塞来昔布对人鼻咽癌细胞凋亡的促进作用

目的 研究塞来昔布对人鼻咽癌CNE细胞凋亡的促进作用.方法 以人鼻咽癌细胞株CNE为研究对象,设实验组（加入塞来昔布20mmol/L）及对照组,培养48h后,制备成超薄切片透射电镜观察塞来昔布对细胞凋亡的影响.取不同浓度塞来昔布（0 ×10-5mol/L、1.0 ×10-5mol/L、2.0 ×10-5mol/L、4.0 ×10-5mol/L）处理细胞,用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡.TUNEL（DNA末端原位标记染色法）荧光染色法检测CNE细胞凋亡,计算凋亡率%=凋亡阳性细胞数/100个CNE细胞.结果 给予塞来昔布48 h后,透射电镜下CNE细胞染色质固缩边集,细胞器肿胀,胞浆内可见凋亡小体形成.流式细胞学结果显示塞来昔布对CNE细胞周期分布的影响S期细胞减少,G1期细胞增加,经浓度分别10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L塞来昔布处理48h,随浓度增大,凋亡率增加.TUNEL结果显示：实验组凋亡细胞明显增多,CNE细胞凋亡百分比（4.3±2.21）%,明显高于对照组（0.9±0.99）%,差异有统计学意义（P〈0.01）.结论 本实验将塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,运用电镜观察到凋亡细胞增加.不同浓度的塞来昔布作用于人鼻咽癌细胞株CNE细胞后,流式细胞术、TUNEL荧光染色均证明环氧合酶-2抑制剂塞来昔布对凋亡有促进作用,塞来昔布（特异性环氧合酶-2抑制剂）已被认为肿瘤治疗新靶标,可为临床的肿瘤治疗提供新的方法.     

他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116凋亡的影响

目的 探讨他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116的凋亡作用及可能机制.方法 应用细胞计数法(CCK-8)试剂盒法观察1、3、10、30、100μmol/L他莫昔芬对结直肠癌细胞HCT116活性的影响,对照组加入5%DESO/EtOH溶液,应用流式细胞仪检测他莫昔芬介导的凋亡作用;RT-qPCR和Western blot检测他莫昔芬作用后HCT116细胞转录共刺激因子(TAZ)、Bcl-2和Bax基因和蛋白表达,并检测HCT116细胞Caspase-3活性的变化.结果 他莫昔芬能使HCT116细胞的活性下降,并且随着其浓度的升高,细胞的活性下降更明显.凋亡率在他莫昔芬组和对照组分别为(35.13±5.14)%和(11.70±1.72)%.他莫昔芬作用后HCT116细胞的TAZ和Bcl-2基因和蛋白表达显著下降,而Bax基因和蛋白表达上调,细胞Caspase-3的活性显著上升(P<0.05).结论 他莫昔芬作用于结直肠癌HCT116细胞后可以显著抑制细胞的增殖,并能促进细胞凋亡,其机制可能是通过降低TAZ、Bcl-2和增高Bax、Caspase-3来介导的.     

IL-22抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡并上调其Bcl-2表达

目的研究IL-22对ox-LDL诱导的CRL-1730细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡的影响及其机制。方法 100μg/ml ox-LDL刺激CRL-1730细胞,不同时间点经实时荧光定量RT-PCR检测CRL-1730细胞中IL-22受体R1(IL-22R1)mRNA的表达状况。然后在ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡模型中加入20 ng/ml外源性IL-22,通过AnnexinⅤ-PI凋亡试剂盒检测其对细胞凋亡的影响,经实时荧光定量反转录PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、caspase 3及STAT3mRNA的表达,采用免疫印迹法分析STAT3磷酸化和Bcl-2蛋白的水平。结果 IL-22R1 mRNA在ox-LDL刺激后表达明显增高(P<0.05),且于12 h达峰值(P<0.01);加入IL-22可明显抑制ox-LDL刺激诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),促进抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w表达,而降低caspase 3 mRNA表达(P<0.01)。此外,IL-22作用1～2 h STAT3发生磷酸化,4 h后Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)。结论 IL-22可抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡,这可能与其促使STAT3磷酸化,上调抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w的表达,抑制促凋亡分子caspase 3的表达有关。     

塞来昔布诱导喉癌Hep-2细胞凋亡的实验研究

目的探讨环氧化酶-2特异抑制剂-塞来昔布对喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡诱导作用及可能机制。方法以不同浓度的塞来昔布处理喉癌Hep-2细胞,以四甲基偶氮唑盐（Mar）法检测对细胞增殖的影响,Hoechst33342染色荧光显微镜下观察细胞核的形态改变,以Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡率,Western blot检测Bcl-2、Bax及COX-2的表达,Western blot分析Caspase-3裂解激活。结果MTT结果表明塞来昔布抑制Hep-2细胞的增殖呈时间和浓度依赖;Hoechst33342荧光染色见随塞来昔布处理时间延长,细胞核逐渐出现凝集、碎裂等凋亡表现;流式细胞术检测细胞凋亡率见塞来昔布处理细胞24h,70、100μmol/L组凋亡率分男q为（28．9±2．74）％、（32．7±3．96）％;Western blot分析蛋白表达,见随药物处理浓度增加,COX-2、Bcl-2表达降低,Bax表达增加,随药物处理时间延长Caspase-3出现裂解片段。结论塞来昔布能够有效地抑制Hep-2细胞增殖和诱导Hep-2细胞凋亡。其诱导凋亡作用机制可能与Bax/Bcl-2比值升高,Caspase-3蛋白裂解激活有关。     

银杏内酯B诱导人结直肠癌HCT116细胞凋亡的研究

目的 探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对人结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 通过制备HCT116裸鼠瘤模型,观察GB对肿瘤生长的影响,并通过体外培养人结直肠癌HCT116细胞,分别加入不同质量浓度GB,与其共孵育72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,Giemsa染色观察细胞形态,Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2蛋白(B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2)、Bax蛋白(Bcl-2-associated protein x,Bax)和线粒体融合蛋白1(mitofusin 1,Mfn1)的表达.结果 GB抑制裸鼠瘤的生长(P＜0.05),并显著抑制HCT116细胞的增殖(P＜0.01),诱导HCT116细胞发生凋亡.同时,GB能够显著下调HCT116细胞Mfn1蛋白和Bcl-2蛋白的表达水平(P＜0.01),并上调Bax蛋白的表达(P＜0.05).结论 GB可能通过抑制Mfn1的表达,调节促凋亡蛋白Bax活性,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,促进结直肠癌细胞的凋亡.     

塞来昔布对人肝癌细胞株HepG2的放射增敏作用研究

目的探讨COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的HepG2细胞放射增敏作用及其可能的机制,为提高肝癌的放疗效果提供实验依据。方法集落形成法绘制细胞存活曲线,计算增敏比;流式胞仪检测塞来昔布对细胞周期及凋亡的影响;免疫细胞化学染色法检测塞来昔布作用后HepG2细胞的Bcl-2、Casepase-3的表达情况。结果集落形成实验计算得单纯照射组D0=2.57Gy、Dq=2.62Gy,药物＋照射组D0=2.18Gy、Dq=1.89Gy,增敏比SER=1.18。塞来昔布作用48h后,流式细胞仪检测发现细胞周期时相分布发生明显变化,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞减少,细胞凋亡率增加。免疫细胞化学染色法观察塞来昔布对凋亡蛋白Bcl-2、Caspase-3表达的影响,发现塞来昔布作用48h后Bcl-2的表达无明显变化,Caspase-3的表达增强。结论塞来昔布具有较强的放射增敏作用,作用机制可能与塞来昔布影响细胞周期的分布,促进细胞凋亡,抑制细胞亚致死性损伤修复有关。     

塞来昔布对U266细胞株增殖和凋亡的研究

目的观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对骨髓瘤细胞株U266细胞的增殖抑制和凋亡诱导的影响,并通过比较单用塞来昔布和加用Caspase-3阻断剂Ac-DEVD-FMK后的U266细胞株的凋亡率以及Caspase-3的表达,探讨其诱导U266细胞株凋亡的分子机制。方法骨髓瘤细胞株U266细胞经不同浓度的塞来昔布处理后,应用CCK-8体外药物筛选法测定受试样品塞来昔布对人骨髓瘤细胞U266体外增殖有无抑制作用及作用强弱;Annexin V-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法测定不同实验组样品中Caspase-3总量的表达。结果塞来昔布浓度〉40μmol/L能抑制人骨髓瘤细胞U266体外增值,并呈浓度依赖性,IC50=66.83μmol/L。塞来昔布在40～120μmol/L浓度范围内能诱导人骨髓瘤细胞U266细胞凋亡,呈浓度依赖性。用Ac-DEVD-FMK阻断Caspase-3活性,塞来昔布诱导的U266细胞凋亡明显受抑。结论塞来昔布可诱导骨髓瘤细胞株U266细胞株凋亡,其机制涉及Caspase-3依赖性凋亡调节信号通路。     

塞来昔布对高表达Her-2/neu的人乳腺癌SKBr3细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对人乳腺癌细胞SKB r3的抑制增殖及诱导凋亡作用。方法4种不同浓度的塞来昔布处理乳腺癌细胞系SKB r3细胞24、48 h,MTT法测定24、48 h后SKB r3细胞的增殖活性,流式细胞仪（FCM）检测48 h后各浓度塞来昔布诱导细胞凋亡情况及对细胞周期的影响。结果与对照组相比,塞来昔布以时间、剂量依赖性方式抑制SKB r3细胞增殖（P〈0.05）。作用48 h后,塞来昔布诱导SKB r3细胞凋亡并阻断了细胞周期进展,凋亡率随塞来昔布浓度的增加而增加（P〈0.05）,且随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞比例逐渐增加、S期及G2/M期细胞比例逐渐下降（P（0.05）。结论塞来昔布抑制高表达Her-2/neu的SKB r3细胞的增殖,诱导其凋亡。     

塞来昔布联合5-Fu对SGC-7901人胃癌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的研究选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布联合5-Fu对SGC-7901人胃癌细胞增殖及Bcl-2、Bax表达的影响。方法以SGC-7901人胃癌细胞为研究对象,运用不同浓度的塞来昔布联合5-Fu,采用MTT法测定塞来昔布及其与5-Fu联合对胃癌细胞生长的影响,流式细胞仪（FCM）检测处理后细胞周期和凋亡的变化,免疫组化检测Bcl-2、Bax的表达。结果塞来昔布联合5-Fu对胃癌细胞均有抑制作用,且联合用药及单药的抑制率与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）;流式细胞学检测到凋亡峰,其抑制作用呈时间-剂量依赖性;处理后的胃癌细胞进行免疫组化检测,发现联合用药组有更显著的Bcl-2表达下降和Bax表达增强。结论塞来昔布与5-Fu联合对胃癌细胞有协同抑制作用,其机制可能与改变Bcl-2和Bax的表达水平有关。     

小檗碱通过激活自噬诱导caspase依赖性凋亡发挥抗结直肠癌作用

  目的  探究小檗碱通过自噬依赖性凋亡发挥抗结直肠功效的潜在作用机制。  方法  使用HCT116细胞和移植瘤模型小鼠进行小檗碱抗肿瘤药效和可能作用机制的研究。体外研究中, 通过利用CCK8实验评价小檗碱对结直肠癌细胞活力的影响, 使用细胞克隆实验评价小檗碱对结直肠癌细胞增殖的影响, 同时借助流式细胞术和TUNEL染色法对小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡作用进行研究。透射电镜和mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞用于检测细胞内自噬流变化。通过对小鼠组织进行HE染色、免疫组化染色和TUNEL染色, 评价小檗碱体内抗结直肠癌作用。  结果  体外研究结果表明, 小檗碱能够抑制结直肠癌细胞活力, 诱导细胞凋亡, 同时提高细胞内LC3B水平。使用自噬抑制剂3-MA、CQ和BafA1进行干预, 自噬抑制剂能够促进HCT116细胞生长, 抵消小檗碱诱导的结直肠癌细胞凋亡作用。雷帕霉素增强小檗碱上调HCT116细胞中LC3B水平的作用, 同时Z-VAD-FMK或ATG siRNA能够废除小檗碱诱导结直肠癌细胞凋亡的作用。在体研究结果表明, 小檗碱能够降低肿瘤体积和重量, 引起肿瘤组织发生凋亡。进一步的体内作用机制研究结果表明, 小檗碱显著抑制p-mTOR表达, 同时显著上调ATG5、ATG7、cleaved-caspase3和cleaved-caspase8表达。  结论  小檗碱能够通过诱导结直肠癌细胞发生自噬, 促进其发生caspase依赖性凋亡, 进而抑制结直肠癌细胞增殖。      

塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用

目的研究环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂塞来昔布对人肝癌SMMC-7721细胞的生长抑制作用.方法用MTr比色法观察其对肝癌细胞生长的影响;荧光显微镜和透射电子显微镜检测细胞凋亡,TUNEL染色法记数细胞凋亡指数,流式细胞仪定量分析.结果塞来昔布以剂量依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的生长,2、10、20及40mmol/L塞来昔布对肝癌细胞的生长抑制率分别为20.78%、33.37%、48.57%和64.96%(P＜0.01).荧光显微镜和透射电镜观察到细胞皱缩、核质浓缩、核碎裂以及凋亡小体形成等凋亡形态学改变.流式细胞仪定量分析示2、10、20及40mmol/L浓度下细胞凋亡率分别为(7.44±0.34)%、(19.59±1.73)%、(29.04±4.18)%和(42.14±2.40)%,与对照组(2.13±0.17)%比较均有显著性差异.结论塞来昔布能抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖,亦能诱导其凋亡;诱导肿瘤细胞凋亡可能是塞来昔布抑制人肝癌细胞生长的机制.     

Effect of STAT3 in mechanism of fuzi polysaccharides postconditioning protecting cardiomyocytes with hypoxia-reoxygenation in neonate rats

目的 以信号转导子与转录激活子3( STAT3)为切入点,探讨附子多糖后处理对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制.方法 建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组、STAT3特异性的阻断剂Stattic加附子多糖组、Stattic组.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,Western blot法分析磷酸化-STAT3 (P-STAT3)、细胞色素C(CytC)和Caspase-3的表达,荧光定量PCR检测Bcl-xl mRNA及Bcl-xs mRNA的表达量.结果 与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以促进P-STAT3的表达,上调Bcl-xl基因表达而下调Bcl-xs基因表达,阻碍CytC自线粒体的释放及Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡发生.而Stattic可以逆转附子多糖后处理对心肌细胞的保护效应及P-STAT3的表达增加.结论 附子多糖后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护效应与其激活STAT3、促进抑凋亡蛋白Bcl-xl表达、保护线粒体、阻断细胞凋亡的线粒体通路有关.     

EGFR抑制剂AGl478联合塞来昔布对胃癌细胞生长的影响

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂AGl478联合塞来昔布能否增强对SGC-7901人胃癌细胞生长的抑制及可能机制.方法 采用MTT法观察药物对胃癌细胞生长的影响;免疫细胞化学法检测胃痛细胞增殖核抗原(PCNA)表达;TUNEL法检测细胞凋亡;蛋白质印迹(Western blot)分析方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)及磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)的表达变化.结果 AG1478及塞来昔布单独使用时,只有在较大浓度(10、100 vmol/L)可明显抑制SGC-7901细胞的增殖,其IC50分别为69.69 Ⅰmol/L及70.98μmol/L.不同浓度的AG1478与塞来昔布联合应用时对胃癌细胞的增殖抑制作用较单药组增强(P<0.01).胃癌细胞中PCNA的表达因AG1478、塞来昔布及两者联合的干预而下调,其PCNA指数分别为26.24%、38.16%、9.08%,与对照组(56.55%)相比差异有统计学意义(P均<0.01).与对照组比较,10 μmol/L AGl478可诱导胃癌细胞的凋亡(凋亡率为7.88%vs.3.54%,P<0.01).与5 μmol/L塞来昔布联合应用时,凋亡率达14.90%(P<0.01).AG1478单用及与塞来昔布联合应用均可降低胃癌细胞p-ERK的表达(P<0.01).但无论是单药还是联合用药均对ERK的表达无影响.结论 AGl478联合塞来昔布能通过共同下调p-ERK水平,增强对SGC-7901人胃癌细胞的增殖抑制作用.     

联合应用干扰素α-2b及选择性环氧化酶2抑制剂对肝癌细胞抑制作用的研究

目的观察干扰素α-2b(IFN-α-2b),选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂非甾体类消炎药塞来昔布单用以及两者联合应用时,对人肝癌细胞株HepG2的生长抑制作用及同时检测药物作用后COX-2和血管内皮生长因子(VEGF)及Bcl-2表达的情况,探讨药物作用的机制。方法 HepG2细胞根据所加药物不同分为不同浓度的IFN-α-2b组(1250、2500、5000、10 000、20 000、40 000 U/mL)、塞来昔布组(25、50、100、200μmol/L)、联合用药组(IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L、IFN-α-2b 5000 U/mL+选择性COX-2 100μmol/L)。MTT法检测不同时间(24、48 h)各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测用药前后COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白在HepG2细胞中的表达变化。结果不同浓度的塞来昔布和干扰素对HepG2细胞均有抑制作用,且联合效果明显优于单用,各组与对照组差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞术分析:塞来昔布50μmol/L组、塞来昔布100μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布50μmol/L组、IFN-α-2b 5000 U/mL+塞来昔布100μmol/L组细胞凋亡率分别为(14.93±0.79)%、(25.43±0.89)%、(20.52±1.46)%、(27.12±3.34)%、(48.17±2.04)%,与阴性对照组(8.73±0.83)%比较差异均有统计学意义(P<0.05);塞来昔布单用及联合IFN-α-2b作用48 h后,各组COX-2、VEGF、Bcl-2蛋白的表达下调,呈剂量依赖性,联合用药组较单药组作用明显。结论干扰素α-2b和塞来昔布均有抑制肝癌细胞HepG2增殖的作用,同时对细胞具有凋亡诱导作用,亦能抑制细胞中COX-2、VEGF、Bcl-2的表达。上述抑制作用随药物浓度的增加、作用时间的延长而增强,联合作用更强。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

STAT3在附子多糖后处理保护缺氧/复氧乳鼠心肌细胞机制中的作用

目的以信号转导子与转录激活子3(STAT3)为切入点,探讨附子多糖后处理对乳鼠缺氧/复氧后心肌细胞的保护机制。方法建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组、STAT3特异性的阻断剂Stattic加附子多糖组、Stattic组。流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,Western blot法分析磷酸化-STAT3(P-STAT3)、细胞色素C(CytC)和Caspase-3的表达,荧光定量PCR检测Bcl-xl mRNA及Bcl-xs mRNA的表达量。结果与缺氧/复氧组相比较,附子多糖后处理可以促进P-STAT3的表达,上调Bcl-xl基因表达而下调Bcl-xs基因表达,阻碍CytC自线粒体的释放及Caspase-3的表达,抑制心肌细胞凋亡发生。而Stattic可以逆转附子多糖后处理对心肌细胞的保护效应及P-STAT3的表达增加。结论附子多糖后处理对缺氧/复氧心肌细胞的保护效应与其激活STAT3、促进抑凋亡蛋白Bcl-xl表达、保护线粒体、阻断细胞凋亡的线粒体通路有关。     

塞来昔布抑制人结肠癌细胞SW-1116增殖并诱导其凋亡

目的 :探讨塞来昔布 ,一个环氧合酶 2选择性抑制剂 ,诱导人结肠癌SW 1 1 1 6细胞凋亡 .方法 :应用体外噻唑兰法、吖啶橙荧光染色法、透射电镜技术、流式细胞术等方法研究塞来昔布抑制人结肠癌细胞SW 1 1 1 6的增殖及诱导其凋亡的作用 .结果 :塞来昔布抑制SW 1 1 1 6细胞的增殖且呈剂量依赖性 ,给药处理 72h其IC50 为 (33.6± 1 .78) μmol/L ;AO荧光染色及透射电镜观察发现 4 0 μmol/L的塞来昔布作用 2 4h后一些细胞形态出现了典型的凋亡特征 ;给药 2 5 ,5 0 ,1 0 0μmol/L 4 8h流式细胞术周期分析结果显示 ,各治疗组均出现凋亡峰 .结论 :塞来昔布抑制人结肠癌细胞株SW 1 1 1 6细胞的增殖并诱导其凋亡     

选择性环氧化酶-2抑制剂调节Egr-1作用机制的研究

目的:以肺腺癌细胞株A549为研究对象,观察不同浓度的塞来昔布对A549细胞的生长周期及凋亡率的影响,以及对早期反应基因-1(Early growth response-1,Egr-1)表达的影响,探讨环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂调节Egr-1的具体机制,从分子水平上寻找COX-2抑制剂抗肿瘤作用的具体机制.进一步指导临床治疗.方法:体外培养肺腺癌细胞A549,经25.0、50.0、100.0 μmol/L浓度的塞来昔布处理细胞,24 h后采用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)测定细胞周期,TUNEL法测定细胞凋亡,RT-PCR法检测Egr-1、Fas基因的表达.结果:25.0、50.0、100.0 μmol/L赛来昔布作用24 h后,A549细胞不同程度的阻滞在G0/G1期,A549细胞凋亡指数分别是10.67%±1.46%、18.33%±2.54%、25.67%±2.10%,差异具有统计学意义(P＜0.05);随着塞来昔布药物浓度的增加,Egr-1和Fas的mRNA表达量逐步增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:高度选择性COX-2抑制剂塞来昔布可通过调节细胞周期和细胞凋亡发挥抗肿瘤作用,其作用机制可能是通过上调细胞中Egr-1的表达,进而上调Fas的表达.使细胞周期阻滞于G0/G1,最终促进细胞凋亡,这可能是环氧化酶抑制剂发挥抗癌作用的分子生物学基础.     

紫草素体外对人结肠癌生长抑制的作用

目的研究紫草素对体外培养的人结肠癌细胞HCT116增殖的影响,并初步探讨其潜在的调节作用机制。方法体外正常培养的HCT116细胞分别给予不同浓度的紫草素刺激,MTT法检测HCT116细胞的增殖情况,AnnexinV-FITC/PI双染后,流式检测HCT116细胞凋亡,q RT-PCR检测细胞中Bcl-2、Bax的m RNA表达,Western blot检测HCT116细胞中Akt蛋白磷酸化水平。结果 10～80μg/m L浓度的紫草素对HCT116细胞增殖均有明显的抑制作用,并能促进凋亡;随紫草素浓度增加,HCT116细胞Bcl-2的m RNA表达逐渐下降(P<0.05),Bax的m RNA表达水平逐渐升高(P<0.05),p-Akt蛋白表达逐渐减少(P<0.05)。结论紫草素可以诱导体外培养的人结肠癌细胞HCT116发生凋亡,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路的激活,进一步降低Bcl-2mRNA表达,增加Bax的m RNA表达有关。     

蟾毒灵抑制肿瘤相关成纤维细胞介导的转移

目的 探究蟾毒灵对肿瘤相关成纤维细胞(CAF)介导的肿瘤转移的作用机制。方法 从结肠癌患者组织中提取原代CAF,命名为CAF-1和CAF-2,并在共聚焦荧光显微镜下观察其形态和表面标志物表达。同时通过Western blot检测CAF表面标志物成纤维细胞激活蛋白(FAP)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIM)的表达来确认CAF身份。收集CAF条件培养基，通过ELISA实验检测条件培养液中的白细胞介素6(IL-6)分泌水平。选取人结肠癌细胞HCT116,分为HCT116组、HCT116加CAF条件培养基组，用Western blot检测HCT116上STAT3信号通路相关蛋白P-STAT3、STAT3表达情况，通过Western blot检测HCT116上皮间充质转化(EMT)的情况，再通过划痕实验和Transwell实验明确HCT116迁移和侵袭能力的改变。将HCT116分为对照组和蟾毒灵组，两组均用CAF条件培养基刺激，观察STAT3信号通路激活情况、EMT和侵袭能力的改变。结果 原代细胞呈长梭形，并表达CAF表面标志物FAP、α-SMA和VIM。ELISA实验显示C...