LRP16影响Hela细胞对电离辐射的敏感性

目的探索LRP16的表达对Hela细胞的电离辐射敏感性是否产生影响。方法将真核表达质粒(pcDNA-3.1和pcDNA-3.1-LRP16)以及抑制LRP16表达的小干扰RNA:control siRNA、siRNA-374分别转染入Hela细胞内,并通过电离辐射处理,导致DNA损伤。采用单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测转染了质粒细胞的DNA损伤程度;CCK-8试剂盒检测细胞活力;流式细胞技术测定抑制LRP16的表达对Hela细胞凋亡率的影响。结果电离辐射后,与对照组相比,转染了LRP16的Hela细胞损伤修复能力增高(P<0.05),而且细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。抑制LRP16的表达后,Hela细胞的细胞活力比对照组明显降低(P<0.05)。结论 LRP16蛋白能够降低Hela细胞对电离辐射的敏感性。     

MG132和顺铂的联合用药对Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1表达的影响

目的 研究蛋白酶体抑制剂MG132和顺铂的联合用药前后卵巢癌细胞株Caov-3细胞内NF-κB和cyclinD1的表达变化情况.方法 免疫组织化学SP法测定用药前后Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1的表达情况.MTT法检测细胞的生长抑制情况.结果 免疫组织化学结果显示MG 132和顺铂联合用药作用24h后Caov-3细胞中NF-κB和cyclinD1的表达下调,与对照组和顺铂组比较差异有显著性(P＜0.01),联合用药组中不同MG132浓度的各组间两两比较差异有显著性(P＜0.01),联合用药能显著增加细胞的生长抑制率(P＜0.01).结论 MG132能诱导卵巢癌细胞Caov-3的凋亡,其重要的作用机制可能是通过抑制NF-κ B和cyclinD1的表达来抑制肿瘤细胞的生长和诱导肿瘤细胞的凋亡.     

β-羟基异戊酰紫草素对前列腺癌细胞株的生长抑制作用及机制研究

目的 研究β-羟基异戊酰紫草素(β-HIVS)对激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3的体外生长抑制作用及其可能机制.方法 采用MTT法检测β-HIVS对PC-3和人皮肤成纤维细胞株HSF的细胞生长抑制率;荧光素酶报告基因法检测给药后细胞中低氧诱导因子-1(HIF-1)和核因子κB(NF-κB)的转录活性;RT-PCR检测HIF-1下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)的表达;Western blotting检测β-HIVS作用后HIF-1α蛋白的表达水平.结果 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有显著抑制作用(P<0.05),而对HSF的细胞生长无明显影响(P>0.05).给药后PC-3细胞中NF-κB转录活性无明显变化(P>0.05);而HIF-1转录活性受抑(P<0.05),其下游靶基因VEGF表达下调,且细胞中HIF-1α蛋白累积减少.结论 β-HIVS对PC-3的细胞生长具有抑制作用,其机制可能与β-HIVS减少低氧条件下PC-3中HIF-1α蛋白水平,抑制其转录活性,使下游促细胞生长靶基因VEGF表达下调有关.     

糖皮质激素抑制人前列腺癌PC-3细胞系增殖的可能机制

目的:观察地塞米松对前列腺癌PC-3细胞中转录因子NF-κB及其下游靶基因cyclinD1的调节作用,探讨其抑制PC-3细胞增殖的可能机制.方法:MTT法检测地塞米松对PC-3细胞增殖的影响;转染和报告基因的方法比较多种肿瘤细胞中NF-κB的基础转录活性并检测地塞米松对PC-3细胞NF-κB转录活性的调节;Western 印迹法检测地塞米松对PC-3细胞cyclinD1蛋白表达的影响.结果:地塞米松抑制PC-3细胞的增殖;PC-3细胞中NF-κB处于组成型激活状态,地塞米松抑制PC-3细胞中转录因子NF-κB的转录活性;地塞米松下调PC-3细胞中cyclinD1蛋白的表达.结论:地塞米松抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖,这可能与其抑制转录因子NF-κB的转录活性及其下游的靶基因cyclinD1的蛋白表达有关.     

干扰素α抑制NF-κB活化增强TNF-α诱导的Hela细胞凋亡

目的探讨干扰素α(IFN-α)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及TNF-α诱导核转录因子NF-κB活化的影响。方法细胞分为空白对照组(不加TNF-α),实验组(加TNF-α)、实验组终浓度分别为(5,10,15ng/ml),作用不同时间分为6,12,24 h,与干扰素α(终浓度100IU/ml)共培养2 h,再加入终度与上述相同的TNF-α继续培养3 h,应用免疫组化,免疫印迹方法检测NF-κB活性的变化,采用Tunel法检测细胞凋亡。结果TNF-α诱导Hela细胞凋亡与其诱导NF-κB活化明显相关,100 IU/ml的IFN-α能显著增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡和抑制TNF-α诱导的Hela中NF-κB的活化。细胞凋亡增加率为69.2%(P<0.05),NF-κB活化抑制率为48.0%(P<0.05)。结论TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的同时激活NF-κB;IFN-α可通过抑制NF-κB活化,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用。     

TNF-α/NF-κB通路干预对肝癌多药耐药相关P-gp表达的影响

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)单抗及核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)/p65siRNA干预NF-κB活化对肝癌HepG2细胞增殖和细胞膜糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响.方法:体外培养人HepG2细胞并给予抗人TNF-α单克隆抗体,以流式细胞术检测细胞凋亡的情况;设计并合成针对NF-κB/p65 siRNA的质粒,在转录水平干扰NF-κB活化,以Western Blot检测P-gp表达.结果:单抗作用后,肝癌细胞凋亡的比率明显增加(P＜0.01),用药后细胞株NF-κB表达水平明显降低(P＜0.01),与培养液中明显降低的TNF-α水平呈显著正相关(r=-0.89,P＜0.01); NF-κB/p65 siRNA干预后可下调化疗药物引起的癌细胞NF-κB和P-gp的过表达.结论:以TNF-α单体干预肝癌细胞中NF-κB活化,可使细胞凋亡增加,siRNA可通过特异性抑制NF-κB/p65编码的mRNA,下调P-gp水平,促进肝癌细胞凋亡.     

α干扰素对TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞凋亡及NF-κB表达的研究

目的:探讨应用α干扰素与宫颈癌细胞核因子κB(NF-κB)表达的关系以及对肿瘤细胞凋亡的影响.方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot分析方法检测NF-κB表达.结果:100 U/ml的α干扰素与10 ng/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合作用24 h后,细胞凋亡率达到92%;与15 ng/ml TNF-α联合作用12 h后,凋亡率上升至92.6%.α干扰素不影响NF-κB的表达,TNF-α可显著增加NF-κB的表达(P＜0.01),α干扰素预先作用后加用TNF-α可以显著抑制NF-κB的表达(P＜0.01).结论:α干扰素能够显著抑制TNF-α诱导宫颈癌Hela细胞NF-κB的表达,增强TNF-α诱导Hela细胞凋亡的作用.     

大黄素增强砷剂对食道癌细胞的促凋亡作用

目的 在体外培养的食道癌细胞株和食道癌细胞的体内移植瘤动物模型上,考察天然物质大黄素通过提高活性氧水平增强砷剂(As2O3)诱导凋亡的作用,同时探讨大黄素造成的氧化还原状态改变对凋亡与抗凋亡信号转导机制的影响.方法 在食道癌细胞株上联合应用大黄素与As2O3,检测细胞凋亡率、线粒体细胞色素C释放、生存相关转录因子NF-κB活性及下游抗凋亡蛋白survivin表达;在食道癌移植瘤动物模型上应用不同剂量大黄素与As2O3腹腔注射化疗,化疗后检测瘤体质量,瘤组织切片上检测凋亡、NF-κB入核和下游抗凋亡蛋白survivin表达.结果 大黄素增强As2O3诱导的凋亡,促进线粒体细胞色素C释放,抑制NF-κB促转录活性;大黄素与As2O3合用增强裸鼠移植瘤凋亡,抑制NF-κB入核,并下调survivin表达.结论 大黄素能够促进体内外食道癌细胞的凋亡,机制涉及增强促凋亡信号转导和抑制抗凋亡信号转导,提示了大黄素的作用机制和应用的可行性.     

LRP11在宫颈癌中表达及其与HPV感染和肿瘤进展的关系

目的研究低密度脂蛋白受体相关蛋白11(LRP11)在宫颈癌中表达及其与人乳头瘤病毒(HPV)感染和肿瘤进展的关系。方法收集123例宫颈癌手术患者的癌组织(HPV阴性25例,HPV阳性98例)及癌旁正常组织,采用免疫组织化学染色法检测癌旁正常组织、HPV阴性宫颈癌组织、HPV阳性宫颈癌组织中LRP11蛋白表达水平。选用HPV阳性人宫颈癌细胞系Hela、HPV阴性人宫颈癌细胞系C33A及人正常宫颈上皮细胞系HUCECs,采用Western blot法检测3种细胞中LRP11蛋白表达量。将Hela细胞分为对照组、空质粒组和LRP11质粒组,对照组不作任何处理,空质粒组转染8 μg pEGFP-N1质粒,LRP11质粒组转染8 μg pEGFP-N1-LRP11质粒,CCK8法检测各组Hela细胞增殖率,Transwell小室侵袭实验检测各组Hela细胞侵袭能力,流式细胞术检测各组Hela细胞凋亡率,Western blot法检测各组Hela细胞中LRP11蛋白表达量。结果HPV阴性宫颈癌组织和HPV阳性宫颈癌组织中LRP11阳性表达率高于癌旁正常组织(P＜0.05),HPV阳性宫颈癌组织LRP11阳性表达率高于HPV阴性宫颈癌组织(P＜0.05)。Hela细胞和C33A细胞LRP11蛋白表达量高于HUCECs细胞(P＜0.05),Hela细胞LRP11蛋白表达量高于C33A细胞(P＜0.05)。LRP11质粒组Hela细胞增殖率、穿过小室膜的Hela细胞数、LRP11蛋白表达量较对照组和空质粒组高(P＜0.05),LRP11质粒组Hela细胞凋亡率较对照组和空质粒组低(P＜0.05),空质粒组Hela细胞增殖率、凋亡率、穿过小室膜的Hela细胞数、LRP11蛋白表达量较对照组差异无统计学意义(P＞0.05)。结论LRP11在宫颈癌中呈高表达,宫颈癌中LRP11表达与HPV感染有一定相关性;LRP11过表达可促进宫颈癌细胞增殖和侵袭,抑制其凋亡,以加速肿瘤进展。     

清热解毒中药对流感病毒感染细胞NF-κB转录活性及TNF-α mRNA水平的影响

目的 观察清热解毒中药毒热平、痰热清注射液对流感病毒亚甲型鼠肺适应株(FMI)感染人胚肾上皮细胞株HEK-293T细胞中报告基因NF-κB相对转录活性以及靶基因肿瘤坏死因子(TNF-α)mRNA的影响,探讨清热解毒中药抗流感病毒FM1的作用机制.方法 采用四唑盐(MTT)比色法体外检测毒热平、痰热清及利巴韦林注射液对HEK-293T细胞增殖的影响.FM1感染HEK-293T细胞后,利用双荧光素酶顺式报告系统,以利巴韦林对照,检测不同药物组中报告基因NF-κB-Luc相对荧光素酶活性;RT-PCR方法检测各组细胞中TNF-αmRNA水平.结果 MTT结果显示,毒热平、痰热清、利巴韦林各药物组不影响细胞正常增殖(P＞0.05).报告基因结果显示,与细胞对照组相比,流感病毒FMl组细胞NF-κB转录活性显著增高(P＜0.01),与FM1病毒组相比,毒热平1、10、100 mg/L,痰热清1/300、1/200、1/100倍稀释药液,利巴韦林50 mg/L均可不同程度下调NF-κB的转录活性(P＜0.01).RT-PCR结果显示,与细胞对照组比较,FM1病毒组的TNF-αmRNA表达明显增高(P＜0.05),各药物组与FM1病毒组相比,TNF-αmRNA表达量明显降低(P＜0.01).结论 毒热平、痰热清治疗流感病毒的作用机制之一,可能是通过下调转录因子NF-κB的转录活性,从而影响下游靶基因TNF-α的表达,减少肺损伤和相应炎症反应.     

RNF31表达下调抑制TNF-α刺激的NF-κB通路的激活

目的利用慢病毒干涉下调内源性RNF31 表达,研究NF-κB通路的活化及对细胞凋亡的影响。方法将人RNF31 的
shRNA片段克隆到慢病毒表达载体pGreenPuro中,瞬时转染HEK293T细胞,筛选出有效的干涉片段。将重组表达质粒与包装
质粒PMD、SPA共转染293T 细胞,在24 h、48 h 分2 次收集慢病毒上清,用流式细胞术检测病毒滴度。将获得的病毒感染
HEK293细胞,提取细胞蛋白,Real-time PCR以及Western Blot 检测RNF31干涉效果;报告基因实验检测敲低RNF31对NF-κB
转录活性的影响;Real-time PCR检测干涉RNF31对TNF-α诱导的NF-κB下游靶基因的影响;Western Blot 检测下调RNF31对
IκBα活化的影响;Hochest染色检测下调RNF31对细胞凋亡的影响。结果成功构建RNF31干涉慢病毒pGreenPuro-RNF31载
体并获得慢病毒颗粒,病毒滴度可达3×107 pfu/ml。在HEK293细胞中下调RNF31,抑制TNF-α刺激的NF-κB的转录活性,并抑
制NF-κB下游靶基因的表达;下调RNF31抑制TNF-α刺激的IκBα的活化;此外,在TNF-α刺激细胞24 h时,RNF31表达下调使
细胞凋亡增多。结论RNF31表达下调抑制TNF-α刺激的NF-κB通路的激活。
     

HIP1在维生素K3诱导Hela细胞损伤中的表达及意义

目的：观察Huntingtin 相关蛋白1（HIP1）在维生素K3诱导Hela细胞损伤中的表达及意义。方法：对数生长期Hela细胞随机分为对照组(Control)、VK3处理组（VK3）、VK3与NAC联合作用组（VK3 + NAC）及NAC单独应用组(NAC);MTT法检测各组细胞存活率;Western blotting法检测各组HIP1、NF-κB蛋白表达水平;RT-PCR方法检测各组Cyclin D1 mRNA表达水平。结果：与对照组相比,VK3组Hela细胞存活率降低（P<0.01）,HIP1蛋白、NF-κB蛋白表达量降低（P<0.05）,Cyclin D1 mRNA表达量明显下降（P<0.05）;与VK3组相比,VK3与NAC联合应用组细胞存活率增加,能够明显拮抗HIP1蛋白,NF-κB蛋白表达量和Cyclin D1 mRNA表达量均增加（P<0.05）。结论：VK3具有抑制细胞增殖作用,可能与降低HIP1的蛋白表达水平有关。     

拓扑异构酶抑制剂通过ATM/ATR和NF-κB途径上调乳腺癌细胞MICA/B的表达

目的：分析常用化疗药物对免疫识别乳腺癌细胞重要的靶标主要组织相容性复合体Ⅰ类相关分子A和B（major histocompatibility complex class Ⅰ-related chain A and B,MICA/B）的影响,探讨其调节MICA/B表达的分子机制。方法：用荧光定量RT-PCR法检测化疗药物对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA表达的影响,流式细胞术检测化疗药物对MICA/B表面蛋白表达的作用。加入咖啡因抑制毛细血管扩张性共济失调突变和Rad3相关激酶（ataxia telangiectasia mutated and Rad3 related kinase,ATM/ATR）,加入吡咯烷二硫氨基甲酸酯（pynolidine dithiocarbamate,PDTC）抑制核因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）,观察其是否能够抑制化疗药物中拓扑异构酶抑制剂对乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及蛋白的表达。凝胶阻滞实验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测药物是否影响乳腺癌细胞NF-κB与MICA/B启动子区的结合。结果：三种拓扑异构酶抑制剂足叶乙甙、拓扑替康和阿霉素可使乳腺癌MCF-7细胞的MICA和MICB mRNA水平升高。足叶乙甙在浓度为5、20、100 μmol/L时,与不加药处理组相比,MICA mRNA水平分别升高到（1.68±0.17）、 (2.54±0.25)、 (3.42±0.15)倍（P<0.05）;MICB mRNA水平分别升高到(1.82±0.24)、(1.56±0.05)、(5.84±0.57)倍（P<0.05）。拓扑替康和阿霉素在特定浓度时也使MCF-7的MICA和MICB mRNA水平显著升高（P<0.05）。拓扑异构酶Ⅱ抑制剂足叶乙甙和拓扑替康处理另一乳腺癌细胞系SK-BR-3后,MICB mRNA的表达也轻度升高（P<0.05）。足叶乙甙和拓扑替康还增加MCF-7细胞表面MICA/B蛋白的表达（P<0.05）,且存活和凋亡细胞MICA/B蛋白的表达均增高。用不同浓度的咖啡因处理足叶乙甙损伤的乳腺癌细胞,MICA/B mRNA和蛋白表达均显著降低,当咖啡因浓度为1、 5、 10 mmol/L时,MICA mRNA相对表达水平由不用咖啡因处理组的(3.75±0.25)倍分别降为(0.89±0.05)、(0.81±0.02)、(0.48±0.04)倍（P<0.001）,MICB mRNA由(6.85±0.35)倍降为(1.36±0.13)、(0.76±0.06)、(0.56±0.03)倍（P<0.05）,MICA/B蛋白表达由(3.42±0.05)倍降为(1.32±0.03)、(1.21±0.06)、(1.14±0.03)倍（P<0.001）,表明足叶乙甙对MICA/B的上调作用能够被ATM/ATR抑制剂所抑制。同样,加入不同浓度的NF-κB的强抑制剂PDTC（10、50、100 μmol/L）,MICA/B mRNA和蛋白的表达均明显受到抑制（P<0.05）,提示NF-κB也参与这一过程。EMSA实验显示,MCF-7细胞用足叶乙甙处理后,NF-κB与MICA/B基因启动子区的结合活性增强。结论：拓扑异构酶抑制剂诱导并上调乳腺癌细胞MICA和MICB mRNA及表面蛋白的表达,表明化疗药物有可能增强免疫系统对乳腺癌的识别和杀伤,ATM/ATR和NF-κB途径参与了这一过程。     

靶向小鼠核因子κB P65的小干扰RNA逆转录病毒载体的构建与鉴定

目的构建靶向小鼠核因子κB（NF-κB）P65进行RNA干扰（RNAi）的逆转录病毒载体,鉴定其生物学效应。方法采用分子克隆技术构建靶向小鼠NF-κB P65 siRNA的逆转录病毒载体,转染293E细胞,包装成逆转录病毒,以不同滴度感染小鼠单核巨噬细胞J774A.1,用相同浓度的脂多糖（LPS）刺激,在不同时间点用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平上检测细胞NF-κBP65表达,并用RT-PCR和ELISA方法检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达。结果成功构建靶向小鼠NF-κB P65基因的小干扰RNA逆转录病毒表达载体。经LPS刺激后,siRNA病毒组J774A.1细胞中NF-κB P65 mRNA的表达明显受到抑制,2 h即明显低于Scramble病毒组（0.91±0.03比1.02±0.02,P〈0.01）,此后持续降低;在LPS刺激后的24、36、48和72 h,siRNA病毒组NF-κB P65蛋白表达均明显低于Scramble病毒组（0.97±0.02比1.01±0.01,0.94±0.01比1.02±0.01,0.94±0.02比1.02±0.01,0.93±0.01比1.00±0.02,P〈0.05）。LPS刺激后2、6、12和24 h,siRNA病毒组TNF-α的mRNA表达水平均明显低于Scramble病毒组（P〈0.01）,而相同时间点siRNA病毒组细胞上清TNF-α的含量亦明显低于Scramble病毒组（P〈0.01）。结论将小干扰RNA片段连接到空白质粒中构建逆转录病毒表达载体的方法是可行的。采用RNA干扰技术抑制NF-κB的表达后,可以减少其下游炎症因子的释放,提示RNA干扰技术在炎性损伤性疾病如急性肺损伤的防治中具有潜在应用价值。     

米非司酮诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡机制的研究

目的探讨米非司酮（MIF）对人宫颈癌Hela细胞的凋亡诱导作用及作用机制。方法体外培养人宫颈癌Hela细胞,流式细胞技术分析不同浓度米非司酮对Hela细胞凋亡率及细胞周期分布的影响,用Western blot法检测米非司酮对Hela细胞中NF-κB p65蛋白表达水平的影响。结果 5、10、20μmol/L的米非司酮均能使Hela细胞凋亡率明显增加,使S期、G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例显著增加,且作用呈剂量依赖性;随着米非司酮浓度的增加,Hela细胞中NF-κB p65蛋白表达水平逐渐下降。结论米非司酮可能通过NF-κB信号通路下调NF-κB p65蛋白表达,从而调节细胞周期,诱导Hela细胞凋亡。     

三氧化二砷通过抑制NF-κB增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用研究

【摘要】 目的 研究三氧化二砷(As2O3)联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及对核转录因子-kappaB(NF-κB)表达的影响。方法 采用As2O3、TRAIL单用和联合作用于体外培养的A549细胞,以四甲基偶氮唑蓝比色法测细胞增殖抑制率和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测NF-κB mRNA的表达,Western blot检测NF-κB蛋白的表达,酶联免疫吸附(ELISA)检测NF-κB的活性。结果 As2O3与TRAIL联用对A549细胞增殖的抑制作用均比单药组强(P<0.05);联合用药组诱导凋亡作用强于单药组(P<0.05);联合用药组明显抑制NF-κB表达,并抑制其活性(P<0.05)。NF-κB mRNA、蛋白及其活性与细胞凋亡率呈负相关（P均<0.05）。结论 As2O3可能通过NF-κB通路,增强TRAIL诱导A549细胞凋亡的作用。     

NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响

目的研究NF-κB对尿白蛋白诱导肾小管上皮细胞骨桥蛋白转录的影响。方法去脂的小牛血清白蛋白(BSA)20mg/ml分别加入到体外培养的肾小管上皮细胞和加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内,EMSA、RT-PCR检测不同时限NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达情况。结果去脂的小牛血清白蛋白可刺激肾小管上皮细胞内NF-κB活性增加,骨桥蛋白mRNA表达上调,而提前加入NF-κB抑制剂(PDTC)共同培养半小时的肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA表达明显下降。结论尿白蛋白诱导小管上皮细胞损伤的机制与诱导肾小管上皮细胞内NF-κB活性、骨桥蛋白mRNA增加有关,而且骨桥蛋白转录由NF-κB调控。     

聚花过路黄对原代大鼠脑微血管内皮细胞糖-氧剥夺诱导下NFκ-B p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的影响

目的 通过测定聚花过路黄(Lysimachia congestifloa hemsl,LCH)对原代大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMECs)糖-氧剥夺诱导下NF-κB p65蛋白及下游靶基因ICAM-1表达的变化,探讨其可能的细胞保护机制.方法 选用初生的Wistar大鼠,建立脑微血管内皮细胞培养模型,以糖-氧剥夺方法 (oxygen-glucose deprivation,OGD)复制体外模拟的脑缺血再灌注模型,观察试验各组(即正常组、模型组、LCH低剂量组及LCH高剂量组)缺氧缺糖6 h、复氧复糖18 h后BMECs的活性(CCK-8比色法)变化,相差显微镜下BMECs的细胞形态学改变,免疫组化测定NF-κB p65蛋白表达的变化以及荧光定量RT-PCR测定NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达的变化.结果 BMECs活性,LCH高、低剂量组明显高于模型组(均P＜0.01);BMECs的细胞损伤变化,LCH高剂量组明显轻于模型组;NF-κB p65阳性表达,LCH高、低剂量组分别明显低于模型组(均P＜0.01);NF-κB p65 mRNA、ICAM-1 mRNA表达,LCH高、低剂量组明显低于模型组(均P＜0.01),LCH低剂量组高于LCH高剂量组(P＜0.01). 结论 LCH对糖-氧剥夺诱导下的脑微血管内皮细胞损伤具有保护作用,其机制可能与其抑制NF-κB p65的活化及其下游靶基因ICAM-1的异常表达有关.其抑制效应可能存在一定的量-效关系.     

miR-107靶向细胞周期蛋白E1对人非小细胞肺癌A 549细胞功能的影响研究

目的 探讨miR-107对非小细胞肺癌A549细胞功能的影响及可能的靶基因.方法 实验分为脂质体+ miR-107模拟物过表达组(OV-miR-107组)、脂质体+ miR-107抑制模拟物下调组(KD-miR-107组)和脂质体+阴性对照模拟物组(NC组),siRNA的细胞转染分别为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3.MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞实验检测细胞周期,双荧光素酶报告基因实验检测miR-107下游靶基因,实时定量逆转录PCR和Western blot分别检测下游靶基因mRNA和蛋白表达.结果 miR-107呈时间和剂量依赖性地抑制A549细胞的增殖(P<0.05);miR-107阻滞更多A549细胞停留在G0G1期,而S期和G2M期占比下降(P<0.05);miR-107结合于细胞周期蛋白E1(CCNE1)的3′-UTR区域246~253 bp位点,并降低CCNE1 mR-NA和蛋白表达(P<0.05);A549细胞中下调CCNE1后,siRNA-2抑制细胞增殖(P<0.05)并阻滞细胞停留在 G0G1期(P<0.05).结论 miR-107靶向调节CCNE1抑制人非小细胞肺癌A549细胞增殖和调控细胞周期.