利用产气肠杆菌EAM-Z1转化合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究

利用产气肠杆菌EAM Z1转化合成5 氟尿苷,从筛选中间体稳定剂、底物流加、底物诱导、菌体冻融和石英砂研磨等方面研究转化率的影响因素,结果:(1)转化过程中加入40 mmol/L的硼砂可以将转化率达到75.56%,提高30.28%;加入10 mmol/L的甘氨酸可以使转化率达到61.92%,提高6.76%;(2)流加5 氟尿嘧啶可以将转化率提高到87.78%;(3)培养过程中加入尿苷诱导效果并不明显,尿苷浓度为 0.001 g/L时效果最佳,提高3.63%;(4)菌体冻融和石英砂研磨使转化率下降26%。     

利用嘧啶核苷磷酸化酶基因工程菌酶法合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究

研究酶法合成5-氟尿苷(5-FUR)的反应条件.利用嘧啶核苷磷酸化酶(Pyrimidine-nudeoside phosphorylase,PyPNase)基因工程菌大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a 合成5-氟尿苷(5-FUR),考察不同反应条件对转化率的影响;尝试不同反应体系对转化率的影响.结果:(1)最佳转化条件:菌体:0.5 WCG/L;UR:10 mmol/L;5-FU:45mmol/L;PBS:40 mmol/L;T:50℃;pH 7.4;t:60 min,转化率可达91.27%;(2)以Na2SO4溶液为溶剂,比以PBS溶液为溶剂的转化率略有提高.微生物酶法合成5-氟尿苷(5-FUR)的转化率较高,可考虑用于工业生产.     

酶法合成5-氟尿苷

采用产气肠杆菌ＣＰＵ７８５６变异株的游离细胞,利用其中的嘧啶核苷磷酸化酶通过碱基交换进行酶法合成目的物。试验以３０ｍｍｏｌ／Ｌ尿苷（ＵＲ）,３０ｍｍｏｌ／Ｌ５－氟尿嘧啶（ＦＵ）,３０ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液ＰＨ７．８）的混合物加入１０％的产气肠杆菌湿菌体反应３ｈ,底物ＵＲ的转化率可达５０％。     

2''''-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺改进

目的:改进2'-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺。方法:参照文献方法,以氟尿嘧啶为起始原料,经硅醚化、缩合、溴化、氢化和皂化等工艺合成2'-脱氧-5-氟尿苷,并对其关键步骤进行了改进。结果:该合成工艺对2'-脱氧-5-氟尿苷有较高的收率,总收率为34.31%。结论:工艺更趋于合理,操作条件更为简单,三废易于处理,适合于工业化生产。     

2＇-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺改进

目的：改进2＇-脱氧-5-氟尿苷的合成工艺。方法：参照文献方法,以氟尿嘧啶为起始原料,经硅醚化、缩合、溴化、氢化和皂化等工艺合成2＇-脱氧-5-氟尿苷,并对其关键步骤进行了改进。结果：该合成工艺对2＇-脱氧-5-氟尿苷有较高的收率,总收率为34.31%。结论：工艺更趋于合理,操作条件更为简单,三废易于处理,适合于工业化生产。     

抗肿瘤药物2''''-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的合成抗肿瘤药物2'-脱氧-5-氟尿苷.方法以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰澳酰化溴代得2'溴代-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2'-脱氧-3',5'-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2'-脱氧-5-氟尿苷.结果以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2'-脱氧-5-氟尿苷.结论本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备.     

抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷合成研究

目的:合成抗肿瘤药物2′-脱氧-5-氟尿苷。方法:以5-氟尿嘧啶核苷为原料,经丙酰溴酰化溴代得2′-溴代-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,然后氢化得产物2′-脱氧-3,′5′-O-二丙酰基-5-氟尿嘧啶核苷,最后经皂化合成2′-脱氧-5-氟尿苷。结果:以5-氟尿嘧啶核苷为起始原料经3步反应合成了2′-脱氧-5-氟尿苷。结论:本合成方法工艺简便,原料易得,条件温和,总收率为72.0%,适于工业制备。     

核苷磷酸化酶的产酶条件优化的研究

以鸟苷和5－氟尿嘧啶为底物,乙酰短杆菌菌体为酶源酶法合成5－氟尿苷,采用酵线浸膏培养基（酵母浸膏4．0％,葡萄糖0．4％,NaCl0.3%,pH7.0),较高的溶氧量,同时添加0．6％的豆油,培养12h,产酶量可提高30％。     

酶法合成2’—脱氧—5—氟尿苷

本文采用大肠杆菌核苷磷酸化酶，以5-氟尿嘧啶（FU）、2’-脱氧尿苷（dU)和磷酸盐为底物酶法合成2’-脱氧-5-氟尿苷，实验结果表明，含10mmol/L dU、30mmol/L FU、10-30mmol/L磷酸盐的混合物加入5%培养24h的大肠杆菌湿菌体于pH7.0反应3h，底物dU的转化率可达45.9%。     

重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种的稳定性考察

目的 研究基因工程菌E.coli TOP10F'在LB培养基中传代50代过程中菌种的稳定性.方法 以菌体和菌落的形态、质粒稳定性(ST)、质粒酶切图谱和重组嘧啶核苷磷酸化酶(PyNPase)的表达量和酶活性为指标进行考察,以评价工程菌的稳定性.结果 重组PyNPase工程菌在传代50代的过程中质粒稳定性高,传代10代内质粒稳定性(ST)为100%,其表达产物可达发酵液总蛋白的20%,其活性为1.18 U·ml-1,传代50代的菌体与菌落呈典型的大肠杆菌形态.结论 重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种稳定.     

枸杞提取液对球形红细菌生长的影响

目的考察枸杞提取液对球形红细菌生长的影响。方法在不同质量浓度的常规培养基中添加不同质量浓度的枸杞提取液,培养球形红细菌,比较球形红细菌的活菌数、生长曲线和脱氢酶活性,考察枸杞提取液对球形红细菌生长的影响。结果在培养基中添加枸杞提取液可缩短球形红细菌生长延迟期,使其提前进入指数期和稳定期;当质量浓度为12.5 g/L时,球形红细菌活菌数增加到之前的1.5倍,使球形红细菌脱氢酶活性提高到之前的3.3倍。结论培养基中添加一定量的枸杞提取液可以促进球形红细菌的生长,使球形红细菌生长周期缩短、活力提高。     

不同诱导子对黄芩不定根生长及黄芩苷累积的影响

目的研究蔗糖、茉莉酸甲酯和水杨酸3种诱导子对黄芩不定根生长及黄芩苷累积的影响。方法向黄芩不定根悬浮培养液中添加不同种类及浓度的诱导子,观察不定根生长情况并测量不定根的生物量及黄芩苷的含量。结果培养基中蔗糖浓度为50 g·L^-1时可使不定根生物量达到对照组（30 g·L^-1）的1.62倍,黄芩苷的含量达到对照组的1.71倍为20.81 mg·g^-1。加入44.860 mg·L^-1茉莉酸甲酯可使黄芩苷的含量为对照组的3.22倍,达到最高39.14 mg·g^-1,但却大大影响黄芩不定根的产量。低浓度水杨酸对不定根生长及黄芩苷累积均有利。当其浓度为4 mg·L^-1时,不定根的生物量及黄芩苷含量均达到最大。结论在黄芩不定根悬浮培养中加入适量的蔗糖、茉莉酸甲酯及水杨酸,对不定根的生长及黄芩苷的合成有一定的促进作用。     

阿莫西林胶囊微生物检查方法学研究

目的 为了建立有效、操作简单、成本低廉的阿莫西林胶囊微生物限度和控制菌检查方法。方法 采用平皿法、稀释法、薄膜过滤法、中和法共14种方法对阿莫西林胶囊进行微生物限度方法适用性研究，比较了稀释法、薄膜过滤法和中和法去除阿莫西林胶囊抑菌性的能力；考察了聚山梨酯80、卵磷脂和β-内酰胺酶作为中和剂去除其抑菌性的能力；并考察了将中和剂添加于稀释剂、冲洗液、培养基中去除抑菌性的能力。采用直接接种法、中和法共7种方法进行了控制菌方法适用性研究。结果 建立阿莫西林胶囊微生物限度和控制菌检查方法。结论 可采用在稀释剂TSB中添加1115万单位β-内酰胺酶的方法对阿莫西林胶囊进行需氧菌总数检查。     

正交设计法研究补肾壮骨胶囊醇提工艺

目的 优选补肾壮骨胶囊醇提工艺的最佳条件。方法 用正交设计法以补骨脂素含量、异补骨脂素的含量为指标对醇提工艺进行筛选。结果 优选出补肾壮骨胶囊醇提工艺，重复试验结果满意。结论 补肾壮骨胶囊醇提工艺的最佳条件为A1B2C2D2，即加10倍量60％乙醇，回流提取2次，每次提取60min，     

提高他克莫司胶囊含量均一性的工艺研究

目的研究提高他克莫司胶囊含量均一性的工艺。方法在普通湿法制粒机增设弯管式定位加料系统控制加料位置和流速、选用合适的辅料与工艺参数制得他克莫司胶囊,用HPLC测定含量。结果他克莫司胶囊含量均一性良好,中间体粉末RSD<2.0%,含量均匀度A+1.80S<15,溶出度>85%。结论使用弯管定位加料,选用乳糖G200及合适的工艺参数,制备的他克莫司胶囊含量均一,适合产业化生产。     

过磷酸钙生产中掺入磷石膏的方法

介绍在过磷酸钙生产中,综合利用饲料级磷酸氢钙配套的磷酸装置副产磷石膏的几种方法.将磷石膏直接掺入过磷酸钙一级品中,或者直接掺入过磷酸钙的鲜肥中,不会影响产品的质量、转化率、物性.将磷石膏与磷矿粉制浆后生产过磷酸钙,其产品转化率有所降低,而且会增加球磨机和混合器的生产负荷,降低产量.     

Kinetic method for studying the antiradical activity of medicinal plant extracts

A kinetic method for studying the activity of medicinal plant extracts with respect to the stable 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) radical is developed. The initial rate of DPPH decay under standard conditions is suggested and theoretically justified as a kinetic parameter to compare the antiradical activity of extracts. A 10- to 150-fold decrease of the DPPH reaction rate with antioxidants (AO) of plant extracts in aqueous EtOH is achieved by adding acids to the reaction medium. The reaction at the optimum acid concentration decreases with increasing acid strength. Using this approach, the influence of organic acids extracted from the plant material on the results can be eliminated by adding stronger acids. The noise level on the kinetic curves and, therefore, in the measurement error, is decreased by smoothing the data using a general equation of the kinetic curve obtained using the Microcal Origin 7.0 and SYSTAT TableCurve 2D 5.01 software. It is found that the extent of DPPH conversion in the interval from 0 to 60% after the first 30 min depends linearly on the initial AO concentration.     

Glucuronidation in rat intestinal epithelial cells

Glucuronidation of 1-naphthol was studied in mucosal cells isolated from the rat intestine. Glucuronidation was directly dependent on the supply of extracellular carbohydrates. Basal glucuronidation (ca. 0.3 nmoles/min · mg cell protein) was increased 2- to 3-fold by adding glucose or fructose to the incubation medium. Saturation of glucuroniation was achieved by adding 0.3 mM glucose, while saturation by fructose was not reached at concentrations below 2 mM. No carbohydrate reserves able to support glucuronidation appear to be present in intestinal cells, since no difference in glucuronidation was observed between cells prepared from fasted (18 or 42 h) and control rats. Glucuronidation was decreased by adding d-galactosamine to the incubation medium, but only when extracellular glucose was present. Various chemicals which are known to inhibit glucuronidation in hepatocytes (ethanol, diethyl ether, sorbitol) did not influence the glucuronidation of 1-naphthol in isolated intestinal cells. Only when ethanol was added to mucosal cells in the absence of extracellular glucose was a small decrease in glucuronidation observed.     

选用优质明胶改善软胶囊的崩解

目的：解决软胶囊崩解迟缓、崩解不合格的问题。方法：从更换明胶、添加加速溶出辅料、抗氧剂三方面改进囊皮，应用胶片溶解速率法筛选囊皮处方，并进行软胶囊留样考察。结果：加入L-半胱氨酸、柠檬酸，选用优质明胶均有明显的增溶效果，选用优质明胶可解决软胶囊崩解迟缓、崩解不合格的问题。结论：不同厂家生产的明胶质量存在较大差异，选用优质明胶是改善软胶囊崩解迟缓、崩解不合格问题的关键所在。