咪唑安定联合miR-135a-5p影响宫颈癌细胞HeLa增殖 迁移及侵袭的机制研究

目的 探讨咪唑安定对宫颈癌细胞HeLa增殖、迁移及侵袭的影响及分子机制。方法 以RPMI-1640培养基对HeLa细胞常规培养，分别用25、50、100μmol/L的咪唑安定处理，记为低、中、高剂量组，常规培养的细胞作为NC组；将miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞，记为anti-miR-135a-5p组、anti-miR-NC组；miR-135a-5p抑制剂及阴性对照转染至HeLa细胞后用100μmol/L的咪唑安定处理，记为anti-miR-135a-5p+高剂量组、anti-miR-NC+高剂量组。CCK-8检测细胞活性；Western blot法检测蛋白表达；克隆形成实验检测细胞克隆；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-135a-5p表达水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果 不同剂量咪唑安定处理后，HeLa细胞活性、CyclinD1、MMP2、MMP9表达、细胞克隆、迁移和侵袭数量、miR-135a-5p表达降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。下调miR-135a-5p降低HeLa细胞活性、MMP2、CyclinD1、M...     

LncRNA PTPRG-AS1通过靶向miR-5590-3p调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨LncRNA PTPRG-AS1对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法以正常乳腺上皮细胞MCF-10A为对照,qRT-PCR法检测乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中 LncRNA PTPRG-AS1 和 miR-5590-3p 表达。分别转染 si-LncRNA PTPRG-AS1、miR-5590-3p mimics、共转染si-LncRNA PTPRG-AS1与anti-miR-5590-3p至乳腺癌MCF-7细胞,用CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法检测细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达。双荧光素酶报告基因实验验证LncRNA PTPRG-AS1和miR-5590-3p的调控关系。结果与MCF-10A细胞比较,乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D和BT549)中LncRNA PTPRG-AS1表达升高,差异有统计学意义(P<0.05),miR-5590-3p表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。敲减LncRNA PTPRG-AS1或过表达miR-5590-3p后,MCF-7细胞增殖活性、迁移数、侵袭数及细胞中CyclinD1、MMP2和MMP9蛋白表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA PTPRG-AS1靶向负调控miR-5590-3p。敲减miR-5590-3p逆转了敲减LncRNA PTPRG-AS1对MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论 LncRNA PTPRG-AS1可能靶向下调miR-5590-3p促进乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

lncRNA DDX11-AS1靶向miR-299-3p调控宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)DDX11反义RNA1(DDX11 antisense 1,DDX11-AS1)靶向miR-299-3p对宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭的影响。 方法 实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织中DDX11-AS1和miR-299-3p表达水平。将小干扰RNA阴性对照(si-NC组)、DDX11-AS1小干扰RNA组(si-DDX11-AS1组)、miR-299-3p模拟物组(miR-299-3p组)、miRNA模拟物阴性对照组(miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miRNA抑制物阴性对照组(si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组)、si-DDX11-AS1+miR-299-3p抑制物组(si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组)分别转染HeLa细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)、transwell实验分别检测细胞活力、迁移侵袭能力。双荧光素酶报告实验和RT-qPCR验证DDX11-AS1对miR-299-3p的靶向调控作用。 结果 与癌旁组织相比,宫颈癌组织中DDX11-AS1表达显著升高,miR-299-3p表达显著降低(P<0.05)。与si-NC组相比,si-DDX11-AS1组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与miR-NC组比较,miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著降低(P<0.05)。与si-DDX11-AS1+anti-miR-NC组比较,si-DDX11-AS1+anti-miR-299-3p组HeLa细胞活力、迁移和侵袭细胞数显著升高(P<0.05)。miR-299-3p是DDX11-AS1的靶基因,DDX11-AS1负调控miR-299-3p表达。 结论 宫颈癌中DDX11-AS1呈高表达。沉默DDX11-AS1通过上调miR-299-3p能够降低宫颈癌细胞增殖、迁移侵袭能力。     

miR-377在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌细胞增殖、侵袭和EMT的影响

目的 观察miR-377在宫颈癌组织和细胞中的表达,探讨miR-377对宫颈癌发展的影响。方法 检测miR-377在宫颈癌组织和Hela、SiHa和Caski细胞、H8细胞中的表达;过表达或下调miR-377后,CCK-8、细胞侵袭实验、Western blot和细胞划痕愈合实验分别检测miR-377对Hela细胞增殖、侵袭、上皮间质转化(EMT)和迁移能力的影响。下调CUL4A表达后,检测Hela细胞增殖、侵袭、迁移和EMT;Western blot检测过表达CUL4A对cAMP/PKA通路的影响。结果 miR-377在宫颈癌组织的表达(0.58±0.24)低于癌旁正常组织(1.05±0.35),miR-377在宫颈癌Hela、Siha和Caski细胞中的表达(0.36±0.09、0.72±0.18、0.75±0.37)低于H8细胞(1.43±0.28),差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-377抑制了Hela细胞增殖、侵袭、迁移与EMT,下调miR-377则起到相反作用。miR-377靶向和负调控CUL4A,下调CUL4A抑制了Hela细胞发展;过表达CUL4A...     

扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖 迁移 侵袭的影响及机制研究

目的 探究扶正合剂联合miR-210对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 体外培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,采用扶正合剂进行干预。将anti-miR-NC、anti-miR-210分别转染至MDA-MB-231细胞；将miR-NC、miR-210 mimics分别转染MDA-MB-231细胞，再使用扶正合剂处理细胞。CCK-8检测细胞增殖能力，Transwell小室检测细胞迁移和侵袭，实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-210表达，Western blot检测CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9蛋白表达。结果 与正常对照组(0.56±0.05)比较，乳腺癌细胞组OD值明显上调，为(0.96±0.09),差异有统计学意义(t=11.655,P=0.000);与乳腺癌细胞组比较，扶正合剂组OD值显著降低，为(0.32±0.03),差异有统计学意义(t=20.239,P=0.000)。正常对照组迁移细胞数、侵袭细胞数、MMP-2蛋白及MMP-9蛋白表达水平分别为(62.31±5.30)个、(70.33±8.26)个、(0.25±0.02)、(0....     

miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡 侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测正常卵巢上皮细胞HOSE和卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p和CK2β的表达;采用双荧光素报告基因实验验证miR-627-3p和CK2β之间的靶向关系;建立miR-627-3p过表达及miR-627-3p和pcDNA-CK2β共转染的SKOV3细胞株,采用CCK-8法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 HOSE组、SKOV3组、ES-2组及OVCAR3组miR-627-3p的表达水平分别为(1.00±0.12)、(0.21±0.04)、(0.41±0.07)及(0.32±0.06),差异有统计学意义(F=183.037,P<0.05)。与正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p表达显著降低,CK2β表达显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.05);CK2β是miR-627...     

异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖迁移及侵袭影响的机制研究

目的 探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础.方法 不同浓度的异丙酚[(0 μM(μmol/L)、0.125 μM、0.25 μM、0.5 μM和1.0 μM]作用SKOV3细胞48h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测...     

miR-378和miR-10b对子宫颈癌增殖、侵袭与转移的影响

目的探讨miR-378、miR-10b在子宫颈癌增殖、侵袭及转移中所发挥的作用。方法以宫颈癌Hela细胞为靶点,通过细胞转染技术将miR-378、miR-10b质粒及空白质粒转染细胞,通过Transwell侵袭实验检测宫颈癌细胞增殖、侵袭和转移行为的改变。结果高表达miR-378可促进宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭及转移;低表达miR-10b可促进宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭及转移。结论 miR-378、miR-10b在宫颈癌的增殖、侵袭和转移中可能发挥了重要的作用,为宫颈癌的诊断和治疗提供了新的靶点和方向。     

雷帕霉素对宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭转移的影响及机制

目的探讨雷帕霉素对女性宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭转移的机制。方法培养女性宫颈癌HeLa细胞,根据雷帕霉素剂量不同分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,比较4组HeLa细胞增殖、侵袭、转移能力。结果 4组HeLa细胞各项指标差异均有统计学意义(P0.05),随雷帕霉素剂量增加,HeLa细胞抑制率呈明显升高趋势(P0.05),侵袭试验、转移试验透膜细胞数,均呈明显减少趋势(P0.05),Akt、m TOR磷酸化水平呈明显降低趋势(P0.05),HIF-1αmRNA、VEGF mRNA表达水平呈明显降低趋势(P0.05)。结论雷帕霉素能够有效抑制女性宫颈癌HeLa细胞的增殖、侵袭、转移,且抑制作用存在剂量依赖性。     

miR-5787通过靶向HSPG2基因对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响

目的:观察微小RNA(miR)-5787在乳腺癌组织及多种乳腺癌细胞系中的表达,分析过表达miR-5787对乳腺癌细胞侵袭和增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-5787在47例乳腺癌组织及癌旁组织、4种乳腺癌细胞系及正常乳腺上皮细胞中的表达。选择miR-5787表达...     

SIRT1调控Nrf2信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响

目的 探讨SIRT1调控Nrf2信号通路对宫颈癌细胞增殖、凋亡及迁移侵袭的影响.方法 选取宫颈癌细胞株Hela细胞,将Hela细胞株分为:空白对照组、SIRT1阴性对照组(negative control group,NC组)和SIRT1抑制组;采用Western Blot和qRT-PCR法检测各组细胞SIRT1的表达...     

siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究

目的 探究siRNA沉默FOXF2基因对宫颈癌Hela细胞迁移与增殖的影响研究。方法 在该院于2018年1月-2018年12月检测siRNA沉默FOXF2,选择Western Blot、Real Time-PCR法,之后Hela细胞中蛋白表达、FOXF2基因mRNA的变化。siRNA沉默FOXF2后细胞增殖,选择CCK8检测;siRNA沉默FOXF2后细胞迁移选择划痕试验检测。结果 多重对比各组,选择Dunnett T3,结果显示:3条siRNA链沉默FOXF2后,相较于Hela细胞SNC组合Hela细胞,siRNA-FOXF2 mRNA显著降低(65%~85%),对比差异有统计学意义(P<0.05);相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞FOXF2蛋白表达水平出现显著降低;在siRNA沉默FOXF2基因后,经细胞划痕试验显示,相较于Hela细胞SNC组及Hela细胞组,Hela细胞的迁移能力显著较高;较Hela细胞SNC组及Hela细胞组,siRNA-FOXF21415组增殖率显著较高,对比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 宫颈癌患者针对其Hela细胞的迁移与增殖能力,选择SiRNA沉默FOXF2基因有极大的促进作用,具有临床应用价值。     

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

MTSS1基因对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制研究

目的探讨MTSS1基因在骨肉瘤组织中的表达情况,对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法 qRT-PCR、Western blot和免疫组化染色分别检测骨肉瘤组织及其对应的癌旁组织样本中MTSS1的mRNA和蛋白表达水平。构建MTSS1表达载体在骨肉瘤细胞株MG63中过表达MTSS1,采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况;通过Transwell细胞迁移和侵袭实验分别检测对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测MMP2和MMP9的表达情况。结果骨肉瘤组织中MTSS1 mRNA和蛋白表达显著低于癌旁组织。MTSS1高表达能够抑制MG63细胞的增殖,抑制细胞凋亡。MTSS1表达上调显著降低细胞的迁移和侵袭能力。MG63细胞中过表达MTSS1可以降低MMP2和MMP9的表达。结论 MTSS1基因在骨肉瘤中低表达,MTSS1能够降低MG63细胞的增殖并促进细胞凋亡,可能通过抑制MMP2和MMP9的表达调控骨肉瘤的侵袭和转移。     

丙泊酚介导miR-137/FGF9通路对人黑色素瘤细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响

目的:探讨丙泊酚介导miR-137/FGF9通路对人黑色素瘤细胞A375增殖、侵袭及迁移能力的影响。方法:体外培养A375细胞,采用MTT法确定丙泊酚对A375细胞的半数抑制浓度和半数抑制时间,lipofectamine法分别将miR-137 mimics和miR-137 inhibitors转染到A375细胞。将A3...     

miR-515-5p靶向ITLN2对子宫内膜基质细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨微小RNA-515-5p(miR-515-5p)是否可靶向内凝集素2(lectin 2, ITLN2)影响子宫内膜异位症(endometriosis, EMT)子宫内膜基质细胞(endometrial stromal cells, ESCs)的增殖、迁移和侵袭。方法收集2020年12月至2021年12月期间在济宁医学院附属医院生殖医学科就诊治疗的24例EMT患者的在位内膜和异位内膜组织及18例行腹腔镜手术的非EMT患者的正常内膜组织。RT-qPCR检测内膜组织miR-515-5p、ITLN2 mRNA相对表达量;Western blotting法检测内膜组织中ITLN2蛋白表达量。原代分离、培养EMT患者的ESCs, 利用Lipofectamine 2000试剂转染ESCs, 并将其分为空白组、miR-515-5p抑制剂组、miR-515-5p抑制剂阴性对照(negative control, NC)组, CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕愈合和Transwell实验分别评估细胞迁移、侵袭能力;双荧光素酶报告基因检测miR-515-5p和ITLN2的靶向关系;RT-qPCR技术...