健脾解毒复方中药对裸鼠肝癌模型PTEN/ERK1的影响

目的:探讨肝癌裸鼠不同肝组织PTEN/ERK1的表达及健脾解毒复方中药对其的影响.方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型90只,造模24 h后随机分9组,即不同浓度复方中药A～G组,FT207化疗组,生理盐水组,10只裸鼠不造模作为正常对照组,给药每天1次,8周后处死裸鼠,免疫组化二步法检测肝组织、癌旁组织和癌组织PT]EN/ERKI的表达情况.结果:荷瘤裸鼠肝脏PFEN蛋白表达强度正常肝组织>癌旁组织>癌组织.中药组B,D,E组眦N在正常肝组织的表达高于生理盐水组、化疗组、正常照组,(P<0.05).中药组D组PTEN在癌旁组织的表达高于生理盐水组,(P<0.05),中药组在癌组织中PTEN的表达高于生理盐水组和化疗组,(P<0.05).荷瘤裸鼠肝脏ERK1蛋白表达强度癌组织>癌旁组织>肝组织,癌旁组织ERK1表达强度化疗组高于中药组和生理盐水组,癌组织ERK1表达强度生理盐水组和化疗组均高于中药C,D,E,G,F组.在癌组织中,PTEN和ERKl的表达呈负相关,(P<0.01).结论:在肝癌的发生发展过程中PTEN的缺失或突变可能导致了ERK1的过度活化,健脾解毒复方中药可能对PTEN/ERK1有良性调节作用.     

复方中药对裸鼠肝癌模型的抗癌作用研究

目的:探讨复方中药对间接原位移植肝癌裸鼠模型的干预作用。方法:采用人肝细胞癌细胞株Bel-7402间接原位移植,造雄性肝癌裸鼠模型48只,造模后24 h随机分4组,即复方中药低(A)、中(B)、高(C)3个浓度组和FT207化疗组(D),4周后处死裸鼠,观察各组荷瘤裸鼠的生存时间、瘤体积、瘤指数、肝内转移情况等,并用二步法免疫组化检测肝组织、肝癌旁组织、肝癌组织中PTEN蛋白的表达。结果:四周时,中药组(A B C)总存活率为50.0%,高于化疗组0%(P<0.01);A组存活率虽高于D组,但无显著性意义(P>0.05);B组和C组生存率均明显高于D组(P<0.05或P<0.01)。中药组的瘤体积和瘤指数与化疗组相比无明显差异(P>0.05)。经中药治疗的癌鼠肝内转移少于化疗组癌鼠(P<0.05)。瘤体积与模型生存时间负相关,与脾指数正相关(P<0.01)。PTEN蛋白表达强度以癌旁组织最高,癌组织最低,正常肝组织次之(P<0.01)。中药治疗相对于FT207化疗而言可明显增加PTEN蛋白的表达强度,中药组组间比较提示中浓度组效果最好(P<0.05或P<0.01),低浓度和高浓度差别不大(P>0.05)。结论:本方能延长实验癌鼠的生存时间,减少癌灶的肝内转移,肿瘤体积过大是瘤鼠的主要死因,其治疗肝癌的部分机制可能是通过增强PTEN蛋白表达来实现的。     

解毒法与健脾法对裸鼠人肝癌模型的持续抗癌作用探讨

目的：通过解毒复方中药和健脾复方中药对裸鼠人肝癌模型的干预,探讨两种治法治疗6周和停药4周后疗效的差别,用以探索中医药治疗肝癌的持续效应。方法：180只裸鼠随机分为9组,每组20只,其中8组造人肝癌原位移植模型,即生理盐水干预（B）、替加氟干预组（C）、解毒中药低（D）、中（E）、高（F）浓度组和健脾中药低（G）、中（H）、高（I）浓度组。造模后24小时开始干预,每天灌胃给药一次,另10只裸鼠不造模正常饲料饲养作平行对照（A）。6周后各组随即选择10只裸鼠处死并解剖,各组剩余裸鼠停止干预,自由进饮食继续观察4周,于第10周末处死所有裸鼠。动物肝组织、癌组织和癌旁组织免疫组化SP法观察组织中PTEN的表达情况。实验过程中记录裸鼠生存时间和体重,裸鼠解剖后记录裸鼠肿瘤体积。结果：实验期间低浓度健脾中药（G组37.5g/kg）相对于替加氟和生理盐水可以明显延长荷瘤鼠的生存率和减少荷瘤鼠体重变化,第10周末该组存活率80%,而其余各组为0%～30%,P〈0.05。10周末G组动物体重变化指数为-9.08±17.50,其余各组为-15.19±10.10～-31.10±18.30,P〈0.05。替加氟给药期间相对于各中药组可以减小肿瘤体积,P〈0.05或0.01,停止给药后无此作用,P〉0.05。在肝组织中给药期间生理盐水和替加氟干预组PTEN蛋白表达水平明显低于正常未造模组、解毒复方中药中高浓度组和健脾中药各组,P〈0.05或0.01;停止给药后生理盐水干预组PTEN蛋白表达强度低于解毒中药高浓度组,P〈0.05,替加氟干预组则低于所有中药组,P〈0.05或0.01。在癌旁组织和癌组织中给药和停药期间替加氟干预组PTEN蛋白表达强度低于其他组,P〈0.05或0.01。在肝组织和癌组织中低浓度解毒中药组PTEN蛋白表达强度给药期间低于给药后,P〈0.05,在肝组织和癌旁组织中健脾中药低浓度组给药期间高于给药后,P〈0.05。结论：健脾中药可以提高荷瘤鼠的生存率,并控制体重减轻,中药可以不同程度上维持抑癌基因PTEN蛋白的表达水平,这些作用可能具有后效优势。     

健脾解毒中药延长肝癌裸鼠带瘤生存时间及对PTEN/FAK的影响

目的探讨健脾解毒方提高裸鼠人肝癌模型的"带瘤生存"作用和对PTEN、FAK的影响。方法 40只裸鼠随机分为4组,每组10只,其中3组制作裸鼠人肝癌模型,分别给予健脾解毒方、生理盐水、替加氟(FT-207)灌胃,每天1次,持续71 d;第4组不造模作空白对照,每天给予生理盐水。实验过程中记录裸鼠生存时间和体质量,免疫组化SP法检测各组肝组织和癌组织PTEN、黏附斑激酶(FAK)的表达,IPP6.0分析平均光密度。结果生存分析表明健脾解毒方组裸鼠累积生存率显著高于其余各组(P<0.05或0.01);健脾解毒方组体质量减轻率显著低于其余各组(P<0.05或0.01);累积生存率和体质量减轻率FT-207组最差(P均<0.05);各组肿瘤体积比较无显著性差异(P均>0.05);PTEN在肝组织中的表达水平(平均光密度)显著高于癌组织(P<0.01);肝癌模型肝组织中PTEN表达水平明显低于空白组(P<0.05或0.01);FT-207组肝组织和癌组织中PTEN表达水平明显低于健脾解毒方组和生理盐水组(P<0.05或0.01);FAK在各组肝组织中的表达水平显著高于癌组织(P<0.01);健脾解毒方组肝组织中FAK表达水平显著高于其余各组(P均<0.01),癌组织中FAK表达水平显著低于其余各组(P均<0.01)。结论健脾解毒方能延长荷瘤鼠的带瘤生存时间,延缓体质量下降,其作用可能与健脾解毒方能良性调节PTEN、FAK的表达有关。     

扶正祛邪抑癌方治疗大鼠原发性肝癌的实验研究＊

目的 探讨扶正祛邪抑癌方对原发性肝癌大鼠的治疗效果，以及与体内细胞因子的相关性。方法 干预组使用二乙基亚硝胺（Diethylnitrosamine，DEN）进行造模，造模成功后随机分为模型组、斑蝥组、高剂量组、中剂量组和低剂量组共5组。正常组、模型组予以生理盐水灌胃，斑蝥组予以复方斑蝥胶囊灌胃,三个不同剂量组予以扶正祛邪抑癌方灌胃，12周后腹主动脉取血，检测肝功指标：GGT、ALP、AST、ALT；Elisa检测IL-6、LI-10、TNF-α、IFN-γ；免疫组化检测AFP、COX-2。结果 给药组可以改善肝癌大鼠一般情况、生存率、ALT、AST、ALP、GGT、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ，减低肝脏组织中COX-2、AFP的表达，且以中剂量组改善最明显。结论 扶正祛邪抑癌方可以提高肝癌大鼠的生存率，改善大鼠一般情况及肝功能，并且减少血清中的炎症因子，对原发性肝癌有一定治疗作用。     

糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经NGF蛋白及NGF mRNA表达的影响

目的：观察中药复方糖痹康对糖尿病大鼠坐骨神经神经生长因子（nerve growth factor ,NGF）蛋白及NGF mRNA表达的影响。方法：采用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱发2型糖尿病大鼠动物模型,造模成功后随机分为模型组、甲钴胺组（1.97 mg·kg^-1）、糖痹康高、中、低剂量组（分别为生药4.175,8.35,16.7 g·kg^-1）,另设10只雄性SD大鼠为正常组,模型组和正常组给予蒸馏水,用不同剂量的糖痹康灌胃,并与甲钴胺对照,16周后取大鼠一侧坐骨神经,用免疫组化法检测坐骨神经中NGF蛋白的表达及采用RT-PCR方法检测坐骨神经组织中NGF mRNA的表达。结果：与正常组比较,模型组NGF蛋白及NGF mRNA表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,糖痹康中、高剂量组能升高 NGF蛋白及NGF mRNA表达（P<0.01）,糖痹康低剂量组能升高NGF mRNA表达（P<0.05）。结论：中药复方糖痹康能够促进糖尿病周围神经病变大鼠坐骨神经NGF mRNA的转录和蛋白的表达。     

基于SNAIL信号通路及肠道菌群研究密点麻蜥抑制胃癌肝转移的作用机制

目的 基于SNAIL信号通路及肠道菌群研究密点麻蜥Eremias multiocellata对胃癌肝转移的抑制作用及机制。方法 36只BALB/c裸鼠随机分为对照组和造模组,造模组脾脏注射HGC-27胃癌细胞,造模4周剖腹探查验证造模成功。随后将造模组随机分为模型组、5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU,0.025 g/kg）组和密点麻蜥（2.6 g/kg）组,每组8只。对照组和模型组ig生理盐水,密点麻蜥组ig密点麻蜥水煎剂,5-FU组ip 5-FU,连续干预4周后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组裸鼠肝组织病理变化;采用Western blotting检测各组裸鼠肝组织SNAIL及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白表达;取末次给药2 h后各组裸鼠新鲜粪便进行16S rRNA高通量测序检测肠道菌群的变化。结果 与对照组比较,模型组裸鼠肝组织出现肝小叶破坏、肝组织坏死,中性粒细胞浸润,癌细胞核大深染;肝组织SNAIL、N-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.001）,E-caherin蛋白水平显著降低（P＜0.001）。与模型组比较,密点麻蜥组肝细胞排列趋于整齐,结构完整,癌组织灶变小;肝组织中SNAIL、N-cadherin蛋白表达水平显著降低（P＜0.001）,E-cadherin蛋白表达水平显著升高（P＜0.001）。16S rRNA结果显示,与对照组比较,模型组裸鼠肠道菌群失调紊乱,厚壁菌门/拟杆菌门（Firmicutes/Bacteroidetes,F/B）值下降,经密点麻蜥干预后F/B值升高。门水平上,密点麻蜥主要对厚壁菌门进行调节,厚壁菌门在对照组中丰度占比40.9%,与对照组比较,模型组中厚壁菌门的丰度降低到26.4%。经密点麻蜥干预后厚壁菌门丰度提高到30.2%。属水平上,密点麻蜥主要对胃癌肝转移裸鼠肠道菌群中差异菌属（拟杆菌属Bacteroides、梭状芽孢杆菌属Clostridia_UCG-014、副拟杆菌属Parabacteroides、幽门螺旋杆菌Helicobacter）发挥调节作用。结论 密点麻蜥可能通过降低SNAIL蛋白表达,增加E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin蛋白表达,来抑制EMT发展进程,发挥对胃癌肝转移的抑制作用。此外,密点麻蜥通过调节厚壁菌门丰度,增加作用于癌细胞表面G蛋白偶联受体的短链脂肪酸（short-chain fatty acids,SCFAs）含量,调节机体自身免疫相关菌属（拟杆菌属、梭状芽孢杆菌属、副拟杆菌属）,降低致病菌幽门螺旋杆菌的丰度,发挥对胃癌肝转移的抑制作用。     

阳和化岩汤联合曲妥珠对HER-2高表达型乳腺癌细胞PTEN-PI3K/Akt通路及

目的：观察阳和化岩汤联合曲妥珠体外对乳腺癌细胞株SK-BR-3（HER-2高表达型） PTEN-PI3K/Akt通路及血管内皮生长因子（VEGFC）的影响。方法：制备阳和化岩汤肠吸收液,将乳腺癌细胞株SK-BR-3随机分为对照组、中药组、曲妥珠组、中药+曲妥珠组,分别予相应药物干预72h后,应用westernblot法及RT-PCR法检测人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物基因（PTEN）、磷脂酞肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶（p-Akt）、血管内皮生长因子（VEGFC）蛋白及其mRNA表达。结果：与对照组比较,曲妥珠组、曲妥珠+中药组乳腺癌细胞株PTEN蛋白与mRNA表达明显升高,PI3K、p-Akt、VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）;中药组p-Akt蛋白表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）。与曲妥珠组比较,中药+曲妥珠组PTEN蛋白与mRNA表达明显升高（P<0.05）,PI3K、p-Akt蛋白与mRNA表达明显降低（P<0.05）,VEGFC蛋白表达明显降低（P<0.05）。各药物组效果曲妥珠+中药组最佳,曲妥珠组次之,中药组作用稍弱。结论：阳和化岩汤肠吸收液联合曲妥珠能有效干预PTEN-PI3K/Akt通路,增强PTEN表达,降低PI3K、p-Akt、VEGFC表达,效果优于单用曲妥珠,提示温阳散结中药对曲妥珠在HER-2高表达型乳腺癌的治疗中可能存在辅助作用。     

四君子汤调控肝癌癌旁组织NF-κB p65的O-GlcNAc糖基化修饰抑制肝细胞癌进展的机制

目的 探究四君子汤通过调控肝癌癌旁组织核因子-κB p65（NF-κB p65）的O-连接的β-N-乙酰葡糖胺（O-GlcNAc）糖基化修饰,干预肝癌发展的分子机制。方法 建立原位肝癌小鼠模型,将24只C57BL/6小鼠,随机分为4组,每组6只,分别为正常组、模型组、四君子汤低剂量组（10 g·kg^-1）、四君子汤高剂量组（25 g·kg^-1）,通过蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平和p65的磷酸化修饰水平;免疫沉淀法（IP）检测p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测癌旁组织中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9） mRNA表达水平;观察各组小鼠肿瘤数量,称量肝脏质量;检测各组小鼠的旷场运动情况和抓力,分析小鼠的气盛衰度。结果 与正常组小鼠肝组织比较,模型组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平显著下降（P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平显著下降（P<0.01）;p65的磷酸化水平显著升高（P<0.01）;IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著升高（P<0.01）;肝脏质量显著升高（P<0.01）;小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数显著下降（P<0.01）,气盛衰度显著下降（P<0.01）。与模型组小鼠比较,四君子汤低剂量组和四君子汤高剂量组小鼠癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平明显升高（P<0.05, P<0.01）;p65的O-GlcNAc糖基化修饰水平明显上调（P<0.05,P<0.01）;p65的磷酸化水平显著下降（P<0.01）;四君子汤低剂量组IL-6、TGF-β₁、VEGFA mRNA水平明显降低（P<0.05,P<0.01）;四君子汤高剂量组中IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9 mRNA水平显著降低（P<0.01）,直径>3 mm肿瘤数量显著减少（P<0.01）,小鼠肝脏质量明显降低（P<0.05）,小鼠抓力、旷场水平跨格数和垂直站立次数明显升高（P<0.05,P<0.01）,气盛衰度显著升高（P<0.01）。结论 四君子汤可以抑制小鼠原位肝癌的进展,该作用可能是通过增加肝癌癌旁组织中O-GlcNAc糖基化水平,增加癌旁组织中p65的O-GlcNAc糖基化修饰,抑制p65的磷酸化修饰,最终抑制下游IL-6、TNF-α、TGF-β₁、VEGFA、MMP-2、MMP-9的表达而实现。     

茯苓酸调节Hippo信号通路对二乙基亚硝胺诱导的肝癌大鼠的治疗作用研究

[目的]探讨茯苓酸调节Hippo信号通路对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌大鼠的治疗作用。[方法]取SD大鼠随机分为对照组、模型组、茯苓酸低剂量(3.5 mg/kg)组、茯苓酸中剂量(7 mg/kg)组、茯苓酸高剂量(14 mg/kg)组、氟尿嘧啶(50 mg/kg)组,每组10只,模型组和给药组大鼠通过腹腔注射DEN诱导建立肝癌模型,对照组大鼠腹腔注射等剂量0.9%氯化钠溶液,以茯苓酸和氟尿嘧啶分组处理后检测各组大鼠血清肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平;检测各组大鼠体质量变化、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积;以苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肝组织病理形态并比较其炎症细胞浸润数;以试剂盒检测大鼠血清炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肝组织Hippo信号通路相关蛋白[Yes相关蛋白(YAP)、LATS1]表达。[结果]与对照组比较,模型组大鼠肝组织发生明显癌变,给药结束后体质量、血清SOD、CAT水平显著降低(P＜0.05),血清ALT、AST、IL-6、IL-17、TNF-α与MDA水平、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积、炎症细胞浸润数、肝组织LATS1蛋白表达及p-YAP1/YAP1显著升高(P＜0.05);与模型组比较,茯苓酸低、中、高剂量组、氟尿嘧啶组大鼠肝组织癌变症状均减轻,给药结束后体质量、血清SOD、CAT水平升高(P＜0.05),血清ALT、AST、IL-6、IL-17、TNF-α与MDA水平、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积、炎症细胞浸润数、肝组织LATS1蛋白表达及p-YAP1/YAP1降低(P＜0.05),且茯苓酸各组呈剂量依赖性(P＜0.05);茯苓酸高剂量组与氟尿嘧啶组大鼠比较,各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05)。[结论]茯苓酸可降低Hippo信号通路活性,抑制DEN诱导的炎症和氧化应激,减轻大鼠肝组织损伤并缓解其癌变症状,改善大鼠肝功能。     

健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制

目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制。方法:10%,15%,20%健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P0.05)。与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P0.05)。结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖。     

健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响

目的:研究健脾消癌方对大肠癌肝转移裸鼠模型肝组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路相关蛋白表达的影响,探讨其拮抗大肠癌肝转移的作用机制。方法:随机抽取10只BALB/C-nu裸鼠作为空白组,其余裸鼠建立人大肠癌细胞肝转移裸鼠模型,建模3 d后取存活裸鼠30只,随机分为模型组,健脾消癌方组(41.6 g·kg-1),人参皂苷Rg3组(5.2 mg·kg-1),各组裸鼠灌胃相应药物及生理盐水4周后脱颈处死,观察各组裸鼠肝转移情况,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)测定肝组织第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(PTEN),磷酸化第10号染色体同源缺失性磷酸酶和张力蛋白基因(p-PTEN),Akt,磷酸化蛋白激酶(p-Akt)蛋白表达情况。结果:健脾消癌方及人参皂苷Rg3组肝转移率明显低于模型组(P0.05);与空白组比较,模型组中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显升高(P0.05),与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组肝组织中p-PTEN,p-Akt蛋白表达明显降低(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组p-PTEN,p-Akt表达差异无统计学意义。与空白组比较,模型组PTEN,Akt蛋白表达明显降低(P0.05);与模型组比较,健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达量明显升高(P0.05);健脾消癌方组与人参皂苷Rg3组PTEN,Akt蛋白表达差异无统计学意义。结论:健脾消癌方可拮抗大肠癌肝转移,其作用机制可能与升高PTEN蛋白表达,降低p-PTEN,p-Akt蛋白表达有关。     

Differentiation of bel-7402 human hepatocarcinoma cells induced by aqueous extracts of fresh gecko (AG) and its anti-tumor activity in vivo

Ethnopharmacological relevance

Gecko, a kind of reptile, has been widely used as a traditional Chinese medicine to treat various diseases including cancer in China for thousands of years. The aim of this study was to investigate the anti-tumor effect of AG (aqueous extracts of fresh gecko) on human hepatocellular carcinoma cell Bel-7402 in vitro and mouse H22 hepatocellular in vivo. Further to underlie the molecular mechanism of AG inducing the differentiation of Bel-7402 cells.

Materials and methods

AG was obtained by water extracting method and qualitatively analyzed through High Performance Liquid Chromatography. The total protein concentration of AG was measured by BCA (bicinchoninic acid disodium) assay. The anti-tumor activities in vivo were analyzed through H22 (mouse hepatocellular carcinoma cell line H22) tumor xenografts mice. The cytotoxic activity of AG on Bel-7402 cells was evaluated by MTT assays. AFP (alpha fetoprotein) was detected by radioimmunoassay. ALB (albumin), ALP (alkaline phosphatase) and γ-GT (γ-glutamyl transpeptidase) were detected by biochemical methods with commercial kits. While morphological changes were observed through an inverted microscope. Moreover, the expression level of the proteins involved in MAPK (mitogen-activated protein kinase) signal pathway which was closely related to cellular differentiation was assessed by Western blot.

Results

AG showed obviously anti-tumor activity in vivo and anti-proliferative activity on Bel-7402 cells in vitro both dose-dependently. The number of clones of Bel-7402 cells treated with AG reduced and the cells were displaying differentiation state such as relatively bigger size and dispersed growth. The biochemical function markers of the cells were significantly changed after being treated with AG. The data showed that AFP secretion of the cells decreased 42.5%, ALB secretion increased 58.9%, the activity of ALP and γ-GT markedly decreased 67.0% and 48.5% separately when the concentration of AG was 10 μl/ml, and those effects were all in a dose-dependent manner. The major original and phosphorylated signal proteins (ERK1/2 (extracellular sigal-regualted kinase 1/2), P38 (p38 MAPK) and JNK1/2 (c-Jun N-terminal kinase 1/2)) involved in MAPK signal pathway were measured and the results showed that AG activated the ERK1/2 of Bel-7402 cells.

Conclusions

AG has anti-tumor activity in vivo and inhibits Bel-7402 cell proliferation in vitro through inducing cell differentiation, and the mechanism involves the activation of ERK1/2.     

多棘蜈蚣与少棘蜈蚣抗肿瘤作用研究

目的:探讨两种蜈蚣的抗肿瘤作用。方法:以MTT法测定两种蜈蚣的含药血清对人肝癌细胞系Bel-7402生长的抑制作用;体内试验将小鼠接种S180实体瘤后检测两种蜈蚣对小鼠S180实体瘤生长的抑制作用。结果:两种蜈蚣均可明显抑制肝癌细胞株Bel-7402的增殖;多棘蜈蚣和少棘蜈蚣0.2,0.4,0.6 g.kg-1对小鼠S180实体型肿瘤均有明显抑制作用(P<0.01),抑瘤率分别为60.95%,63.68%,69.01%和48.52%,50.18%,50.83%。结论:两种蜈蚣均具有较强的抗肿瘤作用,无论体内和体外试验,多棘蜈蚣均有优于少棘蜈蚣的趋势。     

结直肠癌转移模型裸鼠血管因子变化及健脾消癌方干预作用

目的:探讨结直肠癌裸鼠转移模型组织中血管内皮生长因子(VEGF),内皮抑素(ES),血管生成素(ANG),血管抑素(AS),基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织金属蛋白酶抑制物(TIMP)变化及健脾消癌方干预的机制。方法:在BALB/C-nu裸鼠盲肠内注射HCT116细胞50μL,造裸鼠结直肠癌转移模型。将模型裸鼠分为模型组、健脾消癌方组(40 g·kg-1),另设空白组。所有动物灌胃给予相应药物4周后,蛋白免疫印迹法(Western blot)测定裸鼠结肠、肝、肺及盲肠肿瘤组织中相关血管因子蛋白表达。结果:HCT116结直肠癌模型裸鼠的结肠、肝、肺与肿瘤组织的VEGF,MMP-9,TIMP明显升高(P0.05,P0.01);ANG在结肠、肝与肿瘤组织也明显升高(P0.05,P0.01);ES在结肠、肺与肿瘤组织显著降低,AS在肝、肺及肿瘤组织显著降低(P0.05)。健脾消癌方组的结肠MMP-9,肿瘤TIMP,肝组织ANG,MMP-9及肺组织VEGF明显降低,肺组织AS明显升高(P0.05)。结论:HCT116结直肠癌模型裸鼠VEGF,ANG,MMP-9在结肠、肝、肺及肿瘤组织中蛋白表达升高,ES,AS降低,TIMP升高;健脾消癌方能比较全面地改善机体抗肿瘤血管生成的能力。     

白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞生长的影响

目的研究白花蛇舌草多糖对体外培养的人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞生长的影响。方法常规法体外培养人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞,设空白对照组、阳性对照组和供试药物组(大、中、小剂量),分别采用MTT法和流式细胞仪检测白花蛇舌草多糖对人宫颈癌Hela细胞和人肝癌Bel-7402细胞的生长抑制率和凋亡率;采用倒置显微镜观察细胞形态学变化。结果白花蛇舌草多糖可抑制人肝癌Bel-7402细胞和人宫颈癌Hela细胞的生长,并促进其凋亡,其作用效果与其浓度正相关,与空白对照组相比具均有显著性差异(P﹤0.01)。结论本研究结果提示,白花蛇舌草多糖具有较好的抗肿瘤活性。     

扶正解毒法对肝癌患者TACE术后临床作用的研究

目的：探讨扶正解毒法复方中药对TACE术后肝癌患者的作用。方法：将45例行TACE术的肝癌患者作为治疗组,予常规护肝对症处理加扶正解毒复方中药,观察1月内患者临床症状积分与肝功能、AFP的变化,并与用同样常规护肝对症处理的对照组37例比较。结果：治疗组患者除纳差在术后1周改善不明显外,恶心、腹胀、疲乏在术后1周和1月时皆较治疗前改善(P＜0.01或P<0.05)；对照组患者术后1周时除恶心较治疗前有改善外(P<0.05),纳差、腹胀、疲乏改善不明显,但治疗1月后恶心、纳差、疲乏均得到改善(P＜0.01或P<0.05)；治疗组1周和1月时的总症状积分减少较对照组明显(P<0.05)。术后1月,治疗组和对照组除ALB外,ALT,TBIL,AFP均较术前好转(P＜0.01或P＜0.05),治疗组TBIL改善较对照组明显(P<0.05)。结论：扶正解毒法复方中药能减轻肝癌患者TACE术后的反应,促进肝功能的恢复,提高患者的生存质量。     

麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系的抑制增殖作用研究

目的　研究麝黄消瘤汤对人肝癌细胞系 (Bel- 74 0 2 )的抑制增殖作用。方法　制备含药血清 ,孵化人肝癌细胞系 (Bel- 74 0 2 ) ,用MTT比色法、倒置相差显微镜观察法及PCNA(增殖细胞核抗原 )免疫组化染色法等方法研究不同浓度的麝黄消瘤汤含药血清 ,经过不同作用时间对人肝癌细胞系的抑制增殖作用。结果　麝黄消瘤汤含药血清对人肝癌细胞系有明显杀伤作用 ,最大杀伤率达 98.4 5 % (含药血清浓度为 30 % ,孵化 72h) ;可明显降低人肝癌细胞系PCNA阳性细胞率 ,含药血清浓度 2 0 %、孵化 72h后PCNA阳性细胞率为 97.32 %。结论　麝黄消瘤汤对人肝癌系有显著的抑制增殖作用