤坏死因子对胃癌细胞的作用机理,运用流式细胞术测定其对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的作用.结果显示经肿瘤坏死因子作用后,胃癌细胞SGC-7901增殖指数明显下降(P<0.01),72 h内G<,2>M期细胞由6.5%上升到49.8%(P<0.01).而G<,0>.G<,1>期和S期细胞则显著下降(P<0.01);72 h后其作用减弱.表明肿瘤坏死因子能抑制SGC-7901细胞增殖,将SGC-7901细胞阻抑在细胞增殖周期中的G<,2>M期,且在72 h内达高峰.为临床合理运用肿瘤坏死因子治疗胃癌提供实验依据.     

失血性休克时重要器官组织内某些细胞因子表达,释放及其作用探讨

目的：探讨休克后重要器官内几种主要细胞因子的变化规律、产生机制及其作用．方法：采用ＲＴ－ＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ等方法观察失血性休克时肝、肺、肾、肠组织内ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达，ＴＮＦα释放，器官功能损害及内毒素组织移位等变化．结果：（１）失血性休克及复苏后，组织内ＴＮＦα、ＩＬ－１β、ＩＬ－６ｍＲＮＡ可相继表达增加，以ＴＮＦα表达最早，ＩＬ－６虽表达较晚，但持续时间较长；（２）休克及复苏后，肝、肺、肾组织及循环内ＴＮＦα水平均有不同程度升高，其中组织内ＴＮＦα水平在数量和持续时间上大于循环内ＴＮＦα水平；（３）失血性休克时肝、肺、肾功能均有不同程度受损；（４）休克后肝、肺、肾组织内毒素水平先后明显升高，且与休克后组织内细胞因子基因表达、ＴＮＦα释放有一定内在联系．结论：休克后组织内细胞因子表达、释放在局部器官损害中起一定作用，其产生与休克后内毒素的组织移位有关．     

血吸虫病患者血清肿瘤坏死因子水平及临床意义

用双抗体夹心法检测了急性和慢性血吸虫病患者血清肿瘤坏死因子的含量。结果：急性组ＴＮＦ－ａ的水平显著增高，并与患者体温呈正相关；慢性组则与正常对照无明显差异。     

Synergistic anti-oral cancer effects of UVC and methanolic extracts of Cryptocarya concinna roots via apoptosis,oxidative stress and DNA damage

Purpose Radiation combined with natural products may improve the radiosensitivity of cancer cells. This study investigated the potential of a combined modality treatment with Ultraviolet C (UVC; wavelength range 200–280?nm) and our previously identified anti-oral cancer agent (methanolic extracts of Cryptocarya concinna roots; MECCrt) in oral cancer cells.

Materials and methods The mechanism of the possible synergy of UVC and MECCrt was explored in terms of cell viability, cell cycle, apoptosis, reactive oxygen species (ROS), mitochondrial membrane potential (MitoMP), and DNA damage analyses.

Results In cell viability (%) at 24?h treatment, the low doses of UVC (14 J/m²) and MECCrt (10 μg/ml) resulted in slight damage to human oral cancer Ca9-22 cells (83.2 and 80.4) but was less harmful to human oral normal HGF-1 cells (93.4 and 91.8, respectively). The combined treatment of UVC and MECCrt (UVC/MECCrt) had a lower viability (54.5%) than UVC or MECCrt alone in Ca9-22 cells but no showed significant change in HGF-1 cells. In Ca9-22 cells, the expression of flow cytometry-based apoptosis (sub-G1 phase, annexin V, and pancaspase assays) was significantly higher in UVC/MECCrt than in UVC or MECCrt alone (p < 0.0001). Using flow cytometry, intracellular ROS levels of UVC/MECCrt and MECCrt alone were higher than for UVC alone. MitoMP change and H2A histone family member X (γH2AX; H2AFX)-based DNA damage were synergistically inhibited and induced by MECCrt/UVC compared to its single treatment in Ca9-22 cells, respectively.

Conclusion UVC plus MECCrt treatment had selective killing and synergistic anti-proliferative effects against oral cancer cells involving apoptosis, oxidative stress, and DNA damage. This combination therapy appears to have a great clinical potential against oral cancer cells.     

大黄对创伤性休克患者胃肠功能障碍及多器官功能不全综合征的治疗作用

目的：研究中药大黄对创伤性休克后胃肠功能障碍的治疗及其对多器官功能不全综合征（MODS）的防治作用。方法：137例创伤性休克皇胃肠功能障碍患者，分为大黄治疗组和非大黄治疗组，观察两组患者胃肠功能障碍的缓解率，缓解时间，测定治疗后血浆内毒素和肿瘤坏死因子－α（TNF-α）的水平，MODS的发生率，病死率等。结果：本组中71例接受大黄治疗后，胃肠功能障碍的缓解率为87．32％（62／71），66例患者为非大黄治疗组，胃肠功能缓解率为48．48％（32／66），两组间比较，差异有非常显著性意义（P＜0．01），大黄治疗组胃肠功能障碍持续时间明显缩短，患者接受大黄治疗后，血浆中内毒素与TNF-α的水平较非大黄组明显降低，大黄治疗组与非大黄治疗组MODS的发生率分别为29．58％和51．52％，MODS的病死率分别为23．81％，55．88％，两组间比较，差异有非常显著性意义（P＜0．01），结论：大黄对创伤性休克后胃肠功能障碍有显著疗效，可减少MODS的发生率和病死率。     

EGFR和NRF2对电离辐射导致的DNA损伤修复的影响

目的 探讨表皮生长因子受体（EGFR）和核转录因子E2相关因子2（NRF2）对人宫颈癌HeLa细胞受到电离辐射损伤后的DNA损伤响应及修复作用。 方法 将人宫颈癌HeLa细胞按2种处理方式分组：（1）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的EGFR,采用137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降EGFR组（HeLa siEGFR）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降EGFR+照射组（HeLa siEGFR+8 Gy）。采用免疫荧光实验（8 Gy照射后6、12、24 h）检测细胞中磷酸化组蛋白H2A变异体（γ-H2AX）foci的数量;采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测NRF2下游靶基因;采用流式细胞术检测EGFR对HeLa细胞周期的影响;采用核质分离实验分离HeLa细胞的胞质蛋白和胞核蛋白;采用蛋白质免疫印迹法检测NRF2、EGFR、血红素氧合酶1（HO-1）、共济失调毛细血管扩张突变基因Rad3相关激酶（ATR）Thr1989位点的磷酸化水平、检查点激酶1（CHK1）在Ser345位点的磷酸化水平。（2）采用小干扰RNA敲降HeLa细胞中的NRF2,采用137Cs γ射线照射源照射细胞。将HeLa 细胞分为对照组（HeLa siCtrl）、敲降NRF2组（HeLa siNRF2）、照射组（HeLa siCtrl+8 Gy）、敲降NRF2+照射组（HeLa siNRF2+8 Gy）。采用免疫荧光实验检测细胞中γ-H2AX foci的数量。符合正态分布的计量资料的组间比较采用两独立样本t检验（方差齐）。 结果 （1）8 Gy照射6、12、24 h后,HeLa siEGFR+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（94.00±1.00）% 对（89.67±2.03）%、（72.33±1.76）% 对（60.00±1.73）%、（43.00±2.31）% 对（26.33±1.20）%],且差异有统计学意义（t=3.919、4.919、6.402,均P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较,HeLa siEGFR+8 Gy组的细胞G2/M期阻滞显著受损[（46.53±3.06）%对（37.90±4.61）%],且差异有统计学意义（t=4.384,P<0.05）。与HeLa siCtrl组比较,HeLa siEGFR+8 Gy组的HO-1表达下降66.66%（1.35±0.10对0.45±0.02）,且差异有统计学意义（t=8.782,P<0.05）。敲降EGFR后细胞核内的NRF2蛋白水平降低,辐射引起的NRF2下游ATR-CHK1信号通路活化水平及HO-1蛋白水平均降低。（2）8 Gy照射6、12、24 h后,与HeLa siCtrl组相比,HeLa siNRF2+8 Gy组细胞中γ-H2AX foci的数量均多于HeLa siCtrl组[（96.67±0.88）%对（89.67±2.03）%、（77.33±1.20）% 对（60.00±1.73）%、（54.33±2.19）% 对（26.33±1.20）%],且差异均有统计学意义（t=3.166、4.919、11.220,均P<0.05）。 结论 电离辐射条件下,敲降EGFR可以减少NRF2蛋白入核,抑制ATR-CHK1信号通路激活及下游基因HO-1的表达,降低人宫颈癌HeLa细胞的DNA损伤修复能力。     

妊娠糖尿病患者肿瘤坏死因子的动态变化与胰岛素抵抗的关系

目的 探讨妊娠糖尿病(GDM)患者肿瘤坏死因子α(TNF-α)的动态变化与胰岛素抵抗(IR)的关系.方法 选择GDM患者32例(GDM组)、正常孕妇31例(NGT组)为研究对象,分别测定孕25~28周、孕29~32周、孕37~38周、产后6~8周空腹血TNF-α、胰岛素、血糖水平,采用放射免疫法测定TNF-α和胰岛素,葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖.以稳态模式评估法的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价IR.结果 ① GDM组、NGT组血清TNF-α水平均随孕期的增加而升高,且均显著高于产后;② GDM患者妊娠各时期TNF-α水平均显著高于NGT (t值分别为7.81、7.05、7.15,P<0.01);③血清TNF-α水平与HOMA-IR显著正相关(r=0.571,P<0.05).结论 GDM患者血清中TNF-α水平随孕期的增加而升高,且显著高于产后,TNF-α的动态变化与IR相关.