大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的制备和评价

目的:研究不同缺血时间对大鼠局灶性脑缺血再灌注模型脑梗塞灶体积及神经功能缺损的影响.方法:24只SD大鼠随机分为假手术组、缺血1 h再灌注组和缺血2 h再灌注组,每组8只,采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组仅将线栓插至颈总动脉(CCA),缺血1、2 h再灌注组分别于术后1、2 h行再灌注.用2% 2,3,5三苯基氯化四氮唑(TTC)染色计算梗死灶体积,并对大鼠神经功能缺损进行评分.结果:假手术组于再灌注各时间点神经功能缺损评分均为0分.缺血2 h再灌注组再灌注2、6 h神经功能缺损评分明显高于缺血1 h再灌注组(t值分别为2.546、3.000,P<0.05),再灌注24 h,2组神经功能缺损评分差异无统计学意义(t=-1.128,P＞0.05).缺血1 h再灌注组与缺血2 h再灌注组于再灌注24 h时,神经功能缺损评分均明显低于再灌注2、6 h时的评分(t值分别为-2.222、-2.778;-3.458、-4.447, P<0.05).再灌注24 h时,2组神经功能缺损评分及梗塞灶体积/同侧大脑半球体积比值差异无统计学意义(P＞0.05).结论:线栓法大鼠局灶性脑缺血再灌注模型选择缺血1 h后再灌注是合理的.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用.方法 采用线栓法栓塞大鼠大脑中动脉建立急性局灶性脑缺血再灌注损伤模型,检测缺血2 h再灌注24 h后脑梗死体积、脑组织含水量、神经细胞凋亡及相关基因Bcl-2与Bax的表达,脑组织SOD、MDA和GSH-Px水平,以及对缺血再灌注后神经功能进行评分等评价EGCG的作用.实验分假手术组、脑缺血/再灌注组、EGCG(高、低剂量)治疗组、尼莫地平对照组.结果 模型组大鼠的神经功能缺陷症状、脑梗塞体积和脑组织水肿表现明显;脑组织SOD、GSH-px活性显著降低,MDA含量显著增高;神经细胞凋亡、Bcl-2与Bax表达明显增加,但Bcl-2/Bax显著降低(与假手术组比较,P<0.01).而上述这些指标在EGCG和尼莫地平组均得到明显改善(与模型组比较,P<0.05或P<0.01).结论 EGCG通过提高清除自由基能力以及上调Bcl-2表达和下调Bax的表达抑制神经细胞凋亡,对大鼠脑缺血再灌注损伤发挥保护作用.     

金纳多注射液对局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及相关蛋白的动态影响

目的:研究金纳多注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型.60只Wistar雄性大鼠被随机分为假手术组、缺血组和金纳多治疗组.缺血组和金纳多治疗组分别在脑缺血再灌注后6,12,24,48 h处死,应用免疫组化染色及原位细胞凋亡检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白表达及凋亡细胞数.结果:缺血组和金纳多治疗组凋亡细胞数于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点凋亡细胞数均明显少于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bcl-2表达于脑缺血再灌注后12 h达高峰,金纳多治疗组各时点Bcl-2蛋白表达均明显高于缺血组(P＜0.01).缺血组和金纳多治疗组Bax蛋白表达于脑缺血再灌注后24h达高峰,金纳多治疗组各时点Bax蛋白表达均明显低于缺血组(P＜0.01).结论:金纳多注射液可能通过上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,对脑缺血再灌注损伤起保护作用.     

棕榈油对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

目的研究棕榈油（palm oil,PO）对大鼠局灶性脑缺血再灌注后梗死体积及细胞凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨棕榈油的脑缺血保护作用及机制。方法用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。将健康雄性SD大鼠随机分成4组：空白对照组、假手术组、缺血再灌注组（IR）、PO处理组。空白对照组与假手术组每组12只大鼠,缺血再灌注组与PO处理组再分为再灌注2 h、6 h、12 h、24 h、72 h、7 d等6个亚组,每亚组12只大鼠。TTC染色观察脑缺血再灌注损伤后的损伤体积;SDS聚丙烯酰胺凝胶转移电泳（westernblotting,WB）检测Bcl-2、Bax的表达水平并观察PO的保护作用。结果①TTC染色：空白对照组与假手术组未见缺血失染区域,缺血再灌注组与棕榈油处理组缺血再灌注后2h均未见明显的缺血失染区,在缺血再灌注6 h、12 h、24 h、72 h、7 d各时间点,PO处理组梗死质量百分比与对应的IR组数值比较均有统计学差异（P〈0.05）,PO处理组较缺血再灌注组缺血梗死脑区质量百分比减少;②WB：缺血再灌注组及棕榈油组从再灌注6 h开始Bcl-2、Bax在半暗带区表达增强,随缺血时间延长,表达呈先升高后降低,Bcl-2于缺血12 h达高峰,Bax于缺血24 h达高峰。各时间点PO处理组与相应缺血组相比,Bcl-2的表达量显著增加（P〈0.05）,Bax的表达量显著减少（P〈0.05）。结论①棕榈油可以减小大鼠局灶性脑缺血再灌注后的缺血受损范围;②棕榈油能够增加大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡抑制基因Bcl-2表达作用,降低凋亡基因Bax表达作用,保护神经细胞。     

阿司匹林预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察阿司匹林预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用,并探讨其作用机制. 方法 健康雄性SD大鼠36只,随机分为假手术组、模型 溶媒组、阿司匹林50mg/kg预处理组.以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,予缺血2 h再灌注24 h后进行5分制神经功能评分并断头取脑分别测定脑梗死体积、凋亡细胞数及caspase 3的表达.结果 与模型 溶媒组相比,阿司匹林预处理组的脑梗死体积明显减小(P<0.05),神经功能缺损评分获不同程度改善(P<0.05),脑组织caspase 3表达及凋亡细胞减少(P<0.01). 结论 阿司匹林对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制与抑制脑组织中caspase 3的表达和细胞凋亡有关.     

低分子肝素对大鼠脑局灶性缺血再灌注后Bcl-2,Bax表达的影响及保护作用

目的:观察低分子肝素对大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Bcl-2,Bax表达的影响及保护作用. 方法:①选用雄性SD大鼠54只,体质量280～330 g. 应用随机数字表法将大鼠分为3组:假手术组、缺血再灌注组和低分子肝素组,每组18只. ②应用免疫组化方法测定海马CA1区神经元细胞凋亡基因Bcl-2,Bax表达情况. ③采用两样本均数的t检验对两组间数据进行分析. 结果:大鼠54只均进入结果分析,缺血再灌注组大鼠脑缺血再灌注6,12,24 h时Bcl-2蛋白在神经元内表达的阳性细胞数较低分子肝素组同一时间点明显减少,两组比较具有显著的统计学意义(P＜0.05). 缺血再灌注组大鼠脑缺血再灌注6,12,24 h时Bax蛋白表达的阳性细胞数较低分子肝素组同一时间点明显增加,两组比较具有显著的统计学意义(P＜0.05). 结论:脑缺血再灌注损伤随再灌注时间延长而加重,低分子肝素可能通过减少Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达,从而减轻神经元的损伤及凋亡,起到脑保护作用.     

骨髓间充质干细胞移植对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对缺血再灌注大鼠脑组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:SD大鼠84只,随机分为假手术组(n=12)、模型组(n=24)、磷酸盐缓冲液(PBS)组(n=24)和MSCs组(n=24).模型组、PBS组和MSCs组采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血模型,假手术组除不插尼龙线外,其余步骤相同.PBS组和MSCs组分别于建模成功后24 h分别经颈动脉注入等体积的PBS液和已制备好的同种异体MSCs悬液.每组于脑缺血2 h再灌注2 d、4 d、6 d、8 d时行神经功能缺损评分及脑灌注固定取材,采用免疫组化染色及TUNEL检测脑组织Bcl-2、Bax蛋白的表达及凋亡细胞数.结果:假手术组在各时间点神经功能评分为0分,无神经功能缺损,未见细胞凋亡,未见Bcl-2和Bax表达.与模型组和PBS组比较,脑缺血2 h再灌注4 d开始,MSCs组神经细胞凋亡数、Bax蛋白表达和神经功能缺损评分较低,Bcl-2蛋白表达较高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:骨髓间充质干细胞移植能改善脑损伤大鼠的功能;上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经细胞凋亡,可能是其主要机制之一.     

银杏叶提取物对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白和Caspase-3表达的影响

目的探讨银杏叶提取物（ginkgo biloba extract,GBE）对脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白和半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法将SD大鼠随机分为假手术组（A组）、缺血再灌注组（B组）和GBE治疗组（C组）,建立大鼠大脑中动脉缺血1.5 h再灌注24 h的模型;C组于缺血前30 min及缺血再灌注后1 h腹腔内注射银杏叶提取物;采用免疫组化SP法检测脑缺血再灌注后Bcl-2、Bax蛋白的表达,采用四肽酶底物法检测Caspase-3活性水平。结果 GBE治疗组大鼠Bcl-2阳性细胞表达数目均高于缺血再灌注组,Bax少于缺血再灌注组（P〈0.05）;假手术组未检测到Caspase-3活性升高,缺血再灌注组Caspase-3活性明显高于GBE组,有统计学意义（P〈0.05）。结论 GBE可通过上调Bcl-2蛋白表达而减少Caspase-3活性水平,下调Bax蛋白表达,来降低脑缺血再灌注后大鼠神经细胞凋亡。     

尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑神经元的 保护作用及其机制

目的： 探讨尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑神经元的保护作用及其对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响并阐明其作用机制。方法：30只雄性Wistar大鼠随机分
为假手术组、模型组和尼莫地平组,每组10只。采用线栓法堵塞大鼠大脑中动脉制作脑缺血再灌注损伤模型。缺血2 h再灌注2 h后进行神经功能学评分。之后断头取脑,应用TUNEL染色及SP免疫组织化学方法观察脑组织梗死情况并检测Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果：与模型组比较,尼莫地平组大鼠脑组织凋亡细胞数明显减少(P<0.05),Bax蛋白表达水平减少(P<0.05),Bcl-2蛋白表达水平增加(P<0.05)。形态学观察,模型组大鼠脑细胞坏死严重,水肿明显;尼莫地平组大鼠脑组织坏死细胞数减少,水肿情况有所改善。结论：尼莫地平对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠脑组织具有保护作用,其作用可能是通过下调Bax和上调Bcl-2相关蛋白表达从而抑制
脑神经元凋亡实现的。     

不同剂量促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的:探讨促红细胞生成素(Epo)对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡的影响.方法:32只雄性SD大鼠随机分成Epo低、中、高剂量组和缺血再灌注组,4组大鼠均采用线栓法阻断一侧大脑中动脉血流2 h再灌注24 h制成局灶性脑缺血再灌注损伤模型.缺血开始时Epo低、中、高剂量组分别腹腔注射Epo 1000 U/kg、3000U/kg、5000U/kg,缺血再灌注组注射等量生理盐水.再灌注24 h后断头取脑,制作石蜡切片,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax的表达,TUNEL法检测细胞凋亡.结果:与缺血再灌注组比较,Epo各剂量组凋亡细胞均少,Bcl-2表达较高,Bax表达较少,Bcl-2/Bax比值变大.Epo各剂量组间Bax的表达差异无统计学意义;高剂量Epo组对Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值影响最大;中剂量Epo对细胞凋亡的影响最为显著;低剂量Epo对Bcl-2表达和细胞凋亡的影响最小,对Bcl-2/Bax比值的影响与中剂量相同.结论:不同剂量的Epo对大鼠脑缺血再灌注损伤后皮层神经细胞凋亡的影响不完全相同,3000 U/kg可能最接近最佳应用剂量.     

Melatonin通过影响Bcl-2／Bax比率抑制再灌注后大鼠肝细胞凋亡

目的 探讨再灌注损伤对大鼠肝细胞凋亡的影响。Mel对大鼠肝再灌注细胞凋亡的影响作用及其机制。方法 150只健康雄性Wistar大鼠（质量190-210g，6-7周龄），随机分为褪黑素处理组（Mel）、酒精溶媒对照组（Alc）和生理盐水对照组（NS）。建立肝缺血再灌注损伤模型，缺血均为60min。之后每组分别按再灌注后0．5、1、6、12及24h采集标本。M组（20mg／kg）于缺血前30min腹腔注射melatonin；A组采取与Mel组相同浓度的酒精液，N组则注射同比例的生理盐水。测定血清天门冬酸氨基转移酶（AST）进行测定；对肝组织进行Bcl-2及Bax免疫组化染色；并在此基础上进行透射电镜观察肝细胞核及细胞器。结果 Mel组在再灌注后的6及12h时点AST均显著低于Alc及NS对照组（aP〈0．05），且Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组在再灌注后各时点的Bcl-2染色的阳性细胞率显著高于Alc及NS对照组（aP〈0．05），且各时点内Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组在再灌注后1，6，12及24h时点的Bax染色的阳性细胞率显著低于Alc及NS对照组（cP〈0．05）。且各时点内Alc组与NS组相比差异无显著性。Mel组再灌注后6，12及24h的Bcl-2／Bax值显著高于Alc组和NS组（aP〈0．05）。且上述每时点内的Alcohol组与N．s．组相比差异无显著性。电镜观察结果在Alcohol组及N．s对照组发现了普遍的肝细胞凋亡现象，相同时点Mel组则未发现肝细胞凋亡的发生。结论 外源性Mel可以抑制再灌注后血清天门冬酸氨基转移酶（AST）。增强肝细胞Bcl-2蛋白的表达，抑制Bd-2蛋白的表达，通过提升Bcl-2／Bax值来抑制再灌注后肝细胞凋亡的发生。     

Effects of NGF pretreatment on cerebral injury in gerbils

Objective: To investigate the effects and underlying mechanisms of different doses of nerve growth factor(NGF) pretreatment on neuron apoptosis and the expressions of the apoptosis-related protein, Bcl-2 and Bax, in the gerbil cerebral prefrontal cortex following global cerebral ischemia-reperfusion(FR) injury. Methods: Fifty-four gerbils were randomly divided into five groups, group C: sham operation(n = 6); group I/R(n = 12), group L(n = 12): low-dose NGF+I/R, group M(n = 12): medium-dose NGF+I/R and group H (n = 12): high-dose NGF+I/R. Groups I/R, L, M and H were further divided into 2 subgroups according to the durationof reperfusion(24 h and 72 h). The global cerebral I/R injury model was induced by bilateral carotid artery occlusion for 20 min,followed by removal of the clamps to permit reperfusion. In groups L, M and H, NGF was injected into the lateral ventricle 24 h prior to ischemia. Terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP-biotin nick end iabeling(TUNEL) and immunohis-tochemical staining were performed to detect neuron apoptosis and the expressions of Bcl-2 and Bax protein in the cerebral cortex,respectively. Results: In the I/R group and NGF pretreatment groups(L, M and H groups), reperfusion for 72 h caused higher percentages of both neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells(P < 0.01), but lower percentages of Bcl-2 positive cells compared with the corresponding 24 h reperfusion groups(P < 0.05). All NGF pretreatment groups exhibited lower percentages of neurons exhibiting apoptosis and Bax positive cells but a higher percentage of Bcl-2 positive-cells relative to the I/R group(P < 0.01).Moreover, the high-dose NGF pretreatment group had a greater decreased neuronal apoptosis and Bax protein expression and increased Bcl-2 protein expression than either the low-or medium-dose groups. Conclusion: Neuron apoptosis participates in the progression of cerebral ischemia-reperfusion injury. The protective effect of NGF pretreatment against ischemia-reperfusion-induced neuron apoptosis seems to be both time-and dose-dependent. This anti-apoptosis mechanism may be associated with upregulation of Bcl-2 protein expression and downregulation of Bax protein expression.     

姜黄素对视网膜缺血再灌注损伤Bcl-2，Bax 表达的影响

目的：研究姜黄素（Cur）预处理对视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）Bcl-2和Bax表达的影响,为姜黄素治疗视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）提供实验依据。方法将33只健康成熟无眼疾的SD大鼠随机分为正常组（3组）、模型组（15只）、Cur组（15只）,缺血前1h,正常组不进行任何处理,模型组腹腔注射生理盐水,Cur组腹腔注射姜黄素,前房加压法建立视网膜缺血再灌注损伤（RIRI）模型,模型组和Cur组分别在2h,6h,12h,24h,48h5个时间段,通过腹腔注射10g/L戊巴比妥钠处死大鼠,立即摘取实验眼球,通过免疫组化检测Bcl-2和Bax阳性表达。结果正常组未见Bal-2阳性表达,模型组和Cur组在缺血再灌注后2h可见Bal-2阳性表达,6h,12hBal-2阳性表达逐渐增加,24h阳性表达达高峰,48h阳性表达逐渐减少;Bax在正常组未见阳性表达,模型组和Cur组在缺血再灌注后2h可见Bax阳性表达,6hBax阳性表达逐渐增加,12h阳性表达达高峰,24h阳性表达逐渐减少,48h表达明显下降;在各时间段Cur组Bcl-2阳性表达数均高于模型组;Bax阳性表达数均低于模型组,各时间段差异具有统计学意义（P＜0．01）。结论姜黄素预处理大鼠视网膜缺血再灌注损伤,可增加神经节细胞Bcl-2表达,减少Bax阳性表达,减少神经节细胞损伤,对视网膜缺血再灌注损伤具有保护作用。     

p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注海马神经元损伤中的作用

目的　探讨p38MAPK在沙土鼠脑缺血再灌注损伤海马神经元中的作用。方法　采用沙土鼠双侧颈动脉阻断前脑缺血模型 ,随机分成假手术组 (sham组 )、缺血再灌注组 (IR组 )、对照组 (control组 )、SB2 0 2 190组及P7935 0组 ,后 3组分别侧脑室注射 1%DMSO、p38MAPK特异性抑制剂SB2 0 2 190和激动剂P7935 0。每组根据再灌注时间不同再分为 1天、3天和 5天 3个亚组 ,每亚组 6只动物。在预定时间点行开阔法行为学检查 ,显微镜下计数海马CA1、CA3区存活神经元数目 ,TUNEL法检测CA1区凋亡细胞。结果　SB2 0 2 190可以显著减少沙土鼠再灌注 3天、5天的探索活动 ,增加存活海马神经元数目 ,减少CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 ) ;而P7935 0可以显著增加沙土鼠再灌注 1天、3天、5天的探索活动 ,减少海马CA1、CA3区存活神经元数量 ,增加海马CA1区神经元的凋亡 (P <0 .0 5 ,vsIR组 )。结论　抑制p38MAPK的激活可以减轻脑缺血再灌注引起的海马神经元损伤。     

全脑缺血再灌注后大鼠海马回中Bcl-2及Bax的表达

目的探讨大鼠全脑缺血/再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）损伤后大脑海马回中Bcl-2及Bax的表达。方法将48只SD大鼠随机分为假手术（SO）组24只;全脑缺血/再灌注（I/R）组24只,采用四血管阻塞法建立大鼠全脑I/R损伤的模型。用免疫组织化学SABC法检测大鼠海马CA1区锥体细胞中Bcl-2及Bax的表达,测量其平均灰度值,用苏木精-伊红（HE）染色检测存活锥体细胞数。结果在I/R组,可见Bcl-2平均灰度值在3小时降低;Bax在3小时平均灰度值开始降低,12小时继续降低,24小时降低达到高峰,到48小时开始回升;存活神经元数目随再灌注时间的延长而减少（P均〈0.01）。结论大鼠全脑缺血/再灌注后,Bcl-2和Bax参与了脑神经元凋亡的调控。     

麦芽醇对缺血性急性肾功能衰竭的影响

目的:探讨麦芽醇(MT)在缺血性急性肾功能衰竭中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组(IR)、MT治疗组。利用急性缺血再灌注损伤的大鼠模型尾静脉注射麦芽醇。再灌注24 h后处死大鼠,取血、肾脏标本。全自动生化、分析仪检测血生化肾功能改变。免疫印迹方法测定Bcl-2、Bax的表达。结果:与对照组相比,IR组肾脏/体重指数、血清Scr、BUN和血钾显著升高(P<0.05),经MT治疗后,肾脏/体重指数、血清Scr、BUN和血钾水平明显下降(P<0.05)。与对照组相比,IR组Bcl-2、Bax表达升高(P<0.05),经MT治疗疗后,Bcl-2表达升高(P<0.05),Bax表达降低(P<0.05)。结论:麦芽醇在肾氧化应激性损伤中具有一定保护和协助修复的作用。     

细胞凋亡和Bcl-2、Bax基因在兔肺缺血再灌注损伤中的作用

目的:探讨细胞凋亡在兔肺缺血再灌注损伤中的作用以及Bcl-2和Bax基因的调控.方法:健康日本大耳白兔48只,随机分为对照组与肺缺血再灌注损伤1 h、3 h和5 h组.复制在体肺缺血再灌注损伤模型.采用TUNEL法观测肺组织细胞凋亡;予免疫组化及原位杂交技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax蛋白和基因表达.结果:随着再灌注时间的延长,凋亡指数(AI)及Bax蛋白、BaxmRNA水平进行性升高;Bcl-2蛋白及Bcl-2mRNA先升高而后下降(均P＜0.01).凋亡指数(AI)与Bax蛋白及Bax mRNA之间均呈显著正相关(r分别=0.926,0.933;均P＜0.01),而与Bcl-2蛋白/Bax蛋白及Bcl-2mRNA/BaxmRNA的比值呈显著负相关(r分别=-0.836,-0.879;均P＜0.01).结论:肺组织细胞凋亡参与了肺缺血再灌注损伤的发生,Bcl-2/Bax的比值下降是促进凋亡的重要因素.