非酶糖基化终末产物抑制大鼠睾丸Leydig细胞睾酮的生成

目的:研究非酶糖基化终末产物受体(RAGE)在大鼠睾丸Leydig细胞上的表达及非酶糖基化终末产物(AGEs)对大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的抑制作用。方法:原代培养大鼠睾丸Leydig细胞,RT-PCR和免疫荧光技术检测RACE在大鼠Leydig细胞上表达,不同浓度AGEs处理Leydig细胞(25、50、100、200μg/ml),ELISA法测定睾酮分泌量。结果:RT-PCR和免疫荧光结果表明RAGE在大鼠睾丸Leydig细胞上表达,不同浓度AGEs处理后,人绒毛膜促性腺激素(hCG)诱导的Leydig细胞睾酮合成量呈剂量浓度依赖性下降,与对照组相比,50、100、200μg/ml AGEs处理组差异显著(P0.01)。结论:大鼠Leydig细胞上存在RAGE受体,AGEs显著抑制原代培养大鼠Leydig细胞睾酮的分泌。     

吸烟对雄性小鼠睾丸间质细胞、睾酮及精子数量的影响

目的探讨吸烟对雄性小鼠的睾丸间质细胞、血清睾酮含量及附睾精子数量的影响。方法雄性小鼠50只,随机分为5组,即经吸烟处理后6周、12周(吸烟组),未经特殊处理的6周、12周小鼠(对照组),及吸烟6周后戒烟6周(戒烟组)小鼠。对5组小鼠睾丸组织进行HE染色,光镜下观察支持细胞、问质细胞形态及结构;免疫组化方法分别计数5组小鼠睾丸支持细胞及问质细胞数量;利用酶联免疫法(ELIsA)测定小鼠体内睾酮含量:用石墨炉原子吸收光谱法测定血清镉含量;同时计数附睾精子数。结果 HE染色可见吸烟6周小鼠睾丸问质细胞数量减少;吸烟12周小鼠睾丸问质细胞数量稀少甚至消失:而睾丸支持细胞数量及形态与对照组相比未见明显改变。免疫组化发现吸烟组小鼠睾丸支持细胞数量与对照组相比无显著差异(P0.05)。问质细胞数量随吸烟时间延长而显著减少(P0.01);小鼠血清中睾酮水平吸烟组明显低于对照组(P0.01),且随吸烟时间的延长而下降(P0.01):吸烟组小鼠附睾精子汁数较对照组显著下降(P0.01),并且与吸烟时间呈正相关(P0.01)。而戒烟组中,睾丸问质细胞、血清睾酮含量、附睾精子数量3组数据都较吸烟组增高。结论吸烟可导致睾丸间质细胞的破坏,影响体内睾酮的生成,进而导致生精障碍,而戒烟可逆转此现象。     

邻苯二甲酸单乙基己基酯对原代培养大鼠睾丸Leydig细胞睾酮合成的影响

目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己基酯(DEHP)的代谢产物邻苯二甲酸单乙基己基酯(MEHP)对SD大鼠体外培养睾丸间质细胞(Leydigcells)睾酮合成的影响。方法:建立SD大鼠睾丸Leydig细胞体外原代培养模型,MEHP染毒剂量组分为对照(0μmol/L)、62.5、125、250、500、1000μmol/L,通过噻唑蓝(MTT)法观察线粒体活性,放射免疫法测定睾酮浓度,RTPCR法测定Leydig细胞类固醇合成急性调节蛋白(StAR)mRNA表达。结果:MEHP染毒24h后,Leydig细胞线粒体活性在250μmol/L时显著上升,1000μmol/L时显著下降,与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。基础状态及人绒毛膜促性腺激素(hCG)刺激状态下,Leydig细胞睾酮合成水平均呈上升趋势,与对照组相比,250、500μmol/L剂量组差异均有显著性(P<0.01)。Leydig细胞StARmRNA的表达在62.5、125、250μmol/L时与对照组相比均未见有显著性改变,在500、1000μmol/L时显著下降(P<0.01)。结论:MEHP直接影响原代培养Leydig细胞线粒体活性及睾酮合成,胆固醇跨膜转运的调节因子StAR与MEHP引起睾酮合成上升的原因可能无关。     

Cox7a2荧光载体构建及其在小鼠睾丸Leydig细胞表达和定位研究

目的构建Cox7a2的荧光表达载体,研究其在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达和定位。方法原代培养小鼠睾丸Leydig细胞并利用3β-HSD染色法鉴定,应用PCR方法研究Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞中的表达。利用BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点把Cox7a2克隆到pEYFP-N1。细胞转染和细胞荧光显微镜技术观察YFP-Cox7a2定位。结果Cox7a2表达在原代培养的小鼠睾丸Leydig细胞中。绿色荧光的YFP-Cox7a2和红色荧光的线粒体标记物- Mitotracker有完全的共定位。结论Cox7a2在小鼠睾丸Leydig细胞表达,成功构建Cox7a2真核荧光蛋白表达载体,明确YFP-Cox7a2定位在Leydig细胞的线粒体。这些结果将对老年男性睾丸间质细胞合成功能障碍的研究提供重要的信息。     

叶下株提取物对盐酸氮芥损伤睾丸组织N-钙粘蛋白表达的保护作用

目的:研究叶下珠(PU)提取物对盐酸氮芥(HN2)损伤睾丸组织N-钙粘蛋白表达的保护作用。方法:以5mg/kg高剂量HN2腹腔注射雄性KM小鼠制备生殖毒性模型,48只KM小鼠随机分为正常对照组、高剂量HN2组(5mg/kg)、高剂量HN2+低剂量PU(125mg/kg)干预组、高剂量HN2+中剂量PU(250mg/kg)干预组、高剂量HN2+高剂量PU(500mg/kg)干预组、高剂量PU组(500mg/kg)6组,每组8只。分别应用免疫组化染色、RT-PCR、Western印迹检测各组小鼠睾丸组织N-钙粘蛋白分布、mRNA及蛋白质表达水平变化。结果:N-钙粘蛋白主要分布在生精小管基底部Sertoli细胞及Leydig细胞、管周细胞胞膜及胞质;HN2处理后,N-钙粘蛋白仅在生精小管基底部及管周细胞有少许表达;不同剂量PU干预高剂量HN2处理后,睾丸内N-钙粘蛋白mRNA和蛋白质表达随PU干预剂量增加而明显上调(P<0.01);高剂量PU干预HN2组及高剂量PU组,N-钙粘蛋白分布表达与正常睾丸组织无明显差异(P>0.05)。结论:PU能有效干预HN2对睾丸组织N-钙粘蛋白表达的损伤。     

应用白消安构建唯支持细胞综合征小鼠动物模型

目的:构建稳定、可靠的小鼠唯支持细胞综合征模型。方法:60只SPF级NIH小鼠分成两组,分别给予30 mg/kg白消安腹腔注射及睾丸冷冻(0℃)30、60 min处理。于处理后2、4及8周,观察小鼠的生存率、睾丸重量及生精功能的变化,并对精子发生障碍程度进行定量化分析。结果:各组小鼠的基础体重值及处理后小鼠的生存率均无明显差异(P>0.05)。白消安处理后第4及8周,睾丸重量(g)(4周:0.04±0.01;8周:0.05±0.01)均显著低于对照组(4周:0.09±0.03;8周:0.11±0.02)(P<0.05),生精小管呈"唯支持细胞综合征"样改变,Johnsen评分(4周:3.86±0.50;8周:2.70±0.67)较对照组(4周:9.60±0.25;8周:9.76±0.43)均显著降低(P<0.01);睾丸冷冻30及60 min后,第2、4及8周睾丸重量(g)(冷冻30 min,2周:0.07±0.02;4周:0.06±0.01;8周:0.09±0.01)(冷冻60 min,2周:0.05±0.01;4周:0.04±0.02;8周:0.04±0.02)显著低于同期对照侧(2周:0.11±0.01;4周:0.11±0.01;8周:0.12±0.00)(P<0.05),睾丸形态学上易见生精小管萎缩、脱落、坏死及纤维化。各期冷冻组Johnsen评分(冷冻30 min,2周:4.70±0.67;4周;2.70±0.84;8周:6.10±1.14;冷冻60 min,2周:1.67±0.58;4周:1.20±0.45;8周:1.00±0.00)均显著低于同期对照组(2周:9.60±3.23;4周:9.60±0.55;8周:9.70±0.45)(P<0.01)。结论:白消安处理对小鼠的生存率无明显影响,可用来制备稳定、可靠的小鼠唯支持细胞综合征模型。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对小鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对小鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨隐睾发生的可能机制。方法:30只健康KM孕鼠随机均分为3组:空白对照组、玉米油对照组、DEHP组。DEHP组以剂量500mg/(kg.d)的DEHP灌胃作用于怀孕12～19d(GD12～GD19)的KM母鼠,观察DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重、睾丸重量、睾丸引带形态结构、位置、睾丸到膀胱颈之间的相对距离(TBD)、颅侧悬韧带残留情况、引带内雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、肌动蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响。结果:DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重无明显影响;DEHP可影响胎鼠睾丸重量及TBD;DEHP组睾丸均有一定程度的下降不全,睾丸引带形态结构无明显差异;光镜下见DEHP组睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;DEHP组睾丸引带AR阳性表达率降低(P<0.01)。结论:DEHP可通过抗雄激素效应导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导小鼠隐睾;同时造成睾丸Ser-toli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞的发育障碍和功能改变。     

白消安致小鼠精子再生模型的精子发生量化评价

目的:量化评价白消安二次腹腔注射制备的小鼠精子再生模型。方法:54只8～10周龄雄性昆明白小鼠随机分为对照组和两个模型组,每组18只。模型组小鼠分别以10mg/kg和15mg/kg白消安间隔24d二次腹腔注射建立精子再生模型,对照组小鼠以50%二甲基亚砜溶液10ml/kg间隔24d二次腹腔注射。采用Johns-en评分量化给药后3、4和8周时生精上皮精子发生,运用实时定量PCR技术检测这3个时期支持细胞GATA结合蛋白4(GATA-4)mRNA和胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA表达水平。结果:对照组Johnsen评分在各时期无显著差异(P>0.05)。给药后3周和4周,两模型组Johnsen评分均显著低于对照组(P<0.01);给药后4周和8周,15mg/kg组Johnsen评分均低于10mg/kg组(P<0.05);给药后8周,15mg/kg组Johnsen评分仍显著低于对照组(P<0.05),而10mg/kg组和对照组间无显著差异(P>0.05)。各组各时期支持细胞GATA-4mRNA表达均无显著差异(P>0.05)。对照组各时期支持细胞GDNF mRNA表达无显著差异(P>0.05)。两模型组支持细胞GDNF mRNA表达在给药后3周均高于对照组,而在给药后4周均低于对照组(P<0.01);给药后8周,15mg/kg组支持细胞GDNF mRNA表达低于对照组(P<0.01),而10mg/kg组与对照组无显著差异(P>0.05)。在以上3个时期,15mg/kg组GDNF mRNA表达均低于10mg/kg组(P<0.01)。结论:10mg/kg白消安间隔24d二次腹腔注射是建立小鼠精子再生模型的适宜剂量,增大剂量可使支持细胞GDNF mRNA表达不足,导致精子发生不能完全恢复。     

睾丸移植物中支持细胞相关基因和蛋白表达的研究

目的 研究新生小鼠睾丸组织异体异位移植后,几种在睾丸支持细胞中起重要作用的基因和蛋白表达情况,为异体异位睾丸组织移植模型用于科研及临床的可行性提供进一步实验数据.方法 将162只1～2d昆明小鼠的睾丸移植到54只7～12周去势雄性免疫缺陷小鼠背部;在移植后9个时间段(3d和1～8周)取出移植物;选取4种在睾丸支持细胞中表达或高表达的基因abp、amh、vim和clu,采用聚合酶链反应,对发育不同阶段移植物中4种基因的表达情况进行分析,并与正常小鼠相应各年龄段睾丸中的基因表达相比较;同时采用免疫组织化学方法对支持细胞的GATA-4蛋白在移植物组织中的表达量及分布情况进行分析.结果 在9个时间段取出的移植物中,所测定4种基因的表达趋势与在正常小鼠睾丸中所见基本相同;免疫组化结果显示,4周和8周移植物支持细胞中GATA-4蛋白呈高表达,与在正常小鼠睾丸组织支持细胞中的表达基本一致.结论 新生小鼠睾丸组织异体异位移植到免疫缺陷小鼠体内后,支持细胞的发育在组织形态学以及几种受试基因的表达趋势和蛋白的表达情况与在正常小鼠中的表现基本相同.     

GATA家族与生殖

GATA家族是一族含锌指结构的转录调节因子,在人和哺乳动物中广泛表达,同时在器官形态发生、细胞的增殖和性别的分化中扮演着重要的角色。GATA-4和GATA-6在人类、小鼠、猪和鸡的卵巢和睾丸中被鉴定。GA-TA-4通过基因调节苗勒管的退化和雄激素的产生来促成雄性生殖腺的发育。GATA-4和GATA-6存在于小鼠胎儿的卵巢和睾丸的细胞中,并能够调节这些细胞的功能,尤其是卵巢的颗粒细胞、膜细胞、睾丸的支持细胞和间质细胞。GATA-4还存在于小鼠胎儿期和青春前期的生精细胞内。     

不同发育阶段Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织iNOS的变化

目的:对不同周龄的Fmr1(fragile X mental retardation 1)基因敲除和野生型雄性小鼠睾丸组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达进行分析比较,探讨Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织中iNOS表达的差异,为脆性X综合征的研究提供背景资料。方法:不同周龄(4、6、8、10周)的Fmr1基因敲除型和野生型雄性小鼠各6只,先采用PCR技术对基因敲除和野生型小鼠进行基因型鉴定,之后所有小鼠麻醉取睾丸组织,采用石蜡包埋切片免疫组化染色技术对基因敲除和野生型小鼠睾丸iNOS的表达进行检测并作对比分析。结果:iNOS在4周野生型小鼠睾丸间质细胞呈弱阳性表达,在6周小鼠呈阳性表达,在8周和10周小鼠呈强阳性表达,且基因敲除小鼠睾丸的iNOS表达均弱于野生型小鼠。结论:Fmr1基因敲除小鼠在缺失FMR1蛋白(FMRP)后的睾丸组织中iNOS的表达降低。     

年龄相关分子c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾中的表达

目的:检查c-kit、HIWI和波形蛋白在不同月龄大鼠睾丸和附睾组织中的表达差异,研究睾丸和附睾在成熟和衰老过程中特征性分子表达的规律性改变,为研究男性生殖系统衰老提供实验依据。方法:运用免疫组织化学方法检查6、12、24月龄SD大鼠睾丸和附睾组织中c-kit、HIWI和波形蛋白抗体免疫反应强度,并对其进行比较分析。结果:c-kit特异性免疫反应阳性主要表达于精原细胞,其他细胞表达水平甚弱,不同月龄差异不显著。附睾上皮、附睾管腔内成分亦有c-kit阳性表达。HIWI在大鼠睾丸和附睾组织中表达也很丰富,6月龄和12月龄大鼠中各级生精细胞,尤其是精原细胞和初级精母细胞为免疫反应强阳性细胞;支持细胞、间质细胞、类肌细胞和血管内皮细胞亦为HIWI阳性细胞。附睾上皮有HIWI阳性表达。但是24月龄大鼠睾丸和附睾组织中HIWI表达下调。波形蛋白在睾丸和附睾组织中表达模式为6月龄大鼠睾丸和附睾组织中低表达,24月龄大鼠睾丸和附睾组织表达明显上调(P<0.01)。结论:c-kit、HIWI在24月龄动物睾丸和附睾组织中表达下调,波形蛋白表达随增龄而明显增强。结果提示,睾丸和附睾组织的衰老与细胞和细胞信号转导异常密切相关。     

出生后注射雌二醇诱导隐睾性不育小鼠模型的实验研究

目的:观察出生后注射雌二醇诱导小鼠隐睾模型的发生率及生精情况。方法:90只雄性新生Balb/C小鼠随机分为实验组(n=60)、溶剂对照组(n=20)和正常对照组(n=10)。实验组进一步随机分为4个亚组,分别于出生后3～28 d(4周组)、3～42 d(6周组)、3～56 d(8周组)、3～70 d(10周组)给予皮下注射17-β雌二醇(5μg/d)。观察停药后2周隐睾发生率及形态学变化。结果:实验组各亚组(4、6、8、10周组)停药后2周隐睾发生率分别为0%、26.7%、60%、60%。而对照组均无隐睾发生。在4周和6周组停药后均出现隐睾自行下降恢复生精的情况,连续注药8周后模型稳定,隐睾生精不恢复。结论:出生后连续注射雌二醇8周能够建立稳定的隐睾性不育小鼠模型。     

瘦素及其受体在精索静脉曲张模型大鼠附睾组织的表达及意义

目的:探讨瘦素及其受体在精索静脉曲张模型大鼠附睾组织的表达及其意义。方法:将40只SD大鼠随机分为精索静脉曲张(EV)持续4、8周组(EV4、EV8组,每组12只)和相应的假手术对照组(Control 4、Control 8组,每组8只)。采用左肾静脉部分结扎的方法建立精索静脉曲张模型。采用免疫组织化学法检测大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体表达情况,采用实时定量PCR法检测大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体mRNA表达量。结果:EV4组、EV8组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体表达分别比Control 4组、Control 8组显著增强(P<0.01);而EV4组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体表达与EV8组比较无显著性差异(P>0.05)。EV4组、EV8组附睾上皮细胞瘦素及瘦素受体mRNA的表达分别比Control 4组、Control 8组显著增加(P<0.01);而EV4组瘦素及瘦素受体mRNA的表达与EV8组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:精索静脉曲张大鼠附睾组织中瘦素及瘦素受体的表达明显增加,瘦素可能参与了精索静脉曲张引起男性不育的机制。     

Effect of cocaine on germ cell apoptosis in rats at different ages

Aim:To investigate the effect of cocaine on apoptosis and caspase-3 activity in germ cells in male rats at differentages.Methods:Cocaine hydrochloride was given(15 mg/kg body weight s.c.)to male Sprague-Dawley rats of3 weeks(n=8),6 weeks(n=8)and 12 weeks(n=8)of age,daily for 28 days.The serum levels of folliclestimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH),prolactin(PRL),testosterone(T)and estrogen(E_2)wereassayed,and the DNA fragmentation of germ cells was determined by gel eletronphoresis.The cell cycle,apoptosisand caspase-3 activity of germ cells were tested by flow cytometry.Results:After the 28-day cocaine treatment,testes weight of the 3-week-old rats,the testes and body weights of the 6-week-old rats were decreased significantlycompared to those of their corresponding controls(P<0.05).The serum level of T was decreased significantly inthe 3-week-old and 6-week-old rats,and the serum level of PRL was also decreased significantly in 12-week-old ratscompared to the controls(P<0.05).In all the three cocaine-treated groups,the isolated DNA displayed a clear ladderpattern,especially in the 6-week old rats.The number of apoptosic germ cells increased significantly in 3-and 6-week-old rats treated with cocaine(P<0.05).The caspase-3 activity in all three groups increased significantlycompared to the controls(P<0.05),especially in the 6-week-old rats.Conelusion:Cocaine exposure for 28 daysleads to significant damage to male gonad and apoptosis elevation in testes of rats of different ages,especially in thoseof 6 weeks of age.The increase in caspase-3 activity might be a key pathway related to the early stage of apoptosisas the mechanism of cocaine-induced germ cell loss.(Asian J Androl 2006 Sep;8:569-575)     

Effects of Sirt1 gene knockout on chronic kidney disease induced by 5/6 nephrectomy in mice and VEGF/Flk?1 signaling pathway

Objective To investigate the effect of Sirt1 gene knockout on chronic kidney disease induced by 5/6 nephrectomy in mice and vascular endothelial growth factor (VEGF)/fetal liver kinase-1 (Flk-1) signaling pathway. Methods Twenty four male Sirt1+/+ and Sirt1+/- mice were randomly divided into four groups: Sirt1+/+ mice with sham-operation (WT-Sham, n=6), Sirt1+/- mice with sham-operation (KO-Sham, n=6), Sirt1+/+ mice with 5/6 nephrectomy (WT-Nx, n=6) and Sirt1+/- mice with 5/6 nephrectomy (KO-Nx, n=6). Proteinuria was determined by urine collection from 8:00 to 8:00 the next day at 20 weeks. Serum creatinine (Scr), urea nitrogen (BUN) and the renal pathological changes were measured after 20 weeks. Expressions of Sirt1, collagenⅠ and transforming growth factor β (TGF-β) were used to analyze the changes of renal fibrosis by immunohistochemistry staining. Real-time PCR and Western blotting were used to measure the mRNA and protein expressions of Sirt1, fibronectin, collagenⅠ,VEGF and Flk-1 in kidney. Results Sirt1 expressed in glomerular endothelial cells, podocytes, mesangial cells and renal tubular epithelial cells in Sirt1+/+ mice, while Sirt1 expression intensity was significantly reduced in Sirt1+/- mice. Compared with the WT-Sham group, WT-Nx group had increased proteinuria, BUN, Scr, glomerular sclerosis index and tubulointerstitial fibrosis index at 12 weeks after operation (all P＜0.01), and KO-Nx group had exacerbated the above up-regulations (all P＜0.01). Compared with those in WT-Sham group, the expressions of fibronectin, collagenⅠ and TGF-β were up-regulated in WT-Nx group (all P＜0.01), and were significantly augmented in KO-Nx group (all P＜0.01). Compared with those in WT-Sham group, renal mRNA and protein expressions of VEGF and Flk-1 were decreased in WT-Nx group, and KO-Nx group aggravated their down-regulation (all P＜0.01). Conclusions Sirt1 gene knockout can increase proteinuria and Scr, and aggravate renal pathology and renal fibrosis in 5/6 nephrectomized mice, which is associated with the inhibition of VEGF/Flk-1 signaling pathway. It is suggested that Sirt1 may be a potential therapeutic target of chronic kidney disease.     

可卡因诱导不同年龄段大鼠生殖系统损害模型的建立及生精细胞凋亡状况的研究

目的 建立可卡因诱导不同年龄段大鼠生殖系统损害动物模型,探讨可卡因对不同年龄段大鼠生精细胞凋亡影响。方法 应用3、6、12周龄SD雄性大鼠皮下注射可卡因28d建立吸毒动物模型。测定血清性激素浓度,分析生殖细胞凋亡状况。结果 可卡因诱导4周后,3周龄大鼠睾丸重量减轻(P<0.05),其他生殖器官重量无明显影响;6周龄大鼠睾丸、附睾和阴茎重量减轻(P<0.05),其中睾丸重量差异有非常显著性(P<0.01);12周龄大鼠生殖器官重量则均无明显影响(P>0.05)。3周龄实验组大鼠睾酮(T)降低,雌二醇(E2)升高(P<0.05);6周龄实验组大鼠T明显降低(P<0.05),而E2变化;12周龄实验组大鼠T、E2差异无显著性(P>0.05)。3个年龄段实验组大鼠均出现细胞凋亡梯带,生精细胞凋亡峰值明显增高,其中6周龄组最为显著。3、6和12周龄实验组大鼠睾丸生精细胞半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)活性均较对照组明显增高,其中6周龄实验组 Caspase-3活性增高更为明显(P<0.01),Caspase-3活性增加与血清雄激素水平呈负相关(P<0.05)。结论 可卡因诱导不同年龄段大鼠 28 d可致大鼠生殖器官发育和生殖内分泌功能损害,造成生精细胞凋亡增加,增殖能力下降。该模型是研究毒品影响不同年龄段雄性大鼠生殖系统损害较为理想的方法。     

Adonesine A1 receptor and megalin defect in diabetic mice with early kidney disease

Objective To observe the effect of adenosine A1 receptor (A1AR) on the megalin defect in type 1 diabetic mice with early kidney disease. Methods 7-8 week-old, baseline body weight and fasting blood glucose matched wild type (WT) C57BL/6J mice were selected, and randomly divided into two groups: control group (n=6) and WT DM group (n=6). In the same way, male A1AR knock-out C57BL/6J mice were selected as A1AR-/- DM group (n=6). DM model was established by intraperitoneal injection of streptozocin. The blood glucose (BG), body weight (BW), kidney weight (KW), 24 h proteinuria (24hUP) and albumin creatine ratio (ACR) were measured at 4 weeks. The renal pathological lesion was observed and the expression of megalin in proximal tubules was examined by immunohistochemistry. The expression of caspase-1, IL-18 and A1AR were detected by Western blotting. Results At 4th week, compared with WT control mice, the BG, BW, KW and 24hUP of WT DM mice were increased significantly (n=6, P＜0.01), with the pathological glomerular enlargement, mesangial cell proliferation, extracellular matrix accumulation and renal tubule hypertrophy being observed. Immunohistochemistry revealed decreased expression of megalin, an important multiligand protein receptor on the brush border of proximal tubular epithelial cells in WT DM mice, which was correlated with 24hUP (r=-0.645, P＜0.01). Compared with the control mice, the expressions of caspase-1, IL-18 and A1AR were significantly increased in WT DM mice (P＜0.05). For A1AR-/- DM mice, more serious pathological lesion and megalin defect, together with increasing of casapase-1 and heavier proteinuria were observed than those in WT DM mice. Conclusion A1AR may play a protective role in megalin expression of diabetic mice with early kidney disease, in which the mechanism may be associated with caspase-1 related pyroptosis pathway. The details need further exploration.     

睾丸性不育动物模型的建立

目的:探讨制作睾丸性不育动物模型的方法。方法:①X-射线局部照射:取8～10周龄的BALB/c雄鼠70只,分实验组1、2、3、4、5、6和对照组各10只。实验组1、2、3、4、5、6分别用1000、1200、1400、1600、1800、2000cGy6种不同的剂量照射睾丸局部10min;对照组不做任何处理。做受孕试验。②环磷酰胺腹腔注射:取4～5周龄的雄鼠40只,分实验组1、2、3和对照组各10只。实验组分别以30、5070mg/kg体重剂量的环磷酰胺腹腔注射,每周2次,连续注射5周;对照组腹腔注射生理盐水。做受孕试验。③达菲林腹腔注射:取8～10周龄的雄鼠20只,分实验组和对照组各10只。实验组腹腔注射0.375mg/ml达菲林0.4m,l对照组腹腔注射生理盐水0.4ml。做受孕试验。④通过脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)、苏木精-伊红(HE)染色及免疫组化等病理学检查鉴定。未使雌鼠受孕的雄性小鼠定为睾丸性不育,共30只。结果:①X-射线局部照射:实验组1、2的雄鼠分别于X-射线照射后10、15d使雌鼠受孕;实验组3、4的雄鼠,经观察3个月也未能使雌鼠受孕;实验组5、6的雄鼠,于X-射线照射后第5d和第2d死亡;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。②环磷酰胺腹腔注射:实验组1雄鼠体重增加7g左右,停药后9～14d恢复生育能力,使雌鼠受孕;实验组2雄鼠体重增加4g左右,停药后观察3个月未使雌鼠受孕;实验组3雄鼠体重不增,呈消瘦状,分别于用药第3、4、5周相继死亡;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。③达菲林腹腔注射:实验组雄鼠于停药后3周左右使雌鼠受孕;对照组雄鼠皆于3d内使雌鼠受孕。④TUNEL结果:对照组睾丸组织偶见凋亡细胞,占(0.71±0.12)%;睾丸性不育组睾丸组织凋亡细胞数量明显增加,占(10.36±1.48)%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。HE染色:对照组睾丸组织正常,生精小管呈饱满椭圆形,各级生精细胞排列有序,内含大量精子细胞;睾丸性不育组生精小管萎缩,细胞排列疏松,未见各级生精细胞,只有支持细胞,各生精小管间腔隙扩大,间质细胞减少。免疫组化染色:CD29、Hsp90α、CD117的阳性表达率对照组分别为(50.3±5.2)%、(41.6±3.5)%、(73.6±3.7)%,而睾丸性不育组明显降低,分别为(1.3±0.2)%、0%、(1.6±0.3)%(P<0.01)。p53阳性表达率对照组为(19.7±0.8)%,而睾丸性不育组明显增高,为(39.4±2.9)%(P<0.01)。结论:X-射线睾丸局部照射、环磷酰胺腹腔注射法均可制作睾丸性不育动物模型。     

外胚间充质干细胞对射线照射后大鼠造血系统的影响

目的探讨颌突外胚间充质干细胞对γ射线照射后大鼠造血系统的影响.方法取孕11.5 d SD大鼠胚胎颌突,用消化法培养获得外胚间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况.雄性SD大鼠80只,体重220 g,随机分为A、B、C、D 4组,每组20只,A、B和C组给予60Co γ射线全身一次性照射,照射剂量为6.0 Gy.A组:照射后6 h,尾静脉移植第2代外胚间充质干细胞;B、C组尾静脉分别移植真皮成纤维细胞和生理盐水作为阴性对照;D组未照射,为正常对照组,注射生理盐水0.3 ml/只.分别于1、2、3和4周动态观察大鼠外周血白细胞及血红蛋白的变化,并于第4周行骨髓有核细胞计数,测定大鼠骨髓粒细胞巨噬细胞集落形成单位(colony forming unit-granulocyte macrophage,CFU-GM),采用内源性脾结节法测定脾集落形成单位(colony forming unit-spleen,CFU-S),进行大鼠骨髓组织学检查.结果培养的原代外胚间充质干细胞呈单层生长,似成纤维样梭形,有2～4个突起.移植后第3、4周,A组白细胞数明显高于B、C组(P＜0.05),A、D组大鼠外周血血红蛋白含量高于B、C组(P＜0.05).移植后第4周,A组大鼠骨髓有核细胞计数明显多于B、C组(P＜0.01), CFU-S计数明显多于B、C组(P＜0.01),A、D组CFU-GM数量均较B、C组多(P＜0.01).结论颌突外胚间充质干细胞具有干细胞的特征,能够促进辐射损伤后大鼠造血功能的修复与重建.