均匀设计优选玉红膏中紫草油炸提取工艺研究

摘要 目的: 以羟基萘醌总色素得率为指标,优化玉红膏中紫草的油炸提取工艺。方法: 通过单因素试验考察闷润溶剂的种类、闷润溶剂的浓度对羟基萘醌总色素的影响;采用均匀设计法安排试验,紫外分光光度法测定羟基萘醌总色素含量,考察闷润溶剂的浓度、闷润溶剂的用量、油炸温度和油炸时间对提取提取工艺的影响,优选紫草的油炸提取工艺。结果: 最佳油炸提取工艺：采用68.87 %乙醇闷润,用量为紫草的3.20倍,油炸温度为160.15 ℃,提取1.96 min。结论: 采用均匀设计优化紫草的油炸提取工艺可行、稳定,可以为紫草的传统油炸提取工艺提供试验依据。 关键词：玉红膏;紫草;均匀设计;提取工艺;羟基萘醌总色素     

正交试验优选紫草提取工艺

目的以紫草中总萘醌和左旋紫草素的含量为指标，研究超声萃取和索氏提取2种工艺方法在萃取紫草中有效成分的差异。方法通过正交试验安排实验条件，采用分光光度法测定紫草提取液中总萘醌含量，HPLC法测定提取液中左旋紫草素含量，比较超声萃取与索氏提取的提取效率，优选两种工艺方法的最佳工艺条件。结果2种工艺方法中，粒度对总萘醌的提取率均有非常显著影响，粒度较大的提取率高，但对紫草中左旋紫草素的提取率无显著影响；溶剂乙醇在2种工艺方法中表现出不同影响，超声萃取工艺乙醇的提取率较高，呈显著影响，而在索氏提取工艺中提取率较低，也呈显著影响。结论比较2种工艺，超声萃取具有高效、省时、节能的特点，优于索氏提取工艺。     

闪式提取法用于紫草的工艺条件研究

以左旋紫草素、羟基萘醌总色素的提取率为评价指标,对比闪式提取、回流提取、超声提取对紫草中有效成分的提取效果,采用正交设计综合评分法对闪式提取的工艺参数进行优化。结果表明,闪式提取法提取效率最高,优选的闪式提取最佳工艺为95%乙醇提取3次,每次90 s。在此工艺条件下左旋紫草素、羟基萘醌总色素提取率分别为93.16%,93.89%,出膏率为5.16%。闪式提取法适于紫草有效成分的提取,通过正交试验设计优选的紫草闪式提取工艺稳定、切实可行。     

用均匀设计法优选紫草膏的制备工艺

优化合理,可靠的紫草膏制备工艺。方法：采用均匀设计法对紫草膏的制备工艺中油浊 温时间和固液比例３个因素进行优选。结果：油温为１３０℃,保温时间为４０ｍｉｎ,固液比例为１：８,制备的紫草膏紫草素含量最高。结论：验证实验表明,优选出的紫草膏制备工艺合理、可靠。     

正交试验设计优选新疆紫草的醇提工艺

目的:优选新疆紫草中总萘醌的提取工艺.方法:采用紫外-可见分光光度法测定吸光度,以总萘醌提取率为指标,通过正交试验考察提取时间、溶剂用量、提取温度对总萘醌的提取效率的影响.结果:影响新疆紫草中总萘醌提取效果的因素顺序为溶剂用量＞提取温度＞提取时间.最佳醇提工艺条件为10倍量95％乙醇提取2次,每次1h,提取温度55℃.结论:该优选的工艺稳定可行,为总萘醌的后期开发提供实验依据.     

紫草乳膏提取工艺研究

目的:探讨紫草乳膏中药材提取工艺的优选方法。方法:采用分光光度法测定羟基萘醌总色素含量,采用高效液相色谱法(HPLC)测定羟基红花黄素A含量,以此作为评价指标,进行正交试验,优选药材提取工艺。结果:紫草、白芷的提取工艺为饮片粗粉加乙醇4倍量浸渍48 h后开始渗漉,溶剂用量为10倍;红花、当归的提取工艺为饮片用水浸泡0. 5 h后,70℃温浸2次,60 min/次,第1次用水12倍量,第2次用水10倍量。结论:紫草乳膏提取工艺合理可行,为紫草乳膏的成型工艺研究及质量控制奠定基础。     

黄柏提取工艺的均匀设计优选

以黄柏中小檗碱含量为指标,考察了粉碎度,提取次数,提取时间、溶煤量对贡柏提取工艺的影响。方法：采用均匀设计试验方法。结果：黄柏药材切成长５ｃｍ的丝,提取２０ｍｉｎ,加水８倍量提取次４次。结论该方法提取效率高。     

均匀设计法优选枸杞提取工艺

目的优选枸杞提取工艺。方法以枸杞水提液中多糖含量为指标,采用均匀设计法筛选最佳提取工艺。结果枸杞提取工艺最好参数条件为加水量12倍,浸泡时间20 min,煎煮时间20 min,水提液枸杞多糖含量为333.4 mg。结论实验结果可为枸杞提取工艺的确定提供依据。     

均匀设计优化红花黄色素提取工艺

目的：优选红花黄色素的提取工艺。方法：采用均匀设计对红花黄色素提取工艺优化，以羟基红花黄色素A为对照品、高效液相色谱法测定了不同工艺提取物中羟基红花黄色素A的含量及提取率。结果：红花黄色素的最佳提取工艺为：150倍量50％乙醇，室温下提取4次，30min／次。结论：该提取工艺可作为提取红花黄色素生产工艺的参考。     

均匀设计法优选红花提取工艺

目的：确定红花水提工艺条件。方法：以羟基红花黄色素A浸出量为指标，采用均匀设计法优选红花提取工艺条件。结果：以水为溶剂提取2次，加水量分别为12倍、10倍，提取时间分别为60、50min，可使药材中羟基红花黄色素A基本浸出。结论：试验结果可为红花提取工艺的确定提供实验依据。     

新疆紫草7种萘醌类成分的同时测定

目的:建立同时测定新疆紫草中紫草酸、紫草素、乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素7种成分的HPLC检测方法.方法:选用安捷伦ZORBAX SB-C18(4.6 mm× 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-0.03％甲酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长516,254 nm,柱温30℃,进样量6μL,流速1 mL· min-1.结果:7种萘醌类对照品在进样量范围内分别与峰面积呈现的良好线性关系(r＞0.999 1);仪器精密度和稳定性RSD均＜3％;加样回收率在97％～103％ (n=3).结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量新疆紫草的7种水溶性及脂溶性萘醌类成分,为新疆紫草的质量评价提供了更为全面的科学依据.     

新疆紫草中1个新的紫草呋喃类化合物

目的研究新疆紫草Arnebiaeuchroma的化学成分。方法运用硅胶柱色谱、MCI凝胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱及制备型HPLC等方法进行分离纯化,通过核磁共振、质谱等波谱学方法并结合文献对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从该植物干燥根的75%乙醇提取物中分离纯化得到3个化合物,分别鉴定为2-(2′-烯基-4′-羟基-环己酮-3′-基)-4-(1′′-羟基-4′′-甲基-3′′-戊烯-1′′-基)呋喃(1)、arnebinol A(2)和arnebinol C(3)。结论化合物1为新的紫草呋喃类化合物,命名为紫草呋喃萜酮A。     

基于网络药理学及实验验证探讨新疆紫草抗肝癌作用机制

目的 运用网络药理学方法探究新疆紫草抗肝癌的物质基础和作用机制,并通过分子对接和实验验证新疆紫草抗肝癌潜在靶点。方法 通过中国知网（CNKI）、中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）等数据库检索文献收集新疆紫草主要活性成分;根据药物的药物动力学（ADME）特性,通过FAFDrug4平台对活性成分进行筛选;利用多个数据库搜集筛选化合物和肝癌作用靶点,并绘制韦恩图分析;借助Cytoscape软件和STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络;用DAVID数据库对关键靶点进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析;通过Autodock对核心通路上的靶点进行分子对接;细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验验证5种萘醌类化合物的活性;根据预测结果在H22荷瘤小鼠模型中,采用苏木素-伊红（HE）染色法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）验证异戊酰紫草素抗肝癌关键靶点。结果 共筛选出55个活性成分,有效成分抗肝癌靶点34个;“药物-活性成分-靶点-疾病”中,度值较高的活性分子主要是萘醌类成分;PPI网络得到多个紫草抗肝癌核心靶点,KEGG筛选通路22条,主要作用于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子（TNF）等信号通路,分子对接结果表明,5种紫草萘醌类成分与PI3K/Akt信号通路靶点亲和力良好。CCK-8和动物实验结果说明脂溶性成分异戊酰紫草素有着较好的抗癌潜力,高剂量组可显著降低荷瘤小鼠血清中VEGF、甲胎蛋白（AFP）水平,升高干扰素-γ（IFN-γ）水平（P<0.05,P<0.01）,并显著下调磷酸化（p）-Akt（Ser473）、B细胞淋巴瘤（Bcl）-2蛋白表达,上调Bcl-2家族抗凋亡因子（Bad）蛋白的表达（P<0.01）。结论 新疆紫草可以通过PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞增殖、肿瘤血管生成并诱导癌细胞凋亡,为后续深入探讨其具体机制提供了思路和线索。     

2-氨基磷酸茚处理对新疆紫草悬浮细胞次生代谢物积累的影响

用不同浓度2-氨基磷酸茚(AIP),并结合茉莉酸甲酯(Me JA)处理新疆紫草悬浮细胞,测定不同处理组、不同处理时间细胞中迷迭香酸及乙酰紫草素、脱氧紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰紫草素、异戊酰紫草素等次生代谢物的含量,考察AIP抑制苯丙氨酸通路后对紫草悬浮细胞中次生代谢物合成、积累的影响。结果显示Me JA处理能够明显促进新疆紫草细胞中次生代谢物的合成积累;AIP处理能够抑制新疆紫草细胞中上述次生代谢物的积累,并在二者联合处理时能一定程度上抵消Me JA的促进作用,且抑制作用的强弱与处理剂量、处理时间存在正相关性。表明苯丙氨酸途径在紫草素类化合物生物合成中具有重要作用,可为通过细胞培养方式生产紫草素类化合物的代谢调控及紫草素类化合物生物合成等进一步研究提供参考。     

基于新疆紫草转录组的对羟基苯甲酸香叶基转移酶(PGT)基因的挖掘及生物信息学分析

对羟基苯甲酸香叶基转移酶(PGT)在紫草素类化合物的生物合成途径中起重要作用。该文主要通过生物信息学的方法从新疆紫草转录组中获得6个PGT基因,并预测其编码蛋白的理化性质,进行相关基因的表达分析。结构域预测结果显示,6个PGT蛋白序列均包含Ubi A异戊烯基转移酶家族保守结构域及异戊烯焦磷酸结合位点NDxx Dxxx D和可能的芳环的结合位点GX(K/Y)ST AL;系统进化树分析显示PGT与同源的对羟基苯甲酸多异戊烯转移酶(PPT)属于2个不同的进化枝;基因表达分析表明在紫草素类化合物产量较高的新疆紫草红色高产系悬浮细胞及植株的地下部分,其PGT基因的表达量明显高于白色低产系及植株的地上部分,说明新疆紫草PGT基因的表达量与紫草素类化合物的合成呈正相关。该研究为进一步了解对羟基苯甲酸香叶基转移酶(PGT)的功能及特性奠定了基础,并为紫草素类化合物生物合成及代谢调控提供依据。     

黄连紫草膏中地黄、紫草的醇提工艺优选

目的:优选黄连紫草膏中地黄、紫草的提取工艺.方法:以梓醇、毛蕊花糖苷、紫草素的含量和干膏得率为指标,考察乙醇体积分数、提取时间、乙醇用量、提取次数对提取工艺的影响,通过层次分析法确定各指标的权重系数,均匀设计优选醇提工艺.结果:最佳提取工艺为12倍量65％乙醇提取2h.结论:该优选工艺稳定可行,可为提取工艺的确定和剂型改革提供依据.     

基于转录组的新疆紫草ERF转录因子家族生物信息学分析

从新疆紫草转录组分离出27个ERF转录因子家族基因, 平均大小为1 010 bp, 每个基因平均编码了212个氨基酸。以紫草ERF基因gi261363612为参考, 对27AeERFS从基因结构、表达量、理化性质、亚细胞定位、信号肽、高级结构和保守域的预测和分析等方面做了研究, 并对新疆紫草ERF家族做了系统进化分析, 认为最合适的建树方法为最大似然法。结果显示, 该家族存在3个保守域, 高级结构以无规则卷曲为主, 聚为CBF/DREB, ERF 2个亚族。     

一测多评法测定新疆紫草中主要萘醌类成分的含量

以β,β'-二甲基丙烯酰阿卡宁为内参物,测定新疆紫草中乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、α-甲基-正丁酰紫草素的含量,建立紫草中5种萘醌类成分的一测多评定量分析方法。采用高分辨LC-MS对含量测定的5个色谱峰进行鉴定。采用不同高效液相(HPLC)系统和不同色谱柱考察相对校正因子的耐用性,同时采用外标法与一测多评法对16批新疆紫草药材进行分析,并对含量测定结果进行比较。结果表明相对校正因子的耐用性良好,16批样品一测多评法与外标法所得结果无显著差异。所建立的含量测定方法可用于同时测定新疆紫草中5种萘醌类成分。     

正交试验优化板蓝根总生物碱的提取工艺

目的:优选板蓝根中总生物碱的超声提取工艺.方法:以总生物碱提取量为指标,采用L9(34)正交试验考察乙醇体积分数、超声时间,料液比对提取工艺的影响,确定最佳提取工艺.结果:各因素对超声提取工艺的影响顺序为乙醇体积分数＞超声时间＞料液比;最佳提取工艺为乙醇体积分数80％,提取时间20 min,料液比1∶10.结论:优选的提取工艺稳定可行,提取率高.