癌胚抗原和增殖细胞核抗原与中耳胆脂瘤上皮

目的 观察癌胚抗原、增殖细胞核抗原在中耳胆脂瘤上皮中的表达情况,分析其在胆脂瘤上皮增殖演变过程中的作用.方法 应用免疫组化SP染色方法和计算机图像分析系统,检测癌胚抗原、增殖细胞核抗原在32例胆脂瘤上皮和14例胆脂瘤患者外耳道皮肤中的表达情况,并做比较.结果 增殖细胞核抗原在胆脂瘤上皮各层细胞均存在较强表达,主要定位在胞核,染色由基底层向表皮层逐渐减弱,外耳道皮肤表达较弱,主要集中在基底层及基底上层;癌胚抗原主要在胆脂瘤上皮的颗粒细胞层及表皮层表达,少数在外耳道皮肤的基底层表达.各组间胆脂瘤上皮各指标阳性细胞率和光密度值均高于外耳道皮肤,和外耳道皮肤间的比较有高度差异性.皮下结缔组织伴随着大量的淋巴细胞和浆细胞,中性粒细胞和巨噬细胞,与胆脂瘤上皮中的阳性率呈一致趋势.同一患者胆脂瘤上皮中癌胚抗原、增殖细胞核抗原高表达,利用SPSS10.0软件包进行统计学分析,存在正相关关系（P＜0.01）.结论 癌胚抗原、增殖细胞核抗原在胆脂瘤上皮的表达从不同方面反映了胆脂瘤上皮的过度增生和角化,二者之间可能有协同作用,共同促进胆脂瘤上皮细胞增殖与分化;上皮下炎症反应可能是角化细胞过度增殖的一个原因,为胆脂瘤发病机制提供新的理论依据,便于指导临床.     

中耳胆脂瘤上皮增殖能力的研究

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在中耳胆脂瘤上皮中的表达和定位以及与中耳炎症的关系。方法 :采用 PCNA单克隆抗体对 16例中耳胆脂瘤组织和 6例正常外耳道皮肤 ,面部皮肤以及鼓膜进行免疫定位检测。结果 :PCNA阳性细胞仅见于正常外耳道、面部皮肤和鼓膜的基底细胞层和棘细胞层的开始部位 ,亦可见于胆脂瘤组织上皮全层。上皮下炎性细胞浸润愈重 ,PCNA阳性细胞率愈高。结论 :中耳胆脂瘤上皮组织具有过度增殖能力。上皮下炎症反应可能是角化细胞过度增殖的一个原因     

Caspase-8在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的 研究caspase-8(胱天蛋白酶-8)在中耳胆脂瘤上皮的表达,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的作用.方法 分别采用免疫组化法和Western Blot(蛋白质印迹法)技术检测caspase-8在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况.结果 caspase-8在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达,而正常外耳道皮肤表达较弱,caspase-8在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较正常外耳道皮肤显著增高,差异具有统计学意义(P<0.01).结论 胆脂瘤上皮中caspase-8表达较外耳道皮肤显著增高,其可能参与了中耳胆脂瘤上皮细胞的过度凋亡及增殖的调控.     

中耳胆脂瘤上皮增殖能力的研究

目的：探讨增殖细胞核抗原（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅａｒ ａｎｔｉｇｅｎ，ＰＣＮＡ）在中耳胆脂瘤上皮中的表达和定位以及与中耳炎道皮肤关系。方法：采用ＰＣＮＡ单克隆重抗体对１６例中耳胆脂瘤组织例正常外耳道皮肤，面部支及鼓膜进行免疫定位检测。结果：ＰＣＮＡ阳性细胞率愈高。结论：中耳胆脂瘤上皮组织具有过度增殖能力。上皮下炎症反应可能是角化细胞过度增殖的一个原因。     

肿瘤坏死因子受体1在中耳胆脂瘤上皮中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体1（TNFR1）在中耳继发性胆脂瘤上皮的表达，探讨其在胆脂瘤型中耳炎的发病机制中的作用。方法 分别采用免疫组化法和Western blot技术检测TNFR1在36例中耳胆脂瘤组织及20例正常外耳道皮肤组织中的表达情况。结果 TNFR1在36例胆脂瘤上皮各层细胞中均有强表达，定位于胞膜和胞质，而外耳道皮肤表达较弱甚至没有表达，TNFR1在胆脂瘤上皮中的蛋白表达水平较外耳道皮肤显著增高，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 胆脂瘤上皮中TNFR1表达较外耳道皮肤显著增高，肿瘤坏死因子可能通过与TNFR1相结合而导致胆脂瘤上皮细胞的过度增殖及凋亡。     

上皮细胞增殖和凋亡在中耳胆脂瘤发病学的意义(附33例报告)

目的 :通过探讨胆脂瘤上皮 (CE)、胆脂瘤患者外耳道上皮 (CAMS)和正常健康者外耳道上皮(NAMS)的增殖和凋亡及 p5 3基因与上皮细胞增生和凋亡的关系 ,阐明增殖和凋亡异常在胆脂瘤发病中的作用。方法 :采用免疫组织化学和原位末端标记技术检测细胞增殖标记物 PCNA、Ki- 6 7和 p5 3蛋白在 33例 CE、2 5例CAMS和 10例 NAMS细胞的表达及细胞凋亡。结果 :在上述标本中均有 PCNA表达及凋亡细胞存在 ,但不同类型上皮阳性细胞数量、染色强度及分布不同。 CE存在过度增殖和凋亡 ,CAMS亦存在过度增殖。 p5 3表达与PCNA呈正相关 ,与细胞凋亡呈负相关。结论 :CE具有过度增殖和凋亡的特性 ,增殖与凋亡的紊乱与胆脂瘤形成密切相关。     

PTEN、P-Akt和NF-κB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt(P-Akt)及核转录因子-κB(NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K(phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)-Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin-peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF-κB蛋白的表达。结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7%,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3%(P<0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0%,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7%(P<0.01);NF-κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3%,...     

PTEN、 P-Akt和NF-кB在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的 研究10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化Akt (P-Akt)及核转录因子- κB (NF-κB)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨PI3K (phosphatidylinositol-3-kinase,磷脂酰肌醇-3激酶)- Akt信号通路在中耳胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制中的可能作用.方法 采用免疫组织化学SP法(辣根酶标记链霉卵白素连接法,streptavidin - peroxidase conjugated method)检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN、P-Akt及NF- kB蛋白的表达.结果 PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为36.7％,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3％ (P＜ 0.01);P-Akt蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞胞质,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为70.0％,明显高于正常外耳道皮肤组的26.7％ (P＜0.01);NF- κB蛋白阳性表达定位于上皮细胞核,其在中耳胆脂瘤上皮中阳性表达率为63.3％,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0％ (P＜ 0.01).在30例中耳胆脂瘤上皮组织中,PTEN分别与P-Akt、NF-κB蛋白的表达之间呈显著负相关(P＜0.01),而P-Akt和NF- κB蛋白的表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 PTEN、P-Akt和NF- κB在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用.胆脂瘤上皮中PI3K-Akt信号通路的激活可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制.     

角化细胞生长因子在中耳胆脂瘤的表达及意义

目的研究角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）在中耳胆脂瘤中的表达,探讨KGF对胆脂瘤上皮增殖能力的影响及其在中耳胆脂瘤发生、发展中的作用。方法20例胆脂瘤上皮标本及配对的正常外耳道皮肤标本制成石蜡切片,应用免疫组化SP染色法检测上述两组标本中KGF和Ki67的表达,对染色结果进行定量分析。结果KGF在胆脂瘤上皮中呈强阳性表达,且从基底层向角质层染色有逐渐增强的趋势,间质中可见散在的阳性细胞;正常外耳道皮肤标本主要表现为间质中稀疏不均的弱阳性表达,在上皮细胞不表达。胆脂瘤上皮和正常外耳道皮肤的KGF阳性表达率之间差异有显著性意义（P〈0.01）。在胆脂瘤上皮中KGF与Ki67表达呈正相关（r=0.609,P〈0.01）。结论KGF和Ki67表达与中耳胆脂瘤的增殖能力有高度相关性,局部炎症通过调控KGF的表达促进胆脂瘤上皮的异常增殖,其中KGF的自分泌机制可能与胆脂瘤的发生、发展密切相关。     

热休克蛋白70在中耳胆脂瘤中的异常表达

目的研究热休克蛋白(HSP70)在中耳胆脂瘤组织中的异常表达,探讨HSP70与胆脂瘤的关系及其作用.方法采用免疫组化SABC染色法、计算机图像定量分析法,对25例中耳胆脂瘤和10例正常外耳道皮肤中HSP70的表达情况进行观察.结果在25例胆脂瘤上皮组织的全层及上皮下结缔组织中炎性细胞和成纤维细胞的胞浆中均有HSP70强表达,部分核中也有强表达.10例正常外耳道皮肤中HSP70为弱表达.计算机图象分析仪定量分析,结果显示胆脂瘤上皮中HSP70阳性细胞的平均光密度为0.3309±0.0070,正常外耳道上皮为0.1798±0.0020,胆脂瘤上皮中HSP70的含量显著高于外耳道皮肤(P＜0.001).结论HSP70可能参与了胆脂瘤的形成和发展.     

凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的研究凋亡抑制蛋白Survivin及Bcl-2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及相互关系,探讨其表达对胆脂瘤增殖能力的影响。方法运用免疫组织化学SP法检测21例胆脂瘤标本及11例外耳道骨部正常皮肤组织中Survivin、Bcl-2的表达。结果Survivin、Bcl-2在胆脂瘤上皮的表达与正常外耳道皮肤上皮比较,不仅范围广,基底上层也有表达,而且表达水平显著增高,两者比较有统计学意义(P<0.01)。胆脂瘤上皮中Survivin表达指数与Bcl-2表达指数呈正相关(r=0.553,P<0.01)。结论凋亡抑制蛋白Survivin,Bcl-2在中耳胆脂瘤的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用,它们可能参与胆脂瘤上皮的凋亡调控过程,因此适当控制Survivin,Bcl-2的表达可能会更有效地控制中耳胆脂瘤的发展。     

CDK4、P16在中耳胆脂瘤中的表达及意义

目的：观察细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P16在中耳胆脂瘤上皮的表达情况,探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用。方法：采用免疫组织化学技术SABC法检测CDK4、P16在中耳胆脂瘤35例、正常外耳道皮肤20例中的表达,并结合胆脂瘤对听小骨骨质破坏程度,采用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果：CDK4、P16均表达于胆脂瘤上皮的棘细胞层、颗粒层和角质层,阳性率分别为68.6%、88.6%,高于对照组(前者P=0.011,后者P=0.02)。二者在胆脂瘤上皮的表达有一定的相关性,P＜0.05;与中耳胆脂瘤听小骨骨质破坏程度之间无明显相关性,P＞0.05。结论：CDK4与P16在中耳胆脂瘤发生中是共同而非单独起作用的,从细胞周期的角度可反映胆脂瘤上皮细胞过度增殖的同时也增强负调控因子来抑制增殖,使凋亡同时加快而达到新的平衡。但与骨质破坏程度可能无直接关系。     

人类β防御素2在中耳胆脂瘤上皮中的表达及意义

目的:研究中耳胆脂瘤上皮中人类β防御素2(hBD2)的表达及与上皮内朗汉斯巨细胞(LC)密度的相关性,探讨hBD2在胆脂瘤病理过程中的作用。方法:采用免疫组织化学计算机图像分析方法观察21例中耳胆脂瘤上皮和10例外耳道正常皮肤表皮中hBD2的表达及LC密度。结果:胆脂瘤上皮中hBD2的表达水平及LC密度较外耳道皮肤表皮增高,差异具有统计学意义(均P<0.01)。胆脂瘤上皮中hBD2表达与上皮内LC的密度存在正相关(P<0.05)。结论:胆脂瘤上皮中hBD2表达较外耳道表皮显著增高,表明其与胆脂瘤的慢性炎症病理状态关系密切。胆脂瘤上皮中hBD2可能是LC重要的趋化因子,在连结特异与非特异性免疫中扮演一定角色。     

Role of Bcl-xL protein in differentiation and apoptosis of human middle ear cholesteatoma epithelium.

OBJECTIVE: To compare the mechanisms of proliferation, differentiation, and apoptosis in middle ear cholesteatoma epithelium with those of normal external ear canal epithelium. DESIGN: The localizations of the expression of Bcl-xL protein and involucrin and the presence of apoptotic cells were determined for tissue slices of middle ear cholesteatoma epithelium and compared with the findings for normal external ear canal epithelium. In addition, SCC-25/bcl-xL transfectants showing the overexpression of Bcl-xL were used to investigate the effect of this protein on the expression of involucrin, which is a marker of epithelial cell differentiation. MATERIALS: Cholesteatoma tissue specimens were surgically excised from 10 patients. Normal skin specimens collected from the external ear canal of the 10 patients were used as control specimens. RESULTS: The expression of Bcl-xL was detected in the vicinity of the basal cell layer of both the cholesteatoma epithelium and the normal external ear canal epithelium. Conversely, the expression of involucrin (ie, a marker of epithelial cell differentiation) increased in proportion to the shallowness of the epithelial layer. In situ labeling detected apoptotic cells in the spinous and granular cell layers of cholesteatoma tissue sections and similar findings in the normal external skin specimens. Western blot analysis confirmed that the expression of involucrin protein was the same in both wild-type SCC-25 cells and the SCC-25/bcl-xL transfectants. CONCLUSIONS: In both the cholesteatoma epithelium and the normal external ear canal epithelium, differentiation and apoptosis begin when the epithelial cells separate from the basal cells. The mechanisms behind these changes, at least in apoptosis, appear to be controlled by the expression of the Bcl-xL protein.     

表皮生长因子受体和Ki67及p16在成人中耳胆脂瘤中的表达

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)、Ki67、p16在成人中耳继发性胆脂瘤上皮中的表达情况,分析它们之间的相互关系,探讨其表达对胆脂瘤上皮侵袭能力的影响。方法:应用免疫组织化学SP染色方法检测EGFR、Ki67和p16在30例成人中耳胆脂瘤上皮、21例成人胆脂瘤患者外耳道正常皮肤、17例正常人外耳道中的表达情况,应用计算机图像分析系统对其阳性表达进行定量分析。结果:EGFR、Ki67、p16在成人中耳继发性胆脂瘤上皮中阳性表达率分别为70.0%,60.0%,46.7%,与外耳道正常皮肤相比表达均差异有统计学意义。成人中耳胆脂瘤中EGFR、Ki67与p16之间表达均无相关性(均P>0.05)。胆脂瘤侵袭能力与EGFR、Ki67表达有显著相关性(均P<0.01)。EGFR、Ki67表达灰度值越低,表达密度越高,胆脂瘤侵袭能力越强。p16在成人中耳胆脂瘤中的表达与侵袭能力之间无相关性(P>0.05)。EGFR、Ki67、p16在成人中耳胆脂瘤中阳性细胞主要分布于上皮全层,以基底层和棘层为著,呈高度表达;而在对照组中阳性细胞仅在基底层表达,呈弱表达。结论:EGFR、Ki67、p16在成人中耳胆脂瘤中呈高表达,EGFR、Ki67的表达与成人中耳胆脂瘤的侵袭能力有高度相关性,提示成人中耳胆脂瘤具有高度增殖能力,其中细胞因子EGFR、Ki67、p16起到重要的作用。     

核转录因子κ-Bp65在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的检测核转录因子-κBp65（nuclear factor kappa Bp65,NF-κBp65）在中耳胆脂瘤上皮中的表达和活化,探讨其在中耳胆脂瘤发病机制中的可能作用。方法采用免疫组织化学SP法检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中NF-κBp65蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白阳性表达定位于上皮细胞核。NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮组织中阳性表达率为63.3%,明显高于正常外耳道皮肤组的20.0%（P〈0.01）。结论NF-κBp65蛋白在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起重要作用。胆脂瘤上皮中NF-κBp65的活化可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制。     

RANKL和IL-17A在中耳胆脂瘤中的表达及相关性研究

目的观察破骨细胞分化因子（RANKL）和白介素-17A（IL-17A）在中耳胆脂瘤组织中的表达,探讨二者在中耳胆脂瘤骨质破坏机制中的作用。方法采用免疫组织化学两步法和计算机图像定量分析法,检测RAN-KL、IL-17A在25例中耳胆脂瘤上皮、16例胆脂瘤周围肉芽组织及15例正常外耳道皮肤中的表达,同时观察二者的表达与临床听小骨骨质破坏程度的相互关系。结果（1）RANKL、IL-17A在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中表达增高,分别与正常对照组比较,差异均有统计学意义（tRANKL=9.864、5.630,均P〈0.05;tIL-17A=13.905、9.011,均P〈0.05）,且二者的表达与骨质破坏程度相关。（2）在胆脂瘤上皮及胆脂瘤周围肉芽组织中,RANKL与IL-17A的表达呈正相关（r上皮=0.692,r肉芽=0.538,P〈0.05）。结论RANKL及IL-17A在中耳胆脂瘤组织中呈高表达,与骨质破坏程度成正比,表明其与胆脂瘤骨质破坏机制密切相关;RANKL与IL-17A表达有相关性,提示二者之间可能存在相互作用。     

中耳胆脂瘤中核因子-κB的表达与活化

目的研究中耳胆脂瘤中核因子-κB(nuclearfactorkappaB,NF-κB)的表达与活化,深入阐明胆脂瘤的发病机制。方法中耳手术中收集21例中耳胆脂瘤组织及8例正常外耳道皮肤组织,分别采用免疫组化及凝胶电泳迁移阻滞法(electrophoreticmobilityshiftassay,EMSA)检测2种组织NF-κB的蛋白表达分布及DNA结合活性,并进一步以胆脂瘤鳞屑刺激人角质形成细胞系HaCaT,观察细胞NF-κB的活性变化。结果胆脂瘤上皮组织中NF-κB的表达强度显著高于正常表皮组织,其阳性细胞平均积分吸光度分别为0·168±0·051、0·088±0·019(t=4·211,P<0·01),部分胆脂瘤(12/21)上皮细胞出现明显NF-κB的核转位;EMSA结果显示胆脂瘤组电泳带相对密度扫描值平均为(16·5±10·1)%,正常皮肤组则为(1·38±1·24)%,提示胆脂瘤组织中NF-κB的DNA结合活性显著高于正常皮肤组织(t=3·600,P=0·014);在胆脂瘤鳞屑刺激下,HaCaT细胞出现NF-κB的活化,其活性变化与鳞屑组织呈剂量依赖关系。结论NF-κB在胆脂瘤组织中存在异常活化,核因子-κB可能在胆脂瘤的发生和持续发展中起重要作用。     

转化生长因子α在中耳胆脂瘤组织中的表达及意义

目的 :研究转化生长因子 (TGFα)在中耳胆脂瘤中的表达 ,探讨TGFα在胆脂瘤上皮细胞增生中的可能作用。方法 :31例胆脂瘤上皮标本及 10例正常外耳道皮肤组织标本制成石蜡切片 ,应用免疫组化 (S P)染色法检测上述两种标本中TGFα的表达情况 ,并采用多媒体彩色图文分析系统 ,对染色结果进行定量分析。结果 :TGFα阳性表达定位于胞浆 ,胆脂瘤上皮组织均呈中等阳性或强阳性反应 ,2 1例标本呈现从基底层向角质层染色逐渐增强的趋势 ,皮下结缔组织中可见散在的阳性细胞 ,主要为成纤维细胞、单核 巨噬细胞、浆细胞 ,少数为淋巴细胞 ;外耳道皮肤组织的阳性反应集中在表皮层 ,其中 8例标本表现为表皮全层稀疏均一的弱阳性表达。胆脂瘤上皮和正常外耳道表皮的TGFα积分吸光度分别为 2 .4 31± 0 .5 87及 1.4 6 3± 0 .14 7,两者差异有显著性意义(t’ =1.95 ,P <0 .0 5 )。结论 :胆脂瘤组织中TGFα的含量较正常皮肤组织显著增高 ,TGFα可能以自分泌和旁分泌机制参与胆脂瘤上皮增生的调节 ,局部炎症反应可能构成特殊微环境 ,诱发并维持胆脂瘤上皮的高度增生