硫化氢对化学性缺氧诱导PC12细胞凋亡的影响

【目的】 探讨硫化氢(H2S)对抗二氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的作用及其初步机制｡【方法】 应用化学性缺氧模拟剂CoCl2在PC12细胞建立化学性缺氧损伤模型;以硫氢化钠(NaHS)作为H2S的供体;应用CCK-8比色法检测细胞存活率;碘化丙啶(PI)染色流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡率; Hoechst33258 染色检测细胞凋亡的形态学变化; 罗丹明123(Rh123) 染色荧光显微镜照相检测细胞线粒体膜电位(MMP); 2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相检测细胞内的活性氧 (ROS)水平｡【结果】 CoCl2引起PC12细胞的存活率显著降低及凋亡率明显增加, 同时引起PC12细胞的MMP 明显降低及ROS 生成显著增加｡在600 μmol/L CoCl2处理PC12细胞前,应用100 ~ 400 μmol/L NaHS 预处理30 min,呈浓度依赖性地阻断CoCl2引起PC12细胞的存活率降低; 200 μmol/L､400 μmol/L NaHS 预处理能显著地降低600 μmol/L CoCl2 引起PC12 细胞的凋亡率增加并阻断CoCl2 引起的MMP降低及ROS升高｡【结论】 H2S 具有神经细胞保护作用, 能明显地对抗CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,此作用可能与其减少ROS生成,提高MMP有关｡     

多巴胺和谷胱甘肽对PC12细胞凋亡的影响

目的研究帕金森病（PD）黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法用脱氧核糖核酸（DNA）标记法,借助荧光显微镜观察多巴胺（DA）和还原型谷胱甘肽（GSH）对PC12细胞凋亡的影响。结果发现DA可诱发PC12细胞凋亡,适中浓度时（0．45mmol／L）PC12细胞凋亡数最多（凋亡率为48．7％±6．3％）;抗氧化剂还原型合胱甘肽（GSH）可部分阻止DA诱发的PC12细胞凋亡（P＜0．01）。结论凋亡参与了PD的病变过程,采用适当的抗氧化剂对于PD治疗具有积极的意义。     

人参总皂苷对PC12细胞分化的影响

目的:研究人参总皂苷(Total saponin ofpanax ginseng,TSPG)诱导PC12细胞神经元性分化的作用.方法:体外培养PC12细胞,观察PC12细胞在TSPG的影响下细胞发生的形态学改变.诱导48 h透射电镜观察突触连接形成情况,72 h利用免疫细胞化学技术,观察TSPG作用后PC12细胞向MA...     

神经再生素对PC12细胞凋亡的影响

目的 :研究神经再生素 (NRF)对PC12细胞凋亡的影响。方法 :通过多种方法 ,了解NRF对低浓度血清培养下PC12细胞凋亡的影响。结果 :培养细胞的突起生长数量和长度、MTT微量比色、AnnexinV -PE/7AAD显示的凋亡细胞比例、caspase -3活力的检测等指标 ,在NRF组和NGF组间无明显差异 ;和空白对照组间差异有显著性意义。结论 :NRF对低血清培养下PC12细胞的凋亡有抑制作用     

波形蛋白影响PC12细胞神经分化的研究

目的 探究波形蛋白分子在PC12细胞神经分化中的作用。方法 用免疫印迹方法检测PC12H和PC12L细胞中波形蛋白的表达情况。用免疫印迹方法检测PC12H细胞和PC12L细胞在NGF处理前后波形蛋白的表达情况。构建波形蛋白干扰质粒,用免疫印迹方法检测该质粒的干扰效果。分别将对照质粒、波形蛋白干扰质粒瞬时转染PC12H细胞,培养0、1、2、3天观察与记录细胞的分化情况,用Image-pro plus软件定量分析这两组细胞的平均神经突长度和含分化神经突细胞的百分比例。结果 PC12H细胞中波形蛋白的表达明显高于PC12L细胞（P=0.000）。NGF处理后PC12H和PC12L细胞中波形蛋白的表达量均增加,且在PC12L细胞中更明显（P=0.000）。波形蛋白干扰质粒能有效地抑制PC12H细胞中波形蛋白的表达（P=0.000）。瞬时转染波形蛋白干扰质粒能有效地抑制PC12H细胞的神经分化,定量分析结果显示干扰组细胞的平均神经突长度和含分化神经突细胞的百分比均明显小于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000）。结论 波形蛋白分子可以促进PC12细胞的神经分化。     

MCI-186对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的:研究MCI-86对PC12细胞凋亡的影响.方法:以过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡模型,采用MTT比色法,琼脂糖凝胶电泳分析,荧光染色及荧光显微镜形态学观察,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡.结果:MCI-186可有效地改善凋亡引起的PC12细胞形态学变化,提高细胞存活率,1×10-5 mol/L MCI-186可减小亚二倍体峰的峰面积,使凋亡细胞比率(1.99)小于损伤对照组细胞(6.45).结论:MCI-186可能作用于细胞凋亡过程,通过清除活性氧,对神经细胞凋亡具有抑制作用.     

川芎嗪对PC12细胞抗凋亡作用的实验研究

目的　探讨川芎嗪对多巴胺诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及机制。方法　用多巴胺 (DA)刺激PC12细胞使其发生细胞凋亡 ,用流式细胞仪检测PC12细胞二倍体比率表征细胞凋亡率 ,用MTT法测定细胞活性 ,用Griess法间接测定NO的浓度 ,比较分析加入不同剂量的川芎嗪后对上述指标的影响。结果　加入 0 .3 0、0 .60mmol L的DA两组的PC12细胞的凋亡率、培养上清NO含量均显著高于无DA组 (P <0 .0 5 ) ,细胞活性显著低于无DA组 (P <0 .0 5 )。加入川芎嗪后 ,细胞凋亡率、NO含量均显著低于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )、细胞活性显著高于未加入川芎嗪组 (P <0 .0 5 )。结论　川芎嗪可抑制DA引起的PC12细胞凋亡 ,此作用可能与降低NO生成有关。     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。     

EGb对MPP^＋诱导的PC12细胞凋亡的影响

目的 观察EGb对MPP^ 诱导的PC12细胞凋亡的细胞。方法 MPP^ 诱导PC12细胞凋亡,AO／EB染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞。结果 EGb50、100μg/ml在6h、12h、24h可抑制细胞凋亡,而EGb25μg/ml则无效。结论 EGb在6h、12h、24h时呈剂量依赖性降低细胞凋亡率,提示EGb有可能通过抑制DA能神经元凋亡而相对增加DA含量。     

神经节苷脂GM1对神经生长因子诱导PC12细胞分化的影响

目的 研究神经节苷脂GM1是否介导神经生长因子（NGF）诱导的PC12细胞的分化。方法 采用MTT法、葡萄神经酰胺合成抑制剂（D－PDMP）分析神经节苷脂GM1对NGF诱导的PC12细胞分化的影响。结果 神经节苷脂GM1对PC12细胞的生长无明显的影响，而能够促进NGF对PC12细胞的生长抑制作用；NGF能诱导PC12细胞分化，但NGF无法诱导神经节苷脂缺乏型PC12细胞的分化；在神经节苷脂缺乏型PC12细胞中添加神经节苷脂GM1后，细胞恢复对NGF的反应性。结论 神经节苷脂GM1在NGF诱导的PC12细胞分化过程中发挥重要作用。     

尼氟灭酸对氯化钴诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用

目的：探讨尼氟灭酸（NFA）对氯化钴（CoCl2）诱导血管内皮细胞凋亡的保护作用,阐明其可能的机制。方法将血管内皮细胞随机分为对照组、100μmol／L CoCl2损伤组和20、40μmol／L NFA保护组,四甲基偶氮唑蓝比色（ MTT）法检测各组细胞增殖活性,酶联免疫吸附试验（ ELISA ）检测细胞内相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax及Caspse-3的表达情况。结果 MTT检测,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞增殖活性明显降低（P＜0．01）;与CoCl2损伤组相比,20、40μmol／L NFA保护组在24 h细胞增殖活性升高（P＜0．05,P＜0．01）,40μmol／L NFA保护组更加明显。 ELISA法检测显示,与对照组比较,100μmol／L CoCl2组在24 h细胞Caspse-3、Bax的表达增多,Bcl-2表达减少（ P＜0．05,P＜0．01）。与损伤组相比,NFA处理缺氧后血管内皮细胞Caspse-3、Bax的表达减少,Bcl-2表达增多（P＜0．05,P＜0．01）。结论 CoCl2能诱导血管内皮细胞缺氧损伤,引起细胞的凋亡;NFA可以保护CoCl 2诱导的血管内皮细胞的缺氧损伤,这可能与上调Bcl-2、下调Bax和Caspse-3抑制其凋亡有关。     

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴(CoCl2)对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK8)法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α(HIF-1α)和凋亡相关蛋白(BCL2、BAX)的表达水平.结果 低浓度(50 μtmol/L)CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2(＞200 μtmol/L)虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高(P＜0.05),BCL2/BAX比率显著上调(P＜0.05).结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.     

溶血卵磷脂对牛视网膜微血管内皮细胞凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

目的: 探讨溶血卵磷脂(LPC)对牛视网膜微血管内皮细胞(BRECs)凋亡及细胞内钙离子浓度的影响.方法: 原代分离培养牛视网膜微血管内皮细胞,加入不同浓度的LPC,分别培养6 h、12 h、24 h,通过吖啶橙染色在荧光显微镜下观察细胞凋亡,流式细胞检测细胞凋亡率,F2000荧光光度计测细胞内钙离子浓度,并计算游离钙浓度.结果:(1)60 μmol/L LPC作用牛视网膜微血管内皮细胞24 h后, 细胞凋亡率明显高于LPC浓度为20 μmol/L及40 μmol/L时;(2) LPC浓度从20 μmol/L增加到60 μmol/L过程中,细胞内游离钙离子浓度明显增加,而且细胞内游离钙离子浓度的增加与LPC的作用时间有关,作用时间越长,钙离子浓度越高.结论: LPC能增加细胞内游离钙离子浓度,促使BRECs的凋亡,而且LPC的这种作用具有时间和剂量依赖性.因此,脂代谢紊乱可能是通过诱导BRECs的凋亡而发挥作用的.     

蛋白酶体抑制剂MG132对PC12细胞的增殖抑制作用

目的:了解蛋白酶体抑制剂MG132对多巴胺能细胞PC12增殖和凋亡的影响. 方法:用不同浓度的MG132处理PC12细胞3 d,通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)微量比色法检测MG132对PC12细胞增殖的影响,通过姬姆萨染色法和流式细胞术检测MG132对PC12细胞凋亡的影响. 结果:在作用时间相同(3 d)的条件下,随着MG132浓度的增高(0, 1, 2.5, 5, 10, 20 μmol/L),对PC12细胞增殖的抑制作用逐渐增强. 当MG132浓度达到2.5 μmol/L时,对PC12细胞的抑制率超过40%, IC50＝3.78 μmol/L. 同时,MG132能够明显诱导PC12细胞凋亡:姬姆萨染色显示,浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d,细胞凋亡率为24.7%,而对照为1.3%;流式细胞术分析结果表明,浓度为2.5 μmol/L的MG132作用3 d,细胞凋亡率为25.6%,而对照为0%. 结论:蛋白酶体抑制剂MG132能够抑制多巴胺能细胞PC12的增殖并诱导细胞凋亡,蛋白酶体活性的丧失可能影响到多巴胺能细胞的生存.     

姜酚肟对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用

 【目的】探讨姜酚肟对谷氨酸(glutamate, Glu)诱导PC12细胞损伤的保护作用。【方法】体外培养PC12细胞，建立谷氨酸诱导PC12细胞损伤的模型；采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术和Hoechst 33258 DNA 染色法检测细胞凋亡。【结果】经5 mmol/L的谷氨酸处理24 h后，PC12细胞活力比对照组降低，仅为对照组的58.3﹪。在一定浓度范围内，姜酚肟能保护PC12 细胞免受谷氨酸(5 mmol/L)的影响，但较高浓度时对细胞有一定的毒性。经不同浓度姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25 μg/mL)预处理后，细胞活力明显提高，其保护作用随浓度降低而升高，当浓度为6.25 μg/mL时效果最好，使PC12细胞的存活率达到75.2﹪（P<0.01），浓度为3.125 μg/mL 时，细胞存活率降为70.2﹪(P<0.01)。谷氨酸(5 mmol/L)能诱导PC12细胞凋亡，处理24 h 后细胞凋亡率为20.1﹪, 经姜酚肟(3.125、6.25、12.5、25 μg/ml )预处理后，细胞凋亡率明显降低，分别为3.5﹪(P<0.01), 2.8﹪(P<0.01), 9.6﹪(P<0.01), 17.7﹪(P<0.05)。【结论】谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡，较低浓度的姜酚肟能有效保护PC12细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤，其中6.25 μg/ml的姜酚肟效果最好。     

利福平对鱼藤酮致分化PC12细胞氧化应激的影响

【目的】 探讨利福平对鱼藤酮诱导的分化大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12)细胞形态&#65380;活性氧(ROS)&#65380;还原型谷胱甘肽(GSH)及细胞凋亡的影响&#65377;【方法】 利用鱼藤酮诱导分化PC12细胞建立帕金森病体外细胞模型;显微镜下观察细胞形态,酶标仪检测细胞还原型谷胱甘肽,流式细胞仪检测细胞活性氧和凋亡&#65377;【结果】 鱼藤酮组细胞内还原型谷胱甘肽含量低于两对照组,而活性氧含量及凋亡率均高于两对照组;经100&#65380;200和300 μmol/L各浓度利福平预处理后,利福平预防组3组细胞内活性氧含量及凋亡率均低于鱼藤酮组,而细胞内还原型谷胱甘肽含量高于鱼藤酮组,且存在浓度依赖性&#65377;【结论】 利福平可能通过氧化应激途径减轻鱼藤酮诱导的分化PC12细胞的损伤作用,且存在浓度依赖性&#65377;     

PC12细胞缺氧培养后细胞凋亡及其机制的研究

目的　探讨PC12细胞缺氧后细胞凋亡及其发生机制。方法　采用末端标记法 ,结合流式细胞术观察PC12细胞缺氧培养不同时间点细胞凋亡现象 ,以及DNA损伤相关基因表达的改变。结果　在缺氧 0 .5h开始出现凋亡细胞 ,p5 3、p2 1wafl/cipl蛋白表达也开始增高。至缺氧 1h凋亡细胞达高峰 ,p5 3、p2 1蛋白表达亦最高 (P <0 .0 1) ,缺氧 6～ 12h ,则以坏死为主 ,以上基因的表达均减弱。结论　缺氧后PC12细胞凋亡部分是由于DNA损伤严重、损伤不能及时得到修复所致。     

乳康饮及拆方对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究乳康饮及拆方对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 采用乳康饮及拆方含药血清处理人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,分别在24、48、72h时间点,用cell counting kit-8（CCK-8法）检测乳康饮及拆方在不同时间点对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用,FCM法（流式细胞术）检测乳康饮及拆方诱导MDA-MB-231细胞凋亡。结果 各组中药处理48h后,细胞增殖出现明显抑制,抑制率分别为46.05%、31.85%、41.24%,相对氟尿嘧啶组抑制作用时间有明显延迟,乳康饮组在48h与氟尿嘧啶组抑制率之间差异无统计学意义（P=0.076）。各处理组48h凋亡率分别为40.7%、16.3%、23.2%、57.5%,比空白对照组凋亡率显著增加（P<0.05）,乳康饮组与氟尿嘧啶组凋亡率差异无统计学意义,但高于拆方2组（P=0.000）。结论 乳康饮及其拆方能够显著抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,并诱导其凋亡。     

吲哚美辛防治增殖性玻璃体视网膜病变的实验研究

目的研究玻璃体腔内注射吲哚美辛（indomethacin,IN）对兔增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）的防治作用,并评价其对视网膜的毒性．方法防治实验15只健康有色成年兔分为3组（每组5只10只眼）：对照组、低剂量组、高剂量组．兔眼玻璃体腔内注入富含血小板的血浆制作PVR动物模型．术后1d,对照组玻璃体腔内注入溶剂无水乙醇,低剂量组注入含5mgIN的无水乙醇溶液,高剂量组注入含7．5mgIN的无水乙醇溶液．给药后7、14、21、28d分别行眼底检查并记录玻璃体腔内PVR的增殖程度．处死动物,抽取玻璃体及剪取玻璃体中的增殖条带,TUNEL法检测凋亡细胞,400倍光镜下计数各组的凋亡细胞数．毒性实验5只健康有色成年兔共10只眼行闪光视网膜电图检查（FERG）后玻璃体腔内注入含7．5mgIN的无水乙醇溶液,28d后行FERG检查,对给药前后的a波和b波的潜伏期及波幅进行统计分析．处死动物,取视网膜组织行透射电镜检查．结果防治实验：术后7d3个组间的PVR的增殖程度无差别（χ^2=6．00P≥0．05）,术后14、21、28d,与对照组相比,低剂量组和高剂量组的PVR的增殖程度均比对照组低（P〈0．05）,但高剂量与低剂量组间的PVR增殖程度无差异（P〉0．05）．高剂量与低剂量组的凋亡细胞数比对照组明显增多（P〈0．01）,但治疗组间的凋亡细胞数无差异（P〉0．05）．毒性实验：玻璃体腔内注射IN后28d,FERG的a波、b波的潜伏期延长（P〈0．05）,波幅降低（P〈0．01）．透射电镜示：视网膜有一定的改变．结论吲哚美辛能使实验性PVR模型的增殖程度降低,并能诱导PVR形成时玻璃体中及增殖膜上的增殖细胞凋亡．玻璃体腔内注射IN7．5mg时,对视网膜存在一定的毒性作用。     

瓜子金皂苷己对鱼藤酮损伤PC12细胞的保护作用及其对CREB的影响

目的：观察瓜子金皂苷己（polygalasaponin F,PS-F）对鱼藤酮损伤的PC12细胞的保护作用及其对cAMP反应元件结合蛋白（cAMP response element binding protein,CREB）表达的影响。方法：以鱼藤酮损伤的PC12细胞为模型,通过倒置显微镜观察细胞形态;Caspase 3活性检测试剂盒测定Caspase3 活性;荧光素酶报告基因技术检测CREB表达的变化。结果：PC12细胞在4 μmol·L^-1鱼藤酮损伤后,细胞出现萎缩变圆,折光率降低,Caspase 3 活性显著升高,呈现凋亡的现象。不同浓度（0.1,1.0,10.0 μmol·L^-）瓜子金皂苷己,能够剂量依赖性的减轻对细胞形态的影响,降低Caspase3活性。荧光素酶报告基因标记显示,瓜子金皂苷己能够增加报告基因CREB的表达。结论：瓜子金皂苷己能够抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞凋亡,其机制可能与增加CREB的表达有关,本研究提示,瓜子金皂苷己对神经系统具有一定的神经保护作用。