PDCD4参与异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡的实验研究

目的研究程序性细胞死亡4 (PDCD4)在异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡中的作用。方法宫颈癌细胞Si Ha经异甘草素处理以后,MTT检测细胞增殖,计算半数抑制浓度,Western blot和qRT-PCR检测细胞中PDCD4蛋白和mRNA水平。在Si Ha细胞中转染PDCD4过表达载体和阴性对照载体,用Western blot和qRT-PCR检测细胞中PDCD4表达变化。用半数抑制浓度的异甘草素处理过表达PDCD4的Si Ha细胞,MTT检测细胞增殖能力,克隆形成实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3 (Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果异甘草素抑制宫颈癌细胞增殖,其半数抑制浓度为40μmol/L。40μmol/L异甘草素处理宫颈癌细胞,细胞中PDCD4 mRNA和蛋白表达水平升高。转染PDCD4过表达载体的宫颈癌细胞中PDCD4 mRNA和蛋白水平升高。过表达PDCD4或者异甘草素处理均可以降低宫颈癌细胞增殖和克隆能力,促进宫颈癌细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白表达,并且异甘草素处理过表达PDCD4宫颈癌细胞对细胞增殖、克隆能力的抑制作用更强,细胞凋亡和细胞中Cleaved Caspase-3蛋白水平更高。结论 PDCD4参与异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡过程,PDCD4高表达能够协同异甘草素诱导宫颈癌细胞凋亡。     

卵巢癌程序性细胞凋亡因子4的临床意义及对预后的评估

目的探讨卵巢癌患者程序性细胞凋亡因子4(programmed cell death factor 4,PDCD 4)检测的临床意义及对疾病的预后评估。方法选取2013年1月至2015年1月在西南医科大学附属医院妇产科行卵巢癌手术的癌组织标本67例,并和距离癌组织边缘2 cm以上的正常卵巢组织18例为对照,免疫组化法检测卵巢癌组织和正常卵巢组织的PDCD 4蛋白的表达差异,探讨PDCD 4蛋白表达量和临床病理特征之间的相关性,并通过Log-rank检验比较PDCD 4蛋白高表达和低表达患者之间的生存差别。结果 67例卵巢癌组织样本中,28.36%表现为PDCD 4高表达,71.64%低表达,卵巢癌组织中PDCD 4的高表达率明显高于正常卵巢组织(P0.05)。年龄、FIGO分期、发病部位对PDCD 4蛋白的表达均无显著影响(P0.05),而癌组织的分化程度显著影响PDCD 4蛋白的表达(P0.05)。患者年龄、发病部位、分化程度对卵巢癌患者术后2年生存率无明显影响(P0.05),而FIGO分期和PDCD 4蛋白的表达量则显著影响患者2年生存率(P0.05)。PDCD 4蛋白高表达的卵巢癌患者的2年生存率为68.42%,PDCD 4蛋白低表达组为37.50%,两组患者2年生存率差异有统计学意义(P0.05)。结论 PDCD 4作为卵巢癌组织中的一种抑癌基因,可能对卵巢癌的早期诊断具有一定的意义,PDCD 4蛋白的表达水平可能对卵巢癌患者的预后评估存在一定的价值。     

凋亡相关基因PDCD5与三氧化二砷诱导卵巢癌细胞凋亡的相关性研究

目的探讨凋亡相关基因人程序化死亡分子5（PDCD5）在三氧化二砷（As2O3）诱导卵巢癌细胞凋亡过程中发挥的作用。方法流式细胞仪检测，并在荧光显微镜下观察PDCD5在As2O3诱导卵巢癌细胞凋亡前后的表达状况。结果PDCD5在卵巢癌细胞系中表达，经As2O3孵育后PDCD5的表达强度增加，其增加量与As2O3的剂量有关。结论凋亡促进剂PDCD5在As2O3诱导的卵巢癌细胞凋亡过程中发挥重要作用。     

As2O3对NB4细胞增殖及凋亡的影响

目的研究不同浓度的三氧化二砷（As2O3）对急性粒细胞白血病细胞株NB4（APLM3）凋亡及细胞周期的影响。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法测As2O3对NB4的细胞毒活性，流式细胞仪AnnexinVFITC-PI检测细胞凋亡率，溴化丙碇（PI）染色法检测细胞周期。结果1～8μmol／LAs2O3能显著抑制NB4细胞增殖，且这些变化呈明显的时间和浓度依赖关系（时间一剂量效应）。2～8μmol／LAs2O3能显著诱导NIM细胞凋亡，处理时间为12h，其早期凋亡率和总凋亡率均与剂量呈线性正相关；处理时间为24h，其早期凋亡率、中晚期凋亡率和总凋亡率与剂量呈线性正相关；As2O3处理时间为36h和48hNB4细胞以中晚期调亡为主。流式细胞检测表明，不同浓度的As2O3均使NB4细胞周期阻滞在G2／M期。结论As2O3能抑制人白血病NB4细胞增殖，其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖使细胞受阻于G2／M期。其诱导凋亡作用具有时间和浓度依赖关系。     

薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及机制研究

目的 研究薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用不同浓度薏苡仁油作用于卵巢癌SKOV3细胞,MTT法观察薏苡仁油对SKOV3细胞存活率的影响.采用Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色、DNA Ladder检测、流式细胞仪检测薏苡仁油对SKOV3细胞凋亡的影响.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Capase 3、8、9的表达情况.结果 与对照组相比,400μg/mL和500μg/mL薏苡仁油浓度可在处理后24 h、48 h和72 h显著降低SKOV3细胞存活率(t值4.635～5.231,P<0.05),其作用随着时间的延长而增加.薏苡仁油低浓度50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L作用于卵巢癌SKOV3细胞48h诱导凋亡效果较好.薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色均可见典型的凋亡小体.不同浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,与对照组相比较,细胞凋亡均显著增多(t值分别为2.536、3.012、4.908,P<0.05),其中200μg/m L组细胞总凋亡率高达(27.10±5.42)％.与对照组相比较,薏苡仁油浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL作用于SKOV3细胞48h后,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达均显著增高(t值2.436～5.709,P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(t值2.357～4.304,P<0.05).结论 薏苡仁油可诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡,其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3、8、9的表达水平有关.薏苡仁油有可能抑制卵巢癌细胞的扩散、转移.     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

p38MAPK信号转导通路与细胞凋亡研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen2activated protein kinase, MAPK)级联是细胞内广泛存在的丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,是将细胞质的信号传递至细胞核并引起细胞核发生变化的重要物质.     

Caspase和JNK/SAPK、p38 MAPK与细胞凋亡

Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器,在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是真核生物信号传递网络中的重要途径之一,其中JNK/SAPK和p38 MAPK信号转导通路在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用。本文主要综述了Caspase和JNK/SAPK、p38 MAPK在细胞凋亡中的关系,并对其可能的作用机制进行简要的阐述。     

茶多酚对皮肤角朊细胞生长与凋亡的影响

为探讨茶叶中的重要活性成分茶多酚对皮肤角朊细胞的生长周期动力学和对细胞凋亡的影响。在原代培养大鼠皮肤角朊细胞基础上，根据培养基中乳酸脱氢酶释放情况确定的茶多酚浓度范围，采用细胞计数法和流式细胞仪研究角朊细胞的生长，周期动力学和凋亡发生率。结果发现，在一定浓度范围内（０．１－１．５ｇ／Ｌ）茶多酚可以促进角朊细胞生长。在细胞周期动力学上，表现为促进细胞从Ｇ１期和静止期（Ｇ０）转向降到１７．９７％。表明     

对硫磷对PEO4卵巢癌细胞凋亡的影响

目的:探讨有机磷农药对硫磷对PEO4卵巢癌细胞凋亡的影响。方法:应用耗尽细胞内雌激素的常规传代培养的PEO4细胞,采用流式细胞仪观察细胞周期分布及其凋亡情况。结果:雌激素耗尽可诱导PEO4细胞发生凋亡。1×10-6mol/L对硫磷处理细胞72小时显著抑制细胞的凋亡作用并可促进细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期。结论:有机磷农药污染可能与近年来卵巢癌发病率升高有关。     

002 Caspase和JNK／SAPK、p38 MAPK与细胞凋亡

Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器，在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，其中JNK／SAPK和p38 MAPK信号转导通路在炎症与细胞凋亡等应激反应中发挥重要作用。本文主要综述了Caspase和JNK／SAPK、p38 MAPK在细胞凋亡中的关系，并对其可能的作用机制进行简要的阐述。     

4'-甲醚-黄岑素对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响

目的探讨4'-甲醚-黄岑素(4'-MS)对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响。方法采用流式细胞术、实时定量PCR法及RT-PCR技术体外观察4'-MS对JAR细胞的影响。结果流式细胞术分析,加药组细胞凋亡率随4'-MS浓度的增加而逐渐升高,G2/M期细胞比例显著升高。20、40 mg/ml 4'-MS作用48 h后c-myc及h TERT mRNA的表达量明显低于对照组(P0.01)。RT-PCR结果显示,20 mg/ml和40 mg/ml 4'-MS作用后,人绒毛膜癌JAR细胞中Survivin mRNA表达显著下降,而Caspase 9、Caspase 3及p38 MAPK mRNA表达显著上升(P0.05)。结论绒毛膜癌JAR细胞在4-MS的作用下发生凋亡的机制与降低c-myc及h TERT mRNA的表达、上调Caspase 9表达、Caspase 3表达、激活p38 MAPK信号通路及抑制Survivin表达相关。     

p38MAPK及Caspase3在LNG诱导人子宫肌瘤细胞凋亡中的作用

目的 探讨p38MAPK及Caspase3在高浓度左炔诺孕酮(LNG)诱导体外培养人子宫肌瘤细胞(UtLMC)凋亡过程中的作用.方法 原代培养UtLMC传代后,加入不同浓度LNG,流式细胞术测定其对细胞凋亡率的影响,并以AO/EB双染法区分早、晚期凋亡细胞和坏死细胞;Western blot测定p38MAPK、Caspase3在LNG诱导细胞凋亡中的活性变化.结果 流式细胞术分析,加药组细胞凋亡率随LNG浓度的增加而逐渐升高,与对照组相比有显著性差异(t值分别为8.458、25.582、58.415、127.390,均P<0.05);AO/EB双染后发现,对照组无明显凋亡细胞,10μg/mL LNG作用UtLMC后,早期凋亡细胞多于阴性对照组,随着LNG剂量的增加,晚期凋亡细胞也逐渐增多,核浓聚、偏位,被染成桔红色;在10μg/mL以上LNG诱导UtLMC凋亡中,p38MAPK磷酸化水平升高(t值分别为96.278、165.878,均P<0.05),Caspase3被明显激活(t值分别为31.527、53.190,均P<0.05).结论 高浓度LNG诱导UtLMC凋亡的机制涉及多途径、多靶点,可能与直接激活p38MAPK信号通路,诱导Caspase3活化有关.     

p38MAPK信号通路抑制剂对TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路抑制剂对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的乳腺癌细胞凋亡的影响。方法 TNF-α处理乳腺癌细胞MDA-MB-231,Western blot检测细胞中p38MAPK信号通路激活情况。p38MAPK信号通路阻断剂SB203580和TNF-α同时处理MDA-MB-231细胞,流式细胞术检测细胞凋亡,二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(DCFH-DA)法检测细胞中活性氧(ROS)水平,Western blot检测细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、Bid、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。结果 TNF-α作用后的MDA-MB-231细胞中p-p38MAPK/p38MAPK蛋白水平由(0. 25±0. 03)升高至(0. 80±0. 07),两者比较差异有统计学意义(P<0. 05)。TNF-α处理后MDA-MB-231细胞凋亡率由(2. 28±0. 47)%升高至(19. 56±1. 33)%,SB203580处理后细胞凋亡率降低至(12. 14±1. 12)%。TNF-α处理后细胞中Bax和Bid水平明显升高,ROS水平升高,而SB203580处理后细胞中Bax、Bid水平和ROS水平有所降低,与对照MDA-MB-231细胞相比差异有统计学意义(P<0. 05)。结论 TNF-α诱导Bid、Bax介导的乳腺癌细胞凋亡,提高细胞中ROS水平,p38MAPK信号通路抑制剂可以减弱TNF-α的上述作用。     

TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌细胞凋亡影响的研究

目的:探讨TRAIL联合紫杉醇对卵巢癌3AO细胞株凋亡的影响,以进一步研究其诱导细胞凋亡的原理。方法:应用MTT法检测TRAIL和紫杉醇作用组的抑制率,并以流式细胞仪检测各组凋亡率。结果:亚毒剂量的TRAIL、紫杉醇及联合作用组致卵巢癌3AO细胞凋亡率分别为17.6%、16.1%、64.3%。单独应用组与联合应用组之间存在显著性差异(P<0.01)。结论:TRAIL在诱导卵巢癌细胞凋亡的同时,也显著提高了其对紫杉醇(taxol)的化疗敏感性。     

光动力疗法对人卵巢癌细胞系Skov3凋亡的影响

目的 通过对经光动力疗法(PDT)处理后卵巢癌细胞系Skov3发生凋亡情况的研究,探讨光动力学疗法对体外培养的人卵巢癌细胞的影响. 方法 采用不同能最激光对不同浓度光敏剂(5-ALA)处理过的卵巢癌细胞系(Skov3)进行照射,48 h后应用光镜、电镜进行形态学观察,同时利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况. 结果 倒置显微镜下经光动力学处理后Skov3细胞体积缩小,细胞变形、皱缩,细胞核浓缩、深染,染色质密集成斑块状,细胞间失去彼此连接,透射电镜下可见致密的染色质沿核膜下聚集,有凋亡小体形成.流式细胞仪定量分析最大细胞凋亡率为60.5%. 结论 PDT通过诱导捅亡对体外培养的Skov3细胞产生杀伤作用.     

Caspase-3和p38MAPK在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中的作用

目的确定Caspase-3和p38MAPK在大气污染物甲基环戊二烯羰基锰（MMT）诱导人前列腺细胞系PC-3M凋亡过程中的作用。方法1mmol／LMMT诱导PC-3M细胞后，化学发光法检测细胞Caspase-3活力的变化，MTS法检测Caspase-3特异性多肽抑制剂Z-DEVD-FMK对细胞存活率的影响，Western blot法检测p38MAPK在细胞凋亡过程中的活性变化，MTS及化学发光法检测p38MAPK抑制剂SB203580对细胞凋亡率和Caspase-3活力的影响。结果在MMT诱导的PC-3M细胞凋亡中，Caspase-3被明显激活差异有统计学意义（P〈0．01）；Z-DEVD-FMK可明显提高PC-3M细胞存活率差异有统计学意义（P〈0．01）；p38MAPK磷酸化程度明显升高；SB203580可抑制细胞凋亡差异有统计学意义（P〈0．01），同时使Caspase-3活力下降差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Caspase-3及p38MAPK参与了MMT诱导的PC-3M细胞凋亡。     

敲减CCDC132表达对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响

目的 分析敲减CCDC132表达对宫颈癌HeLa细胞生长和凋亡的影响.方法 以CCDC132-shRNA(shCCDC132组)和阴性对照Ctrl-shRNA(shCtrl组)慢病毒感染人宫颈癌HeLa细胞后,采用荧光显微镜观察HeLa细胞感染效率,应用实时荧光定量PCR检测HeLa细胞中CCDC132 mRNA表达水...     

DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗对晚期卵巢癌患者疗效及血清CD133、DDX4水平的影响

目的:探讨DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌的临床疗效以及对患者血清CD133、DDX4水平的影响。方法:将60例晚期卵巢癌患者随机分为观察组(30例)和对照组(30例),对照组仅接受常规化疗,观察组采用化疗联合DC-CIK细胞免疫治疗。比较两组患者的免疫功能、治疗效果、不良反应以及血清CD133、DDX4水平在治疗前后的变化情况。结果:观察组的客观缓解率(80.0%)高于对照组(50.0%);在治疗后和6个月随访时观察组CD3+、CD3+CD4+、CD4+/CD8+以及NK细胞的比值均高于对照组,CD4+CD25+、CD133、DDX4水平均低于对照组;且治疗前、治疗后、6个月随访后自身比较CD3+CD4+、CD4+/CD8+、NK细胞比值均明显升高,CD133、DDX4水平均明显降低(均P<0.05);治疗后与6个月随访后免疫功能指标两组无差异(P>0.05),骨髓抑制和肝功能损害的发生率观察组低于对照组(P<0.05)。结论:应用DC-CIK细胞免疫治疗联合化疗治疗晚期卵巢癌患者可提高临床治疗效果,增强患者免疫能力,更大幅度降低血清CD133、DDX4水平,减少不良反应的发生,值得临床探索应用。     

人参皂苷Rh2联合顺铂对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rh2联合顺铂对于人卵巢癌细胞株SKOV-3的影响。方法:采用MTT比色法检测人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3细胞株增殖的影响,利用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡情况,并计算细胞平均凋亡率,利用Western-blot技术观察SKOV-3细胞内HER-2蛋白的表达。结果:①Rh2与DDP联合应用分别作用于SKOV-3卵巢癌细胞株,单独应用DDP 350μmol/L和600μmol/L IC50降为DDP 250μmol/L和300μmol/L。②流式细胞术检测显示,DDP+Rh2组凋亡率在SKOV-3细胞系中为32.2%,SKOV-3细胞被阻止于G1期,在SKOV-3 DDP细胞中为12.5%,均显著高于仅应用DDP组细胞(P<0.05),SKOV-3 DDP细胞亦被阻止于G1期。③Western blotting结果显示,SKOV-3细胞中DDP+Rh2组HER-2蛋白表达较对照组、DDP组、Rh2组显著降低(P<0.05)。结论:人参皂苷Rh2与DDP联合应用对SKOV-3卵巢癌细胞株有促凋亡作用,并改善卵巢癌细胞株SKOV-3 DDP对DDP的敏感性。