雄激素调节耐多西他赛前列腺癌细胞肺耐药蛋白的表达

目的肿瘤多药耐药是导致肿瘤化疗失败的主要原因,肺耐药蛋白(LRP)可诱导多药耐药,我们研究雄激素对前列腺癌的LRP表达影响。方法人前列腺癌细胞株LNCaP及PC-3在含多西他赛的培养液中诱导成为耐药细胞株,耐药细胞株分别在含有DHT培养液和在含DHT及比卡鲁胺培养液中培养7d。免疫细胞化学及Western Blot检测两组细胞的LRP表达。结果 LRP在LNCaP及PC-3细胞系的表达明显低于LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系,DHT诱导后,LNCaP/Docetaxel及PC-3/Docetaxel细胞系的LRP表达明显增加,经DHT及比卡鲁胺联合作用后,LRP的表达明显低于DHT诱导后。结论多西他赛可诱导前列腺癌LRP表达,二氢睾酮可诱导耐多西他赛前列腺癌的LRP增量表达,雄激素受体阻断剂比卡鲁胺可阻断二氢睾酮的诱导作用。     

雄激素调节耐比卡鲁胺前列腺癌细胞肺耐药蛋白的表达

目的探讨雄激素对耐比卡鲁胺前列腺癌细胞肺耐药蛋白(LRP)表达的调节作用,为前列腺癌病理及临床的深入研究提供理论依据。方法选用PC-3和LNCa P细胞株,建立耐比卡鲁胺前列腺癌细胞株,并以二氢睾酮(DHT)对耐比卡鲁胺前列腺癌细胞株诱导,采用免疫细胞化学法和Western Blot检测LRP的表达状况。结果耐比卡鲁胺前列腺癌细胞株的LRP表达相对前列腺癌细胞株强,经DHT诱导后,LRP表达进一步增强。结论雄激素可诱导耐比卡鲁胺前列腺癌细胞肺耐药蛋白(LRP)表达增强。     

雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌雄激素受体表达水平的变化

目的:从雄激素受体表达水平变化的角度,探讨雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化的可能机理。方法:体外培养雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP细胞)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞株(PC-3细胞),应用流式细胞术测定两种细胞株在生理盐水和二氢睾酮(DHT)作用下雄激素受体(AR)的表达水平。结果:两种细胞株均有AR表达,两种条件下AR的表达水平分别为:LNCaP细胞生理盐水处理组85.99±4.97,DHT处理组93.74±3.63;PC-3细胞生理盐水处理组8.52±1.57,DHT处理组9.52±1.75,两种条件下LNCaP细胞的AR表达水平均高于相应条件下PC-3细胞的AR表达水平,两者有显著性差异(P<0.05)。DHT作用下LNCaP细胞的AR表达水平显著高于生理盐水作用下LNCaP细胞的AR表达水平(P<0.05);DHT作用下PC-3细胞的AR表达水平与生理盐水作用下PC-3细胞的AR表达水平无显著性差异(P>0.05)。结论:雄激素依赖性前列腺癌细胞过表达AR,并且二氢睾酮能促进其表达AR;雄激素非依赖性前列腺癌细胞AR表达较少,二氢睾酮对其AR表达无明显作用,雄激素依赖性前列腺癌向雄激素非依赖性前列腺癌转化可能与前列腺癌雄激素受体表达水平下降有关。     

多西他赛对雄激素依赖型及非依赖亚型前列腺癌细胞中C-jun与雄激素受体相互作用的影响

目的研究C-jun和雄激素受体（AR)在多西他赛处理的前列腺癌LNCaP细胞及其非雄激素依赖亚型LNCaP-bic细胞中的
相互作用。方法采用多西紫杉醇处理雄激素依赖型LNCaP前列腺癌细胞及其亚型雄激素非依赖型LNCaP-bic细胞,采用荧光
素酶分析检测AR及AP-1基因的表达,利用Western blotting,免疫沉淀方法分析C-jun以及AR的蛋白表达和相互作用。结果
经多西他赛处理后,LNCaP-bic以及其父代LNCaP细胞AR和C-jun在基因表达水平均得到增强。Western blotting提示
LNCaP-bic细胞中C-jun的磷酸化水平高于LNCaP细胞,同时其PSA蛋白表达也更强。免疫沉淀结果提示多西他赛使
LNCaP-bic细胞株中的AR和C-jun有更高的相关作用。结论多西他赛可以激活AR非配体依赖的转录功能,AR和C-jun之间
的相互作用可能影响多西他赛对前列腺癌的化疗结果。
     

ABC转运蛋白在SPC-A1细胞系中SP细胞多药耐药机制的研究

目的:近期研究表明,肿瘤是由异质细胞构成的一个群体,肿瘤的形成及生长是由称为肿瘤干细胞的一小群细胞驱动的.由于肿瘤干细胞高表达ABC转运蛋白、通常处于静止期并具有高度的DNA修复能力及抗凋亡能力因而对传统的放化疗耐药.文中研究ABC转运蛋白与SPC-A1细胞系多药耐药及肿瘤干细胞之间的关系. 方法:在实验前期构建多西他赛耐药细胞系SPC-A1/ Docetaxel的基础上,比较了SPC-A1及SPC-A1/ Docetaxel细胞系之间SP细胞的含量及其生物学特性、ABC转运蛋白的表达及其对多西他赛耐药性的影响. 结果:SPC-A1及SPC-A1/ Docetaxel细胞株中均存在SP细胞,SPC-A1/ Docetaxel细胞株中的SP细胞比例高于SPC-A1细胞;耐药蛋白P-gp及乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在SPC-A1/ Docetaxel细胞株及SPC-A1/ Docetaxel-SP细胞中均有明显的表达,而在SPC-A1细胞株的SP细胞中仅BCRP的表达增高;SPC-A1-SP细胞的增殖率、克隆形成能力及致瘤性均显著高于SPC-A1/ Docetaxel-SP细胞;SPC-A1/ Docetaxel细胞的耐药性可被维拉帕米逆转,而相同浓度的维拉帕米不能完全逆转SPC-A1-SP细胞的Docetaxel耐药. 结论:耐药蛋白BCRP在分选人肺腺癌细胞株SPC-A1 中具有肿瘤干细胞性质的SP细胞时起主要作用,由此分选的SPC-A1-SP细胞基本具备了肿瘤干细胞的特性,而且BCRP表达也是SPC-A1-SP细胞多西他赛耐药的一个主要因素.     

热休克蛋白60在多西紫杉醇治疗激素非依赖性前列腺癌过程中的差异表达

目的 分别比较热休克蛋白60(HSP60)在多西紫杉醇(Docetaxel)诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡及耐药前后表达的差异,并探讨其意义。方法 采用20μmol/L Docetaxel诱导PC-3细胞凋亡,后采用逐渐加量的方式培养PC-3细胞Docetaxel耐药株;采用双向荧光差异凝胶电泳(DIGE)技术定量筛选未处理组PC-3细胞与凋亡PC-3细胞,及PC-3细胞敏感株与耐药株的差异蛋白,并采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对其进行成分鉴定,进而检测HSP60的表达。结果 HSP60在Docetaxel诱导PC-3凋亡细胞中表达上调,在Docetaxel耐药株中表达下调。结论 HSP60在PC-3凋亡细胞中高表达,在Docetaxel耐药株中的低表达,提示其可能与PC-3细胞的凋亡及耐药有重要关系。     

灵芝孢子油抑制前列腺癌LNCaP细胞中AR激活及转录活性

目的:研究灵芝孢子油对双氰睾酮诱导的前列腺癌LNCaP增殖、雄激素受体AR的激活和转录活性及相关激酶的影响。方法:采用质粒转染、Western blot、CCK-8细胞增殖活性检测及双色荧光素酶报告基因活性等研究灵芝孢子油对雄激素依赖的前列腺癌LNCaP细胞的作用。结果:CCK-8检测显示灵芝孢子油明显降低DHT刺激的LNCaP细胞的增殖活性,同时,Western blot检测表明灵芝孢子油降低了DHT诱导的前列腺癌LNCaP细胞中AR和蛋白激酶D的磷酸化活性,而对其本底蛋白的表达水平无影响。荧光素酶报告基因活性检测进一步表明灵芝孢子油明显抑制DHT诱导的LNCaP细胞中AR的转录激活活性。结论:灵芝孢子油可能通过抑制AR的激活及其转录活性而抑制雄激素依赖的前列腺癌细胞的增殖。     

P-gp与GST-π在鼻咽癌多药耐药细胞中的表达及其意义

目的比较P-糖蛋白(P-gp)与谷胱甘肽S转移酶π(GST-π)在鼻咽癌细胞TW03及其多药耐药细胞TW03/DDP中的表达差异,进一步探讨鼻咽癌多药耐药的机制。方法制备鼻咽癌细胞TW03及其多药耐药细胞TW03/DDP的细胞爬片,利用免疫细胞化学技术,检测P-gp与GST-π在两种细胞中的表达情况。结果 GST-π在TW03/DDP中表达明显高于TW03(P<0.01),而P-gp在TW03/DDP中表达明显低于TW03(P<0.01)。结论 GST-π可能是TW03/DDP导致多药耐药中的重要原因之一,P-gp降低的原因需要进一步研究。     

抑癌基因PDLIM4在前列腺癌细胞中的差异表达

目的 探讨PDLIM4基因在正常前列腺上皮细胞(RWPE1)、前列腺癌细胞(PC-3、DU145、LNCaP)、前列腺癌多药耐药细胞(PC-3/Doc)及其他耐药细胞(K562/A02、H460/Doc)中的差异表达.方法 采用定量PCR(qPCR)、Western blot、免疫荧光等方法检测PDLIM4基因在各种细胞株中的表达;利用Western blo和DNA甲基转移酶(DNMTs)活性检测分析细胞中DNMTs的表达及活性.结果 PDLIM4基因在RWPE1高表达,在DU145、LNCaP细胞中基本无表达,在前列腺癌PC-3细胞中表达甚低,而在与其对应的多药耐药PC-3/Doc细胞中高表达(P＜0.05),并且在耐药细胞株中的高表达具有组织特异性.DNMTs在RWPE1表达水平低于前列腺癌细胞,但在PC-3和PC-3/Doc中无差异.酶活性分析表明,PC-3/Doc中DNMTs的活性低于PC-3细胞(P＜0.05).结论 PDLIM4基因在前列腺癌细胞中低表达,这种特异性的在前列腺癌耐药细胞中表达显著上调可能是由DNMTs活性降低所致.     

膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达与多药耐药性

目的：探讨膀胱移行细胞癌中P-箔蛋白（P-gp）、p53、Bcl-2、谷胱甘肽S-转移酶-π（GST-π）的表达，了解多药耐药性与膀胱移行细胞癌细胞凋亡的相关性。方法：采用链霉素-生物素（SP）免疫组化技术检测75例膀胱移行细胞癌和10例无病变膀胱（正常对照组）坏率P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的表达。结果：膀胱移行细胞癌中P-gp、p53、GST-π、Bcl-2的阳性表达牢分别为81．66％、69．33％、80．00％、65．33％；不同病理分级膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、Bcl-2的阳性表达差异有统计学意义（P〈0．05～0．01），不同病理分期膀胱移行细胞癌中P—gp、GST-π、p53、Bcl-2阳性表达差异有统计学意义（P均〈0．05）；复发病例中P—gp、GST-π表达异常与p53、Bcl-2之间存在联系。结论：P—gp、p53、Bcl-2、GST-π等表达与膀胱移行细胞癌的分期有关；P—gp、GST-π高表达在膀胱移行细胞癌中是一种常见现象；耐药指标P-gp、GST-π与凋亡指标p53、Bcl-2影响因素有一定的内在联系。     

MADD抑制人前列腺癌PC-3细胞凋亡作用的研究

目的：检测含促分裂素原活化蛋白激酶激活死亡结构域蛋白（MAPK-activating death domain-containing protein,MADD）在前列腺癌组织及良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia,BPH）组织中的表达并探讨其对前列腺癌细胞凋亡的作用。方法：收集40例人前列腺癌及35例BPH组织,免疫组化染色技术检测MADD的表达情况;Western blot技术检测MADD在人前列腺癌细胞株（LNCaP、PC-3和PC-3M）和良性前列腺细胞株（BPH1）中的表达情况;应用MADD siRNA转染人前列腺癌PC-3细胞,Western blot检测其MADD、caspase-3和PARP表达,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡变化。结果：MADD在前列腺癌组织中的表达高于BPH组织（P=0.000）;人前列腺癌细胞株LNCaP、PC-3M和PC-3中MADD表达水平明显高于良性前列腺细胞株BPH1（P=0.009、P=0.001、P=0.000）,沉默PC-3细胞中MADD表达,导致活化型caspase-3和PARP降解产物表达增加,并诱导PC-3细胞凋亡增加和增殖活力降低（P=0.000）。结论：前列腺癌组织中MADD表达明显增高,MADD在前列腺癌中可能作为凋亡抑制因子发挥功能。     

食管癌放射抗拒细胞P-gp和GST-π表达的研究

目的研究食管癌放射抗拒细胞多药耐药基因的表达。方法以食管癌EC9706细胞为研究对象,采用长期、间隔、γ射线照射的方法建立放射抗拒的食管癌EC9706细胞系EC9706-R,MTT法测定EC9706-R的耐药指数,免疫细胞化学法和RT-PCR法分别测定P-gp、GST-π的蛋白和mRNA的表达。结果EC9706-R细胞耐药指数是EC9706细胞的1.24倍,P-gp和GST-π的蛋白均有表达,mRNA表达比EC9706细胞高。结论诱导建立的食管癌放射抗拒细胞EC9706-R的化疗耐药性有所增高,原因多为放疗增加了P-gp和GST-π的表达。     

雄激素剥夺治疗对前列腺癌癌干细胞的影响

 目的探讨雄激素剥夺治疗（ADT）对前列腺癌癌干细胞（PrCSC）比例及干细胞相关基因的影响。方法由雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP 诱导出雄激素非依赖性前列腺癌细胞系LNCaPAI,流式细胞技术检测ADT 对LNCaP 中PrCSC 比例以及雄激素对LNCaPAI 中PrCSC 比例的影响,Western blot及实时定量PCR 检测、和的变化。结果由LNCaP 诱导出LNCaPAI 细胞,LNCaP 细胞中PrCSC 的比例为0.04%。ADT 4周后PrCSC 的比例增加至0.23%,6 个月后形成LNCaPAI时则达到0.74%。ADTBMI-1、NANOG、ABCG2 3周后,BMI-1、NANOG、ABCG2的表达逐渐增高,LNCaPAI中BMI-1、NANOG、ABCG2表达明显高于LNCaP。双氢睾酮作用于LNCaPAI 后PrCSC 的比例逐渐下降,第2周时下降至0.43%,第3 周时下降至0.37%,第4 周下降至0.33%。同时BMI-1、NANOG和ABCG2的表达逐渐降低。结论ADT 可以使LNCaP逐渐形成LNCaPAI,此时PrCSC 比例增加,同时干细胞相关基因表达增加。双氢睾酮可以减少雄激素非依赖性前列腺癌中PrCSC 比例。间断雄激素治疗可能是治疗前列腺癌的较好选择。     

耐药表型P-gp,GST-π,及TOPOⅡ的表达与Ki67在肺癌中的表达及其临床意义

目的：检测P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67在肺癌中的表达,探讨其在肺癌中的表达水平及其临床相关性.方法：用免疫组化方法检测52例术前未进行化疗的肺癌组织中P-gp,GST-π,TOPOП与Ki67的表达.结果：P-gp,GST-π,TOPOП和Ki67在肺癌中的阳性表达率分别是73%,80.5%,62.5%,23.7%.P-gp,GST-π的表达与病理组织学分型,分化程度有显著相关性（P＜0.05）;TOPOП在腺癌中的表达明显低于其他类型的肺癌（P＜0.05）;P-gp,GST-π,TOPOП的共表达率明显高于其单一表达率（P＜0.05）;P-gp,GST-π,TOPOП的表达与Ki67之间无显著相关性.结论：P-gp,GST-π,TOPOП在不同类型的肺癌中均可表达,且表达水平不同,但它们均与肺癌的耐药相关,且呈共同表达,所以以上指标可以作为临床判断预后和指导化疗的综合指标.     

GST-π、P-gp及Topo Ⅱ在大肠癌中的表达及其多药耐药的临床研究

目的探讨大肠癌组织中谷胱甘肽s转移酶（GST-π、糖蛋白（P-gp）和DNA拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）的表达与临床病理和预后及多药耐药的关系。方法采用免疫组化方法检测111例大肠癌组织中GST-π、P-gp和TopoⅡ的表达。对其组织病理改变和5年生存率进行综合分析。结果在高、中分化及低分化大肠癌组织中,GST-π阳性率分别为56．3％、66．2％和92．6％;TopoII阳性率为25．0％、32．3％和66．7％,P-gp阳性率为37．5％、50．0％和74．1%。GST-π和TopoII表达在高、低分化两组间及中、低分化两组间均有非常显著的差异（P〈0．01）,P-gp表达均有显著差异（P〈0．05）。而在不同的年龄、性别、Duke’S分期及有无淋巴结和远处转移中,GST-π、P-gP、TopoII的表达均无显著差异（P〉0．05）。5年内生存者,GST-π、P-gp和TopoII表达阳性率低于5年内死亡者,GST-π和P-gp有显著差异（P〈0．05）,TopoII有非常显著差异（P〈0．01）。结论耐药表型GST-π、P-gp和TopoII可作为多药耐药的标志物,其表达可能作为评估大肠癌预后的有价值的指标。     

肥大细胞通过上调p21促进前列腺癌神经内分泌分化及增加对多西他赛化疗的抵抗性

目的探索肥大细胞浸润对前列腺癌细胞神经内分泌分化（NED）及多西他赛化疗敏感性的影响。方法利用Transwell小 室将人前列腺癌细胞系（LNCaP和C4-2）与人肥大细胞系（HMC-1）进行共培养,通过sh-AR慢病毒沉默C4-2细胞AR的表达, 通过sh-p21质粒（pLKO.1-sh-p21）和p21过表达质粒（pCMV-p21）转染分别沉默和过表达前列腺癌细胞p21,倒置显微镜观察 LNCaP和C4-2细胞的形态变化,MTT实验及克隆形成实验检测LNCaP和C4-2的细胞增殖能力,CCK8实验检测C4-2在多西 他赛化疗下的细胞活性,RT-qPCR实验及Western blot实验分别检测前列腺癌细胞细胞神经内分泌标志物、AR、p21的mRNA 及蛋白表达量。结果HMC-1细胞共培养可以增加LNCaP和C4-2细胞的NE表型表达,抑制LNCaP和C4-2细胞的增殖能力, 并上调p21的表达（P<0.05）。P21通过不依赖AR的信号通路正向调控前列腺癌细胞NED,敲除p21表达可部分逆转HMC-1共 培养促进NED的作用。同时,肥大细胞共培养后的前列腺癌细胞对多西他赛化疗的抵抗性增加（P<0.05）,敲除p21部分逆转了 肥大细胞提高多西他赛化疗抵抗性的作用。结论肥大细胞可以部分通过上调p21表达促进前列腺癌细胞NED以及增加对多 西他赛化疗的抵抗性。     

多药耐药相关蛋白在乳腺浸润性导管癌中的表达

目的探讨多药耐药基因产物P-糖蛋白（P-gp）、拓扑异构酶（TOPOⅡ）、谷胱甘肽转移酶（GST-π）、肺耐药蛋白（LRP）在乳腺浸润性导管癌中的表达及其临床意义。方法应用免疫组化SP法,对80例乳腺浸润性导管癌的主要耐药指标P—gp、TOPOⅡ、GST-Ⅱ、LRP进行检测,并分析其与临床病理特征之间的关系。结果P-gp、TOPOⅡ、GST-π、LRP在乳腺浸润性导管癌的阳性表达率分别为40％、55％、65％、80％,P-gp、TOPOⅡ、GST-Ⅱ、LRP在乳腺浸润性导管癌的表达无相关性。结论联合检测LRP、GST-π、TOPOⅡ、LRP对乳癌化疗药物的选择具有指导作用,对预后的判断有参考价值。     

汉防己甲素逆转白血病细胞株K562/A02耐药的机制

目的:研究汉防己甲素（TTD）对白血病细胞株K562/A02多药耐药(MDR)逆转的机理。方法：以白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562/A02为TTD作用的靶细胞。细胞水平检测实验分5组（K562组、K562/A02组、K562+ADM组、K562/A02+ADM组和K562/A02+TTD+ADM组）,采用MTT法检测TTD对K562和K562/A02细胞的非细胞毒性剂量,流式细胞术检测细胞内阿霉素(ADM)的浓度,基因、酶学、蛋白水平检测实验分3组（K562组、K562/A02组和K562/A02+TTD组）,采用RT-PCR法检测mdr1 mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测谷胱甘肽S转移酶π（GST-π）和拓扑异构酶Ⅱ（Topo Ⅱ）的表达水平,Western-blotting法检测P-糖蛋白（P-gp）和bcl-2表达。结果：1.562 5 mg•L^-1的TTD处理K562/A02细胞后,细胞内ADM的浓度较单用ADM组明显提高（P<0.01）;与空白对照组比较,K562/A02细胞内mdr1 mRNA/P-gp的表达量减少（P<0.01）;GST-π和TopoⅡ表达无明显变化;凋亡抑制基因bcl-2的表达量减少（P<0.01）。结论:TTD主要通过增加细胞内ADM浓度,下调mdr1/P-gp和bcl-2表达逆转耐药。     

雄激素依赖性和雄激素非依赖性前列腺癌差异膜抗原的筛选

目的:探讨雄激素依赖性和非依赖性前列腺癌细胞差异表达膜蛋白的筛选方法。方法:提取雄激素依赖性前列腺癌(androgen dependent prostate cancer, ADPC) 细胞株LNCaP 和雄激素非依赖性前列腺癌(androgen independentprostate cancer, AIPC) 细胞株PC-3 膜蛋白作为抗原,采用免疫共沉淀方法,与ADPC 和AIPC 患者的血清各3 例交叉孵育,行Western 印迹检测,比较、识别杂交后差异表达蛋白条带,串联质谱分析鉴定,细胞免疫荧光和组织免疫组织化学方法验证。结果:共获得11 个差异表达的膜蛋白(Neural-Cadherin precursor,ER60 precursor, Claudin-4 等);细胞免疫荧光结果显示Claudin-4 在LNCaP 和PC-3 细胞存在明显差异,在ADPC 组织中阳性表达率(34.3%) 低于AIPC 组织中阳性表达率(72.4%, P<0.05)。结论:本研究所采用的方法筛选前列腺癌差异表达膜蛋白具有可行性;Claudin-4 可能在雄激素非依赖性前列腺癌的发生和发展中发挥重要的作用。     

二氢睾酮对前列腺癌LNcap和PC-3细胞株EGFR mRNA表达的影响

目的探讨AR免疫表型突变对前列腺癌(prostate carcinoma,PCa)增殖和凋亡效应的影响机制,为PCa的病理及临床提供实验依据.方法应用不同水平DHT刺激LNcap和PC-3细胞株,检测EGFR mRNA及蛋白在不同AR表达的PCa中的表达特点,研究雄激素及AR与PCa增殖和凋亡的相关性.结果低水平DHT促进LNcap细胞EGFRmRNA的表达,促进LNcap细胞增殖,随DHT水平升高EGFR mRNA表达下降,增殖活性下降,不加DHT组EGFR mRNA表达较低.低水平DHT与不加DHT对PC-3细胞EGFR水平影响不大,增殖活性较高,高水平DHT刺激则EGFR表达下降.结论在AR正常表达情况下,雄激素可提高前列腺癌细胞EGFR水平且有剂量依赖性.AR表达异常,雄激素信号途径改变,不能影响EGFR的转录水平,EGFR的表达和激活可能受其他表达上调的细胞因子调控.