卵巢癌细胞系OVCAR-3中肿瘤干细胞样细胞的分离与鉴定

目的:分选卵巢癌细胞系OVCAR-3中ABCG2+细胞,并鉴定其肿瘤干细胞特征。方法:应用流式细胞仪检测、分选OVCAR-3中ABCG2+细胞,并通过克隆形成试验、分化能力检测及化疗敏感性分析等试验比较ABCG2+及ABCG2-细胞增殖能力、自我更新及分化能力以及耐药性,并通过RT-PCR检测其干性基因表达量。结果:卵巢癌细胞系OVCAR-3中存在少量ABCG2+细胞,其比例为12.2%。ABCG2+及ABCG2-细胞的克隆形成率分别为38.25%±5.46%及14.35%±3.21%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);ABCG2+及ABCG2-细胞顺铂的IC50值分别为(25.1±5.7)μmol/L及(6.4±3.4)μmol/L,紫杉醇的IC50值分别为(7.28±1.25)μmol/L及(2.14±0.68)μmol/L,两者顺铂及紫杉醇IC50值差异均有统计学意义(P<0.05);ABCG2+细胞中Oct4及Nanog基因表达量分别是ABCG2-细胞的2.01±0.45倍及4.56±0.74倍,两者Oct4及Nanog基因表达量差异有统计学意义(P<0.05);分别贴壁培养ABCG2+及ABCG2-细胞,ABCG2+细胞群中ABCG2+细胞比例为10.8%,与分选培养前比例相似(P>0.05);ABCG2-细胞群中ABCG2+细胞比例为4.8%,低于分选培养前比例(P<0.05)。结论:卵巢癌细胞系OVCAR-3中ABCG2+细胞所占比例较少,较ABCG2-细胞具有更高的增殖能力、自我更新和分化潜能以及耐药性,并高表达干性基因,符合肿瘤干细胞的基本特征。研究分选的ABCG2+细胞可被视为卵巢癌干细胞样细胞,是研究卵巢癌干细胞较为理想的细胞模型。     

肿瘤干细胞与卵巢癌研究进展

近年肿瘤干细胞理论及其相关研究引起关注。该理论认为,肿瘤干细胞是恶性肿瘤发生、耐药、复发及转移的根源,并最终导致恶性肿瘤靶向治疗失败,难以根治。卵巢癌治疗的最大障碍是肿瘤细胞耐药性的产生,肿瘤干细胞的研究对解决卵巢癌等恶性肿瘤的高耐药、复发难题有重要意义。目前,卵巢癌干细胞已经成功分离鉴定,但此方面的研究尚处于开始阶段。从肿瘤干细胞角度对卵巢癌干细胞的性质及分离鉴定方法综述。     

肿瘤干细胞与卵巢癌研究进展

近年肿瘤干细胞理论及其相关研究引起关注。该理论认为,肿瘤干细胞是恶性肿瘤发生、耐药、复发及转移的根源,并最终导致恶性肿瘤靶向治疗失败,难以根治。卵巢癌治疗的最大障碍是肿瘤细胞耐药性的产生,肿瘤干细胞的研究对解决卵巢癌等恶性肿瘤的高耐药、复发难题有重要意义。目前,卵巢癌干细胞已经成功分离鉴定,但此方面的研究尚处于开始阶段。从肿瘤干细胞角度对卵巢癌干细胞的性质及分离鉴定方法综述。     

肿瘤干细胞与卵巢癌的复发及耐药

卵巢癌复发率高与耐药性强以及缺乏个体化治疗的有效预测因子,是其治疗的瓶颈。肿瘤干细胞是存在于肿瘤细胞群体中的少数干细胞样癌细胞亚群,能够凭借正常干细胞所赋予的"自我更新"能力和处于静止期的特性、DNA损伤的修复能力以及高表达膜转运蛋白、逃脱药物的杀伤作用,从而在化疗后导致肿瘤的复发、转移和耐药。就肿瘤干细胞与卵巢癌的复发与耐药方面的相关性研究进行综述。     

肿瘤干细胞与卵巢癌的复发及耐药

卵巢癌复发率高与耐药性强以及缺乏个体化治疗的有效预测因子,是其治疗的瓶颈.肿瘤干细胞是存在于肿瘤细胞群体中的少数干细胞样癌细胞亚群,能够凭借正常干细胞所赋予的"自我更新"能力和处于静止期的特性、DNA损伤的修复能力以及高表达膜转运蛋白、逃脱药物的杀伤作用,从而在化疗后导致肿瘤的复发、转移和耐药.就肿瘤干细胞与卵巢癌的复发与耐药方面的相关性研究进行综述.     

人宫颈癌干细胞的分离鉴定

目的:通过分选人宫颈癌细胞中的侧群细胞验证其肿瘤干细胞特性。方法:取16例行宫颈鳞癌切除的手术标本进行宫颈癌细胞原代培养,流式细胞仪分选侧群细胞(Side Population,SP),对比SP细胞和非SP细胞(Non Side Population,Non-SP)的体外自我更新能力和肿瘤形成能力。结果:在原代培养的16株宫颈癌细胞中均分选出SP细胞,比例约占(1.67±0.94)%。SP细胞的克隆形成能力显著高于NSP细胞,SP细胞在裸鼠肿瘤形成能力显著高于NSP细胞。结论:人宫颈癌侧群细胞具有肿瘤干细胞特性,为宫颈癌干细胞的研究提供了简单、有效的分离方法。     

卵巢癌肿瘤干细胞相关研究

<正>卵巢癌死亡率位居妇科恶性肿瘤之首。高复发率和高耐药率是主要原因。肿瘤干细胞学说认为肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSC)是存在于肿瘤内的少数细胞,这些细胞具有无限增殖、自我更新及多向分     

卵巢癌肿瘤干细胞及其标志物与卵巢癌靶向治疗的研究进展

卵巢癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,因其隐匿于盆腔深部,大部分卵巢癌发现已是晚期,这给卵巢癌的治疗和预后带来了很大的挑战。随着对卵巢癌研究的深入,进一步发现卵巢癌的早期诊断和治疗有赖于肿瘤干细胞标志物的发现和识别,这对于卵巢癌的靶向治疗有着深远的意义。本文就目前国内外对卵巢癌肿瘤干细胞的研究,从肿瘤干细胞(CSC)起源,卵巢癌干细胞与卵巢癌的关系、并对卵巢癌干细胞标志物与卵巢癌靶向治疗的相关进展进行综述。     

肿瘤干细胞在卵巢癌治疗中的进展

卵巢恶性肿瘤是死亡率最高的妇科恶性肿瘤。尽管标准化的治疗方法（包括理想的肿瘤细胞减灭术和以铂类／紫杉醇为基础的化疗方案）使得70％的患者得到一定程度的临床缓解,但绝大多数患者仍然会在2年内复发并出现耐药。肿瘤干细胞理论认为,肿瘤组织中有小部分细胞群体具有极强的增殖能力,它们具有类似正常干细胞的生物学特性,能通过自我更新和分化来高频度地启动肿瘤的发生发展,它们是导致肿瘤发生、发展、转移和耐药的主要细胞,是肿瘤复发的根源。该文将概述近几年卵巢癌干细胞的各项研究,包括卵巢癌干细胞的分离及其耐药机制、各种治疗方法等。     

整合素β1阳性卵巢癌细胞具干细胞样属性和间质属性分析

目的:检测和分选人卵巢癌细胞系SKOV3及原代卵巢癌细胞中整合素β1(ITGβ1)阳性细胞,鉴定其是否具有肿瘤干细胞生物学特性。方法:从临床卵巢癌患者腹水中成功分离卵巢癌细胞后,采用流式细胞技术检测SKOV3及原代卵巢癌细胞中ITGβ1和干细胞标志CD133的阳性率;流式分选得到ITGβ1(+)和ITGβ1(-)两群细胞后,采用qRT-PCR比较卵巢癌干细胞相关基因(CD44、CD133、ALDH1、OCT)及上皮间质化(EMT)分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)表达情况,采用悬浮成球试验观察两者干细胞潜能。最后通过免疫缺陷小鼠体内的有限稀释成瘤试验对比ITGβ1(+)/ITGβ1(-)细胞的成瘤能力、自我更新和自我分化能力。结果:SKOV3细胞中可检测到少量的CD133(+)细胞,其比率为(0.91±0.12)%,腹水原代细胞中CD133(+)比率为(2.38±0.34)%;ITGβ1检测SKOV3中ITGβ1(+)比率为(1.95±0.24)%,原代卵巢癌细胞中含量为(3.78±0.28)%;流式分选得到的ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞表达更高的干细胞基因(CD133、CD44、ALDH1、OCT4)(P<0.05)、更低的上皮标志E-cadherin(P<0.05)和更高的间质标志(N-cadherin、Vimentine、MMP2、MMP9)(P<0.05);悬浮成球试验结果显示:SKOV3细胞和原代卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞较ITGβ1(-)细胞成球数量明显增多,球体体积也明显大于ITGβ1(-)细胞(P<0.05);体内成瘤试验结果显示:在SKOV3细胞系或原代卵巢癌细胞中102个ITGβ1(+)细胞即可成瘤,成瘤比率分别为1/5和2/5,成瘤时间分别为64天和54天;而至少需要104个ITGβ1(-)细胞SKOV3细胞系才有成瘤现象,至少需要103个ITGβ(-)细胞原代卵巢癌细胞才有成瘤现象,成瘤比率均为1/5,成瘤时间分别为78天和68天;ITGβ1(+)细胞的成瘤能力至少为ITGβ1(-)细胞的100倍。结论:卵巢癌细胞中ITGβ1(+)细胞高表达间质属性和干细胞基因,具备自我分化、自我更新和体内成瘤能力,ITGβ1(+)表型可考虑作为分选卵巢癌干细胞的新方法。     

Co-expressed functional module-related genes in ovarian cancer stem cells represent novel prognostic biomarkers in ovarian cancer

ABSTRACT

Ovarian cancer is the leading cause of death from gynecologic malignancies. Cancer stem cells (CSC) seem to play a crucial role in tumor metastasis, recurrence, and chemoresistance. Therefore, CSCs offer significant potential for developing therapeutic targets and to understand tumor recurrence and chemoresistance mechanisms. In the present study, our aim was the identification of the gene group in ovarian CSCs (O-CSCs) and the potential of the resultant gene group in ovarian cancer prognosis. Two different microarray data sets were analyzed by comparing gene expression levels between O-CSCs and cancer samples. The O-CSC co-expression network was reconstructed and its modules were identified. According to the analysis results, 74 mutual DEGs were identified. The O-CSC-specific co-expression network included 32 nodes and 95 edges (network density: 19%), while the co-expression network in cancer samples was reconstructed with 74 nodes and 1066 edges (network density: 39%). Understanding of the molecular mechanism and signatures of O-CSCs should provide valuable insight into chemotherapy resistance and recurrence of ovarian tumors. A highly connected 12 gene module in O-CSC samples of BAMB1, NFKB12, EZR, TNFAIP3, C1orf86, PMAIP1, GEM, KHDRBS3, FILIP1, FGFR2, TGFBR3 and PEG10, (network density: 67%) was identified. Prognostic performance of these genes was evaluated independently using six ovarian cancer datasets (n = 1933 patient samples) via survival analysis. These co-expressed genes were determined as prognostic targets in ovarian cancer. Through literature search validation, five genes (C1orf86, PMAIP1, FILIP1, NFKB12 and PEG10) suggested as novel molecular targets in ovarian cancer. The presented prognostic biomarkers here provide a resource for the understanding of tumor recurrence and chemoresistance and may facilitate critical research directions and development of new prognostic and therapeutic strategies for ovarian cancer.     

The role of hematopoietic stem cells in the treatment of ovarian cancer

In recent years hematopoietic stem cells (HSC) have been the object of new research efforts and scientific advances. Therapeutic strategies have been set up using HSC for the treatment of solid tumors such as ovarian cancer. In this context different approaches have been proposed and clinically investigated. The "autologous" approach refers to the use of HSC as hematologic support to high-dose chemotherapy regimens, and to the use of HSC as an abundant source of dendritic cells for cancer vaccination protocols. Our institution has developed a long-term experience in high-dose chemotherapy with autologous HSC transplantation as first-line treatment of advanced ovarian cancer, and in the use of cytokines both for the HSC collection and for the post-transplantation hematopoietic recovery. Moreover, the "allogeneic" approach with HSC consists of the allogeneic transplantation with both myeloablative/standard or nonmyeloablative/reduced conditioning regimens, which has been proposed as a new adoptive immunotherapeutic treatment for different nonhematologic malignancies. Perspectives in the use of HSC in oncology comprise the possibility of an HSC ex vivo expansion, the use of umbilical cord blood HSC, and the development of future HSC-based gene-therapy programs.     

Antiproliferation effect of commercially brewed coffees on human ovarian cancer cells in vitro

Numerous scientific studies have examined the relationship between coffee consumption and an array of medical conditions, including cancer, and yet the direct effect of commercially brewed coffee on cancer cells has not been evaluated. The purpose of this study was to evaluate the antiproliferation effect of 4 different regular and decaffeinated coffee brews and 3 of coffee's bioactive ingredients-caffeine, chlorogenic acids, and caffeic acid-on 2 human ovarian cancer cell lines alone and in combination with cisplatin (CDDP). Antiproliferation IC(50) for Brand A regular and decaffeinated coffee on A2780 cells was 1:70.79 ± 5.66 and 1:55.68 ± 2.00 dilution (vol/vol) in tissue culture medium (mean ± standard error of the mean; N = 12), respectively, and slightly lower on A2780CP70 cells. Three other brands showed lower antiproliferation activity. Antiproliferation IC(50) concentrations of chlorogenic acids and caffeic acid are many folds lower than caffeine. In combination with CDDP, both Brand A coffee brews, and the 3 bioactive compounds, showed additive antiproliferation effect on both cancer cell lines. Flow cytometry analysis showed that coffee treatment induced apoptosis of A2780 and A2780CP70 cells. To our knowledge, this is the first report showing the antiproliferation activity and the additive effect with CDDP of commercially prepared coffee brews on human cancer cell lines.     

黄连素对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨黄连素对人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖和凋亡的影响,为卵巢瘤的治疗提供实验依据。方法采用不同浓度的黄连素处理人卵巢癌细胞株OVCAR3,等体积培养基培养正常对照组细胞。CCK-8法观察黄连素对卵巢癌细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测黄连素处理后细胞凋亡情况;RT-PCR、Western Blot分别检测卵巢癌细胞中Caspase-3、Caspase-8mRNA及蛋白表达情况。结果黄连素抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3的增殖且呈时间剂量依赖性,并促进细胞凋亡。RT-PCR、Western Blot结果显示:黄连素作用于OVCAR3细胞株后,细胞Caspase-3、Caspase-8 mRNA及蛋白表达升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论黄连素能够通过抑制人卵巢癌细胞株OVCAR3增殖、促进凋亡发挥抗肿瘤作用,可为临床卵巢癌治疗策略提供新的思路。     

生长抑素受体亚型在胰腺癌组织的表达研究

目的:探讨生长抑素受体亚型(SSTR1～5)在胰腺癌组织中的表达及临床病理学意义,为临床生长抑素治疗胰腺肿瘤提供理论依据. 方法:采用免疫组化EnVisionTM 法检测50例胰腺癌组织中生长抑素受体(SSTR)5种亚型的表达. 结果:SSTR1～5亚型在胰腺癌组织中均有表达,但表达强弱有明显差异.SSTR1表达阳性率为50%,SSTR2为94%,SSTR3为82%,SSTR4为90%,SSTR5为96%.胰腺癌SSTR表达优势是SSTR5＞SSTR2＞SSTR4＞SSTR3＞SSTR1(P＜0.01).胰腺癌SSTR各亚型表达阳性率与病人年龄、性别、肿瘤部位和大小、肿瘤组织分化程度及肿瘤分期无统计学意义(P＞0.05). 结论:胰腺癌组织中有SSTR1～5表达,可为将来生长抑素及其类似物治疗胰腺癌提供理论依据.免疫组化方法分析胰腺癌组织中SSTR各亚型表达,可作为病理学分析肿瘤组织中SSTR亚型表达的常规方法.     

VEGF mRNA亚型在上皮性卵巢癌中的表达及意义

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)mRNA亚型在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义.方法 用逆转录多聚酶链反应聚丙烯酰胺凝胶银染检测41例上皮性卵巢癌组织、14例良性卵巢囊肿及16例正常卵巢组织中VEGF mRNA亚型的表达.结果 ①检测出3种VEGF mRNA亚型121、165及189.恶性肿瘤中VEGF 121、165表达率明显高于良性肿瘤和正常卵巢组织(χ2值分别为4.90、9.84,均P<0.05);VEGF 189仅在恶性肿瘤中表达;②VEGF mRNA亚型与肿瘤的病理学类型、分化程度、临床分期无关;③大量腹水(≥1 000mL)患者VEGF 165的表达率显著高于少量腹水者(<1 000mL,χ2=9.84,P<0.05);④淋巴结阳性者VEGF 165和VEGF 189阳性表达率分别为92.9%及50.0%,明显高于淋巴结阴性者(χ2值分别为9.08、5.60,均P<0.05);大网膜转移者VEGF 189阳性表达率为50.0%,明显高于大网膜正常者(χ2=7.19,P<0.05).结论 VEGF mRNA亚型表达与上皮性卵巢癌的发生、发展有关;VEGF 165与恶性腹水产生密切相关.VEGF 165、VEGF 189表达与恶性肿瘤的浸润转移有关,因此可作为预测肿瘤转移潜能的指标.     

肿瘤干细胞的研究进展

目前,越来越多的证据表明肿瘤干细胞对肿瘤发生和发展起着至关重要的作用。肿瘤干细胞理论也被广泛接受,并对肿瘤发生、侵袭性生长、复发和转移以及治疗新策略发展提供了新观点。随着对肿瘤干细胞生物学研究的深入,必将为肿瘤的诊治提供帮助。现将肿瘤干细胞的理论与模型、肿瘤干细胞的起源和分类的最新研究进展阐述如下。     

胡桃醌抑制卵巢癌SKOV3细胞黏附和侵袭作用

目的探讨胡桃醌对人卵巢癌SKOV3细胞转移抑制作用。方法实验设对照组、胡桃醌12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L组,通过噻唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力,黏附实验和Transwell实验观察胡桃醌对SKOV3细胞黏附和侵袭能力,Western blot 检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达变化。结果与对照组比较,胡桃醌12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/L组SKOV3细胞抑制率分别为(16.8±3.4)%、(39.6±9.7)%、(63.3±13.6)%和(84.5±17.3)%,明显升高,呈剂量依赖性;与对照组比较,25.0、50.0、100.0 μmol/L胡桃醌组SKOV3细胞黏附率和侵袭力分别为(49.2 ±6.5)%、(37.3±2.9)%、(24.7 ±3.7)%和(0.627±0.064)、(0.419±0.018)、(0.165±0.014),明显下降(P<0.05);与对照组比较,胡桃醌50.0、100.0 μmol/L组SKOV3细胞内MMP-2、MM-9表达水平明显下降(P<0.05),呈剂量依赖关系。结论胡桃醌能明显抑制SKOV3细胞黏附能力及侵袭力,其机制可能与抑制细胞内MMP-2、MMP-9表达有关。