野生型p53基因对人肺癌细胞SPC-A1凋亡的诱导

目的：观察外源性野生型p53基因特染对人肺腺癌细胞SPC-A1增殖和凋亡的影响。方法：用脂质体Lipofectamine将真核表达载体pCMV-p53和pCMV-p53mtl35分别转染SPC-A1细胞，MTT法检测转染前后的细胞生长情况，于转染后24、48、72h分别收集细胞，以流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率，并进行染色体DNA断裂的测定。结泉：pCMV-p53转染后的SPC-A1细胞生长受到明显抑制，转染后24、48、72h的凋亡率分别为1．78％、24．11％、35．75％，转染后48、72h的细胞染色体断裂明显。结论：野生型p53基因瞬间转染可诱导肺癌细胞SPC-A1凋亡。     

转染野生型p53基因对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的 研究转染野生型p53基因对人肝癌细胞的生长影响作用。方法 将克隆有野生型p53基因的pUHD10-3质粒,通过Lipofectin转染肝癌细胞株BEL-7402、BEL-7404、HLE、HUH-7及SMMC-7721,用四甲基偶氮唑(MTT)法观察细胞的生长情况。结果 转染野生型p53基因,可使肝癌细胞BEL-7404、HLE、HuH-7的生长明显受到抑制,第4天生长抑制率分别是50．0％、69．0％及65．1％。结论 转染野生型p53基因能有效抑制肝癌细胞株BEL-7404、HLE、HuH-7的生长。     

转染野生型p53基因对肝癌细胞生长的影响

目的：通过转染野生型p53基因致肝癌细胞株BEL-7404，研究其对肝癌细胞的生长及凋亡作用。方法：野生型p53基因通过脂质体Lipofectamine介导转染人肝癌细胞株BEL-7404。用四甲基偶氮唑（MTT）法测定细胞生长曲线，用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。结果：肝癌细胞BEK-7404转染野生型p53基因后，其生长作用明显受到抑制．细胞生长抑制率在第4天可达50．8％。流式细胞仪分析细胞凋亡结果：阴性对照组为1．7％，转染pUHD10-3组为3．2％．转染pUHD10-3-p53组为40．7％。结论：野生型p53基因可诱导肝癌细胞BEL-7404的生长抑制及发生凋亡。     

野生型p53诱导基因1研究进展

p53基因是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因.过去20多年来,人们对p53基因的认识经历了癌蛋白抗原,癌基因到抑癌基因的3个认识转变,现已认识到,引起肿瘤形成或细胞转化的突变型p53蛋白是野生型p53基因突变的产物,是一种肿瘤促进因子,它可以抑制正常p53蛋白的功能,而野生型p53基因是一种抑癌基因,它的失活对肿瘤形成起重要作用[1].     

肝癌细胞转染野生型p53基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡

肝癌细胞转染野生型ｐ５３基因稳定表达后肝癌细胞出现自发凋亡＊张晓东１王文亮１穆峰２（１第四军医大学病理学教研室西安７１００３３２第四军医大学唐都医院胸外科）关键词肝肿瘤细胞凋亡ｐ５３基因转染中图号Ｒ７３－３１目的进一步探讨ｐ５３基因与细胞凋亡（ａｐｏ...     

野生型P53基因诱导人肝癌HepG2/5-Fu耐药细胞株凋亡的研究

目的 探讨野生型P53基因与人肝癌耐药的相关性，为肝癌的临床治疗提供新的依据。方法 以IONP—PLL纳米颗粒为基因转运载体，将wtp53基因转入HepG2／5-Fu耐药性细胞株，MTT法、台盼兰拒染实验和Hochest33258染色等分析5-Fu对转染有wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞的杀伤效应。结果 转染wtp53基因的HepG2／5-Fu细胞对5-Fu呈剂量依赖性杀伤效应和时间依赖性杀伤效应，在5-Fu作用下，能发生明显的凋亡效应。结论 以wtp53基因为靶点的肝癌基因治疗有望成为治疗晚期肝癌的一种新的治疗策略。     

重组野生型p53基因转染人骨肉瘤细胞株体外实验

目的：将外源性野生型ｐ５３基因导入人骨肉瘤细胞株，研究野生型ｐ５３蛋白在诱导瘤细胞凋亡中的作用。方法：用ＤＮＡ转染技术将７重组野生型ｐ５３基因ＰＭ４７质粒导入人骨肉瘤细胞株ＨＯＳ－８６０３中，用ＰＣＲ技术监测外源性ｐ５３基因在瘤细胞中存在的稳定性；用免疫组化方法检测在地塞米松的诱导下瘤细胞中ｐ５３的表达情况；用相差显微镜去观察凋亡瘤细胞的形态特点；用细胞凋亡原位检测技术标记并统计凋亡的瘤细胞数。结     

原发性肝细胞性肝癌细胞凋亡及p53基因表达的研究

目的研究原发性肝细胞性肝癌(HCC)细胞凋亡的发生情况及与凋亡相关的p53基因的表达,探讨p53基因与细胞凋亡的关系.方法以TUNEL法检测HCC细胞凋亡的发生情况,免疫组化SABC法检测p53基因的表达.结果34例HCC平均凋亡指数为4.16%±0 70%,有18例p53蛋白阳性,凋亡指数的高低与p53蛋白的阳性率有关,p53蛋白阳性者凋亡指数低;正常肝组织平均凋亡指数为0 51%±0.09%,无p53蛋白阳性者.结论HCC患者中存在肿瘤细胞增殖和死亡调控的异常,其细胞凋亡的发生可能与p53基因失控有关.     

p53基因诱导表达可调控细胞系的构建

ｐ5 3基因是被广泛关注的抑癌基因 ,5 0 %以上人类癌症中都检测到ｐ5 3基因突变[1 ,2 ] 。ｐ5 3基因研究已取得很大进展 ,但有关其作用的具体生理生化通道还不十分清楚 ,解决这个问题的关键是进行ｐ5 3下游基因的克隆 ,了解下游事件 ,弄清信息传递途径。ｐ5 3基因过度表达导致细胞生长停滞或程序性死亡 ,很难获得足够的能表达ｐ5 3基因的细胞作为克隆其下游基因的材料。本研究采用哺乳动物基因诱导表达系统———Ｔｅｔ ＯｎＴＭ基因表达系统[3] ,构建ｐ5 3基因诱导表达可调控细胞系 ,为直接克隆ｐ5 3下游基因并对其功能研究奠定了基础。1　材料与方法1.1　材料　 (1)生物学材料     

携带p53基因增殖性腺病毒影响肝癌细胞对化疗药物的敏感性

目的:研究携带p53基因增殖性腺病毒CNHK600-p53载体能否增加肝癌细胞株对化疗药物的敏感性.方法:构建携带p53基因增殖性腺病毒CNHK600-p53载体,采用四甲基偶氮唑盐法(methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT),观察并比较单用化疗药物[5-氟尿嘧啶(fluorouracil,5-Fu)、丝裂霉素(mitomycin,MMC)和表柔比星(epirubicin,EPI)]、单用CNHK600-p53和CNHK600-p53联合上述化疗药物对肝癌细胞株BEL-7404的杀伤效应.结果:肝癌细胞株BEL-7404在5-Fu浓度为100μg/ml时细胞抑制率为(47±3)%,MMC浓度为1μg/ml时细胞抑制率为(20±4)%,EPI浓度为2.5 μg/ml时细胞抑制率为(73±2)%,联合CNHK600-p53(MOI=10)后上述浓度的化疗药物细胞抑制率分别增高为(59±4)%、(44±4)%和(86±2)%(率的U检验,P＜0.01).结论:携带p53基因的CNHK600-p53能提高肝癌细胞株BEL-7404对化疗药物的敏感性,CNHK600-p53联合化疗药物治疗可望开辟克服肝癌耐药的新途径.     

野生型p53基因转移预防血管成形术后再狭窄的实验研究

目的探讨逆转录病毒载体介导的人野生型ｐ５３基因转移对预防血管成形术后再狭窄的作用。方法构建野生型ｐ５３基因逆转录病毒载体，通过逆转录病毒载体介导，将野生型ｐ５３基因转导至大鼠球囊损伤的颈动脉再狭窄模型中，２１ｄ后观察其对新生内膜形成的影响，并检测ｐ５３蛋白表达水平。结果构建和包装了人野生型ｐ５３基因的重组逆转录病毒载体，并在体外细胞中表达；用逆转录病毒载体转导野生型ｐ５３基因至大鼠球囊损伤的颈动脉，免疫组化检测表明转导血管局部表达人野生型ｐ５３蛋白，且与对照组相比，损伤血管新生内膜／中层面积比降低了４４％。结论人野生型ｐ５３基因治疗对血管成形术后再狭窄有一定的预防作用     

天花粉蛋白诱导H22肝癌细胞凋亡的研究

目的观察天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)在体外诱导H22肝癌细胞凋亡的效果.方法以不同剂量的TCS加入到H22肝癌细胞溶液中,在24孔培养板上培养72h后荧光染色并涂片,激光共聚焦显微镜下观察TCS诱导H22肝癌细胞凋亡的作用效果.结果10μg/ml浓度的TCS就可诱导H22肝癌细胞出现典型的凋亡形态学特征.经统计学分析,100μg/mlTCS组与50μg/mlTCS组间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组间差异均有统计学意义(P<0.01).TCS的作用浓度与凋亡指数间有正相关关系(r=0.9713,P<0.01).结论TCS在体外可诱导H22肝癌细胞发生凋亡,诱导H22肝癌细胞凋亡是TCS抗肝癌作用的机制之一,具有成为肝癌治疗新药的潜在价值.     

卡铂诱导卵巢癌细胞株OVCA_3凋亡中p63及p53基因mRNA的变化

目的探讨卡铂诱导人卵巢癌细胞株OVCA_3凋亡后p63、p53基因mRNA的变化及二者的相关性。方法四唑盐比色法测细胞的存活率,实时荧光定量反转录聚合酶链反应法检测卡铂诱导OVCA_3凋亡后p63、p53基因mRNA的变化。结果卡铂能明显抑制OVCA_3的生长,其作用时间与细胞生长抑制率呈明显正相关,低浓度卡铂（10μg/mL）对OVCA_3生长抑制率明显低于高浓度卡铂（25μg/mL,P〈0.05）,随着OVCA_3凋亡率增加,存活的细胞中p63和p53基因mRNA的表达水平也逐渐增加,且高浓度卡铂处理后,存活的卵巢癌细胞中p63和p53基因mRNA的表达量均明显高于阴性对照和低浓度作用组（P〈0.05）,差异有统计学意义。结论 p63、p53基因共同参与卵巢癌耐药环节,二者在卡铂作用后发挥的作用是一致的。     

野生型p53基因转移对心肌细胞生长的抑制作用

为了探讨野生型ｐ５３基因对心肌细胞生长的抑制作用及应用于高血压和肥厚型心肌病等疾病所致心肌肥厚的基因治疗可能性,本实验将野生型ｐ５３基因重组腺病毒转染体外培养的乳兔心肌细胞。应用生化染色方法,免疫组化法及聚合酶链反应技术,检测了野生型ｐ５３基因的转染效率及表达效果。采用ＭＴＴ方法及光镜技术进一步观察了野生型ｐ５３基因对心肌细胞生长的调节作用。结果显示,腺病毒载体能有效地将外源基因导入心肌细胞中并使     

新型增殖性腺病毒治疗肝癌的实验研究

目的 构建携带p53基因增殖性腺病毒CNHK600-p53载体，研究其对肝癌细胞株抑制效应是否优于Ad-，p53。方法 实验分为两组，单用CNHK600-p53组和单用Ad—p53组；采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyl tetrazolium assay，MTT），观察两组对肝癌细胞株的杀伤效应。结果 单用CNHK600-p53组较单用Ad—p53组肝癌细胞株细胞抑制率高；但当细胞抑制率达到80％以上时，两组之间差异无显著性，统计分析采用率的U检验。结论 较Ad—p53相比携带p53基因的CNHK600-p53能更有效抑制肝癌细胞株，CNHK600-p53可望成为肝癌基因治疗的新方法。     

稳定表达野生型p53基因人骨肉瘤细胞株的建立与鉴定

目的建立稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤细胞株(U-2 OS),为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用提供体外实验模型建立与鉴定的方法。方法利用分子生物学基因克隆技术将人类野生型p53基因cDNA片段插入到表达载体pIRES-EGFP中,得到重组质粒pIRES-EGFP-p53,并通过PCR、酶切电泳等方法进行质粒鉴定;然后用该重组质粒转化大肠杆菌BL21细胞,转化菌落经PCR扩增后,将提取的质粒DNA用脂质体介导的转染方法导入U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系。结果成功地构建出包含有野生型p53 cDNA片段的重组质粒pIRES-EGFP-p53,通过PCR、酶切电泳等方法鉴定质粒大小和位点均符合实验设计;并将该重组质粒成功导入人骨肉瘤细胞株U-2 OS细胞中,经荧光显微镜下人工筛选得到稳定转染的骨肉瘤细胞系,命名为U-2-p53 OS。转染后的骨肉瘤细胞出现散在的凋亡现象。结论利用基因转染技术,建立了稳定表达外源性野生型p53基因的人骨肉瘤U-2-p53 OS细胞系,为进一步研究野生型p53基因在骨肉瘤自杀基因治疗中的协同作用奠定了基础。