Caspase-3与细胞凋亡的研究

细胞凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是基因控制的细胞的自然死亡。现在普遍认为细胞凋亡是一系列高度调控的半胱氨酸蛋白酶ｃａｓｐａｓｅ级联反应 (ｃａｓｃａｄｅ)事件的结果 ,ｃａｓｐａｓｅ 3(又称ＣＰＰ32 ,ａｐｏｐａｉｎ)被证实处于该级联反应的下游 ,它通过降解细胞内相应底物使细胞死亡 ,与其他下游的ｃａｓｐａｓｅ成员可能是凋亡事件的真正执行者。本文综述有关ｃａｓｐａｓｅ 3与细胞凋亡关系的研究进展。1　ｃａｓｐａｓｅ 3的分子生物学特点ｃａｓｐａｓｅ 3基因 (ＣＡＳＰ 3)最初在人类Ｊｕｒｋａｔ Ｔ淋巴细胞中被克隆出的 ,该…     

蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响及机制探讨

目的 观察蟾蜍灵对食管癌ECA109细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 MTT法检测蟾蜍灵对细胞的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡情况;Western-Blot法检测凋亡抑制蛋白survivin,caspeas-3蛋白的表达.结果 随着蟾蜍灵浓度及作用时间的增加,细胞存活率逐渐降低(P＜0.05),细胞凋亡率明显增高(P＜0.05);随着药物浓度增加,survivin蛋白表达逐渐下降,同时活化caspase-3.结论 蟾蜍灵可诱导食管癌ECA109细胞凋亡,其机制可能与抑制survivin蛋白和活化caspase-3有关.     

γ-射线诱导胰腺癌细胞凋亡中Caspase-3的调控

目的 :探讨γ 射线诱导后胰腺癌SW 1 990细胞凋亡存在形式以及Caspase 3(CPP32 /YAMA/apopain)酶活性、mRNA、蛋白表达及相互之间的关系 ,拟阐明Caspase 3在γ 射线诱导的胰腺癌细胞凋亡中的调控机制 .方法 :用不同剂量γ 射线照射胰腺癌SW1 990细胞于不同时间检测细胞形态、凋亡率及Caspase 3酶活性、蛋白、mRNA表达 .结果 :γ 射线照射后胰腺癌SW1 990细胞呈现典型的凋亡特征 ,早期凋亡率与γ 射线剂量及作用时间成正比 (r =0 .7341 ,P <0 .0 5 ) ;γ 射线诱导的凋亡细胞中Caspase 3酶活性较对照组明显升高 (P <0 .0 5 ) ,且酶的活性变化与细胞凋亡率变化呈正相关 ;凋亡细胞的Caspase 3mRNA含量未见明显升高 ,且凋亡细胞中主要表达Caspase 3裂解后形成的Mr1 70 0 0的活性亚基 ,在正常细胞主要表达Mr32 0 0 0的pro Caspase 3.结论 :γ 射线照射后SW 1 990细胞呈现典型的凋亡特征 ,且细胞凋亡与Caspase 3酶活性明显相关 ;凋亡细胞中Caspase 3酶活性增高主要是由于翻译后酶前体的剪切 ,而并非源于转录的提高 .     

生精细胞凋亡与男性不育症

近年来,随着对细胞凋亡认识的不断加深,医疗及科研工作者越来越关注细胞凋亡与疾病之间的联系,并为此展开了一系列的试验。现已明确凋亡是人体正常生长发育所必需的,但其失衡也与许多疾病的发生关系密切。生精细胞凋亡过度可能是导致男性不育的重要原因之一。而caspases是细胞凋亡末期的共同通道,对细胞凋亡起着关键性的作用。因此,对caspases家族的活性调控研究可能为治疗男性不育提供新的诊断标准及治疗途径。     

蛇莓对人结肠癌RKO细胞失巢凋亡作用的实验研究

目的观察蛇莓对人结肠癌RKO细胞悬浮生长及失巢凋亡作用。方法不同浓度蛇莓作用RKO细胞,CCK-8（Cell Counting Kit-8,CCK-8）法检测蛇莓对RKO细胞悬浮生长作用,双嵌入剂乙锭均二聚物（Ethidium homodimer-1,EthD-1）染色检测失巢凋亡,比色法检测半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性,二氯氢化荧光素二酯染色法结合荧光酶标仪检测细胞内活性氧的产生。结果蛇莓可显著抑制RKO悬浮生长,呈剂量依赖性。蛇莓作用后悬浮生长RKO细胞吸收EthD-1散发红色荧光,部分细胞可见核碎裂,呈现凋亡形态改变;蛇莓同时可显著增强RKO细胞Caspase-3活性,升高细胞内活性氧水平。结论蛇莓可抑制RKO细胞悬浮生长,促使RKO细胞发生失巢凋亡,可能与活化Caspase-3以及升高细胞内活性氧水平相关。     

放射治疗对直肠癌细胞凋亡及相关调控蛋白的影响

目的 探讨直肠癌术前放射治疗对癌细胞凋亡及及相关调控蛋白的影响.方法 分析56例接受术前放射治疗的直肠癌患者的临床资料.采用TUNEL法观察放疗前活检标本及放疗后手术切除标本的细胞凋亡情况.免疫组织化学方法检测放疗前后所取标本的Bcl-2和Bax蛋白的表达情况.结果 56例直肠癌患者放疗前和放疗后,肿瘤细胞凋亡指数(AI)及凋亡阳性率均显著增加(均P＜0.001).放疗后Bcl-2蛋白的阳性表达率较放疗前显著升高(P=0.02),且与放疗后肿瘤细胞凋亡率成负相关(r=-0.68,P=0.016);而放疗后Bax蛋白的表达阳性率显著上升(P=0.01),且与放疗后肿瘤细胞凋亡率成正相关(r=0.89,P＜0.001).结论 直肠癌术前放射治疗对癌组织中Bcl-2和Bax蛋白的表达有显著影响,促进肿瘤细胞凋亡.     

雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞株LP-1凋亡的诱导作用

目的研究雷公藤红素对多发性骨髓瘤细胞LP-1凋亡的诱导作用及可能机制。方法通过雷公藤红素体外作用于多发性骨髓瘤LP-1细胞,研究其对于细胞增殖及细胞凋亡的影响。采用EnoGeneCell TM细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)研究雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖的影响,采用膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞株凋亡的诱导作用,采用级联酶底物显色法检测雷公藤红素对LP-1多发性骨髓瘤细胞Caspase-3酶原活化状态的影响。结果雷公藤红素能明显抑制LP-1多发性骨髓瘤细胞体外增殖,其半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)为0.881 7μmol/L。雷公藤红素可诱导LP-1细胞发生细胞凋亡,此效应具有剂量依赖性,雷公藤红素60.0μmol/L作用于LP-1细胞24h可诱导细胞凋亡百分率达到80.7%。雷公藤红素可引起LP-1细胞Caspase-3酶原活化。结论雷公藤红素可抑制多发性骨髓瘤细胞株增殖,诱导其凋亡,此作用可能通过Caspase-3酶原活化途径而实现。     

黄芩苷对D-氨基半乳糖致大鼠急性肝衰竭的保护作用

目的观察黄芩苷对大鼠急性肝衰竭的保护作用并探讨可能机制。方法 86只大鼠随机分为正常对照组、模型组和黄芩苷组,模型组和黄芩苷组再分为1、3、5、7天4个亚组。采用腹腔注射D-氨基半乳糖建立大鼠急性肝衰竭动物模型,黄芩苷组于造模后每隔12h腹腔注射黄芩苷(120mg/kg)1次。全自动生化仪检测血清ALT、AST和TBil水平;HE染色观察肝组织病理学变化;RT-PCR法检测肝组织Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA表达;蛋白免疫印迹法检测肝组织Bax、Bcl-2蛋白表达量。统计学处理采用方差分析。结果黄芩苷组肝组织损伤程度明显轻于模型组。黄芩苷组大鼠各时间点血清ALT、AST、TBil水平较模型组明显降低(t=18.85,15.63,8.86;P均<0.01)。黄芩苷组肝组织Bax、Bcl-2、caspase-3 mRNA的表达趋势与模型组一致,随时间延长3天时达高峰,5、7天时逐渐降低,与模型组相比Bax、caspase-3 mRNA表达量明显降低(t=-55.51,-16.20;P均<0.01)、Bcl-2 mRNA表达量较模型组升高(t=51.91,P<0.01)。黄芩苷组Bax、Bcl-2蛋白表达趋势与模型组一致,Bax蛋白表达量较模型组明显降低(t=-21.32,P<0.01),Bcl-2蛋白表达量较模型组明显升高(t=50.91,P<0.01);黄芩苷组各时间点Bcl-2/Bax蛋白比率明显高于模型组(t=68.08,58.11,64.04,17.50;P均<0.01)。结论黄芩苷可以通过上调抗凋亡基因Bcl-2的表达和下调促凋亡基因Bax,进而减少caspase-3的表达,保护D-GalN诱导的大鼠急性肝衰竭。     

C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的:观察C2-神经酰胺对牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)凋亡的影响及半胱天冬酶-3(Caspase-3)活性的变化.方法:取第二代牛LECs,经不同浓度(25 μmol/L,50 μmoL/L,100 μmol/L)C2-神经酰胺作用12 h,行TUNEL染色,荧光显微镜下计数凋亡细胞,计算凋亡率;Caspase-3活性检测试剂盒检测牛LECs中Caspase-3活性的变化.结果:随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LECs凋亡率也随之升高(P<0.05),呈剂量依赖关系.随着C2-神经酰胺浓度的增加,牛LEC中Caspase-3活性的表达也随之增强(P<0.05).结论:C2-神经酰胺可以诱导牛LECs发生凋亡;在此过程中,存在Caspase-3活性表达.     

凋亡相关蛋白在汉坦病毒诱导HEK-293细胞凋亡过程中的表达及意义

目的 探讨Bcl-2、Bax及Caspase-3在汉坦病毒诱导人胚肾细胞(HEK-293)凋亡过程中的变化,为研究汉坦病毒诱导人胚肾细胞损伤的机制提供参考.方法 体外培养HEK-293细胞,分为正常对照组和汉坦病毒处理的感染组,采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原;用Westen blot方法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平.结果 汉坦病毒感染HEK-293细胞1d后即开始出现荧光阳性细胞,随着时间延长,荧光强度逐渐增强,细胞胞浆内出现大量片状或颗粒性的黄绿色荧光;Western blot结果显示,与对照组比较,汉坦病毒感染1d后Bcl-2、Bax蛋白及Caspase-3酶原活化片段表达量未见明显变化(P＞0.05),感染3d和5d后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Caspase-3酶原活化片段表达升高(P＜0.05).结论 汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,其损伤机制可能与Bcl-2表达减少和Bax蛋白表达上调,通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡有关.     

三氧化二砷诱导肠癌HT-29细胞周期阻滞及凋亡的研究

目的：探讨三氧化二砷（AsO3）对结肠癌细胞增殖的抑制作用及对细胞周期和凋亡的影响。方法：采用MTr法测定细胞增殖活力，通过细胞形态学观察细胞分裂及凋亡，应用流式细胞仪进行细胞周期解析、凋亡的检测。结果：As2O3呈剂量-时间依赖性抑制结肠癌HT-29细胞系的增殖，作用24、48及72h后抑制50％细胞生长的药物浓度（IC50）分别为40．03,13．76,4．53μmol/L，与对照组差异显著（P〈0．05）。2μmol/L与5μmol/L的As2O3作用24h后，细胞周期出现G2/M期阻滞及亚二倍体凋亡峰，随着作用时间的延长，凋亡细胞随岛，M期细胞减少而逐渐增多。细胞形态学观察分裂期细胞及凋亡细胞明显增加。结论：As12O3抑制结肠癌HT-29细胞的增殖，诱导G2/M期阻滞及细胞凋亡。     

胆道肿瘤与细胞凋亡

探索ｂｃｌ－２和ｂａｘ基因产物在胆囊癌中的表达及其之间的关系。方法用免疫组化法对２１例胆囊癌、２５例胆管癌、２５例胆囊炎病理标本进行染色检查。结果ｂｃｌ－２在胆囊癌、胆管癌、胆囊炎上皮细胞中表达率分别为９／２１，１９／２５，６／２５。３组间差异显著（Ｐ＜０．０１）。ｂａｘ表达率分别为６／２１，５／２５，８／２５。３组间差异不显著。ｂｃｌ－２和ｂａｘ在表达上没有相关关系。结论ｂｃｌ－２、ｂａｘ基因参与了胆道肿瘤的形成，但不能作为胆道肿瘤诊断和判断预后的唯一标准     

联合索拉非尼与TRAIL对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响

目的:研究多激酶抑制剂甲苯磺酸索拉非尼(SOR)是否具有增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。方法:体外培养HT-29细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析亚二倍体(sub-G1)细胞百分率。比色法测定细胞Caspase-3活性。AO/EB双染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态。结果:SOR(5μmol/L)和TRAIL(100ng/mL)以及两者合用作用48小时HT-29细胞的sub-G1百分率分别是4.65%±2.33%、5.29%±2.80%和42.6.50%±4.65%;HT-29细胞的Caspase-3的活性分别是培养基组的1.24、1.37和9.51倍。两者合用展示出细胞核染色质固缩和碎裂的典型凋亡细胞形态。结论:亚细胞毒性浓度的SOR具有增强TRAIL诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用。     

18氟-脱氧葡萄糖诱导Lewis肺癌细胞凋亡的实验研究

目的：观察不同浓度18氟-脱氧葡萄糖（18F-FDG）对Lewis肺癌细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：指数生长期Lewis肺癌细胞分为18F-FDG实验组（为92.5×104Bq/ml组、185×104Bq/ml组、370×104Bq/ml组和740×104Bq/ml组）和对照组,应用光镜、电镜、流式细胞术（flow cytometry,FCM）和免疫组化技术检测不同浓度18F-FDG作用于体外培养的Lewis肺癌细胞后,诱导脂质氧化、细胞凋亡及bcl-2和bax基因表达情况。结果：18F-FDG能诱导Lewis肺癌细胞产生凋亡形态学变化,随着18F-FDG浓度增加,脂质氧化增强、细胞凋亡率增加、bcl-2表达减弱、bax表达增强（P〈0.01）。结论：18F-FDG能诱导Lewis肺癌细胞凋亡,且凋亡具有剂量依赖性。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

乳化异氟醚对缺氧复氧乳鼠心肌细胞的保护作用及bcl-2、bar表达的影响

目的 观察乳化异氟醚(8%体积分数)对培养乳鼠心肌细胞模拟缺血再灌注损伤后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2、bax的mRNA与蛋白水平表达的影响.方法 利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型,分正常培养组、模型组、脂肪乳组、乳化异氟醚(终浓度0.28 mmol/L).各组心肌细胞做相应分组处理后,利用倒置显微镜观察心肌细胞的生长状态和搏动频率,并用透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;RT-PCR检测心肌细胞凋亡基因bcl-2 mRNA、box mRNA的表达.Western blot定量检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 乳化异氟醚组和脂肪乳组均可显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),但乳化异氟醚组与脂肪乳组比较降低更明显(P＜0.05).乳化异氟醚可显著上调Bcl-2表达(P＜0.05)、下调Bax表达(P＜0.05);脂肪乳对Bcl-2和Bax表达无影响(P>0.05).结论 乳化异氟醚及其其中的成分之一脂肪乳可抑制模拟缺血再灌注损伤心肌细胞的凋亡;乳化异氟醚对缺氧复氧损伤的抗凋亡作用与其心肌细胞Bcl-2表达上调和Bax表达下调有关.     

8-硝基白杨素诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡

目的 观察8-硝基白杨素(NOChR)诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡作用.方法 MTT比色法测定细胞增殖活性;流式细胞分析术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带.结果 NOChR抑制人结肠癌(HT-29)细胞增殖,呈浓度依赖性,其IC50值为1.78μM;NOChR具有诱导HT-29细胞凋亡作用;PPAR γ特异性阻断剂(GW9662)能有效拮抗NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用.结论 NOChR诱导HT-29细胞凋亡作用与其活化PPAR γ相关.     

米非司酮诱导子宫肌瘤细胞凋亡及其调控基因的研究

目的　探讨米非司酮对子宫肌瘤细胞凋亡及其调控基因bcl- 2、bax表达的影响。方法　选择服米用非司酮和单纯行子宫切除的子宫肌瘤组织标本 4 4例 ,应用流式细胞定量分析技术进行DNA分析 ,采用免疫荧光标记对bcl- 2、bax基因蛋白进行分析。结果　服米非司酮后瘤细胞凋亡指数显著升高 ,bax基因蛋白表达明显上升 ,两者呈正相关 (r=0 6 5 38,P <0 0 5 ) ,而bcl- 2无明显变化。结论　米非司酮治疗子宫肌瘤可能是通过诱导瘤细胞凋亡来实现的 ,bcl- 2 /bax比值下降是诱导瘤细胞凋亡的原因之一。     

刺梨汁促人急性单核细胞白血病U937细胞凋亡作用的研究

目的：探讨刺梨汁（RRTJ）促U937细胞凋亡作用和可能的机制。方法：不同浓度RRTJ在体外作用于人急性单核细胞白血病U937细胞株。应用光学显微镜观察细胞形态变化；细胞计数测定细胞生长情况；流式细胞仪分析细胞生长周期的变化；逆转录聚合酶链反应法（RT—PCR）观察凋亡相关基因bcl-2、bax表达的变化；硝酸还原酶法测定细胞一氧化氮（NO）分泌量；并通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶（LDH）活性分析RRTJ对细胞的毒性作用。结果：刺梨汁显著抑制U937细胞生长，并表现出剂量依赖性。随RRTJ浓度增加，U937细胞凋亡率增高，baxmRNA表达量上升，而bcl-2mRNA表达水平明显下降。U937细胞NO释放量也随RRTJ浓度增加而增加。结论：RRTJ可能是通过影响细胞生长周期、降低bcl-2／bax比值，同时诱导NO分泌，促进U937细胞凋亡。     

姜黄素与5-氟尿嘧啶联用对人结肠癌HT-29细胞凋亡及环氧合酶-2表达的影响

目的:探讨姜黄素是否能增强5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗癌作用,并探讨其与细胞凋亡及COX-2蛋白表达的关系。方法:采用MTT法观察不同浓度姜黄素、5-FU单独或联合应用对HT-29细胞的生长抑制作用;流式细胞仪和荧光显微镜检测对HT-29细胞凋亡的影响;并且应用Western blotting分析联合应用后对于COX-2蛋白表达的影响。结果:姜黄素和5-FU可明显抑制HT-29细胞的生长,并呈剂量依赖性,半数生长抑制率(IC50)分别为(15.9±1.96)μmol/L和(17.3±1.85)μmol/L;当二者联合应用时,在较高的作用水平可以定量地观察到对HT-29细胞的协同抑制作用。流式细胞仪结果表明,单独应用姜黄素以及联合应用姜黄素与5-FU均能使HT-29细胞在加药后24和48 h出现凋亡峰,但联合用药所诱导的细胞凋亡比例较单独应用姜黄素低;荧光显微镜观察的结果与流式细胞仪的结果相同;免疫印迹实验结果显示两种药物联合作用可以使COX-2的表达降低约75%。结论:姜黄素与5-FU联合应用可协同抑制大肠癌细胞的增殖并协同抑制HT-29细胞内COX-2的表达。