~(188)Re标记放射性药物研究进展

188W/188Re发生器的发展极大提高了188Re在各种疾病治疗中的应用1。88Re是一种非常理想的治疗用放射性核素。已经开发了许多新的188Re标记的放射性药物并普遍地应用于临床试验中。188 Re-MAG31、88Re-DTPA用于防止冠状动脉再狭窄,188Re-HEDP1、88Re-ABP1、88Re-EDTMP等用于骨痛缓解的治疗,188Re-HDD碘化油溶液用于治疗肝癌,188Re标记的胶体和微球用于治疗关节炎及其他的实质性肿瘤。然而,仍需要发展新的靶向性更强的188Re标记的放射性药物如肿瘤特异的单克隆抗体和肽及葡萄糖类似物1。88Re从发生器可方便地获得以及合理的价格使188Re标记药物的临床应用前景广阔。     

~(188)Re标记VEGF多肽片段的荷瘤裸鼠体内分布及显像研究

目的 探讨188Re标记VEGF189外显子6编码的多肽(QKRKRKKSRYKS)的方法、标记物在荷瘤裸鼠体内的分布及显像.方法 以S-acetyl-MAG3为双功能螯合剂,正交设计法寻找188Re标记多肽QKRKRKKSRYKS的最佳条件;研究标记物在荷卵巢癌SKOV3裸鼠的体内分布,并在不同时间行SPECT平面显像.结果 采用SPSS 13.0进行分析.结果 188Re标记QKRKRKKSRYKS在最佳标记条件下的标记率为(73.1±5.5)%,HPLC纯化后放射化学纯度>95%,且受体结合活性良好;标记物室温下放置24 h,其放射化学纯度为(91.76±1.36)%;尾静脉注射标记物后,0.5 h荷瘤裸鼠肿瘤部位开始出现放射性浓聚,1 h浓聚更为明显,肿瘤放射性摄取为(1.846±0.511)%ID/g,肿瘤/对侧肌肉组织比值达(2.43±0.30).此外,肝脏、小肠、肾脏及膀胱等部位也可见明显的放射性浓聚,但3 h后肿瘤部位的放射性浓聚影基本消退.结论 188Re-MAG3-QKRKRKKSRYKS能明显聚集于肿瘤组织.     

肿瘤靶向治疗用白蛋白磁性纳米粒子的~(188)铼(~(188)Re)标记

目的188铼(188Re)标记用于肿瘤靶向治疗的白蛋白磁纳米体的实验室条件.方法 188Re标记白蛋白磁性纳米体的最佳实验室条件是SnCl2·H2O8 mg/ml,柠檬酸20 mg/ml,维生素C 8 mg/ml,反应容积为500μl,反应时间为3 h.结果188Re总的标记率大于90%,标记稳定性7 h为98%、24 h为95%.结论188R-0白蛋白磁性纳米体的标记率及标记稳定性适于用于肿瘤靶向治疗的体内研究.     

188Re在介入治疗肿瘤中的应用进展

188Re是理想的治疗用放射性核素,具有优良的核物理特性和化学性能,对多种肿瘤及肿瘤转移灶的治疗有明显的疗效,将188Re标记于某些特异性分子上,应用介入学方法实施肿瘤内照射治疗,提高了治疗的靶向性.综述了188Re在治疗肿瘤中的应用,以及用介入学方法靶向选择性引入188Re进行核素介入治疗恶性肿瘤的研究进展.     

188Re标记放射性药物在肿瘤治疗中的研究进展

随着188W-188Rc发生器的广泛应用,188Re成为近年来最常用的治疗型放射性核素之一,已经开发了许多188Re标记的放射性药物应用于肿瘤治疗,国内外相关的研究报道也逐渐增多,笔者参照最新资料,综述了其研究进展及应用前景。     

~(188)Re标记反基因肽核酸的方法学研究

目的研究^188Re标记反基因肽核酸（AGPNA）的方法及标记物与胰腺癌Patu8988细胞结合内化的特性。方法用^188Re直接标记经修饰的AGPNA,改变标记条件摸索标记方法,在不同时间点（15min-6h）测定标记率;测定标记物加入人血清和生理盐水后不同时间点（15min-24h）的放化纯度;进行胰腺癌Patu8988细胞摄取^188Re-AGPNA的内化实验。结果当标记条件为100μlSnCl2·2H2O（20mg/ml）和20μlAGPNA（2mg/ml）时,^188Re-AGPNA的标记率最高可达（89.99±0.15）%,放射性胶体含量为（9.40±0.55）%。标记物加入血清24h后放化纯度为（89.14±0.63）%。^188Re-AGPNA转染胰腺癌Patu8988细胞的最高细胞结合率为（38.16±2.17）%,最高核内化率为（22.41±0.86）%。结论^188Re直接标记经修饰的反基因肽核酸方法简便、标记率较高,能与胰腺癌细胞结合并转染入细胞核。     

用188Re标记IGF-1类似物的方法

目的研究标记率高且稳定的^188Re标记胰岛素样生长因子-1类似物（IGF-1A）的方法。方法采用直接标记法,改变Tween-80用量、SnCl2·2H2O浓度、IGF-1A用量、洗脱液体积等标记条件;分别在不同时间点测定标记率;标记物中加入生理盐水或人血清后不同时间点测定放射化学纯度。结果最佳标记方法为：将100μl SnCl2·2H2O（10mg/ml）加入50μl IGF-1A（2 mg/ml）;300μl Na3PO4和10μl 0.1%Tween-80混匀后加入50μl ^188ReO4-洗脱液;在IGF-1A体系中加入洗脱液体系,室温反应30 min;加入500μl NaH2PO4将pH值调节到7.0左右,标记完成。最高标记率为（94.07±0.32）%,胶体含量为（5.50±1.50）%。室温下放置6 h放射化学纯度为（89.07±0.74）%,加入人血清放置24 h后放射化学纯度为（76.57±9.96）%。结论用直接标记法进行188Re标记,IGF-1A标记率高且稳定性良好。     

铼-188和平阳霉素联合导向治疗前列腺癌的体外作用

 [目的]探讨前列腺特异膜抗原单克隆抗体7E11C5.3介导铼-188和平阳霉素（PYM）导向治疗前列腺癌细胞系LNCaP的体外作用。[方法]以葡聚糖为中介体制备7E11C5.3-PYM偶联物，间接ELISA法测定免疫活性，2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）法测定抑菌活性。采用2-巯基乙醇直接还原法制备188Re-7E11C5.3标记物，纸层析法测定标记率和放化纯度，直线回归外推法测定免疫活性分数。四唑盐（MTT）法测定体外细胞毒作用。[结果]7E11C5.3-PYM偶联物中7E11C5.3和PYM的克分子比为1∶54，偶联后单抗的免疫活性降低了10%～20%，偶联物中PYM的抑菌活性为游离PYM的25%。188Re-7E11C5.3的标记率为93.16%±2.18%，放化纯度为95.62%±0.48%，免疫活性分数为74.86%±1.86%。7E11C5.3-PYM和188Re-7E11C5.3对LNCaP细胞的抑制作用分别强于游离PYM和188ReO4-；两者单独用药时，其半数抑制浓度（IC50）分别为（10.17±2.06）µg/mL和（23.38±3.73）×104 Bq/mL；两者联合用药时，其IC50值分别为（1.83±0.20）µg/mL和（6.82±0.73）×104 Bq/mL。[结论] 7E11C5.3-PYM和188Re-7E11C5.3联合用药对前列腺癌细胞的抑制作用显著强于单独用药。     

^188Re标记丙氧鸟苷白蛋白纳米微球的制备

目的制备188Re标记丙氧鸟苷（GCV）白蛋白纳米微球（^188Re-GCV-BSA-NP）。方法通过蛋白交联固化的方法制备GCV-BSA-NP,并测定GCV-BSA-NP的体外释药特性;采用预锡化直接标记法对GCV-BSA-NP进行188Re标记,同时观察188Re-GCV-BSA-NP体外稳定性。结果GCV-BSA-NP为大小不等的规则性微球,微球直径不等,但多集中在250-290nm。GCV-BSA-NP总的标记率〉90%,放化纯〉95%,放射性比活度1.85×105MBq/μmol。标记物放置于37℃的PBS（pH7.4）溶液中,在24h时放化纯为95%。结论预锡化直接标记法简便快速,能够得到较高的标记物放化纯度,稳定性好,GCV-BSA-NP具有明显的缓释功能。     

188Re-血管抑素的制备及其在小鼠体内分布

目的: 探索用铼( 188Re)直接标记血管抑素(Angiostatin,AS)的方法,并研究标记产物的体外稳定性及其在小鼠体内的生物分布.方法: 制备的AS经鉴定后,用氯化亚锡(SnCl2)还原法进行 188Re标记AS;对标记产物用纸层析法测标记率;产物中分别加入牛血清白蛋白(BSA)、生理盐水及不同摩尔比的半胱氨酸(Cys)以观察其体外稳定性.结果: AS 100 μg,20 g/L SnCl2(溶于1 mol/L的HCl中)200 μL,以0.1 mol/L酒石酸钠(溶于0.05 mol/L的HCl中)1 mL为络合剂,加入188ReO4 37 MBq,标记率可达76.3%.产物在体外较为稳定;标记物在肝、肾、脾中有较高的放射性摄取,放射性在24 h内大部分排出体外.结论: 用188Re直接法标记AS简单易行,稳定性较好.     

小鼠脑缺血-再灌注损伤后泊洛沙姆188与银杏内酯B联合应用研究*

目的：探讨泊洛沙姆188与银杏内酯B联合应用对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用。方法：以线栓造成小鼠脑组织缺血状态,线栓移除前5min经尾静脉单次注射泊洛沙姆188（0.4g/kg）,银杏内酯B（20mg/kg）或两药的混合溶液,24小时后评价小鼠神经症状并测定脑梗死面积和脑含水量。另一批小鼠在静脉注射给药后再每天腹腔注射上述等效剂量药物,24天后统计各组存活状况,绘制生存曲线;采用爬杆试验、悬挂试验测试小鼠肢体运动功能。结果：生理盐水组小鼠脑梗死面积为35.49%±8.31%,P188组、GB组以及合用组的脑梗死面积分别减少为27.76%±6.41%,25.51%±5.81%和21.16%±8.67%,P188与GB合用组比药物单用组的脑梗死面积更小,差异有统计学意义（P<0.05）。生理盐水组小鼠24天后的生存率为38.89%,P188组,GB组以及合用组小鼠的生存率分别为50%,53.57%和69.21%。P188与GB合用组与药物单用组相比,生存期明显延长,差异均有统计学意义（P<0.05）。P188组、GB组以及药物合用组T/turn分别为6.22秒,6.56秒和5.25秒,T/floor分别为15.50秒,14.88秒和13.25秒,P188和GB合用组与药物单用组相比,T/turn和T/floor均显著缩短,差异均有统计学意义（P<0.05）。与泊洛沙姆188和银杏内酯B单用相比,联合用药能进一步降低脑梗死面积,延长生存期,增强小鼠肢体的运动功能。结论：泊洛沙姆188与银杏内酯B合用能够增强对小鼠脑缺血-再灌注损伤的保护作用。     

188Re-HEDP治疗转移性骨肿瘤疼痛的临床价值

目的 探讨^188Re—HEDP(^188铼-1-羟基亚乙基二瞵酸盐)治疗转移性骨肿瘤疼痛的临床价值。方法 用^188W-^188Re发生器淋洗的^188Re示踪剂制备^188Re—HEDP，38例癌骨转移患者用^188Re—HEDP治疗，观察其疗效。结果 38例经^188Re—HEDP治疗后骨痛消失12例(31．6％)，骨痛明显减轻19例(50％)，止痛总有效率为83．7％；治疗后骨转移灶完全消失1例(2．6％)，转移灶减少或缩小在50％以上3例(7．9％)，减少或缩小在25％以上5例(13．2％)，转移灶消失或缩小的总有效率为23．7％。结论 ^188Re—HEDP对恶性肿瘤多发性骨转移所致疼痛有明显疗效，且安全无副作用。     

应用寡核苷酸芯片检测白血病患者P53和K-ras基因点突变

目的 研究白血病病例中P53、K—ras基因点突变情况。方法 采用寡核苷酸芯片技术对临床收集的白血病标本进行P53、K—ras突变热点检测。结果 共检测出P53突变8例、K—RAS突变4例。其中P53突变包括ANLL—M3 2例，M2 3例，ANLL—M5、ALL、CML各1例。K—ras突变包括CML3例，ALL1例。结论 P53、K—ras突变在白血病发生、发展中起到一定作用。应用寡核苷酸芯片进行P53、K—ras点突变检测，优缺点并存，具有一定临床实用价值。     

气相色谱法测定泊洛沙姆188中乙二醇、二甘醇和三甘醇含量

采用气相色谱法测定药用辅料泊洛沙姆188中3种残留杂质乙二醇、二甘醇和三甘醇的含量,为其质量控制提供科学依据。选用色谱柱VF-17ms(30 m×0.53 mm,1.0 μm),程序升温,进样口温度270 ℃,检测器温度290 ℃,分流比10∶1。实验结果显示,乙二醇、二甘醇和三甘醇在6~15 μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.999);进样精密度RSD(n=8)分别为3.3%、3.0%和2.3%;平均回收率分别为99.05%(RSD=2.9%,n=9),102.20%(RSD=4.0%,n=9),101.91%(RSD=3.1%,n=9)。该方法系统适应性良好,准确度、精密度高,适用于泊洛沙姆188中乙二醇、二甘醇和三甘醇的测定,为泊洛沙姆188的生产及质量控制提供参考与指导。     

131I-Herceptin的血液存在方式及体内外稳定性研究

目的 探讨131I-Herceptin的稳定性与生物学特性.方法 131I-H-Herceptin采用Iodogen法制备,其基础放射化学纯度(RCP)为(94.9+2.7)%.4℃冰箱内放置3、24、48、72、96 h,取各时间样品测RCP.取家兔5只,静脉注射131I-Herceptin后1 h、3 h、6h、24 h、2 d、3 d,4 d、5 d取血,分离血清及血细胞,测血清131I-Herceptin的RCP,并测定血清或血细胞放射性计数百分比.各组样品RCP的差异分析采用One-way Anova检验.结果 4℃放置72 h以内,RCP未见显著下降(F=15.985,P＜0.001);72 h后显著(t=9.971,P＜0.001)下降至(82.6±2.8)%.注射后1～96 h,131I-Herceptin主要存在于血清,其放射性所占比例稳定在81%～87%.注射体内后1 h,血清内131I-Herceptin的RCP为(90.9±8.5)%.未见显著差异(t=1.753,P＞0.05).24 h后为(75.4±3.9)%,提示开始显著降低(t=6.564,P＜0.001).结论 采用Iodogen法标记的131I-Herceptin,体外放置72h内,放射化学纯度基本稳定,注入体内后主要存在于血清,24h以内放射化学纯度稳定,24h后降解明显.     

水飞蓟宾固体分散体的制备及体外溶出研究

目的：制备了水飞蓟宾的固体分散体,并检测其体外溶解度及溶出速度。方法：选择尿素、聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）、泊洛沙姆１８８等３种载体,用熔融法和共沉淀法制备水飞蓟宾固体分散体,并进行差热分析,Ｘ－射线粉末衍射分析以鉴别药物在载体中的存在状态,最后进行了体外溶出研究。结果：水飞蓟宾在ＰＶＰ中以无定型存在,在泊洛沙姆１８８中以微细结晶存在,在尿素中大部分仍以晶体形式存在,少量以分子状态存在。溶出研究结果表明泊洛沙姆１８８载体的水飞蓟宾固体分散体的溶解度最大,溶出速度最快。结论：泊洛沙姆是提高水飞蓟宾溶解度及溶出速度的理想载体。     

两性霉素B聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备及小鼠体内分布研究

目的:制备携载两性霉素的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(AmB-PBCA-NP),研究其对血脑屏障的透过能力.方法:孵化法制备AmB-PBCA-NP,以聚山梨酯-80进行表面修饰,建立高效液相色谱分析法,流动相选择乙腈-水(40:60)及4%乙酸,405 nm处检测.小鼠分3组,每组28只,分别注射AmB粉针剂、脂质体(AmB-L)及纳米制剂(AmB-PBCA-NP),通过检测小鼠脑组织等脏器中的药物浓度,评价其主动脑靶向作用.结果:AmB-PBCA-NP平均粒径94.38 nm,平均包封率为82%,载药量56.1%.给药后AmB粉针剂组小鼠脑内未能检测出药物,AmB-L 组于3 h后测得微量浓度,而AmB-PBCA-NP组小鼠30 min即测得可观浓度,3 h后达133 ng/g.结论:聚山梨酯-80修饰的AmB-PBCA-NP具有主动脑靶向作用.     

无创正压通气联合药物治疗急性左心衰竭的效果及对患者生物学标记物水平的影响

目的探究无创正压通气（noninvasive positive pressure ventilation,NIPPV）联合药物治疗急性左心衰竭的临床效果。方法选取急性左心衰竭患者104例为受试对象,按照随机数字表分为联合组与对照组各52例。对照组仅给予常规药物治疗,联合组在其基础上联合NIPPV进行治疗。比较治疗前及治疗3 d后,2组患者血浆心力衰竭标记物［心肌钙蛋白I（cardiac troponin I,cTnI）、N末端-脑利钠肽原（N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-proBNP）、中段-心房利钠肽原（mid-atrial natriuretic peptide,MR-proANP）］、炎症因子［白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）、C反应蛋白（C-reactive protein,CRP）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）］及动脉血气指标［氧分压（partial pressure of oxygen,PaO2）、二氧化碳分压（partial pressure of carbon dioxide,PaCO2）、碱剩余（base excess,BE）］、超声心动图指标［左心室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）、每搏心输出量（stroke volume,SV）、心排血指数（cardiac index,CI）］变化。结果治疗3 d后,2组血浆cTnI、NT-proBNP、MR-proANP、IL-6、CRP、TNF-α及PaCO2水平均较治疗前有显著下降,且联合组明显低于同一时间对照组（P＜0.05）;2组PaO2、BE及LVEF、SV、CI水平均较治疗前有显著提升,且联合组明显高于同一时间对照组（P＜0.05）。结论NIPPV联合药物治疗急性左心衰竭能取得较为理想的疗效,对尽快控制机体炎症反应、稳定内环境平衡并恢复心功能有利。     

重组腺相关病毒介导内皮抑素的表达及体外活性研究

目的 构建携带人内皮抑素基因的重组腺相关病毒rAAV-hEndo,介导其体外表达并检测其生物活性。方法 采用无需包装辅助病毒的双质粒共转染方法制备rAAV-hEndo,测定其滴度及感染效率。免疫荧光染色检测内皮抑素蛋白在体外感染细胞中的表达,并通过MTT法、细胞周期检测及TUNEL法检测细胞凋亡指数,观察其对人脐静脉内皮细胞ECV304的影响。结果 所制备的重组腺相关病毒滴度为2×10¹²vg/ml,感染效率达98%。免疫荧光染色显示内皮抑素蛋白主要表达于细胞胞质。rAAV-hEndo感染细胞培养上清对ECV304细胞72h增殖抑制率为67.3%。内皮细胞转染内皮抑素基因后细胞周期明显阻滞于G₁期,其G₁期占(72.5±4.0)%,与对照组(52.1±2.1)%比较有显著差异(P<0.01)。TUNEL法检测实验组内皮细胞凋亡指数为(32.6±3.2)%,与对照组(4.2±1.9)%比较有显著差异(P<0.01)。结论 所制备的重组腺相关病毒rAAV-hEndo能有效介导具有生物活性的内皮抑素表达,为进一步肿瘤抗血管生成基因治疗动物实验奠定了基础。