免疫酶染色法（IEA）检测试剂盒的研制

淋巴细胞脉络丛性脑膜炎病毒(LCM)，仙台病毒(Sendai)、鼠痘病毒（Ectromelia)、小鼠肝炎病毒(MHV)等11种大．小鼠病毒IEA试剂盒已建成。建立IEA监测方法的过程中，选择了大鼠冠状病毒(RCV)、小鼠腺病毒(MAd)、小鼠K病毒等病毒抗原，进行了血精学监测方法的比较。对10只人工感染小鼠K病毒的抗体检查，结果表明IEA检出率和抗体滴度均较HI方法高。观察10只人工感染MAd小鼠的抗体增长情况，IEA和IFA的结果基本相符．IEA和补体结合试验(CF)两法检测59份大鼠血清的RCV抗体，阳性率分别为93.2％和71．2%，阳性标本平均滴度分别为1：516和1：68.8。在比较了其敏感性和特异性之后，还做了试剂的保存试验，冻干酵4℃和室温存放20d，其活性从1：1600下降到1：800，存放30d，其活性降至1：100；原倍酶和1：10稀释后的酶4℃存放60d，其滴度由1：6400分别降至1：3200和1：1600。存放150d后，其滴度降为1：1600；冻干血清存放于4℃和室温，70d仍保持滴度不变；抗原片存放4℃和室温40d，其抗原性不变。     

快速免疫酶染色法检测流行性出血热抗体

用快速免疫酶染色法(IESA)检测流行性出血热(EHF)患者血清抗体,并自行设计配制了联苯胺、亚硝基铁氰化钠及沙黄染料融为一体的新的底物染色剂,一次可将细胞核染成红色,抗原抗体复合物染成蓝色,普通显微镜下观察,鲜明易辨。本法可检出特异性抗体,有早期诊断价值,并具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、操作简便、无需特殊设备、底物染色剂可长期保存等优点。     

酶联法检测丙型肝炎病毒抗体阳性分析

目的了解采用间接酶联免疫法（ELISA）检测丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）的阳性情况。方法ELISA法进行抗-HCV测定，筛选出阳性血清141份按S／CO和年龄分组，分别进行比较。结果1≤S／CO〈3．8的例数占总阳性率的27．7％，S／CO≥3．8的例数占总阳性率的72．3％；20～49岁与50～80岁的例数分别占总阳性率的31％和69％，两组存在明显差别（P〈0．001）。结论采用间接ELISA法检测抗．HCV有一定的干扰因素，可导致阳性率偏高。临床诊断时它只能作为一个筛查实验，抗-HCV阳性不能完全证明体内存在丙型肝炎病毒感染，要做相关检查慎重诊断，有条件时进行确认实验才能确诊。     

小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立

目的运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。方法将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白（Nucleocapsid N）的主要抗原域NP（S）纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法。结果确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1∶200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1∶3000。S/P≥0.386则为阳性,S/P〈0.308为阴性,两者之间为可疑。经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好。与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%。用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性。结论本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础。     

玻片免疫酶法（IEA）检测恒河猴麻疹病毒抗体的应用

应用IEA法检测了不同地区的4个猴群的麻疹病毒抗体并与传统的HI法相比较。结果A、B猴群100%阳性，C猴群只有低阳性率和低滴度，D猴群全部阴性，检测的120份标本HI法与IEA法酣符合率达到99%。抗体滴度HI法较IEA法约高4～8倍，同时用IFA法检测了部分标本，IFA法的敏感性与IEA法相仿。     

小鼠肝炎病毒检测方法研究进展

小鼠肝炎病毒（Murine Hepatitis Virus, MHV）是一种冠状RNA病毒,常呈潜伏性感染,影响实验动物的质量和动物实验的结果。及时的检测出MHV可控制其流行范围和预防其对动物实验结果的影响。本文就近年来对MHV的检测与诊断方法做出综述,分析了MHV感染对实验动物及动物实验的影响,分析了现有MHV检测方法的优劣,为进一步研究MHV提供理论依据。     

RT-PCR法对小鼠肝炎病毒垂直传播的应用研究

用4株小鼠肝炎病毒MHV1、MHV3、A59和JHM的混合液人工感染SCID妊娠小鼠和BALB／c和妊娠小鼠。接种病毒后1、2、3、4、5、8、10d分别取母鼠的血、肝、胎盘以及胎鼠的肝脏,用组织RNA抽提试剂盒提取各组织的总RNA,然后用RT-PCR方法检测小鼠肝炎病毒。结果显示：SCID孕鼠接种病毒后24h即可在母鼠胎盘、胎鼠肝脏中检出小鼠肝炎病毒,而BALB／c孕鼠于接种后5d才在胎盘和胎鼠肝中检出病毒。结果表明小鼠肝炎病毒可以通胎盘屏障垂直传播。     

小鼠肝炎病毒抗体Dot-ELISA诊断试剂盒的研制

本文报道以硝酸纤维素膜为固相载体制备的小鼠肝炎病毒(MHV)抗原诊断膜片，用以检测MHV抗体的斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)诊断试剂盒的研制。研究结果表明：试剂盒不仅具有特异性强、灵敏性高、重复性和稳定性好等特点．而且还具有成本低、操作简便快速(2～3h即可作出诊断)．结果客现，便于长期保存，不需特殊仪器，肉眼易判定等优点，具有推广和应用价值。本研究在国内尚未见报道。     

乙型肝炎病毒（ayw型）转基因小鼠的建立

目的：建立遗传上稳定的、带有乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ａｙｗ亚型的转基因小鼠品系。方法：通过对受精卵显微注射进行基因转移的途径制备转基因小鼠，以ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂产、ＥＬＩＳＡ、组织切片免疫组化和透射电镜等方法，分析所导入ＤＮＡ在转基因小鼠体内的功能情况。结果：得到２１只建立者小鼠，在它们的血清中检测到了ＨＢｓＡＧ和ＨＢｅＡｇ的存在，还在肝细胞中观察到了ＨＢＶ样病毒颗粒。结论：ＨＢＶ基因组ＤＮ     

ELISA法与免疫酶法检测EBV抗体的结果分析

目的比较分析ELISA法检测EBNA1-IgA与间接酶免疫染色法检测VCA—IgA定性结果对鼻咽癌NPC（Carcinoma of Nasopharynx）的诊断价值。方法ELISA法和间接酶免疫法检测43例NPC病人、40例非NPC（鼻咽炎等）病人及40例正常人的EBNA1-IgA和VCA-IgA。结果以EBNA1-IgA和VCA—IgA的NPC诊断符合率作配对的卡方检验，两者的差异没有统计学意义（P〉0．05）。三组又分别作组内EBNA1-IgA和VCA—IgA的配对卡方检验，非NPC病人组的阳性率有显著性差异，其他两组没有显著性差异。结论对NPC的早期诊断和健康普查ELISA法检测EBNA1-IgA优于间接酶免疫染色法检测VCA—Iga。     

应用BAS ELISA及RPHA法检测HBsAg的比较

本文通过生物素——抗生物素系统(BAS),酶联免疫吸附试验(ELISA)、反向被动血凝试验(RPHA)检测HBsAg的比较试验,确证BAS具有更高的灵敏度,且特异性很好。建议把BAS用于献血员、饮食从业人员、公共场所服务人员、保育员等的筛检。     

1074名油田职工乙肝病毒感染的血清流行病学研究

本研究使用酶联吸附试验(ELISA)对1074名油田职工HBV感染的血清学标志进行了检测。结果发现HBsAg、抗-HBs、抗-HBc阳性率和HBV总感染率分别为9.8%、26.2%、14.1%和41.0%。从人群分布来看,HBV感染率存在着明显的性别、年龄、职业差异。各工作单位之间HBV的感染率也显著不同。结果提示,野外工作环境可能是造成油田职工HBV感染率升高的一个重要因素,应给予足够重视。     

1074名油田职工乙肝病毒感染标志的血清学模式分析

本研究使用酶联免疫吸附试验(ELISA)对1074名石油职工HBV感染的血清学标志进行了检测.结果表明HBsAg、抗-HBs、抗—HBc阳性率和HBV总感染率分别为9.8%、26.2%、14.1%和41.0%,进一步对105例HBsAg阳性者检测HBeAg和抗—HBe,阳性率分别为24.8%和46.7%,对151例抗—HBc,阳性者检测抗—HBc—IgM,阳性率为11.3%.根据HBV三项感染标志(HBsAg、抗—HBs、抗—HBc)的组合,其发现八种不同类型组合的血清学模式.本文对此八种血清学模式的意义进行了评价,以期为乙肝的临床诊断及预防措施的制订提供依据。     

丙肝病毒核心抗原荧光定量型生物条形码检测体系的建立与评价

目的建立丙肝病毒核心抗原（HCVcAg）的荧光定量型生物条形码检测体系,并对检测体系进行方法学评价。方法制备标记有HCVcAg多抗及特异DNA链的金纳米颗粒探针（NP探针）和标记有HCVcAg单抗的磁性微球探针（MMP探针）,形成MMP探针-HCVcAg-NP探针复合物,再利用去杂交将NP探针上标记的DNA链释放出来,通过荧光定量PCR方法鉴定这些释放的DNA链可确定丙肝病毒的存在。结果建立了HCVcAg的荧光定量型生物条形码检测体系,检测灵敏度可达100fg/ml,是相应的HCVcAg ELISA检测方法的104倍。结论本研究为发展高灵敏度丙肝病毒的荧光定量型生物条形码检测试剂盒奠定了基础。     

检测大鼠细小病毒抗体的ELISA、IEA和HI法比较

对检测大鼠细小病毒(RV株)抗体的ELISA、IEA和HI三种方法作了比较。ELISA、IEA和HI法的重复性分别为92.5％、88.2％和68.6％。经对同一批血清检品的检测,ELISA法IEA和检测结果的符合率为90.5％,抗体阳性检出率均为81％,而HI与前两法的符合率均仅为69％,抗体阳性检出率为69％。以上结果表明:ELISA和IEA法在重复性和抗体阳性检出率方面均优于HI(P<0.05)。经ELISA法检测,普通级大鼠中RV抗体阳性率达59％,而在清洁级大鼠中仅为7％。     

猴副流感病毒SV5 PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。方法根据GenBank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。结果利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccⅢ限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。结论初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

苏北地区弱智儿童弓形虫感染的临床检测与分析

目的:为了探讨弓形虫感染与弱智儿童等神经系统发育迟钝儿童之间的关系,对南通市社会福利院及本市某小学智力欠佳的儿童进行了弓形虫血清学的检测并进行了3个月的连续性观察。方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接红细胞凝集试验(IHA)同时对临床上明显诊断为弱智儿童29人和智力欠佳的儿童21人以及健康儿童51人的血清标本进行弓形虫特异性Ab的检测。结果:弱智儿童组的平均阳性检出率为20.69% ,6/29(ELISA) / 21.14% ,7/29(IHA)高于智力欠佳儿童组4.76% ,1/21(ELISA) / 19.05% ,4/21 (IHA)和明显高于正常对照组1.96%,1/51(ELISA)/ 1.96%,1/51 (IHA)。弱智儿童和正常对照两组差异显著(X2=13.67 ; X2=6.55 , P < 0.05)。结论:儿童的弓形虫感染与其母亲在孕期或本人与动物的密切接触有关。因弓形虫能损害大脑和神经系统,严重影响儿童神经系统的发育和功能,成为优生优育的一大隐患。因此,防止母子间垂直传播和避免妇女(特别在孕期)与动物接触是预防儿童弓形虫感染的主要关键。     

五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。     

梅毒螺旋体检测方法的临床评价

目的 探讨三种血清梅毒螺旋体检测方法的应用价值.方法 应用快速血浆反应素试验(RPR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)分别检测602份标本,其中61例确诊为梅毒感染.荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对RPR阳性标本进行检测.结果 ELISA法与TPPA法检测结果之间无显著性差异(P＞0.05),二者敏感性和特异性分别为95.1%、97.8%和91.8%、96.9%;RPR与ELISA法、TPPA法之间有显著性差异(P＜0.05);FQ-PCR法检测结果均为阴性.结论 ELISA法和TPPA法是较好的血清梅毒螺旋体的检测方法.FQ-PCR法检测的阳性率低.     

小鼠冷冻胚胎和精子SNP遗传鉴定方法的建立

【摘要】目的 建立小鼠冷冻胚胎和精子SNP(Single-Nucleotide Polymorphism)分型方法,用于冷冻胚胎和精子快速遗传鉴定方案。方法 本研究以中科院上海实验动物中心（国家啮齿类实验动物种子中心上海分中心）提供的小鼠冷冻胚胎和精子为样本,采用全基因组扩增技术和PCR-LDR分型技术建立小鼠冷冻物SNP遗传鉴定方法。结果 全基因组扩增技术能大幅度增加冷冻胚胎样本的DNA总量;PCR-LDR分型方法适用于小鼠全基因组45个SNPs的分型;分型确定C57BL/6, BALB/c, FVB/NJ 等胚胎和精子各10种近交系,SNP位点信息与测序结果一致;小鼠冷冻胚胎个数与SNPs检出个数成正比,当胚胎数达到12以上时SNP检出率100%。结论 实现近交系小鼠冷冻胚胎和精子快速SNP基因分型,及遗传质量鉴定。