人类脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1在乳腺癌中的研究进展

在细胞内外各种生物因素的作用下,生物体基因组DNA出现累积损伤,一旦修复机制出现缺陷就可能引发癌症.在细胞修复DNA损伤后形成脱嘌呤/脱嘧啶(AP)位点时,人类脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)发挥关键作用,本文对于APE1基因与癌症的关系及其在乳腺癌中的研究现况做一综述.     

人类脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1在三阴性乳腺癌中的表达研究

目的 检测人类脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease/redox effector factor1,APE-1/REF-1)在乳腺癌中的表达,分析其与乳腺癌的临床病理特征的关系,及APE-1对三阴性乳腺癌患者预后的影响。方法 采用免疫组化Envision两步法检测323例乳腺癌中APE-1蛋白的表达,其中108例为三阴性乳腺癌。计数资料采用χ²检验和Fisher精确检验。采用Kaplan-Meier法进行生存分析及Log-rank检验进行生存率的比较,并用COX比例风险回归模型进行多因素分析。结果 APE-1在乳腺癌组织较癌旁组织有更高的表达,且在非三阴性乳腺癌中与肿瘤大小、腋窝淋巴结状态、临床分期、雌激素受体、人类表皮生长因子2型受体的表达显著相关(P<0.05)。在三阴性乳腺癌中,APE-1表达与肿瘤大小(P=0.006)呈正相关,且APE-1低表达组有较好的生存率(P=0.007)。腋窝淋巴结阳性的三阴性乳腺癌患者中,APE-1低表达组有较好的预后(P=0.042)。结论 APE-1是影响三阴性乳腺癌患者预后的独立因子,可能成为三阴性乳腺癌的潜在治疗靶点。     

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶与卵巢上皮性癌耐药相关性研究

目的 探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)与卵巢上皮性癌耐药性的相关性以及其在卵巢癌化疗耐药中的作用机制.方法 应用免疫组织化学法对78例原发性卵巢上皮性癌组织和卵巢癌顺铂敏感株A2780、顺铂耐药株CP70中APE1的表达进行测定.结果 APE1在卵巢上皮性癌组织中呈胞核表达、胞浆表达或核浆共同表达.化疗敏感组和耐药组的APE1表达强度间差异有统计学意义(P=0.045),核表达者化疗敏感率与浆表达、核浆表达者比较差异有统计学意义(P=0.037).在卵巢癌顺铂耐药株CP70中APE1表达水平较顺铂敏感株A2780明显增高.结论 APE1表达强度和定位与以铂类为基础化疗药物的敏感性相关,时卵巢癌的化疗疗效有提示作用,检测APE1对前瞻性预测化疗药物敏感性和判断化疗疗效具有一定的临床指导价值.     

荧光分析法测定人体血液样品中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)的活性

目的 开发一种可快速、灵敏地检测生物样品中脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1,APE1)含量的荧光分析方法。方法 根据APE1所具有的脱碱基核酸内切酶活性,合成了一种用荧光基团与猝灭基团标记的含脱碱基位点的DNA荧光探针。在合适的缓冲体系下,APE1将该DNA探针水解并释放出荧光基团,根据荧光信号上升速率实现对APE1活性的定量检测。在此基础上,本研究改进了检测APE1时溶液缓冲液的条件,使得该荧光探针对APE1的响应更为灵敏,并进一步通过密度梯度离心法从人全血样品提取了外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),用改进后的荧光探针法定量测定了其蛋白提取液中APE1的含量。最后,使用该荧光探针法测定了临床血液样本中APE1的含量。结果 本研究建立的方法对APE1的最低检测限和功能灵敏度均为0.005 U/mL(3 pg/mL),线性范围为6 pg/mL~1.2 ng/mL。利用该方法测定了8份人血液样品中PBMCs蛋白中APE1的含量,测得每微克PBMCs蛋白中APE1的含量分布为0.061~0.40 ng,平均含量为0.16 ng APE1,加标回收率为98%±5%(n=3)。用该方法对102份正常人(男51例、女51例,年龄59~75岁)血清样品中的APE1含量进行了检测,得到这些血清样品中APE1含量的分布范围为0.13~0.34 ng/mL,加标回收率为96%±15%(n=3)。结论 本研究发展的荧光分析法操作简便、灵敏度高、所需生物样品量小,能够快速、准确地测定血液等生物样本中的APE1含量,解决了原有方法检测低含量血清样品时误差较大的问题,有良好的临床检验应用前景。     

人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶hAPE1融合蛋白的构建、纯化及其功能的初步研究

目的 构建人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶(hAEP1)原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化融合蛋白,对其活性进行初步分析.方法 用PCR法扩增hAEP1基因,克隆入pET28a载体中,获得重组质粒pET28a-hAPE1.将重组质粒转化入E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达并鉴定.用His亲和层析技术进行蛋白纯化,得到hAPE1融合蛋白.用Western blot及电泳迁移率变动分析实验分析hAPE1融合蛋白的抗原性及活性.结果 所构建的重组质粒pET28-hAPE1经双酶切及DNA测序鉴定表明构建正确.IPTG诱导表达后,经SDS-PAGE及Western blot鉴定均在预期位置出现阳性条带,His亲和层析纯化后得到hAPE1融合蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定正确.Western blot及电泳迁移率变动分析实验证明hAPE1融合蛋白具有抗原性、AP修复及氧化还原活性.结论 成功构建了人脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶的原核表达载体pET28a-hAPE1,并在E. coli BL21(DE3)中高效表达和纯化得到有抗原性及活性的hAPE1融合蛋白.     

APE/Ref-1与妇科肿瘤的研究

无嘌呤无嘧啶核酸内切酶(APE)又名氧化还原因子1(Ref-1),是一种多功能蛋白,除了修复AP位点外,还保持很多转录因子的活性还原状态,对维持DNA的稳定和调节细胞因子的表达具有重要作用。目前国内外研究发现APE/Ref-1蛋白在细胞中的表达部位与妇科肿瘤的发生、发展及预后有关,而APE/Ref-1蛋白表达水平的改变与妇科肿瘤放疗的敏感性有关。     

APE/Ref-1的临床应用研究进展

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶/氧化还原因子-1(APE/Ref-1)是一种多功能的蛋白质,在氧化或烷化物所导致的DNA损伤修复,以及在氧化还原反应的调控等多个生物学过程中都发挥着重要作用。本文综合近几年国内外的众多文献,从APE/Ref-1的结构与功能入手,对其与肿瘤和心脑血管疾病、中枢神经系统疾病等之间关系的临床研究进展进行分析,提示APE/Ref-1作为新标记物,在临床的应用有着良好的发展前景。     

APE/Ref-1基因单核苷酸多态性与肿瘤关系的研究进展

脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)是一个生物大分子功能复合体,既具有脱嘌呤/脱嘧啶位点(AP位点)核酸内切酶活性,又具调节转录因子的活性。其分布及单核苷酸多态性为近年来研究的热点。探讨其单核苷酸多态性与肿瘤的关系将有助于对肿瘤的防治。     

氧化还原因子1与转录因子的关系及抗脑细胞凋亡作用

急性脑血管病(acutecerebralvasculardisease ,ACVD)中,不论是脑缺血还是脑出血,病灶以及周围脑组织均出现缺血缺氧,造成缺血半暗带的改变[1] ,导致大量活性氧簇(reactiveoxygenspecies ,ROS)如:超氧阴离子、过氧化氢、氢氧根等阴离子自由基等集聚于受损的脑组织中[2 ] ,引起DN     

氧化还原因子1在胃癌中的表达及其意义

目的检测氧化还原因子1（Ref-1）在胃癌中的表达及意义。方法收集120例胃癌和15例正常胃黏膜组织,用免疫组织化学法检测Ref-1基因的表达,并分析Ref-1与胃癌临床病理因素间的关系。结果 Ref-1在胃癌和正常胃黏膜组织中呈胞核、胞质或核质共表达。Ref-1胞质表达与胃癌分化程度相关（p〈0.05）。结论 Ref-1表达在胃癌的发生发展中发挥重要作用。     

APE1 siRNA表达载体的构建及其对骨肉瘤细胞APE1表达的抑制作用

目的构建DNA损伤修复基因脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,观察其对骨肉瘤细胞HOS和9901APE1蛋白表达的抑制作用.方法设计合成APE1 siRNA cDNA序列与线性化pSilence 2.0-U6质粒连接后构建APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,经酶切鉴定和测序确认.应用免疫组化检测骨肉瘤细胞APE1蛋白的表达,同时应用免疫印迹检测其对APE1基因的敲低作用的量效和时效关系.结果通过双酶切鉴定和测序分析,成功构建了APE1 siRNA表达载体.免疫组化和免疫印迹证实pSilence APE1对骨肉瘤细胞APE1基因具有特异性"敲低"作用,其抑制APE1基因表达效率为72%～95%,而且其抑制作用以3.0μg pSilence APE1转染第3天最为显著.结论成功构建了APE1 siRNA表达载体pSilence APE1,并且该载体能有效地敲低骨肉瘤细胞APE1基因表达.     

APE1/Ref-1 siRNA抑制多发性骨髓瘤骨髓基质细胞IL-6及IL-8分泌的体外研究

目的 体外通过APE1/Ref-1 siRNA敲低多发性骨髓瘤骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)APE1/Ref-1的表达,观察BMSCs的增殖及分泌细胞因子IL-6、IL-8的变化,初步探讨BMSCs APE1/Ref-1表达的功能特点.方法 通过免疫细胞化学染色法定量榆测35例初治、11例复发/难治多发性骨髓瘤患者及10例正常人BMSCsAPE1/Ref-1的表达特点及其差异,经Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染BMSCs后,流式细胞仪检测BMSCs细胞周期的变化;ELISA法检测BMSCs分泌IL-6、IL-8的水平变化情况.结果 多发性骨髓瘤BMSCs的APE1/Ref-1蛋白阳性表达率显著高于正常BMSCs APE1/Ref-1蛋白阳性表达率(P<0.05),且多发性骨髓瘤BMSCs的APE1/Ref-1呈细胞核及核浆共间表达方式.Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染敲低多发性骨髓瘤及正常BMSCs APE1/Ref-1的表达量呈进行性减少(P<0.01),同时发现APE1/Ref-1 siRNA对多发性骨髓瘤BMSCs抑制作用更明显.Adv5-APE1/Ref-1 siRNA感染BMSCs后对正常人及骨髓瘤患者BMSCs分泌细胞因子IL-6、IL-8的量有显著的抑制作用,特别是感染72 h后,骨髓瘤患者及正常人的BMSCs分泌IL-6[初治患者(246.29±46.51)pg/ml,复发/难治患者(365.09±75.25)pg/ml]、IL-8[初治患者(118.77±18.08)pg/ml,复发/难治患者(188.71±33.76)pg/ml]的量最低,与其他时段比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 多发性骨髓瘤BMscs APE1/Ref-1的表达特点不同于正常BMSCs,可能导致其功能差异;APE1/Ref-1 siRNA敲低了MM BMSCsAPE1/Ref-1的表达,同时明显抑制了其IL-6、IL-8的分泌,减少了对骨髓瘤细胞的促增殖和凋亡作用.     

APE1单核苷酸多态性与肺癌易感性关系的研究

目的探讨中国重庆汉族人群脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系。方法采用病例对照研究,应用相对的两对引物-聚合酶链反应(PCR-CTPP)技术检测455例肺癌患者和443例健康人APE1-141T/G和APE1 148Asp/Glu单核苷酸多态性(SNP)。结果 APE1-141G/G基因型相对于T/T基因型,显著减少了患肺癌的风险(OR=0.62;95%CI为0.42～0.91);单倍体分析中,APE1-141T/148Glu单倍体相对于-141T/148Asp单倍体,显著增加了患肺癌的风险(OR=1.28,95%CI为1.01～1.62)。结论 APE1基因与中国重庆汉族人群肺癌易感性密切相关,APE1-141T/148Glu单倍体可能是肺癌的重要遗传易感因素。     

PD-L1和APE1在早期宫颈鳞癌中的表达及临床意义

目的 探讨早期宫颈鳞癌组织中程序性死亡配体-1(programmed death ligand-1,PD-L1)和脱嘌呤/脱嘧啶内切核酸酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease1,APE1)的表达与临床特征及预后的关系.方法 采用免疫组织化学的方法(IHC)检测PD-L1和APE1蛋白在64例早期宫颈鳞癌组织中的表达,分析PD-L1、APE1表达以及两者共表达与早期宫颈癌临床特征的关系;采用Spearman等级相关分析检测APE1与PD-L1表达的相关性,Kaplan-Meier法分析早期宫颈鳞癌患者中APE1与PD-L1的表达与术后生存的关系,Cox回归模型分析早期宫颈鳞癌患者预后的危险因素.结果 早期宫颈癌患者APE1和PD-L1蛋白表达阳性率分别为70.31％和67.18％.PD-L1的表达与分期、淋巴结转移有显著相关性(P＜0.05),而APE1的表达仅与淋巴结转移密切相关(P =0.038).另外,APE1与PD-L1的表达正相关(r2 =0.347,P=0.005),且两者共表达与淋巴结转移相关,其术后生存期比单一阳性表达的宫颈癌患者明显缩短(P＜0.05).多因素COX回归模型结果显示,APE1的表达和淋巴结转移是影响早期宫颈鳞癌预后的独立危险因素,危险度分别为16.187(P =0.01)和27.340(P ＜0.001).结论 PD-L1和APE1表达的联合检测对早期宫颈鳞癌预后评估具有潜在的临床价值.     

大肠癌Ref-1/APE的表达特点及其意义

目的探讨大肠癌氧化还原因子-1(redox factor-1,Ref-1),又称脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE),在大肠癌的表达特点及其与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管密度的关系.方法应用免疫组化S-P法检测110例大肠癌和40例非癌区大肠组织中Ref-1/APE和VEGF的表达,采用血管内皮特异标记物CD31标记并计数肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD),最后分析Ref-1/APE与VEGF和MVD的关系.结果所有大肠癌和非癌区大肠组织都有Ref-1/APE表达,但是其在细胞内的定位有所不同.40例非癌区大肠组织细胞核都有Ref-1/APE表达,仅5例有胞质表达(5/40,12.5%);而110例大肠癌中有79例(79/110,71.81%)细胞质有Ref-1/APE表达,比例显著高于非癌区大肠组织(P＜0.01).而且细胞质Ref-1/APE阳性表达的大肠癌较无细胞质表达者VEGF阳性率显著增加(P＜0.05),MVD也显著增高(P＜0.05).结论大肠癌Ref-1/APE移位于细胞质的异常表达可能涉及大肠癌的发生,并且可能与VEGF表达和肿瘤血管生成有关.     

骨肉瘤中APE1的表达及其与血管生成的关系

目的探讨APE1在骨肉瘤中的表达及其与肿瘤发生、发展以及血管生成的关系.方法采用免疫组化S-P法检测10例正常骨、10例良性骨瘤和60例骨肉瘤组织中APE1、CD34和FⅧ-Rag等蛋白表达,并根据CD34和FⅧ-Rag染色结果计数微血管密度.结果 APE1蛋白表达主要定位于肿瘤细胞的胞核,骨肉瘤中APE1显著高于正常骨(P<0.05),60例骨肉瘤中43例(72%)呈高表达,17例呈低表达,APE1强表达组中的MVD显著高于弱表达组(P<0.01).结论 APE1在骨肉瘤中过度表达与骨肉瘤分化以及微血管密度密切相关,有可能作为骨肉瘤抗血管生成治疗中一个新的靶向分子.     

APE1免疫组化表达与恶性肿瘤相关性的 Meta 分析

目的：通过 Meta 分析系统评价肿瘤组织中脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)的免疫组化表达,进一步探讨其与恶性肿瘤的关系及临床意义。方法检索 PubMed、EMBASE、中国期刊全文数据库、万方数据库,检索时间为建库至2015年2月,使用 stata13.0软件对符合纳入标准的研究结果进行 Meta 分析。结果共纳入36篇文献,包括3374例患者和521例正常对照。Meta 分析显示,与正常组织相比,肿瘤组织中 APE1出现胞浆异位表达(OR =17.82);而且,APE1表达不论是阳性细胞数量,还是表达水平均显著高于正常对照组(OR=37.56,OR=47.56)。APE1的异位表达主要在卵巢上皮癌、胰腺癌、大肠癌、膀胱移行细胞癌和肺癌;APE1阳性表达增高主要在肝癌、胰腺癌、膀胱移行细胞癌、外周 T 细胞淋巴瘤和非小细胞肺癌。APE1在淋巴结转移肿瘤组的阳性表达高于未转移组(OR =4.10);APE1高表达的肿瘤患者,其化疗敏感性较低表达患者差(OR =6.45)。结论APE1的异位表达和(或)表达量增加与多种恶性肿瘤的发生、发展及预后具有显著的相关性。APE1可能是肿瘤诊断及预后的潜在标志物。