急性ITP患者T细胞亚群及血小板凋亡相关蛋白的检测

目的 检测凋亡相关蛋白Fas、FasL在急性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿T细胞亚群及血小板中的表达，分析其在ITP发病机制中的作用。方法 收集ITP患儿及健康儿童外周抗凝静脉血，分离纯化得T细胞和血小板。以PE标记的CD30 mAb和Cy5标记的CD4、CD8 mAb及FITC标记的Fas、FasL mAb作三色流式细胞术，分析ITP患儿Th／Tc、Thl／Th2、Tc1／Tc2细胞Fas、FasL表达的变化；以FITC标记的Fas、FasL mAb作单色流武细胞术，分析ITP患儿血小板Fas、FasL表达的变化。结果 与健康儿童相比，ITP患儿Th、Th1、Th2及Tc、Tc1、Tc2细胞Fas、FasL表达均显著性升高（P〈O．05）；同时，111P患儿血小板Fas的表达显著性升高（P〈0．05）而FasL的表达无明显变化（P〉0.05）。结论 ITP患儿存在免疫功能失调，T细胞亚群及血小板Fas、FasL表达异常可能与ITP免疫病理机制有关。     

Fas／FasL 在原发免疫性血小板减少症发病机制中的作用研究

目的：探讨Fas及FasL系统在成年原发免疫性血小板减少症（IT P）发病机制中的作用。方法收集成年初诊IT P患者及健康成年人外周抗凝静脉血。采用流式细胞术检测ITP患者Th／Tc、Th1／Th2、Tc1／Tc2细胞Fas及FasL的表达率、血小板表面Fas及FasL的表达率。结果与健康对照组相比,ITP组Th、Th1、Th2、Tc、Tc1、Tc2细胞表面Fas及FasL的表达率均明显升高（P＜0．05）;同时ITP组血小板表面 Fas的表达率明显升高（P＜0．05）,而血小板表面 FasL 的表达无明显变化（P＞0．05）。结论 ITP患者T细胞亚群及血小板表面Fas及FasL表达的异常,可能与ITP发病机制密切相关。     

慢性特发性血小板减少性紫癜患者Ⅰ类和Ⅱ类T细胞特点的研究

目的探讨慢性特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者Ⅰ类和Ⅱ类T细胞的特点。方法采取30例慢性ITP患者外周血及8例慢性ITP患者和6例遗传性球形红细胞增多症患者的脾细胞（接受脾切除的患者），应用流式细胞仪技术检测辅助T细胞（Th）CD4^＋’和细胞毒性T细胞（Tc1）CD8^＋胞质内细胞因子干扰素γ（IFN-γ）／白细胞介素（IL）-4的比例；应用实时定量聚合酶链反应（PCR）检测T-bet和GATA-3 mRNA的表达水平。结果疾病活动期患者外周血Th1／Th2和Tc1／Tc2的比例（25．62和30．23）显著高于正常对照组（8．29和12．58，均P〈0．01）；缓解期患者外周血Th1／Th2和Tc1／T02的比例（9．86和10．10）与正常对照组相比，差异无统计学意义。ITP患者脾细胞Th1／Th2的比例（41．46）显著高于对照组（16．30，P〈0．01）；Tc1／T02的比例（35．80）高于对照组（16．88），但差异无统计学意义。疾病活动期患者外周血以及ITP患者脾细胞GATA-3mRNA水平明显低于对照组（是对照组的0．20和0．34倍，均P〈0．05），缓解期患者与对照组相比，差异无统计学意义（是对照组的0．97倍）。ITP患者外周血及脾细胞T-bet mRNA的表达水平与对照组相比，差异无统计学意义（是对照组的1．17和1．04倍）。结论ITP是Ⅰ类T细胞占优势的自身免疫性疾病。促进Ⅰ类T细胞模式向Ⅱ类T细胞转化可能为ITP患者提供一种潜在的免疫治疗方式。     

特发性血小板减少性紫癜Fas—FasL表达与中医辨证分型的关系

目的：探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者外周血T淋巴细胞亚群（简称T亚群）表面凋亡调控因子Fas／FasL表达及其与中医辨证分型的关系．方法：按中医辨证分型将80例ITP患者分为4组,每组20例．以流式细胞术检测ITP患者外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／FasL的表达率并与对照组（正常健康志愿者20例）相同指标进行比较．结果：CD4^＋及CD8^＋外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／Fasl表达率ITP瘀血阻络组、血热妄行组治疗前与对照组相比较显著增加（P〈0．05）,血热妄行组治疗后显著下降,瘀血阻络组略有上升,但差异无显著性．CD4^＋及CD8^＋外周血T亚群表面凋亡调控因子Fas／Fasl表达率ITP阴虚火旺组、气虚不摄组治疗前与对照组相比较有所增加,治疗后略有上升,但差异均无显著性．结论：ITP患者中医辨证分型与Fas／FasL表达存在相关性．ITP患者较高的T亚群表面凋亡调控因子Fas,Fasl值,提示好的预后．     

慢性ITP患者外周血T细胞亚型的分析

目的探讨慢性特发性血小板减少性紫癜（CITP）患者外周血Th1/Th2、Tc1/Tc2的平衡状态。方法收集CITP患者外周抗凝静脉血,分离纯化得T细胞,用抗IFN-γ及IL-4单抗结合患者外周血T细胞,流式细胞术分析Th1、Th2、Tc1、Tc2细胞数以及Th1/Th2、Tc1/Tc2比值。结果 CITP患者与健康对照组比较,外周血CD3＋细胞和CD8＋细胞明显增加（分别为P〈0.01和P〈0.05）,CD4＋/CD8＋比例倒置（P〈0.05）;Th1细胞数显著升高（P〈0.05）,Th2细胞下降明显（P〈0.05）,Th1/Th2比值上升（P〈0.05）。Tc1和Tc2较正常对照无明显变化（P〉0.05）,但Tc1/Tc2显著增加（P〈0.05）。结论 CITP患者外周血细胞免疫功能低下,Th1及Tc1/Tc2细胞比例升高,呈Th1类细胞优势。     

Fas-FasL信号途径在ITP患者血小板凋亡中的作用研究

目的探讨Fas-FasL信号途径在原发性免疫性血小板减少症（ITP）患者血小板异常凋亡中的变化及可能的作用机制。方法选取ITP患者32例为ITP组,另择行健康体检者32例为正常对照组。采用流式细胞术检测ITP组患者（用药治疗前）与正常对照组受检者外周血PLT表面Fas的表达,调节性T细胞（Treg细胞）比率、表面Fas配体（FasL）的表达,并进行比较,分析ITP组患者以上指标的相关性。结果ITP组患者CD4+FasL+细胞比率、CD41+Fas+血小板比率均高于正常对照组受检者（均P＜0.05）,PTL与Treg细胞比率均低于正常对照组受检者（均P＜0.05）。ITP组患者PLT与CD4+FasL+细胞比率、CD41+Fas+血小板比率均呈负相关（均P＜0.05）,与Treg细胞比率呈正相关（P＜0.05）,Treg细胞比率与CD41+Fas+血小板比率呈负相关（P＜0.05）。结论血小板高表达Fas可与激活的T细胞表面FasL结合,T细胞可通过Fas-FasL途径直接介导血小板凋亡。     

免疫性血小板减少性紫癜患者脾脏T细胞亚群分布的实验研究

目的分析免疫性血小板减少性紫癜(ITP)患者脾脏T细胞亚群(Th、Tc、Th1、Th2、Tc1及Tc2等)分布情况,进一步探讨脾脏T细胞亚群分布在ITP发病机制中的作用。方法收集ITP患者腹腔镜手术切除脾脏组织和外伤手术切除脾脏组织各10例,分离纯化后得脾脏T细胞悬液,以PE-Cy5标记的抗CD4、CD8单克隆抗体和以PE标记抗Th2细胞趋化因子受体同源分子(CRTH2)单克隆抗体作双色流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测,分析Th、Tc、Th1、Th2、Tc1、Tc2及Th1类(Th1+Tc1)/Th2类(Th2+Tc2)细胞的比例变化。结果 ITP组与对照组相比,Th、Th/Tc、Th1、Th2、Th1类细胞及Th2类细胞比例下降,Tc、Tc1、Tc2及Th1/Th2比例升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ITP患者脾脏存在T细胞亚群分布紊乱,主要表现在Th及Th/Tc比例明显降低,Tc及Th1/Th2比例明显升高,脾脏自身免疫功能下降。     

特发性血小板减少性紫瘢患儿Th17细胞及其相关细胞因子的检测

目的探讨特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿Th17细胞及其相关细胞因子IL-17、IL-23及IL-6的改变及其临床意义。方法32例ITP患儿为病例组,30例健康体检儿童为对照组,用流式细胞术检测2组儿童外周血Th17细胞占CD4。细胞的百分率;用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测IL-17、IL-23及IL-6等细胞因子的浓度。结果病例组Th17细胞百分率为（3．12±0．91）％,高于对照组的（1．34±0．62）％,差异有统计学意义（P〈0．01）;病例组IL-17、IL-23、IL-6浓度高于对照组,差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论Th17细胞及其相关细胞因子IL-17、IL-23、IL-6等的异常增高是ITP患儿的病理生理改变之一,干预Th17细胞的分化、增殖或将成为治疗小儿ITP更为有效的方法。     

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血T细胞亚群及其细胞因子表达的影响

目的 研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对尖锐湿疣（CA）患者外周血T淋巴细胞亚群及胞内细胞因子表达的影响，探讨BCG-PSN对尖锐湿疣可能的免疫调节机制。方法 采用三色和双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测18例CA患者在BCG-PSN治疗前后外周血T淋巴细胞亚群及CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞内IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ染色阳性细胞百分率。结果 在BCG-PSN治疗前，CA患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显低于对照组（均P〈O．01），CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞内IL-2、IL-12、IFN-γ阳性细胞百分率较对照组明显下降（均P〈0．01），IL-4阳性细胞百分率与对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）；而治疗后CA患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显高于治疗前（均P〈O．01）；CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞内IL-2、IL-12、IFN-γ阳性细胞百分率较治疗前升高（均P〈0．01）。结论 BCG-PSN可通过调节尖锐湿疣患者T细胞亚群，纠正患者Th1／Th2模式及Tc1／Tc2模式失衡现象，起到治疗尖锐湿疣的作用。     

IL-17＋CD4＋T（Th17）细胞和IL-17＋CD5＋T（Tc17）细胞在肺癌患者外周血中的表达水平比较

目的对比白细胞介素（IL）-17＋CD5＋T（Th17）细胞和IL-17＋CD5＋T（Tc17）细胞在肺癌患者外周血中的表达水平。方法选择2010年3月至2013年3月我院接诊的70例肺癌患者进行研究（肺癌组）,同时选择40例健康体检者作为对照组。采用流式细胞术对两组的Th17细胞和Tc17细胞表达情况进行检测并分析。结果检测发现,腺癌、鳞癌、小细胞癌三种病理类型患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异无统计学意义（F=1．7621,P=-0．1798;F=0．1613,P=-0．8530）。表明Th17细胞和Tc17细胞表达水平与肺癌患者的病理类型无关。不同TNM分期的肺癌患者的Th17细胞和Tc17细胞表达水平差异有统计学意义（F=5．7831,P=0．0048;F=3．7514,P=0．0287）,且随着患者TNM分期的升高,Th17细胞和Tc17细胞表达水平也逐渐增高（P〈0．05）。结论Th17细胞和Tc17细胞在不同TNM分期肺癌患者的外周血中的表达水平不同,Th17细胞和Tc17细胞在肺癌患者中表达水平明显升高。     

卵巢癌患者外周血Th1/Th2及Treg/Th17细胞平衡关系

目的 探讨卵巢癌患者外周血中CD4+T细胞亚群:辅助T细胞(Th,包括Th1、Th2、Th17)及调节性T淋巴细胞(Treg)表达、平衡关系的变化,以及在卵巢癌发病机制中的作用.方法 流式细胞术检测30例卵巢癌疾病组及20例健康对照组外周血中Thl、Th2、Thl7、Treg表达占CD4+T细胞的百分率,并计算Th1/Th2、Th17/Treg的比值.结果 卵巢癌患者外周血中Th2、Th17及Treg亚群占CD4+T细胞的百分率明显高于健康对照组(P<0.05),而Th1百分率低于健康对照组(P<0.05),各亚群变化与临床分期相关,但与组织类型及细胞分化无关(P>0.05).卵巢癌组Th1/Th2比值降低,与对照组比较有统计学意义(P<0.05),卵巢癌患者存在Th2方向极化;卵巢癌组Treg/Th17比值升高,与对照组比较有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌患者外周血中存在CD4+细胞亚群表达异常,存在Th1/Th2、Treg/Th17比值失衡,为卵巢癌临床免疫治疗提供理论支持.     

溃疡性结肠炎患者Th17和Th1／Th2细胞亚群的研究

目的检测溃疡性结肠炎（Ulcerativecolitis,UC）患者外周血中辅助性T细胞亚群（Th1、Th2和Th17）数量和比例的变化,探讨其在UC发病机制中的作用。方法选择40例UC患者,分离外周血单核细胞（PBMc）,采用流式细胞术（FCM）检测Th1、Th2、Th17细胞的数量及Th1／Th2比值,用ELISA测定培养上清中IFN-γIL-4、IL-17水平,与同期选择的健康对照组比较并与患儿的病情进行相关性分析。结果UC患者PBMC中IFN-γ＋Th1细胞的数量、IL--γ7＋Th17细胞的数量均高于健康对照组[（27．0±2．9）％,（23．2±1．7）％,P〈O．05;（26．61±2．6）,（11．4±1．2）,P〈0．011;Th1／Th2比值高于健康对照组[（12．8±1．6）,（8．60±1．9）,P〈0．01],Th17细胞的数量与疾病程度呈正相关（P〈0．05,r=0．42）。结论IL-17＋Th17细胞与Th1／Th2比值变化可能参与UC患者的免疫学发病机制。     

系统性红斑狼疮患者血清IL-10与T细胞凋亡的关系研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者血清IL-10与T细胞凋亡的关系.方法:采用ABC-ELISA法检测SLE患者血清IL-10含量;三色荧光流式细胞术检测患者外周血中CD3 、CD4 、CD8 T细胞亚群及其Fas、FasL的表达和早期凋亡,并分析其与血清IL-10水平的相关性.结果:SLE患者血清IL-10水平明显升高,并与SLE活动指数(SLEDAI)和血清中抗ds-DNA抗体呈正相关;外周血中T细胞CD4 亚群比例下降、CD4 /CD8 的比值降低,CD3 、CD4 、CD8 T细胞Fas、FasL的表达均增高,T细胞尤其是CD4 亚群凋亡增加,以上变化以活动性SLE更为显著;SLE患者血清IL-10水平与CD4 /CD8 细胞比值呈负相关,与T细胞FasL表达异常增加和CD4 T细胞亚群凋亡显著增多呈正相关.结论:SLE异常增高的IL-10促使T细胞高表达FasL,诱导CD4 T细胞凋亡,参与了SLE的病理进程.     

白芍总苷抑制小鼠T淋巴细胞体外增殖促进活化诱导细胞死亡

目的 研究白芍总苷（TGP）对小鼠T淋巴细胞体外增殖及活化诱导细胞死亡（AICD）的影响,并初探其免疫抑制机制。方 法 利用免疫磁珠分选技术,无菌分离小鼠脾脏T淋巴细胞,按照TGP溶液浓度（0、50、100、200 µg/mL）设为空白组、TGP低中高剂量组,anti-CD3/CD28刺激T淋巴细胞活化及增殖。流式细胞仪检测细胞早期活化标志、细胞活力及CFSE标记的T淋巴细胞增殖;RT-PCR检测Fas/FasL mRNA水平;流式细胞仪检测活化T淋巴细胞表面Fas/FasL蛋白表达量;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果（1）与空白组相比,TGP中高剂量组在用药48 h后活细胞数目显著减少,活细胞比例明显下降（P<0.001）;（2）TGP组给药处理48 h后,T淋巴细胞分裂代数及已分裂比例显著降低,且抑制作用具有药物浓度依赖性（P<0.001）;（3）TGP处理组T淋巴细胞24 h后Fas mRNA表达量显著上调,并伴随着T淋巴细胞表面Fas蛋白的表达上调及胞内Bcl-2表达下调（P<0.01）。结论 TGP显著抑制T淋巴细胞增殖,并可通过上调Fas、下调Bcl-2的表达促进活化诱导的T淋巴 细胞死亡（AICD）。     

IL-11对ITP患者Th1、Th2细胞及T-bet、GATA-3 mRNA的影响

目的：研究白细胞介素-11 （IL-11）对免疫性血小板减少症（ITP）患者Th1、Th2细胞亚群及其调控因子T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达的影响.方法：从10例ITP患者静脉中抽取外周血提取单个核细胞,加入不同浓度IL-11（0、25、50、100、200 ng/mL）培养4d后,应用流式细胞术和实时荧光定量反转录-多聚酶链反应法检测Th1、Th2细胞亚群比例及T-bet mRNA、GATA-3 mRNA表达水平.结果：当IL-11浓度为100 ng/mL时,与浓度为0的对照组差异最明显,表现为Th1比例及Th1/Th2比值下降,Th2比例升高,差异有统计学意义（P＜0.01）,同时T-bet mRNA表达下降,GATA-3 mRNA表达增加,T-bet/GATA-3比值显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.结论：一定浓度的IL-11在体外培养中能促使ITP患者Th1细胞向Th2细胞转化,同时GATA-3 mRNA表达增加、T-bet mRNA表达下降.     

急性原发免疫性血小板减少症患儿T淋巴细胞亚群NK细胞及B细胞变化的探讨

目的研究ITP儿童T淋巴细胞亚群、NK细胞及B细胞的变化及意义。方法采用流式细胞技术检测35例ITP患儿和24例正常儿童外周静脉血T淋巴细胞亚群、NK细胞和B细胞变化。结果 ITP组CD4+T淋巴细胞百分比明显低于正常对照组(P0.01),CD8+T淋巴细胞百分比较对照组明显增高(P0.05),CD4+/CD8+比值较对照组明显降低(P0.05),NK细胞和B细胞与对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论急性ITP患儿存在明显的T淋巴细胞亚群比例的异常,未发现NK细胞和B细胞的异常变化。