阻遏蛋白β-TrCP在小鼠牙胚不同发育时期的表达与意义

目的观察Sonic hedgehog（shh）信号转导通路的阻遏蛋白β- TrCP在小鼠牙胚发育不同时期的表达情况，探讨β- TrCP在晚期牙胚发育中的作用与意义。方法取不同发育时期的鼠胚、乳鼠鼠头标本，用标记生物素链亲和素LsAB法观察β- TrCP蛋白在不同发育时期牙胚组织的表达情况。结果β- TrCP在胚胎10.5、13.5、14.5、16.5、18.5 d的小鼠牙胚上皮层与间充质层，以及出生后0、3、6 d的小鼠成釉细胞与成牙本质细胞胞浆呈特征性表达。结论β- TrCP在正常发育小鼠牙胚及成釉细胞与成牙本质细胞特征性表达，提示β- TrCP在牙胚发育中维持/限定shh信号通路的正常信号转导具有重要意义。     

氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚中的表达

目的:研究氯离子通道CLC-7在小鼠牙胚发育过程中的表达及分布,探讨其在牙齿发育过程中的作用.方法:提取小鼠牙胚中的总RNA并制备不同发育阶段的小鼠牙胚标本,应用RT-PCR和免疫荧光染色方法检测CLC-7在小鼠牙胚中的表达及分布.结果:RT-PCR检测发现新生小鼠牙胚有Clcn7 mRNA的表达.免疫荧光染色发现E18小鼠牙胚开始有CLC-7的表达,CLC-7存在于牙胚多种细胞,如内釉上皮层细胞、中间层细胞、星网状层细胞、牙乳头细胞、成釉细胞、成牙本质细胞.结论:CLC-7在小鼠牙胚中呈特异性空间分布,可能参与牙胚发育过程的调节.     

小鼠磨牙牙胚发育过程中硫酸软骨素硫酸化模式的时空变化

目的:检测硫酸软骨素在小鼠磨牙牙胚发育过程中的硫酸化模式的时空变化。方法:取胎龄分别为E11.5、E13.5、E15.0、E16.5和E18.5d的ICR胎鼠头部,常规组织学处理,制备5μm厚矢状或冠状切片,用免疫组织化学方法检测4-硫酸软骨素、6-硫酸软骨素在下颌第一磨牙牙胚组织中的时空表达。结果:从小鼠牙胚开始发生到帽状期,4-硫酸软骨素只在牙源性上皮外层细胞与基底膜强表达,在牙源性间充质组织中不表达,钟状早期其开始在牙源性间充质组织中表达。6-硫酸软骨素只在牙源性间充质细胞中表达,且其与4-硫酸软骨素呈互补表达模式。结论:硫酸软骨素在牙胚发生过程中其硫酸化模式呈现时间-空间的特异性改变,这种特异性改变可能与小鼠磨牙牙胚的形态发生密切相关。     

小鼠牙胚发育过程中上游刺激因子1蛋白表达与分布模式的研究

目的:检测小鼠牙胚中上游刺激因子1(USF1)蛋白的表达及时空分布模式.方法:挖取P1和P11 d小鼠第一磨牙胚,抽提总蛋白,Western blot检测USF1蛋白表达;制备E13、16、19及P1、5、8、11、21 d和6月龄小鼠第一磨牙石蜡切片,免疫组化方法检测USF1蛋白的表达和分布.结果:Western blot从P11 d小鼠第一磨牙胚中检测到相对分子质量约43 000的特异性条带,但未从P1 d检测到;免疫组化染色从P5 d开始检测到较强的USF1阳性信号,持续至P11 d,阳性信号仅定位于成牙本质细胞与成釉细胞胞质;而蕾状期,帽状期,钟状期牙胚中未检测到阳性信号,并且在牙齿萌出后(P21 d与6月龄),牙齿中USF1阳性信号再次消失.结论:牙胚中有USF1蛋白表达,仅定位于分泌期的成牙本质细胞和成釉细胞,表达模式具有显著的时空特异性.     

小鼠帽状期和钟状早期磨牙牙胚差异表达基因的初探

目的筛选小鼠帽状期(E14.5)和钟状早期(E18.5)磨牙牙胚的差异表达基因。方法分离小鼠E14.5和E18.5磨牙牙胚,采用基因芯片技术检测相关的差异表达基因。结果共得到76条差异表达基因,上调基因71条,下调基因5条。结论 E18.5磨牙牙胚,调控细胞代谢、分化、极性形成酶类,调控免疫应答相关基因,转录、翻译相关基因,信号通路的信号分子、受体以及应激反应相关基因等功能的基因表达都显著上调,而细胞凋亡相关基因、氨基酸代谢激酶等的表达下调。     

巢蛋白在人牙齿发育过程中表达的免疫组化研究

目的:探讨巢蛋白(Nestin)在人牙齿发育过程中的表达模式和作用.方法:制备人牙齿发育各阶段以及人成牙本质细胞标本,采用SP法进行巢蛋白的免疫组织化学染色.结果:巢蛋白主要表达于功能性成牙本质细胞和成釉器.结论:巢蛋白参与人牙齿发育过程,特别是成牙本质细胞分化和基质分泌,可以作为功能性成牙本质细胞的标志物.     

上游刺激因子1在小鼠牙齿发育过程中表达的原位杂交研究

目的：检测小鼠牙齿发育中上游刺激因子1mRNA的表达及时空分布模式。方法：制备E13,16,19,P1,5,8,11,21d小鼠第一磨牙石蜡切片,用我们前期实验制备的USF1cDNA探针,原位杂交方法检测USF1mRNA的表达和分布。结果：原位杂交染色从钟状晚期小鼠牙胚中开始检测到阳性信号,持续至P11d,阳性信号主要定位于成牙本质细胞与成釉细胞;而蕾状期,帽状期,钟状期牙胚中未检测到阳性信号,并且在牙齿萌出后（P21d）,牙齿中USF1mRNA阳性信号再次消失。结论：牙胚中有USF1mRNA表达,主要位于分泌期的成牙本质细胞和成釉细胞,表达模式具有显著的时空特异性。     

小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞增殖、凋亡以及组织非特异性碱性磷酸酶的表达

目的:观察小鼠釉质发育过程中成釉器中间层细胞的增殖、凋亡和其组织非特异性碱性磷酸酶(tissue nonspecific alkaline phosphatase,TNSALP)的表达,探讨中间层在釉质形成过程中的可能作用.方法:取出生后1、3、5、7、9、11、15d的BALB/c小鼠56只,解剖分离含下颌第一磨牙区的下颌骨,脱钙,制片,HE染色进行牙釉质发育情况的组织学观察,分别采用原位末端标记法(TUNEL法)、SP免疫组织化学技术、PV二步法观察中间层细胞的凋亡及检测Bcl-2、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA),并对TNSALP进行组织学定位.通过Image-pro plus 6.0图像分析软件.对图像进行半定量分析.采用SPSS13.0软件包进行t检验、单因素方差分析及SNK-q检验.结果:出生后1d.中间层细胞增殖细胞核抗原由比成釉细胞表达高的强阳性表达逐渐降低;至7d时,其表达为阴性,而且中间层细胞随釉质的发育逐渐凋亡.中间层细胞先于成釉细胞表达TNSALP,出生后5d时即呈现强阳性染色,而后其表达又逐步减弱;成釉细胞7d时开始出现阳性,且呈逐渐增强趋势.结论:中间层细胞的增殖和凋亡及其TNSALP的表达与成釉细胞具有相关性,提示中间层细胞有可能参与成釉细胞的分化及釉质形成.     

PHEX抗体对小鼠牙胚发育影响的实验研究

目的:研究PHEX抗体对小鼠牙胚发育的影响,探讨PHEX在牙齿发育过程的作用.方法:E17孕鼠尾静脉注射浓度分别为0.1mg/kg(A组)和0.5mg/kg(B组)的PHEX抗体.对照组N组注射0.1mol/LPBS.采用Mallory三色法染色观察钟状早期(E18)、钟状晚期(P1)、牙齿硬组织形成和矿化期(P3)牙胚的发育情况.免疫组织化学染色观察牙胚中PHEX蛋白的表达情况.结果:Mallory三色法染色结果显示;3组牙胚中釉质的发育无显著差异;成牙本质细胞的分化和牙本质的形成在A、N组中未见明显区别,而在B组中则明显延迟和抑制.E18、P1、P3 3组成釉细胞中的PHEX蛋白在牙胚中的表达均呈强阳性.P1、P3 A组和N组中成牙本质细胞中的PHEX表达也呈强阳性,但B组在P1期靠近基底膜的牙乳头细胞中表达呈弱阳性,在P3期也仅有少量的弱阳性表达.结论:0.5 mg/kg浓度的PHEX抗体可显著抑制成牙本质细胞的分化以及PHEX在其中的表达,进而抑制牙本质的生成;PHEX抗体对成釉细胞的发育和釉质的矿化无明显作用.     

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因 敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

牙本质涎磷蛋白、Ⅰ型胶原蛋白在vps4b基因敲除鼠磨牙牙胚发育中的时空表达

目的 研究vps4b基因突变对牙齿发育相关蛋白——牙本质涎磷蛋白（DSPP）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）表达的影响。方法 取胚胎E13.5 d、E14.5 d、E16.5 d的胎鼠头部及出生后P2.5 d、P7 d的幼鼠下颌骨组织,石蜡包埋后获取第一磨牙牙胚组织切片,采用免疫组织化学染色法检测野生型小鼠和vps4b基因敲除小鼠牙胚中DSPP、COL-Ⅰ的表达。结果 野生鼠蕾状期和帽状期DSPP、COL-Ⅰ均未表达;钟状期DSPP在内釉上皮和牙乳头中有表达,COL-Ⅰ表达于牙乳头和牙囊;分泌期和矿化期DSPP、COL-Ⅰ在成釉细胞、成牙本质细胞、牙囊内均有表达,COL-Ⅰ在牙乳头内亦可见表达。小鼠vps4b基因敲除后,DSPP在钟状期牙乳头和分泌期牙乳头及牙囊内未见表达,COL-Ⅰ在钟状期及矿化期表达部位与野生型小鼠一致,分泌期在牙乳头的表达发生改变。结论 vps4b基因在牙胚发育中发挥重要作用;DSPP、COL-Ⅰ的表达可能受vps4b基因的调控,并与vps4b共同调节牙齿牙本质的发育。     

人牙胚发育过程中Smad3的表达变化及其意义

目的：观察转化生长因子β（TGF-β）特异的细胞内信号转导分子Smad3在人牙胚发育过程中的时空表达,探讨Smad3对牙胚发育的作用。方法：运用免疫组化方法观察Smad3在人牙胚发育各期的表达分布和表达变化情况。结果：Smad3在牙胚发育各期均有表达,但表达模式不尽相同,总的趋势是随着成釉细胞和成牙本质细胞的分化成熟而逐渐增强。结论：观察到Smad3在人牙胚发育不同时期的表达及其表达变化,提示Smad3可能在TGF-β调节成釉细胞和成牙本质细胞分化的信号转导过程中发挥一定的作用。     

BSP、OPN在小鼠牙胚发育中的表达

目的:探讨骨涎蛋白(Bone sialoprotein,BSP)、骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)在Balb/c小鼠牙胚发育各期的时空分布特点及两者在牙齿矿化过程中的作用。方法:采用免疫组化法观察Balb/c小鼠出生前后牙胚及颌骨中BSP、OPN的表达与分布。结果:BSP、OPN在牙胚发育中的时空分布模式存在差异。OPN在蕾状期的表达弱于BSP,两者在成釉器早期的发育中作用微弱;在帽状期、钟状期及牙体硬组织(牙冠、牙根)分泌形成期,OPN的表达范围及强度高于BSP,尤其在牙体硬组织形成期,OPN在牙胚各类细胞及骨组织中均呈强阳性表达。结论:BSP、OPN参与牙胚的发育及牙体硬组织的矿化成熟,在牙齿发育中发挥关键作用。     

Smad1在人牙胚发育过程中的表达变化

观察骨形成蛋白特异的细胞内信号转导分子Ｓｍａｄ１在人牙胚发育过程中的表达变化,探讨Ｓｍａｄ１在牙齿发育过程中的作用,方法制备人牙发育各期标本,免疫组化方法观察Ｓｍａｄ１在人牙胚发育过程中的表达情况。结果：Ｓｍａｄ１在牙胚发育的不同时期均见不同的时表达模式。     

bFGF在大鼠牙齿发育过程中表达的研究

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)在大鼠牙齿发育过程中的表达和分布变化,探讨bFGF在大鼠牙齿发育过程中的作用。方法:选用5、10、15、20、25d的大鼠,制备大鼠牙齿发育组织标本,采用免疫组织化学方法观察bFGF在大鼠牙齿不同阶段的表达情况。结果:在大鼠牙齿发育早期bFGF主要在成釉细胞表达,而在中间层和牙乳头表达较少。随着牙齿的发育,在成釉细胞、成牙本质细胞、前期牙本质和牙乳头表达逐渐加强。结论:bFGF可能与大鼠前期牙本质的沉积,牙釉质和牙本质的发育形成有关。     

新基因mcpr1在小鼠牙胚发育中的时空表达和意义

目的:探讨mcpr1在牙胚发生过程中的可能作用。方法:采用免疫组化LsAB法观察MCPR1在小鼠牙胚发育各个时期的表达分布及其变化情况。结果:MCPR1在小鼠牙胚各个时期均有表达,但各期分布模式有所不同,帽状期开始在成釉器上皮细胞表达,在釉结节内亦呈现强阳性表达,在分化成熟的成牙本质细胞及成釉细胞内呈现出强阳性表达。结论:mcpr1可能通过上皮-间充质之间的信号传递及相关基因的相互调控,参与成釉器的成熟及牙胚的发育。     

氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况,探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白,应用RT- PCR和Western blot检测ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC- 5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达,其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC- 5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达,提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。     

氯离子通道CIC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达

目的研究氯离子通道ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的表达情况，探讨其在牙齿发育过程中的作用。方法从不同发育阶段的大鼠牙胚中提取总RNA和蛋白，应用RT—PCR和Westem blot检测ClC-5在大鼠牙胚发育过程中mRNA和蛋白的表达情况。结果ClC-5在牙胚发育的过程中存在时空特异性表达，其mRNA和蛋白都主要在牙胚发育的钟状晚期表达。结论ClC-5在大鼠牙胚发育过程中的这种时空特异性表达，提示其可能在牙齿发育的过程中发挥一定的作用。