人喉癌细胞端粒酶催化亚基cDNA片段的扩增与克隆

目的：测定人喉鳞状上皮癌hep-2细胞的端粒酶活性水平并获得hep-2细胞中hTERTcDNA片段的克隆，方法：采用TRAP-ELISAS法测定酶活性水平，RT-PCR技术扩增获得目的片段，利用酶切法、PCR法和序列分析法对所获克隆进行检测。结果：hep-2细胞具有较高的端粒酶活性水平，获得含hTERTcDNA片段的克隆。结论：利用RT-PCR法能够从具有较高端业酶活性水平的hep-2细胞中扩增获得hTERTcDNA片段。     

人端粒酶催化亚基肿瘤相关性研究

人端粒酶催化亚基(hTERT)基因转录的从头激活是端粒酶活化的主要限速步骤,受到多种癌基因或抑癌基因产物的精密调控。构建hTERT启动子调控抗肿瘤基因的逆转录病毒载体,使抗肿瘤基因在端粒酶阳性的肿瘤细胞内定向表达,有望用于肿瘤基因治疗。     

大肠癌端粒酶活性的意义及其与人端粒酶催化亚基表达的相关性

目的 :研究大肠癌组织中端粒酶活性在大肠癌发生发展中的作用及其与人端粒酶催化亚基 (h TERT)表达的相关性。方法 :运用 PCR- TRAP- EL ISA及免疫组织化学方法 (免疫组化法 )对 30例大肠癌及相应的癌旁组织、正常大肠组织及 2 0例大肠腺瘤性息肉组织中端粒酶活性和 h TERT表达进行检测。结果 :1端粒酶在大肠癌组织中的阳性表达明显高于癌旁组织、正常大肠黏膜及大肠腺瘤性息肉 (P<0 .0 5 ) ;2大肠癌组织端粒酶与淋巴结转移关系密切 ,伴淋巴结转移大肠癌端粒酶阳性表达率明显高于无淋巴结转移者 (P <0 .0 1 ) ;3相关分析显示端粒酶活性与 h TERT表达存在相关性 (P <0 .0 5 )。结论 :端粒酶在大肠癌的发生发展过程中可能起着重要作用 ,h TERT的表达与端粒酶活性密切相关     

肾细胞癌组织人端粒酶催化亚基hTRTmRNA的原位杂交检测

端粒酶是一种具有逆转录酶活性的核蛋白体，其自身含有RNA模板，能够维持细胞染色体末端的端粒长度不随细胞分裂而缩短。端粒酶活性表达是肿瘤细胞的重要标志。许多研究显示端粒酶活性表达受到端粒酶催化亚基(human telom-erese reverse transcfiptase，hTRT)表达的调控，hTRT、在多数恶性肿瘤中有高表达，而在良性肿瘤及正常组织(除胸腺、睾丸、     

人IL-12 cDNA的克隆

目的: 克隆人IL-12的cDNA。方法：利用RT-PCR从人NC 37淋巴母细胞中克隆出IL-12中两个亚基p35和p40的cDNA并进行序列测定。结果：从NC 37细胞中克隆的p35 cDNA序列(GenBank登录号为AF 101062)与先前登录在GenBank上的M65271 (NC 37细胞来源）和M 65291(RPMI 8866细胞来源,美国专利号：5648467）的p35 cDNA序列分别有2处和1处碱基不同：编码第44位氨基酸残基密码子的第3个碱基M 65291是C,而M 65271和本研究AF 101062的相应序列2是G;编码第244氨基酸残基密码子的第3个碱基,M 65271序列是C,而M 65291和AF 101062的相应序列是T;编码第247氨基酸残基密码子的第2个碱基M 65271序列是C,而M 65291和AF 101062的相应序列是T。此外,本研究克隆的p40 cDNA序列与登录在GenBank的p40 cDNA (M 38444)序列完全相同。结论：尽管本研究克隆的p35 cDNA序列与已知的两种p35 cDNA序列分别有2处和1处碱基不同,但其编码的氨基酸序列却与专利登记的p35 cDNA（M 65291）编码的氨基酸序列完全一致,表明克隆的IL-12基因所表达的蛋白质在理论上是符合目前药用标准的。     

端粒酶催化亚基hTERT活性检测在膀胱癌及腺性膀胱炎的诊断价值

膀胱癌是泌尿生殖系统的高发肿瘤,它的早期诊断列临床有重要意义,端粒酶活性测定可作为膀胱癌早期诊断的指标,hTERT是较端粒酶活性对膀胱肿瘤的诊断敏感性更高,特异性更强。本文就近年来检测HTERR活性作为膀胱癌及癌前病变的诊断标志物研究新进展概述。     

端粒酶催化亚基hTERT活性检测在膀胱癌及腺性膀胱炎的诊断价值

膀胱癌是泌尿生殖系统的高发肿瘤,它的早期诊断对临床有重要意义。端粒酶活性测定可作为膀胱癌早期诊断的指标,hTERT是较端粒酶活性对膀胱肿瘤的诊断敏感性更高,特异性更强。本文就近年来检测hTERT活性作为膀胱癌及癌前病变的诊断标志物研究新进展概述。     

端粒酶及端粒酶催化亚基对膀胱癌及腺性膀胱炎诊断的研究进展

端粒酶（telomerase）及端粒酶催化亚基（hTERT）在多种肿瘤中均有较高的表达，膀胱肿瘤发病率日趋增高，腺性膀胱炎可能是膀胱癌的癌前病变。故对其早期发现、早期诊断非常重要。     

尿脱落细胞端粒酶催化亚基活性检测对早期诊断移行膀胱癌的价值

目的探讨尿脱落细胞检测端粒酶催化亚基(hTERT)早期诊断移行膀胱癌(TCC)的价值。方法用RT-PCR法分别对膀胱癌组织、正常膀胱组织及TCC和正常对照组尿脱落细胞进行hTERT检测。结果28例TCC癌组织hTERT表达呈100%阳性,正常膀胱组织25例均无阳性表达。28例TCC患者中,尿脱落细胞hTERT表达阳性率为88.1%(25/28),正常对照组尿脱落细胞hTERT表达阳性率为6.7%(2/30)。结论尿脱落细胞hTERT检测敏感性高,无创伤,可用于膀胱癌的早期诊断。     

卵巢肿瘤组织中端粒酶活性表达的临床病理学意义

目的：研究测定端粒酶活性在诊断和预测卵巢肿瘤方面的意义。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）法检测34例卵巢肿瘤组织的端粒酶活性。结果：18例卵巢良性肿瘤组织中均未测出端粒酶活性，4例卵巢交界性或低度恶性肿瘤组织中1例（25％）端粒酶活性阳性表达，12例卵巢恶性肿瘤组织中端粒酶活性均阳性表达。卵巢上皮性恶性肿瘤组织中，端粒酶活性在组织类型之间差异无统计学意义。结论：端粒酶活性的检测有助于卵巢肿瘤的诊断和鉴别诊断，并有助于预测患者的预后。     

载脂蛋白A1基因克隆及序列分析

目的 :克隆人载脂蛋白A1 (apoA1 )基因。　方法 :选择人胎肝组织 ,提取总RNA ,以此为模板 ,利用RT PCR法获取apoA1成熟肽基因片段 ,琼脂糖电泳分离纯化所得目的基因并克隆至T Vector ;ABI 377自动序列分析仪分析所得基因序列。　结果 :PCR产物经琼脂糖电泳 ,目的基因片段与预期大小相符 ;序列分析仪分析所得基因序列 739bps,与国外报道的完全相同。　 结论 :从人胎肝组织成功克隆apoA1基因     

hTERT基因荧光真核表达载体的构建及表达

目的：构建人端粒酶催化亚单位(hTERT)正、反义荧光真核表达载体,并检测其在人胚胎成纤维细胞中的表达．方法：采用基因重组技术,将hTERT cDNA正向克隆到荧光真核表达载体pIRES2-EGFP中,NotI酶切鉴定;采用脂质法,将重组基因pIRES2-EGFP-hTERT转染入原代培养的人胚胎成纤维细胞;采用激光共聚焦显微镜、RT-PCR及Western blot检测hTERT在胚胎成纤维细胞中的表达．结果：经NotI酶切后,hTERT正义重组质粒被切成1．4kb和7．4kb2个片段,反义重组质粒为4．8kb和4．0kb2个片段,与理论预期长度相符;pIRER2-EGFP-hTERT重组基因经脂质法转染,G418筛选,获得一个阳性克隆,激光共聚焦显微镜下可见明显的绿色荧光,RT-PCR及Western blot可见hTERT mRNA转录及其蛋白的表达。结论：成功构建了h TERT正义荧光真核表达载体,并可在人胚胎成纤维细胞中表达。     

铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因的扩增与克隆

目的PCR扩增及克隆铜绿假单胞菌的弹性蛋白酶基因.方法从铜绿假单胞菌培养物中提取染色体DNA,PCR扩增弹性蛋白酶基因成熟蛋白编码区,A-T克隆于pMD 18-T载体中,对重组质粒进行酶切与测序鉴定.结果从高GC含量的铜绿假单胞菌染色体DNA中扩增到弹性蛋白酶基因并进行了克隆与鉴定.结论本研究成功克隆到铜绿假单胞菌弹性蛋白酶基因,为实现活性弹性蛋白酶的高效表达奠定了基础.     

端粒酶催化亚单位与肿瘤

人类端粒酶催化亚单位又称端粒酶逆转录酶 ,为端粒酶激活的限速酶 ,与端粒酶活性表达一致 ,对癌病变特异。一些化疗药物、中药、核酶及反义寡核苷酸均能不同程度地抑制hTERT -mRNA的表达 ,同时抑制了端粒酶活性 ,减慢了肿瘤细胞的生长速度。     

弓形虫ROP2基因的体外扩增及克隆

目的：构建弓形棒状体蛋白2（ROP2)基因重组质粒。方法：根据ROP2基因已知序列，设计合成一对引物，用PCR方法从弓形虫RH株基因组DNA中扩增编码ROP2的基因片段，插入pGEX-4T-1质粒，转化大肠杆菌TG1感受态细胞，经酶切及PCR鉴定，而后进行测序。结果：ROP2基因体外扩增产物大小约1043bp，重组质粒经酶切及PCR鉴定表明获得正确重组子，测序结果与已知序列基本吻合。结论：在国内首次克隆了弓形虫ROP2基因，为下一步弓形虫诊断及疫苗研究打下了基础。     

人源性高血糖素原基因的克隆

目的 克隆人高血糖素原基因(proglucagon cDNA,PG cDNA),构建其真核表达质粒载体.方法 从人切除脑组织中提取总RNA,并分离mRNA,经过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出PG cDNA,并将其插入经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切的真核表达质粒载体pVITRO3中,构建重组质粒载体pVITRO3-PG cDNA.结果 经过限制性酶切鉴定和测序证明,PG cDNA全长543bp,编码181个氨基酸,并已插入到pVITRO3中.结论 成功获得了PG cDNA,构建了含PG cDNA 的真核表达质粒载体,为研究重组PG的功能奠定了基础.     

人可溶性TRAIL cDNA的克隆及新型原核表达载体的构建

目的 克隆人可溶性TRAIL（sTRAIL)cDNA并构建其原核表达载体，为制备新型抗癌分子创造条件。方法 提取HL－60细胞总RNA，经RT－PCR扩增编码人TRAIL114－281氨基酸残基的cDNA序列，将其克隆至pUC19进行序列测定，然后构建于新型原核表达载体pQE-80L中。结果 RT－PCR扩增得到了504bp的DNA片段，序列分析表明与GeneBank中报道的编码人TRAIL 114－281氨基酸残基的cDNA序列安全一致。结论 sTRAIL cDNA的克隆及其原核表达载体的构建，为进一步制备具有抗肿瘤活性的sTRAIL奠定了基础。     

人干细胞因子全长cDNA的基因扩增与克隆

目的 探讨人干细胞因子的结构与功能及其在真核细胞中的表达与调控的机制，首先克隆了人干细胞因子全长cDNA。方法 用RPMI1640，体积分数为10％的小牛血清培养HepG2细胞，抽提RNA，行RT－PCR，纯化PCR产物，与pGEM-T克隆载体连接，转化、铺板，筛选阳性克隆，酶切鉴定并进行序列测定。结果 通过酶切鉴定并进行序列测定，成功地获得了人干细胞因子全长cDNA的基因克隆。结论 人干细胞因子全长cDNA的基因克隆的构建成功，为其结构与功能的研究及其在真核细胞中的表达与调控的研究提供了一定的物质基础。     

人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因的克隆及基因序列分析

目的 克隆人肺腺癌细胞单羧酸转运泵基因编码序列并对此序列作同源性分析。方法 通过ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆人肺腺癌Ａ５４９细胞单羧酸转运泵基因ｄＤＮＡ编码序列,应用ＰＣＲ、四色荧光、双脱氧终止法测序;通过Ｇｅｅｂａｎｋ数据库应用分析软件对克隆基因序列进行同源性分析。结果 应用ＲＴ－ＰＣＲ方法克隆出人肺癌细胞的单羧酸转运泵基因;肺癌民人心肌细胞单羧酸转运泵基因第一亚型的ｃＤＮＡ编码序列具有主度同源性。结论