siRNA干扰survivin对人胃癌SGC-7901细胞的影响

目的 探讨siRNA沉默survivin基因表达对人胃癌SGC-7901细胞用期、增殖、凋亡的影响及其作用机制的初步探讨.方法 针对survivin mRNA序列设计合成siRNA,转染SGC-7901细胞.MTT法检测SGC-7901细胞增殖;RT-PCR法检测survivin、caspase-3基因表达;Western blot检洲survivin、caspase-3表达;细胞免疫组织化学检测survivin表达;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 survivin siRNA能有效抑制胃癌SGC-7901细胞中survivin的表达,与空白对照组比较.survivin siRNA组SGC-7901细胞生长、增殖速度减缓(P＜0.05);survivin在mRNA和蛋白表达水平均显著下调(P＜0.05),caspase-3在mRNA水平变化不明显(P＞0.05),而在蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);survivin siRNA组细胞凋亡率增高(P＜0.05).结论 survivinsiRNA可以下调胃癌SGC-7901细胞survivin基因的表达,抑制细胞的生长活性,并促进其凋亡.     

低氧环境下蟾毒灵联合顺铂抗食管癌ECA109细胞研究

目的观察低氧环境下蟾毒灵联合顺铂对人食管癌ECA109细胞生长的影响,探讨蟾毒灵增加顺铂抗食管癌ECA109细胞抗肿瘤作用的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定顺铂(2.5、5.0、7.5、10.0 mg·L-1)在低氧及常氧环境下对人食管癌ECA109细胞增殖的影响,低氧环境下顺铂(2.5、5.0、7.5、10.0 mg·L-1)与蟾毒灵(10 nmol·L-1)联合对人食管癌ECA109细胞增殖的影响;Western blot法检测顺铂单药及蟾毒灵联合顺铂作用于人食管癌ECA109后凋亡相关蛋白表达的变化情况。结果常氧环境下,不同浓度的顺铂对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均显著高于空白对照组(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05);低氧环境下,不同浓度的顺铂对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均高于空白对照组(P<0.05),也呈浓度依赖性(P<0.05),但同一浓度顺铂对人食管癌ECA109细胞生长的抑制作用在低氧环境较常氧环境下显著减弱(P<0.05);低氧环境下,不同浓度的顺铂+蟾毒灵对人食管癌ECA109细胞生长抑制率均高于空白对照组(P<0.05),呈浓度依赖性(P<0.05),且同一浓度顺铂+蟾毒灵10 nmol·L-1对人食管癌ECA109细胞生长的抑制作用较不加蟾毒灵和常氧环境下显著增强(P<0.05)。低氧条件下,顺铂单药组随着顺铂药物浓度的增加,Bcl-2蛋白表达轻度下调,Bax表达轻度升高;联合蟾毒灵后,Bcl-2表达随着顺铂药物浓度的增加明显下调,Bax表达明显升高。结论低氧环境使人食管癌ECA109细胞对顺铂产生耐药,而蟾毒灵可逆转ECA109细胞对顺铂的耐药。     

乳源免疫调节肽诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡的研究

目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人食管癌Eca-109细胞生长和凋亡的影响。方法采用MTT法测定PGPIPN对人食管癌Eca-109细胞的作用,用流式细胞仪(FCM)、琼脂糖凝胶电泳检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡,用免疫组化SP法检测PGPIPN诱导Eca-109细胞凋亡过程中survivin、caspase-3蛋白的表达变化情况。结果 PG-PIPN对人食管癌Eca-109细胞有明显的生长抑制作用并有剂量依赖性,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关,Eca-109细胞经PGPIPN作用后,其survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强。结论 PGPIPN能诱导人食道癌Eca-109细胞凋亡,这可能与survivin蛋白表达下降,caspase-3蛋白表达增强有关。     

Survivin与Caspase-3 在膀胱癌的表达的关系和意义

目的 检测膀胱移行细胞癌(bladder transitional cell carcinoma, BTCC)中凋亡抑制蛋白survivin 、caspase-3的表达, 探讨其在膀胱移行细胞癌发生、发展中的意义.方法 采用免疫组织化学SP法对60例膀胱移行细胞癌组织和10例正常膀胱黏膜组织中的survivin、caspase-3进行检测.结果 膀胱移行细胞癌组织中survivin的蛋白表达率(63.3%)明显高于正常膀胱黏膜组织(20.0%), 并随着临床分期的增加, 阳性率增加.而caspase-3在膀胱移行细胞癌组织中的阳性率(53.3%)明显低于正常膀胱黏膜组织(90.0%).survivin与caspase-3的表达呈负相关(r=-0.914,P＜0.05).结论 survivin的蛋白高表达和caspase-3的蛋白低表达在膀胱癌的发生和细胞的凋亡调控方面可能起着重要作用.     

survivin基因沉默对腺样囊性癌细胞生长和凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰下调survivin基因表达后腺样囊性癌细胞生物学行为变化及其与caspase-3基因表达的相关性.方法 设计、合成小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),构建表达载体pGenesil-shRNA-survivin,将重组质粒导入人腺样囊性癌ACC-2细胞株,G418筛选阳性克隆.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测转染后的ACC-2细胞中survivin、caspase-3 mRNA及蛋白表达的变化,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖,原位细胞凋亡(TUNEL)法及透射电子显微镜研究细胞凋亡.结果 测序证实表达载体构建成功,在pGenesil-shRNA-survivin的ACC-2细胞株中,survivin mRNA及蛋白表达明显降低(P＜0.05),caspase-3 mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.05),survivin与easpase-3的mRNA和蛋白表达呈显著负相关(r=-0.333,P＜0.05).ACC-2细胞增殖受到抑制,透射电镜及TUNEL法可见细胞出现凋亡.结论 成功构建了survivin基因的RNAi真核表达载体,pGenesil-shRNA-survivin重组质粒能有效抑制腺样囊性痛细胞生长.     

土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响

目的:观察土大黄苷对人乳腺癌细胞SK-BR-3凋亡的影响.方法:Annexin V-FITC/PI双标法检测100、200、400 μmol/L土大黄苷对SK-BR-3细胞凋亡的影响,Western blot法检测Bcl-2及Bax蛋白的表达情况,试剂盒检测caspase-3的活性变化.结果:土大黄苷可诱导SK-BR-3细胞出现明显的早期凋亡,并呈浓度依赖性(P<0.05～P<0.01).土大黄苷在100、200、400 μmol/L浓度时均可抑制Bcl-2蛋白的表达,且随着其浓度的增加,蛋白表达逐渐降低,并促进Bax蛋白的表达(P<0.01).土大黄苷对caspase-3具有激活作用,且随着土大黄苷浓度的增加,caspase-3的活化程度逐渐增强.结论:土大黄苷具有诱导乳腺癌细胞凋亡的作用,其机制可能与调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达及激活caspase-3有关(P<0.01).     

Survivin反义寡核苷酸联合TCS诱导食管癌细胞Eca-109凋亡的研究

目的:探讨survivin反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)联合TCS诱导细胞凋亡的作用及其分子机制.方法:以食管癌细胞Eca-109为实验对象,将实验分6组:未处理组、脂质体组、survivin正义寡核苷酸组(Sense oligodeoxyn ucleotide,SODN)、survivin反义寡核苷酸组(Antisense oligodeoxynucleotide,ASODN)、天花粉蛋白组(Trichosan thein,TCS)、survivin反义寡核苷酸联合天花粉蛋白组.各处理因素作用食管癌细胞Eca-109 48 h,RT-PCR检测Eca-109细胞survivin mRNA表达变化;Western blot检测Survivin、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达变化;AnnexinV-FITC/PI双染法检测Eca-109细胞早期凋亡率.结果:ASODN组、TCS组和联合组的survivin mRNA和Survivin蛋白表达水平明显降低,联合组较单独药物组(ASODN组、TCS组)降低,而以上3组的早期凋亡率和Caspase-3蛋白表达水平明显升高,联合组较单独药物组增高(P＜0.05);TCS组和联合组细胞的Bcl-2蛋白的表达水平明显降低,Bax蛋白的表达增加.结论:TCS联合survivin的ASODN在诱导Eca-109细胞的凋亡方面,能够发挥协同作用;TCS和survivin的ASODN共同抑制survivin基阒表达,TCS下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达,分别激活caspase级联反应上游、下游途径,是两药发挥协同作用的分子基础.     

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

SiRNA-CD147降低HeLa中survivin表达的研究

目的研究下调CD147表达后宫颈癌细胞系HeLa细胞中survivin表达及凋亡的变化。方法设计、合成两对CD147编码基因的反向重复序列,运用瞬间转染方法抑制HeLa中CD147表达,应用RT-PCR、Western blotting方法检测干扰后CD147、survivin、Bim及caspase-3表达改变,流式细胞术检测干扰后肿瘤细胞的凋亡情况。结果 SiR-NA sequence 1、2均有效抑制CD147基因表达（P〈0.05）,干扰后的survivin表达明显下降,干扰后caspase-3mRNA水平升高（P〈0.05）,活性caspase-3蛋白及Bim水平增高（P〈0.05）,肿瘤细胞凋亡增加,以细胞早期凋亡改变最为明显（P〈0.05）。结论沉默CD147基因表达可下调HeLa细胞中survivin的表达,诱导肿瘤细胞凋亡。     

羧基-D-氨基葡萄糖对人食管癌Eca-109细胞caspase-3活化及bcl-2蛋白表达的影响

目的 探讨D-氨基葡萄糖衍生物2-(3-羧基-1-丙酰氨基)-2-脱氧-D-葡萄糖(COPADG)对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 体外培养Eca-109细胞;倒置显微镜下观察细胞形态学变化;流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞内半胱氨酸酶3(caspase-3)活化程度及bcl-2蛋白表达的变化;Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测COPADG作用后Eca-109细胞凋亡率.结果 COPADG作用显著增加Eca-109细胞凋亡率,且Eca-109细胞内caspase-3活性和bcl-2表达平均荧光强度明显增高.结论 COPADG能显著诱导Eca-109细胞凋亡发生,并使Eca-109细胞内caspase-3显著活化以及bcl-2蛋白表达下调,并可能通过该机制诱导细胞凋亡的发生.     

白英提取物诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的探讨白英提取物(Solanum lyratum Thunb extract,STE)对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法体外培养MCF-7细胞,以2.5、5、10 mg/L STE处理MCF-7细胞48小时,并以2.5 mg/L顺铂(DDP)作为阳性对照。用MTT法检测细胞抑制率,TUNEL法检测凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果与正常对照组比较,STE各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.001),caspase-3 mR-NA表达显著上升(P<0.001),survivin mRNA表达明显下降(P<0.05或P<0.01)。结论STE具有诱导MCF-7细胞凋亡作用,其分子机制可能与上调caspase-3及下调survivin基因表达有关。     

THAP11通过抑制p53的泛素化影响食管癌细胞的增殖和凋亡

目的：探讨死亡相关蛋白(thanatos-associated protein,THAP)11对食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其潜在 的机制。方法：采用蛋白质印迹法检测人食管上皮细胞Het-1A和人食管癌细胞(Eca109,TE-1和Ec 9706)中THAP11的 表达。将食管癌TE-1细胞分为空白对照(NC)组、阴性对照(LV-LC)组、TRA P11(LV-TRA P11)组,按分组处理细胞后, 采用MTT 法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,caspases试剂盒检测caspase-3和caspase-9的活性。采用体外泛素 化实验检测TE-1细胞的p53泛素化水平。结果：与Het-1A细胞相比,食管癌细胞中THAP11的表达显著下降(P<0.05)。 LV-THAP11转染食管癌细胞后,细胞活力降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05),caspase-3和caspase-9活性升高(P<0.05)。 THAP11能够提高食管癌细胞中p53蛋白的表达(P<0.05)。与LV-LC组相比,转染THAP11后食管癌细胞中p53的表达上调 (P<0.05),MDM2调节的p53的泛素化也被抑制。结论：THAP11通过抑制p53的泛素化抑制食管癌细胞的增殖,促进食管 癌细胞的凋亡。     

逆转录病毒介导的p53基因对食管癌细胞株的生长抑制作用

目的 :观察人类野生型 p5 3(wtp5 3)基因对人食管癌细胞系的抑制作用。　 方法 :用逆转录病毒为载体 ,将外源性wtp5 3基因导入人食管癌细胞系ECA10 9,通过体外及小鼠体内实验研究转入基因的表达及其对肿瘤的抑制作用。　结果 :p5 3在转染细胞ECA10 9/p5 3中表达水平提高。外源性wtp5 3基因的导入和表达能使ECA10 9细胞的生长速度减低 ,软琼脂集落形成能力下降 ,G0 G1期细胞比例增加、S期细胞比例降低 ,调亡指数升高 ,裸鼠体内成瘤能力明显下降。　结论 :逆转录病毒载体介导的外源性wtp5 3基因能够抑制人食管癌细胞生长     

RNA干扰技术抑制EC-109细胞survivin基因表达及其促凋亡研究

目的:应用RNA干扰技术(RNAi)研究针对survivin基因的siRNA,抑制survivin基因的表达并诱导食管癌细胞系EC-109细胞的凋亡. 方法:构建针对survivin的siRNA表达质粒,转染至EC-109细胞,荧光显微镜判断转染效率,蛋白质印迹和半定量RT-PCR检测survivin蛋白表达及基因转录水平的变化,并在不同时间点收集转染细胞,利用流式细胞术及基因组DNA凋亡检测试剂盒,观察siRNA抑制survivin基因表达后诱导细胞凋亡的情况. 结果:荧光显微镜结果表明,重组质粒转染效率达46.70%. 半定量RT-PCR检测到pSIREN/S质粒在EC-109细胞内对survivin基因的转录抑制率为74.04%;蛋白质印迹结果表明,转染重组质粒pSIREN/S的EC-109细胞survivin蛋白表达量仅为正常组的41.64%,而对照质粒pSIREN/CN对survivin基因的蛋白表达及转录均没有抑制作用. 经pSIREN/S转染的EC-109细胞基因组DNA出现明显的DNA ladder,流式细胞仪分析结果也显示凋亡细胞为60.78%. 结论:survivin特异性siRNA可明显抑制survivin基因的转录和表达,并能有效地诱导EC-109细胞的凋亡,为下一步在体内利用pSIREN/S重组质粒沉寂survivin基因,促肿瘤细胞的凋亡提供实验基础.     

YM155诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231自噬并促进其凋亡

目的:研究生存素(survivin)抑制剂YM155对三阴性乳腺细胞株MDA-MB-231的凋亡及自噬的影响及其可能的作用机制?方法:采用CCK-8法检测不同浓度YM155对MDA-MB-231细胞增殖的影响,同时联合加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理细胞与单用组比较细胞增殖变化;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Real-time PCR法检测不同加药组与对照组细胞的survivin?beclin 1和bcl-2的mRNA表达量;蛋白质印迹法检测survivin?bcl-2?caspase-3?PARP及自噬相关蛋白beclin 1和LC-3表达变化情况?结果:YM155对MDA-MB-231具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性?流式细胞结果显示YM155在0.5?1.0?1.5 ng/mL浓度对细胞的凋亡率分别是(11.9 ± 2.4)%?(21.7 ± 2.6)%?(30.8 ± 4.5)%,与对照组(6.4 ± 1.2)%相比具有统计学意义(P < 0.01)?当使用自噬抑制剂3-MA(5 mmol/L)联合处理细胞24 h后细胞增殖率(62.5 ± 3.3)%,与单用YM155组(54.7 ± 2.7)%相比,细胞增殖活性增强(P < 0.05)?YM155可显著下调survivn的mRNA和蛋白表达,降低bcl-2和提高caspase-3?PARP的蛋白表达,同时上调beclin 1表达及增加LC-3Ⅱ/ LC-3Ⅰ的比值,促进细胞自噬的发生?结论:YM155能够有效诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡及自噬的发生,其诱导的自噬效应进一步促进其凋亡的发生?     

PDCD5蛋白对地塞米松诱导的多发性 骨髓瘤细胞凋亡的影响及机制初探

目的：观测程序化细胞死亡分子5（programmed cell death 5,PDCD5）表达蛋白对地塞米松诱导人多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）细胞（KM3）凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：将不同浓度的重组人程序化细胞死亡分子5 (human recombinant PDCD5, rhPDCD5)蛋白单独或/和地塞米松（dexamethasone,DXM）同时加入处于对数生长期的KM3细胞,共同培养一段时间,收集细胞后行以下检测：（1）Annexin V-FITC & PI双染法应用流式细胞术（flowcytometry,FCM）检测KM3细胞凋亡率;（2）蛋白免疫印迹方法检测KM3细胞中caspase-3活性;（3）免疫细胞化学法检测KM3细胞survivin蛋白表达。结果：KM3细胞凋亡率,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组明显增加,且浓度较高PDCD5蛋白组作用更明显。KM3细胞caspase-3蛋白活性,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组明显上调,高浓度PDCD5蛋白组（20 mg/L）的caspase-3活化较低浓度 (10 mg/L)组明显。KM3细胞survivin蛋白表达,在rhPDCD5和DXM联用组较单用组表达明显下调,并且浓度较高的PDCD5蛋白组survivin表达下调更明显。结论：PDCD5蛋白可直接作用于多发性骨髓瘤细胞使细胞凋亡,并对地塞米松诱导的KM3细胞凋亡有明显的促进作用。PDCD5蛋白可能通过激活caspase-3和下调survivin蛋白表达发挥其促进多发性骨髓瘤细胞凋亡的作用。     

HOXA1基因反义寡核苷酸对食管癌细胞生长的影响

  目的  探讨同源异形盒A1(HOXA1)基因反义寡核苷酸（ASODN）对食管癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及机制。  方法  采用蛋白免疫印迹（Western blot）检测正常食管上皮细胞Het-1A和人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白的表达,筛选高表达的食管鳞癌细胞进行后续实验;设计合成HOXA1 ASODN链、正义寡核苷酸(SODN)链及无义寡核苷酸（N-ODN）链;将筛选出的高表达的食管鳞癌细胞分为HOXA1 ASODN组（5、10、15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞）、对照组（细胞常规培养,不进行细胞转染）、SODN组（细胞转染15 μmol/L的SODN）和N-ODN组（细胞转染15 μmol/L的N-ODN）。采用噻唑蓝(MTT)法、流式细胞术、Transwell小室分别检测细胞活力、凋亡率及侵袭迁移能力;Western blot检测HOXA1、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）、细胞增殖核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B细胞淋巴瘤-2蛋白（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。  结果  与正常食管上皮细胞Het-1A比较,人食管鳞癌TE-1、EC9706和Eca109细胞HOXA1蛋白表达均升高,差异有统计学意义（P<0.05）。HOXA1蛋白在Eca109细胞表达最高,因此选用Eca109细胞进行后续实验。转染HOXA1 ASODN的Eca109细胞HOXA1蛋白表达降低（P<0.05）。随着Eca109细胞转染HOXA1 ASODN浓度及时间增加,Eca109细胞活力降低,与对照、SODN、N-ODN组比较差异有统计学意义（P<0.05）。15 μmol/L的HOXA1 ASODN转染Eca109细胞后,与对照组比较,细胞侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高,p-AKT、PCNA和MMP-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高（P<0.05）。  结论  HOXA1基因反义寡核苷酸可抑制食管癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,并诱导凋亡,机制与抑制磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/AKT信号通路可能有关。     

氧化苦参碱体外诱导膀胱癌T24细胞凋亡

目的观察氧化苦参碱对膀胱癌T24细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法不同浓度(0.625、1.25、2.5 mg/mL)氧化苦参碱作用于膀胱癌T24细胞,采用流式细胞术、光镜及电镜观察其诱导膀胱癌T24细胞的凋亡作用。用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因survivin及caspase-3转录水平的改变。免疫印迹法检测survivin和caspase-3蛋白的表达情况。结果氧化苦参碱作用人膀胱癌细胞后,光镜及电镜下均见到典型的细胞凋亡形态,流式细胞术观察发现凋亡峰。同时观察到氧化苦参碱抑制survivin的转录和表达,对caspase-3有上调作用(P<0.05)。结论氧化苦参碱可能通过抑制survivin、上调caspase-3表达诱导膀胱癌T24细胞发生凋亡。