PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的　评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。　方法　采集海南省疟疾混合感染流行区 3 0 4份滤纸干血滴样本 ,根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列 ,设计合成 3条引物 ,采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段 ,检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA ;同时与镜检法进行比较。　结果　在 3 0 4份样本中 ,PCR法阳性 15份 ,其中间日疟 7份 ,恶性疟 8份 ;镜检法阳性11份 ,其中间日疟 6份 ,恶性疟 5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性 ;镜检阴性而PCR阳性的 4份样本 ,其扩增产物经限制性酶切鉴定 ,证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。　结论　此PCR检测体系灵敏、特异 ,对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

PCR检测疟疾混合感染的现场应用研究

目的 评价PCR检测技术在间日疟与恶性疟混合感染区诊断疟疾的现场应用价值。方法 采集海南省疟疾混合感染流行区304份滤纸干血滴样本，根据红内期疟原虫SSUrRNA基因序列，设计合成3条引物．采用PCR技术在同一反应体系中扩增出间日疟原虫和恶性疟原虫不同的DNA片段，检测现场所采样本中的间日疟原虫或恶性疟原虫DNA；同时与镜检法进行比较。结果 在304份样本中，PCR法阳性15份，其中间日疟7份．恶性疟8份；镜检法阳性11份，其中间日疟6份，恶性疟5份。镜检阳性的样本PCR均为阳性；镜检阴性而PCR阳性的4份样本，其扩增产物经限制性酶切鉴定，证实为间日疟原虫或恶性疟原虫DNA。结论 此PCR检测体系灵敏、特异．对诊断或鉴别诊断间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有实用价值。     

巢式PCR技术在输入性疟疾监测中的应用

目的评价巢式PCR技术在高疟区回国人员疟疾监测中的应用价值。方法收集2007-2009年自非洲、东南亚等疟疾流行区回国人员中疟疾现症患者及其他无症状高危人群的滤纸血,采用巢式PCR技术检测疟原虫ssRNA基因,并与血片镜检结果进行比对。结果巢式PCR检测53例血检确诊的疟疾现症患者均为阳性,两法的阳性符合率为100%,其中PCR检出恶性疟、间日疟混合感染6例,高于镜检检出的3例。检测疟疾流行区返回的高危人群157人,镜检阳性3例,阳性率1.91%;巢式PCR阳性5例,阳性率为3.18%;其中,镜检阳性、巢式PCR阴性的1例,镜检阴性、巢式PCR阳性的3例,两种方法的阳性符合率为66.7%,阴性符合率为98.1%,两法检测结果一致的血样占检测血样的97.5%。结论巢式PCR技术对输入性疟疾的监测具有实用价值。     

PCR鉴别诊断间日疟及恶性疟的研究

目的 :在同一反应体系中建立能鉴别诊断间日疟与恶性疟的 PCR检测方法。方法 :根据红内期疟原虫 SSUr RNA编码基因序列 ,设计合成 3个引物 ,采用聚合酶链反应技术 ,在同一反应体系中 ,间日疟原虫和恶性疟原虫分别预期被扩增出 34 1bp和 4 31bp的 DNA条带。结果 :间日疟原虫和恶性疟原虫模板在同一反应体系中分别被扩增出预期大小的 DNA片段 ,并经限制性酶切证实 ;杜氏利什曼原虫、弓形虫、健康人血及空白对照均无特异性扩增条带 ;以该检测体系至少可检出原虫血症为 2 .56× 10 ^-7间日疟原虫感染和 1.0 8× 10 ^-5恶性疟原虫感染 ;69份镜检阳性的间日疟和 2份恶性疟患者血样 PCR检测均为阳性 ,1例发热待查患者PCR诊断为间日疟 ,与镜检复查结果一致 ,所有疟疾阳性标本中未检出混合感染 ,2 0份健康人血 PCR均为阴性。结论 :该检测体系灵敏、特异 ,对于诊断间日疟和恶性疟以及鉴别间日疟原虫和恶性疟原虫混合感染具有一定的应用价值。     

上海市2例输入性卵形疟误诊病例的实验室诊断分析

上海市疾病预防控制中心(简称上海市疾控)采用显微镜检查、疟疾快速诊断检测(RDT)和疟疾核酸检测[NP-2002法、多重PCR法和荧光定量PCR (qPCR)法]对2例虫种分型存在争议的输入性疟疾患者的血样进行实验室诊断与分析。结果显示,上海市A区疾病预防控制中心(简称A区疾控)对患者1的初检结果为镜检查见恶性疟原虫,RDT检测结果为恶性疟阳性,未作核酸检测;上海市疾控对患者1的复核结果是镜检查见卵形疟原虫,RDT检测结果为恶性疟阳性,核酸检测结果为卵形疟原虫阳性。B区疾控分别采用镜检、 RDT和qPCR法对患者2进行初检,结果均为间日疟阳性;上海市疾控对患者2的复核结果为镜检查见卵形疟原虫,RDT结果为阴性,核酸检测结果为卵形疟阳性。     

标签引物-套式/多重PCR检测恶性疟原虫和间日疟原虫的研究

目的 建立简便、灵敏、低本底、可同时检测恶性疟原虫和间日疟原虫的套式/多重聚合酶链反应（PCR）系统。 方法 应用标签引物扩增技术、Primer Premier 5.0软件、美国生物信息中心(NCBI-BLAST)网络资源和矩阵试验法优化套式/多重PCR，检测疟疾患者滤纸血样并与镜检结果进行比较。 结果 新建立的标签引物套式/多重PCR，检测模拟现场滤纸血样的敏感性为恶性疟原虫1～2个虫/μl血，间日疟原虫5～10个虫/μl血。检测71份现场采集的镜检疟原虫阳性滤纸血样（恶性疟24份和间日疟47份）的结果与镜检结果的符合率分别为87.5%和100%。 结论 通过标签引物扩增技术优化的套式/多重PCR系统，适用于检测现场采集的滤纸血样，其检出低原虫血症的敏感性和鉴定虫种的准确性均优于镜检法，是很有潜力的疟疾诊断技术。     

疟疾胶体金免疫层析试条在间日疟流行区的诊断评价

目的 在现场评价疟疾胶体金免疫层析试条 （简称试条） 的诊断性能。 方法 2008年9～10月采集安徽省间日疟流行区蒙城县5个乡镇医院门诊部所有就诊的发热病人血样,用双盲法比较镜检法和试条测试的结果。 结果 共采集发热病人血样292份,镜检法检出疟原虫阳性181份,均为间日疟;试条检出疟原虫阳性163份,亦均为间日疟。两法检测结果一致的血样占92.8%（271/292）,其中均为阳性的163份,均为阴性的108份。两法检测结果不一致的21份血样中,镜检阳性的、试条检测阴性的有18份,镜检阴性的、试条检测阳性的有3份。原虫密度在＞1 000 个/μl、100～1 000 个/μl和＜100 个/μl时,试条检测阳性率分别为93.5%（115/123）、86.0%（43/50）和62.5%（5/8）。 结论 该快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条在疟疾流行区对间日疟有一定的诊断价值。     

用单克隆抗体——酶联免疫吸附试验双抗体夹心法检测人体疟原虫抗原的研究

采用兔抗恶性疟原虫(Fcc株)抗体包被,以现症疟疾病人滤纸血为检测样本,用两种单克隆抗体M_26-32。3F_9混合进行反应的ELISA双抗体夹心法检测红内期疟原虫抗原,取得较满意结果: 64份镜检阳性疟疾样本(海南岛恶性疟31份;江苏恶性疟16份,间日疟17份)和25份非疟疾对照样本测定结果,阳性和对照样本的平均增强率分别为77.5和     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR技术检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR技术检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp～320bp的特定Pf60.1基因片段;而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片段的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样,阳性对照为生疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp-320bp的特定Pf60.1基因片段,而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。     

2014年常州市“三热”病人疟原虫检测血涂片质量分析

目的 目的 了解常州市 “三热” 病人疟原虫检测血涂片制作质量, 为消除疟疾后的监测提供技术保障。方法 方法 抽取 2014年常州市各市 （区） 不少于3%的已检 “三热” 病人疟原虫检测阴性血涂片和全部阳性血涂片, 市级疟疾镜检站对血涂 片的制作、 染色、 清洁度和镜检结果进行复核, 并对复核结果进行统计分析。结果 结果 共复核阴性血涂片996张, 复核率为 4.52%, 血涂片制作、 染色、 清洁度合格率分别为92.87%、 93.27%和94.48%; 复核阳性血涂片34张, 未发现误检和漏检。7 个市 （区） 血涂片制作、 染色合格率均在90%以上; 除戚墅堰区清洁度合格率为81.36%外, 其他市 （区） 均＞90%。一级、 二 级、 三级医院血涂片制作、 染色、 清洁度合格率均＞90%。血涂片质量缺陷以沉渣、 血膜制作不规范及厚膜脱落为主, 分 别占25.91%、 21.76%和19.17%。结论 结论 常州市各市 （区） 疟原虫血涂片质量较好, 今后要进一步加强培训和指导, 以保证 消除后监测阶段的疟原虫镜检能力。     

快速诊断试剂盒在疟疾诊断中的应用效果

目的 探讨疟疾快速诊断试剂盒临床应用效果,为临床应用提供参考。方法 快速诊断试剂盒与镜检法对103 例疟疾、疑似疟疾进行检测对比分析。结果 镜检疟原虫阳性23 例（Pf 11 例、Pv10 例、Pm 和Po 各1 例）,阳性率22.33%;快速诊断试剂盒检测疟原虫阳性22 例（Pf 11 例、Pv 10 例、Pm 1例）,阳性率21.36%,卵形疟未检出。两方法检出阳性率无统计学意义（χ2=0.33,P>0.05）。该试剂的总灵敏性95.65% ,总特异性97.50% ,阳性预测值91.67% ,阴性预测值98.73% ,漏检率4.35% ,误诊率2.50%。结论 疟疾快速诊断试剂盒具有良好的疟疾诊断效果和简便、快速等优点,非常适合镜检技术和条件不足的基层医疗、预防机构开展疟疾检测。     

Evaluation of the performance of CareStart™ Malaria Pf/Pv Combo rapid diagnostic test for the diagnosis of malaria in Jimma, southwestern Ethiopia

Objective

To evaluate the diagnostic performance of CareStart™ Malaria Pf/Pv Combo test relative to microscopy, for the diagnosis of falciparum and vivax malaria in Ethiopia.

Methods

Two hundred and forty febrile patients visiting the Serbo health center in Jimma zone, southwestern Ethiopia, were involved in this study in 2008. Giemsa-stained thin and thick blood smears were prepared and microscopically examined under a 100× oil immersion microscope objective for Plasmodium species identification and determination of parasitemia respectively. CareStart™ Malaria Pf/Pv Combo test was performed as per the manufacturers’ instruction.

Findings

The validity of CareStart™ Malaria Pf/Pv Combo test for the diagnosis of Plasmodium was very good with a sensitivity of 95.8%, specificity of 100%, positive predictive value of 100% and negative predictive value of 96%. The test performed equally well for the identification of Plasmodium falciparum and P. vivax. The diagnostic performance of this CareStart™ test is comparable to light microscopy of thin and thick blood smears.

Conclusion

Although CareStart™ Malaria Pf/Pv Combo test and blood microscopy have comparable diagnostic performance for Plasmodium detection, the CareStart™ test has the added advantage of being simple to interpret, cost-efficient, and hence it is preferable to use this rapid diagnostic test for malaria diagnosis in areas where microscopy is not accessible and during times of malaria epidemics that are observed approximately every 4-5 years in Ethiopia.     

ELISA检测云南按蚊环子孢子蛋白的评价

目的　采用酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测疟疾媒介按蚊环子孢子蛋白(CSP),评价ELISA用于云南疟疾媒介按蚊传疟效能调查的可行性。　方法　现场捕获疟疾媒介按蚊经产蚊,每只蚊镜检3叶唾腺子孢子感染率,ELISA检测另3叶唾腺CSP;用含间日疟原虫配子体的患者血人工喂饲微小按蚊,11d后同法镜检唾腺子孢子感染率及ELISA检测唾腺CSP。在种植场捕获8种按蚊(微小按蚊、中华按蚊、多斑按蚊、迷糊按蚊、可赫按蚊、带足按蚊、菲律宾按蚊和须喙按蚊 )各龄成蚊,ELISA检测唾腺CSP。　结果　①现场捕获经产蚊1010只,镜检唾腺子孢子阳性7只,阳性率为0.69%;ELISA检测唾腺CSP阳性8只,阳性率为0.79%;其中6只蚊两项检测均为阳性,阳性率为0.59%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。②人工感染36只微小按蚊,镜检唾腺子孢子阳性27只,阳性率为75.0%;ELISA检测唾腺CSP阳性29只,阳性率为80.6%;其中有26只蚊两项检测(Pv2 10CSP)均阳性,阳性率为72.2%。两法比较,差异无显著性意义(P>0.05)。③种植场捕获8种按蚊各龄成蚊4675只,ELISA检测唾腺CSP阳性11只,阳性率为0.24%;其中Pv210阳性9只,Pf2A10阳性2只;微小按蚊、中华按蚊和多斑按蚊ELISA检测阳性     

2012-2015年上海市实验室疟疾检测能力比较分析

目的 比较疟原虫镜检、抗原快速检测（RDT）和核酸检测（PCR）3种方法在上海市级和区县级疾病预防控制中心（疾控中心）的应用情况,对该市疟疾实验室检测能力进行分析。方法 由上海市疾控中心收集2012-2015年上海市疟疾病例和疑似疟疾病例的血涂片、全血血样、病例复核确认记录单和上海市疟疾病例疫情资料,并对检测结果进行比较分析。结果 2012-2015年,上海市各区县共送检数据完整的样本212份,各区县中以金山区送样量最多（41.98%）,报告医院以三级医院送样量最多（82.07%）;1-10月间送检样本量逐渐增多。市疾控中心对212份血样均采用显微镜检、RDT和PCR 3种方法同时进行检测,综合判定疟疾确诊样本共计167份（78.77%）,阴性样本45份（21.23%）。区县级实验室使用显微镜检和国产RDT对样本进行检测,判定疟疾阳性样本153份（72.17%）,其中阳性未分型41份（19.34%）,阴性样本53份（25.00%）,未检测6份（2.83%）。报告医院与区县疾控中心镜检符合率为78.16%,区县疾控中心与市疾控中心镜检符合率为93.20%;区县级实验室RDT使用率为73.58%,国产RDT检测和市疾控中心进口RDT检测的符合率为93.59%。以市疾控中心检测结果作为标准,区县级实验室误判37份。99.37％的疟疾确诊病例为境外输入,包括非洲（85.44％）、亚洲（13.92％）和美洲（0.63％）。结论 上海市消除疟疾后的监测工作应结合多种检测方法,整合资源开展。     

国产试剂RDT诊断疟疾效果评价

目的将国产试剂疟疾快速诊断试验（RDT）检测结果与镜检结果及进口试剂RDT和PCR结果进行比较,评价国产试剂RDT诊断疟疾的效果。方法收集160例疟疾病人或疑似疟疾病人血样,分别采用两种RDT、镜检和PCR进行检测,对检测结果进行比较。结果160份血样采用国产、进口试剂RDT及镜检和PCR检测疟疾感染,阳性率分别为45．00％、47．50％、41．25％和42．50％,经配对资料的Х^2检验,差异无统计学意义（P〉0．05）;镜检和PCR法均检出2例卵形疟,而国产和进口试剂RDT均为阴性。以镜检为标准．到产试剂RDT检测间日疟和恶性疟的敏感度为94％,特异度87%,假阳性率13％,假阴性率6％,阳性预测值83％,阴性预测值95％;以PCR为标准,国产试剂RDT检测间日疟和恶性疟的敏感度为94％,特异度89％,假阳性率11％,假阴性率6％,阳性预测值83％,阴性预测值95％。国产试剂RDT与进口试剂RDT检测结果比较差异无统计学意义（Kappa=0．95,P〉0．05）。结论国产试剂RDT与进口试剂RDT检测结果高度一致,在基层可取代进口试剂RDT进行疟疾病例主动监测。     

Evaluation of the NOW Malaria Immunochromatographic Test for Quantitative Diagnosis of Falciparum and Vivax Malaria Parasite Density

The NOW® Malaria Test, an immunochromatographic test (ICT), was evaluated to determine its ability to quantitatively detect malaria parasites using 100 blood samples from Thailand, including 50 Plasmodium falciparum (Pf) infections and 50 P. vivax (Pv) infections. Intensities of the thickness of the visible bands of the positive ICT were compared with the parasite densities. In cases of Pf infection, the intensities of both HRP-2 bands (T1 bands: Pf specific bands) and aldolase bands (T2 bands: pan-Plasmodium bands) correlated with the parasite densities. The intensities of T2 bands in Pf positive samples showed better correlation with the parasite densities than the T1 bands. In the cases of Pv infection, the intensities of T2 bands were also well correlated with parasite density. These results suggest that the ICT is useful not only for rapid detection of malaria parasites but also for estimating parasite density.     

应用巢式PCR评价低流行区疟疾诊断结果

目的初步评价大连市疾控人员对疟疾的诊断能力,为低流行区疟疾诊断方法的选择提供理论依据。方法收集2010--2012年大连市上报的27例疟疾阳性病例的血液样本．应用巢式PCR（nest—PCR）方法对诊断结果进行复核：以复核结果为标准,比较镜检和快速诊断试剂盒（rapid diagnosistest．RDT）方法的检测敏感性及对虫种鉴定的正确率。结果27份样本的巢式PCR结果为恶性疟23份,间日疟2份,卵形疟l份,阴性1份,无混合感染。镜检对阳性样本的敏感度为76．9％（20／26）,远低于RDT方法的96．2％（25／26）;镜检和RDT联合使用,敏感度可达100％。对虫种的鉴别,镜检对阳性样本的正确检测率为50％（13／26）：RDT方法仅能鉴别恶性疟和非恶性疟．对恶性疟阳性样本的正确检测率为100％（23／23）。结论采用镜检和RDT联合应用的方法,能够提高检测的敏感性。建议在有条件的疾控单位建立人体疟原虫的分子检测体系．更有效地防止对疟疾病例的漏诊和误诊。