核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响

[目的]采用细胞培养的方法研究核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响,探讨核黄素营养水平与食管癌的关系。[方法]常规培养人食管癌细胞株Eca109细胞。(1)用不同浓度的核黄素作用于细胞株,MTT比色法测定Eca109细胞的增殖活性,计算细胞增殖率。(2)采用流式细胞仪法测定核黄素作用Eca109细胞后细胞周期的改变。(3)免疫组织化学法测定核黄素对Eca109细胞作用24 h Cyclin D1蛋白表达的影响。(4)HE染色以观察核黄素作用24 h对Eca109细胞的分化影响。[结果](1)不同浓度的核黄素作用于Eca109细胞后,其增殖率未见明显变化。(2)核黄素的加入使Eca109的细胞周期改变,出现G2/M期阻滞,但不促进其凋亡。(3)核黄素处理24 h后,经过免疫组化测定,食管癌细胞Cyclin D1蛋白表达无降低,与阴、阳性对照组相比差异均无统计学意义(P﹥0.05)。(4)HE染色观察各浓度组细胞形态形态无明显改变。[结论]核黄素不会影响食管癌Eca109的增殖,但可能将细胞阻滞在M期。     

山楂原花青素诱导食管癌Eca109细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨山楂原花青素诱导食管癌Eca109细胞凋亡的分子机制。方法常规培养食管癌Eca109细胞系并分为二甲基亚砜(DMSO)对照组和不同浓度的山楂原花青素实验组;细胞活性(cell counting kit-8,CCK-8)法检测山楂原花青素对Eca109细胞的抑制率;荧光共振能量转移(FRET)法观察山楂原花青素与细胞表面受体形成的异源二聚体的数量;Western blot法分别检测ERK5磷酸化程度和Bax、caspase-3蛋白表达水平;Annexin V-FITC/PI法检测食管癌细胞凋亡率。结果不同浓度的山楂原花青素培养Eca109细胞72h时,IC50约为275μg/ml,因此选用275μg/ml作为实验剂量;山楂原花青素与细胞表面受体形成的异源二聚体的数量呈时间依赖性,24h数量明显增多(P0.05);ERK5磷酸化程度随着时间的延长逐渐增强(P0.05),于36h和48h活性明显增强(P0.01);Eca109细胞的凋亡率随着时间的推移越来越高,72 h已达48.1%(P0.05);Bax和caspase-3蛋白表达在山楂原花青素的作用下,于48h表达最强(P0.01)。结论山楂原花青素可促进食管癌Eca109细胞的凋亡进程。     

PTEN对耐顺铂的食管癌细胞的增殖及P-糖蛋白表达的影响

目的探讨PTEN对耐顺铂食管癌Ec9706/c DDP细胞增殖及P-gp表达的影响.方法采用顺铂浓度梯度增加的方法筛选食管癌耐药细胞株Ec9706/c DDP,采用流式细胞术检测PTEN转染后对Ec9706/c DDP细胞周期和凋亡的影响,采用Western blot检测PTEN转染后Ec9706/c DDP细胞P-gp表达改变。结果通过顺铂浓度梯度增加的方法成功诱导食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP,与Ec9706/c DDP和Ec9706/c DDP+空载相比,转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞G1期细胞比例增加,S期细胞明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。Ec9706/c DDP细胞株在野生型PTEN转染48 h后细胞凋亡率显著高于转染无活性G129E和C124S组,差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示:转染野生型PTEN的Ec9706/c DDP细胞P-gp蛋白的表达显著下调,而转染2种突变型的PTEN组没有明显改变。结论 PTEN在食管癌耐顺铂细胞株Ec9706/c DDP过表达能够显著抑制肿瘤细胞增殖,促进其凋亡,降低肿瘤耐药关键蛋白P-gp表达,从而逆转食管癌细胞的多药耐药。     

壳聚糖对人子宫内膜癌细胞影响的实验研究

目的:研究壳聚糖对人子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响,为将壳聚糖做为宫内节育器材料提供依据。方法:以添加不同浓度壳聚糖培养的细胞为实验组,正常培养的细胞为空白对照组,使用添加20%胎牛血清和添加阿霉素培养的细胞为阳性对照组。各组细胞处理48h后,噻唑蓝法测定细胞增殖活性及毒性,5-溴脱氧尿嘧啶核苷掺入法测定DNA合成情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果:与空白对照组比较,在壳聚糖浓度≤10μg/ml时各实验组细胞增殖能力无明显变化(P﹥0.05),细胞DNA合成速率无明显影响(P﹥0.05);壳聚糖浓度≤100μg/ml无明显的细胞毒性产生;在10μg/ml浓度壳聚糖组细胞周期分析时G1期、G2期、S期均无明显变化(P﹥0.05)。结论:壳聚糖浓度在<10μg/ml对Ishikawa细胞的增殖生长、DNA合成与细胞周期均无明显影响,≤100μg/ml未见细胞毒性产生。壳聚糖具有作为宫内节育器的生物缓释材料使用的前景。     

紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用

目的:探讨紫杉醇联合顺铂对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药性的逆转作用。方法:取对数生长期SK-OV3/DDP细胞进行实验。实验分为顺铂组、紫杉醇组、联合组和空白对照组。顺铂组细胞给予顺铂15μg/ml;紫杉醇组细胞给予紫杉醇3.13μg/ml;联合组细胞给予顺铂15μg/ml+紫杉醇3.13μg/ml;空白对照组细胞不给予任何药品。所有细胞均培养48 h后进行实验。采用MTT法检测细胞的生长抑制率。采用流式细胞术检测各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:顺铂组细胞生长抑制率与空白对照组无明显增加(P<0.05),证实SKOV3/DDP对顺铂的耐药,紫杉醇组和联合组细胞生长抑制率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞生长抑制率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。顺铂组与空白对照组细胞多被阻滞于G1和S期,紫杉醇及联合组细胞多被阻滞于G2/M期,联合组作用较紫杉醇组更加明显(P﹤0.05)。顺铂组细胞凋亡率与空白对照组无明显差异(P>0.05),紫杉醇组和联合组细胞凋亡率较空白对照组和顺铂组明显增加(P﹤0.05),联合组细胞凋亡率最高,较紫杉醇组增加更为明显(P﹤0.05)。结论:紫杉醇联合顺铂可明显逆转卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP对顺铂的耐药性。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合顺铂对宫颈癌细胞凋亡作用的体外研究

目的:观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂(SAHA)联合顺铂(DDP)对宫颈癌SiHa细胞生长抑制和促凋亡的效果。方法:以1μmol/L SAHA、2μmol/L SAHA、4μmol/L SAHA和1μg/ml、2μg/ml、4μg/ml DDP分别组成单药组和不同SA-HA+DDP联合用药组,分别应用MTT方法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测SiHa细胞早期凋亡的情况。结果:联合用药组肿瘤细胞大量坏死明显,对细胞增殖的抑制率明显高于相应单药组(P<0.05);SAHA与中低剂量的DDP联合给药表现为协同作用,而与较高剂量的DDP联合用药表现为单纯相加作用;联合作用较二者单独用药细胞凋亡率明显增加(P<0.05)。结论:SAHA对宫颈癌细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用,SAHA联合DDP有协同增敏作用。     

城市大气PM10对HLF细胞增殖和细胞周期与凋亡及细胞内钙离子浓度的影响

[目的]研究北京市大气可吸入颗粒物（PM10）对HLF细胞增殖、周期、凋亡以及细胞内钙离子浓度变化的影响.[方法]以人胚肺成纤维细胞（human lung fibroblast,HLF）为模型,PM10终浓度分别为25、50、100、200、400μg/ml,染毒20～24 h,用MTT法测试PM10对HLF增殖的影响,用流式细胞法测试细胞内钙离子浓度和细胞周期,以AnnexinV-FITC/PI双染用流式细胞仪检测细胞凋亡.[结果]PM10浓度＜25 μg/ml刺激HLF增殖,使S期缩短,但随着PM10浓度增加,抑制细胞增殖作用增强,S期、G2/M期细胞明显增多,当PM10浓度＞100μg/ml,与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.随着PM10浓度增加细胞凋亡增加,存在剂量-反应关系.PM10作用于HLF 1 h可引起细胞内钙浓度明显增加,有剂量-反应关系,随着作用时间的延长细胞内钙浓度进一步升高,发生钙超载.[结论]PM10对HLF有一定毒性,具有低浓度刺激细胞增殖、高浓度抑制增值的双向作用;使细胞阻滞在S期和G2/M期,并可诱导细胞凋亡.其作用机制可能与影响细胞内钙离子浓度变化有关.     

二十碳五烯酸联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究二十碳五烯酸(EPA)联合依托泊苷对人肺腺癌A-549细胞株增殖与凋亡的影响.方法 分别用终浓度为40 μg/ml EPA、10 μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 10μg/ml依托泊苷、20μg/ml依托泊苷、40 μg/ml EPA+ 20μg/ml依托泊苷孵育A-549细胞,采用MTT法、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙锭双染法、吖啶橙/溴化乙锭双染法及流式细胞术研究细胞增殖抑制率、细胞形态学及凋亡情况.结果 EPA联合依托泊苷对A-549细胞的增殖抑制率显著高于依托泊苷单独的作用(P均＜0.05).细胞荧光染色显示:EPA联合依托白苷组的凋亡细胞数量多于依托泊苷单独作用组.EPA联合依托泊苷组的S期及G2/M期细胞显著多于依托泊苷单独作用的细胞(P均＜0.05).结论 EPA可能具有增强依托泊苷抑制人肺腺癌A-549细胞增殖、促进A-549细胞凋亡的作用.     

重楼皂苷Ⅰ对人卵巢癌细胞株体外生物学效应的影响

目的探讨重楼皂苷Ⅰ(P-Ⅰ)作用于人卵巢癌细胞株SKOV3的体外生物学效应。方法不同浓度的P-Ⅰ作用于SKOV3细胞的不同时间后,观察细胞的体外增殖情况和细胞周期的变化以及细胞的凋亡过程;所使用的检测和观察方法有CCK-8比色法、流式细胞术检测、ROS检测法。结果 P-Ⅰ给药浓度在1.0~5.0μg/ml范围内时,细胞增殖抑制率随药物浓度增加而明显增加(P<0.05),当P-Ⅰ浓度在1.0~3.0μg/ml时,同一药物浓度,细胞增殖抑制率随用药时间延长而显著增加,但P-Ⅰ浓度为4.0~5.0μg/ml时,细胞增殖抑制率随用药时间延长增加不明显。结论 P-Ⅰ对SKOV3细胞有显著的生物学作用,抑制体外癌细胞增殖、干扰细胞分裂、诱导癌细胞凋亡。     

白藜芦醇对食管癌Eca109细胞的抑制作用研究

[目的]研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对食管癌Eca109细胞的抑制作用。[方法]将食管癌Eca109细胞分为4组:Res1组、Res2组、Res3组和对照组,Res浓度分别为10、20、40和0μmol/L。用MTT法测定Res对Eca109细胞的抑制作用,采用RT-PCR方法检测Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达情况。[结果]10μmol/LRes处理24h对Eca109细胞有明显的抑制作用;20μmol/LRes处理48h后抑制作用达到极显著水平。20μmol/L和40μmol/LRes处理72h,Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达明显高于对照。[结论]Res可显著抑制Eca109细胞增殖,Res可通过促进食管癌细胞株中Caspase-3、Fas的表达发挥其抗肿瘤作用。     

苦参素对人食管癌Eca-109体外细胞增殖活性影响初探

目的:探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖活性的影响.方法:运用MTT和流式细胞术分别检测细胞增殖率和细胞周期变化.结果:苦参素对Eca-109细胞持续作用48h后,细胞增殖率由100%降为9.64%(P<0.001);细胞周期结果显示,G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少,与阴性对照组和阳性对照组比较,差异具有显著性(P<0.05).结论:苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖活性具有抑制作用,其作用机制与细胞周期阻滞于G0/G1期有关.     

表皮生长因子受体抑制剂C225对人食管癌细胞EC109的生长抑制及促凋亡作用研究

目的探讨表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)抑制剂C225对人食管癌EC109细胞的生长抑制及凋亡的影响。方法通过不同浓度的C225作用于人食管癌EC109细胞,MTT法检测EC109细胞抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期,瑞氏染色和倒置相差显微镜观察EC109细胞形态学变化。计量资料采用t检验,率的比较采用单因素方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果经C225作用后,EC109细胞凋亡率增加,其生长明显受到抑制,经40μmol/L的C225作用72 h后,染色后和相差显微镜观察到EC109细胞呈现典型细胞凋亡改变,流式细胞仪能检测到在G0/G1期前出现凋亡特有的亚二倍体峰(APO峰)。且C225对食管EC109细胞的抑制率与C225的浓度及作用时间呈正相关(r=0.935、0.956,均P0.05),凋亡率亦与C225的浓度及作用时间均呈显著正相关(r=0.941、0.962,均P0.05)。结论 C225可抑制食管癌EC109细胞生长,并诱导其凋亡。     

碘对成纤维细胞细胞周期及凋亡的影响

目的研究不同浓度碘对成纤维细胞(HSF)增殖及凋亡的影响。方法使用碘离子(终浓度为0～10000μg/L)染毒1×104个/ml的成纤维细胞悬液。于4、12、24、48h后测定细胞增殖活性;于24、48h后测定细胞周期及凋亡,计算细胞增殖指数和细胞凋亡率。结果染毒24h,碘离子浓度≤7000μg/L时具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度7000μg/L时可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。染毒48h,碘离子浓度≤3000μg/L具有促进成纤维细胞增殖和抑制细胞凋亡的作用;碘离子浓度≥7000μg/L可抑制成纤维细胞的增殖活性和促进成纤维细胞凋亡。结论碘对成纤维细胞的细胞增殖和凋亡具有双向效应。     

黑米皮提取物对PC-3细胞增殖的抑制作用

目的观察黑米皮提取物对人前列腺癌PC-3细胞增殖的抑制作用并探讨其机制。方法用不同浓度的黑米皮提取物(20,150和300μg/ml)处理PC-3细胞,通过MTT法、流式细胞仪、western blot法研究提取物对细胞的影响。结果处理组的细胞增殖率随着提取物作用浓度和时间的增加而降低(P<0.05);与对照组相比,处理组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期中,G1期细胞百分比显著增多,S、G2-M期细胞显著减少,细胞被阻滞在G1-S期。与对照组相比,处理组细胞的p-p38、p-JNK的蛋白表达则随着提取物浓度的增加而增强。结论黑米皮提取物能够抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,改变细胞周期的分布,激活JNK、p38通路,诱导细胞凋亡。     

裙带菜多糖对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用的研究

[目的]观察裙带菜多糖(PUP)对食管癌细胞TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制。[方法]以食管癌细胞TE-13作为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;在电子透镜下观察PUP对TE-13超微凋亡结构的影响;流式细胞技术检测其周期分布和凋亡率;RT-PCR法检测PUP对TE-13细胞中凋亡相关基因Survivin表达的影响。[结果]PUP对食管癌细胞TE-13有显著增殖抑制效应,作用时间越长,在一定范围内的PUP浓度越大,抑制效应越强。PUP作用48h时半数抑制浓度(IC50)为52.17μg/ml。25、50、100μg/ml的PUP作用48h后,TE-13均发生凋亡形态的变化;100μg/ml PUP处理72h后,凋亡率为52.19%;周期分布显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示PUP能降低食管癌细胞中Survivin mRNA的表达。[结论]PUP在体外显著抑制食管癌细胞TE-13的增殖,其机制与PUP诱导食管癌周期阻滞和下调Survivin mRNA的表达有关。     

黄芩提取物联合顺铂对人卵巢癌细胞株SKOV-3凋亡的研究

目的:探讨黄芩提取物(Scutellaria Baicalensis)与顺铂(cisplatin,DDP)联合应用对卵巢癌细胞系SKOV-3增殖及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法检测S.Baicalensis与DDP联合应用对SKOV-3细胞增殖的影响,吖啶橙染色观察诱导细胞凋亡情况,流式细胞仪分析细胞周期及凋亡并计算细胞平均凋亡率,Westernblot技术观察细胞内p53、ERK1/2、p-STAT3的表达。结果:300μg/mlS.Baicalensis联合5μg/ml DDP给药:①48h后可使肿瘤细胞抑制率由单独应用DDP的15.8%提高到37.3%;②吖啶橙荧光染色可见细胞呈现明显凋亡形态,其凋亡率与10μg/ml DDP组相当;③流式细胞检测结果显示,可使细胞凋亡率从15.1%提高到42.2%(P<0.05);④westernblot结果显示,p53、ERK1/2、p-STAT3表达较5μg/ml DDP组单独给药组降低(P<0.05)。结论:S.Baicalensis与DDP联合应用增强对卵巢癌细胞株SKOV-3的致凋亡效应,联合应用可达到减毒增效的效果。     

大蒜素影响子宫颈癌Hela细胞增殖的实验研究

目的探讨大蒜素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的Hela细胞,倒置显微镜下观察Hela细胞的形态学变化,采用MTT法检测大蒜素对Hela细胞增殖抑制能力,流式细胞术分析大蒜素对Hela细胞凋亡的影响。结果 MTT显示大蒜素能抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,并具有时间-剂量依赖性;流式细胞术测定结果显示50μg/ml浓度大蒜素可明显诱导Hela细胞凋亡,并将细胞周期阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用,其抑制作用与诱导Hela细胞凋亡和阻抑细胞周期有关。     

ω-3多不饱和脂肪酸对人胃癌BGC-823细胞周期及凋亡的影响

目的 利用人胃癌BGC-823细胞体外培养实验，观察不同浓度ω-3多不饱和脂肪酸（EPA、DHA）对肿瘤细胞周期及凋亡的影响。方法 采用MTT法、凋亡形态学检查和流式细胞检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 30和45μg／ml的EPA或DHA可显著降低肿瘤细胞存活率（P〈0．001）；Hoechst33258染色和透射电镜可见细胞凋亡现象；流式细胞检测bcl-2基因蛋白表达明显下降（P〈0．05），G0／G1细胞明显增加，G2／M和S期细胞明显减少（P〈0．05）。结论 ω-3多不饱和脂肪酸可诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡和阻滞细胞在G0／G1期，细胞增殖受到抑制。     

榄香烯对肺癌A549细胞凋亡影响及分子机制研究

目的研究榄香烯对肺癌A549细胞的抑制作用及分子机制。方法取肺腺癌细胞株A549,分别以10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L、160μg/m L榄香烯处理,标记为观察组1~5,并设空白对照组6。于处理24 h、48 h、72 h后,以流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率,以Wsetern Bolt法检测真核起始因子4E(e IF4E)蛋白水平。结果 1处理24 h后,各组细胞周期无明显变化,G2/M期、sub-G1期细胞比例差异无统计学意义(P0.05);处理48 h、72 h后,观察组G2/M期细胞比率较对照组显著性下降,差异有统计学意义(P0.05),但观察组组内时点比较,差异无统计学意义(P0.05);榄香烯浓度越高,抑制作用越明显。2随药物浓度增长,细胞凋亡率显著性提升。3相较对照组,处理24 h后,观察组e IF4E表达呈下降趋势,且浓度越高,表达越低。结论榄香烯对肺癌A549细胞抑制作用强,其对细胞周期的影响存在剂量与时间依耐性;细胞凋亡率随药物浓度增加而增加,但过高剂量可能导致毒副作用,降低凋亡率;对A549细胞增殖抑制的生理机制可能与抑制e IF4E表达有关。     

甲羟孕酮对人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用

目的:应用甲羟孕酮(Medroxyprogesterone Acetate,MPA)体外逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的耐顺铂(cisplatin,DDP)效应,并对其作用机制进行初步探讨。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MPA对SKOV3/DDP的细胞毒作用,确定MPA对此细胞株的非细胞毒性剂量作为逆转剂量,同法测定非细胞毒性剂量MPA联合DDP作用后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,采用流式细胞技术(FCM)检测细胞周期及凋亡情况。结果:单用MPA浓度大于7.50 g/L时对SKOV3/DDP细胞有不同程度的抑制作用,且呈剂量依赖性。MPA浓度小于15.85 g/L时,其对细胞生长无明显抑制作用(细胞存活率均>90%),因此选用15.00 g/L作为逆转剂量。DDP联合15.00 g/L的MPA作用24、48、72 h后,顺铂的IC50分别下降至(57.72±0.48)g/L、(13.39±0.21)g/L、(7.93±0.18)g/L,逆转倍数分别为1.22,1.90,2.44倍。DDP与MPA联合作用于SKOV3/DDP细胞,使其细胞周期阻滞于G0/G1期,S期细胞比例下降,并可以增加耐药细胞的凋亡率。结论:MPA可以逆转DDP引发的卵巢癌耐药,其可能的逆转耐药机制为促进细胞的凋亡,阻滞细胞周期进程。