乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达状态及相关性

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＯＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为８例（２９．６３％），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性标本中Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为７例（４１．１７％），９例（５２．９４％）、１２例（７０．５８％）。而在５例正常宫颈组织中未测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ，ＰＣＮＡ只在宫颈组织上皮基底层细胞中表达。统计学分析表明，ＨＰＶ１６Ｅ６与宫颈癌密切相关（Ｐ＜０．０５），ＰＣＮＡ在宫颈癌与正常宫颈组织中有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。未能发现宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ与Ｐ５３蛋白相关性（Ｐ＞０．０５）。     

人乳头瘤病毒16型E6E7反义RNA抑制宫颈癌细胞恶性？…

目的 研究癌基因的特异性反义ＲＮＡ对癌细胞生长繁殖和恶性程度的影响。方法 用逆转录病毒载体将人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）－６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ导入ＨＰＶ－１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细胞株ＣａＳｋｉ中，观察该细胞在导入反义ＲＮＡ后其表型特征和在裸鼠体内致癌能力的变化。结果 ＨＰＶ－１６ Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能降低宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ的生长速率，抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并能明显地抑制其在裸鼠体内的致癌能力     

人乳头瘤病毒16型E6E7基因反义质粒对人宫颈癌细胞恶性的逆转…

构建可为地塞米松诱导表达的人乳头瘤病毒１６型Ｅ６Ｅ７，基因反义质粒，利用磷酸钙沉淀法将其分别转染到ＨＰＶ－１６阳性的人宫颈癌株Ｃａｓｋｉ和ＨＰＶ阴性的人宫颈癌细胞株Ｃ－３３Ａ中。地塞米松诱导反义质粒表达后，ＣａｓＫｉ细胞失去其恶性表型，而Ｃ－３３１细胞的生长特性及恶性行为未发生变化。     

宫颈癌患者外周血中的人乳头瘤病毒16例E6及E7蛋白…

本研究证明进展期宫颈癌患者１０／３７例和１０／４６例外周血中分别存在有ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７蛋白致敏的淋巴细胞，而４０例献血员中分别为１２．５％（５／４０）和１７．５％（７／４０）。４６例中有１７例和２５例分别进行了宫颈癌组织中的ＨＰＶ１６Ｅ６和Ｅ７基因序列检测，Ｅ６蛋白致敏淋巴细胞阳性的６例中检出与未检出Ｅ６序列的各占３例，Ｅ７蛋白致敏淋巴细胞阳性的５例中有３例未检出，有２例检出Ｅ７序列。     

人乳头瘤病毒16型致瘤基因E6在昆虫细胞中表达及其 …

目的 研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）相关肿瘤患者的ＨＰＶ１６ Ｅ６抗体水平及其流行病学意义；探讨用杆状病毒－昆虫细胞表达载体系统表达的ＨＰＶ１６ Ｅ６蛋白的抗原性；方法 用ＰＣＲ从ＨＰＶ１６基因组中扩增出ＨＰＶ１６ Ｅ６完整基因，克隆至转移载体ｐＶＬ１３９３中，重组质粒ＤＮＡ与线性杆状病毒ＤＮＡ共转染昆虫细胞Ｓｆ－９，经噬斑筛选获得带有编码Ｅ６基因的重组杆状病毒株，并在昆虫细胞中表达。结果 Ｗｅｓｔｅ     

人乳头瘤病毒16型E6E7反义RNA抑制宫颈癌细胞恶性表型的作用

目的研究癌基因的特异性反义ＲＮＡ对癌细胞生长繁殖和恶性程度的影响。方法用逆转录病毒载体将人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ导入ＨＰＶ－１６ＤＮＡ阳性的宫颈癌细胞株ＣａＳｋｉ中，观察该细胞在导入反义ＲＮＡ后其表型特征和在裸鼠体内致癌能力的变化。结果ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能降低宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ的生长速率，抑制其在软琼脂上的集落形成能力，并能明显地抑制其在裸鼠体内的致癌能力。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析发现ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能使宫颈癌细胞中病毒ＨＰＶ－１６Ｅ６基因的表达水平降低。结论ＨＰＶ－１６Ｅ６Ｅ７反义ＲＮＡ能使宫颈癌细胞ＣａＳｋｉ恶性表型逆转；由其引起的癌细胞中ＨＰＶ－１６癌基因表达水平的降低可能是癌细胞表型逆转的原因之所在；ＨＰＶ－１６癌基因的表达水平对维持癌细胞的恶性表型起着重要作用。     

我国人乳头瘤病毒58例感染与宫颈癌的关系

人乳头瘤病毒中，第５８型是很重要的高度致瘤性病毒之一。采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹技术对我国１４省区１２１６例宫颈癌及癌前病变组织进行人乳头状瘤病毒５８例检测。结果：（１）各类宫颈组织中，宫颈癌组ＨＰＶ５８型检出率最高；（２）南方地区宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率高于北方地区，表现出明显的地区差异。（３）ＨＰＶ１６型、１８型检出率相比较，在宫颈癌组织中ＨＰＶ５８型检出率低于ＨＰＶ１６型，但明显高于ＨＰ     

特异siRNA抑制宫颈癌细胞中人乳头状瘤病毒16型E6表达的研究

目的 优化HPV-16 E6癌基因特异的U6质粒表达的siRNA，抑制HPV癌基因表达及其对子宫颈癌细胞生长繁殖的影响。方法 选择4个分别针对HPV-16 E6 mRNA外显子和内含子序列为靶序列，合成DNA链，构建表达HPV-16 E6短发卡样dsRNA的重组pSilencer1．0-U6载体，导入HPV-16DNA阳性的宫颈癌细胞株CaSki中，观察该细胞中HPV-16 E6、E7基因表达水平及其蛋白含量的变化，并观察细胞生长被抑制的情况。结果 4种HPV-16 E6 siRNA均能降低宫颈癌细胞CaSki的生长速率。通过细胞生长曲线观察到HPV-16 E6 shRNA表达质粒导入细胞0-96h内，可降低细胞生长速度。荧光定量RT-PCR检测HPV-16 E6 siRNA可使宫颈癌细胞株CaSki中HPV-16 E6、E7基因转录的mRNA水平降低，其中针对E6 mRNA内含子的重组shRNA只抑制E6基因的表达水平。Western blot分析表明，4个HPV-16 E6 siRNA作用72h后，未能检测到宫颈癌细胞中HPV-16 E6蛋白。结论 HPV-16 E6 siRNA能使宫颈癌细胞CaSki生长缓慢；选择针对E6内含子的siRNA作用位点，特异性抑制E6表达；而针对E6外显子的siRNA作用位点，可抑制E6和E7基因的表达，是用于治疗HPV阳性宫颈癌细胞的理想靶位。     

中国地方株人乳头瘤病毒16型E7基因一级结构及其…

从湖北地区一宫颈癌活检组织中提取ＤＮＡ，采取加端聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，获得了人乳头瘤病毒１６型Ｅ７基因（ＨＰＶ１６Ｅ７）。将该基因克隆于载体ｐＵＣ１８后，进行了该基因一级结构顺序分析。完整的ＨＰＶ１６Ｅ７湖北株基因（ＨＰＶ１６Ｅ７－ＨＢ）全长２９４ｂｐ，与已发表的德国株（ＧＳ）大小一致，但其核苷酸顺序中有２处发生了变异，均为Ｃ→Ｔ变异。第４３位ＣＡＡ→ＴＡＡ使相应的谷氨酰胺密码子变为终止密码     

子宫颈癌中人乳头瘤病毒16型E7基因检测及变异分析

用聚合酶链反庆法检测宫颈癌中人乳头瘤病毒１６型转化基因Ｅ７，检出阳性率为１０／２２，其中４例进行ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析发现该基因与标准对照株存在明显变异。核苷酸序列分析证实有两处发生碱基突变。研究提示，ＰＣＲ方法能快速检测宫颈癌中人乳头瘤 转化基因，可作为宫颈癌的辅助诊断方法，ＳＳＣＰ分析能发现病毒株间小变异的基因片段。     

Oncogene lineages of human papillomavirus type 16 E6, E7 and E5 in preinvasive and invasive cervical squamous cell carcinoma.

Human papillomavirus (HPV)16 accounts for about 60% of the HPV infections in invasive cervical cancer (ICC). There are many sequence variations within HPV16, some of which have been associated with different biological properties, although no definite correlations have yet been established. However, the definition 'variant' has been a source of confusion in research and diagnosis, since it is based on all sequence deviations from a randomly selected prototype. This study has sequenced the HPV16 oncogenes E6, E7 and E5 from 61 Swedish cases with cervical intraepithelial neoplasia grade III (CIN III) or ICC. Clustering the sequence variations at the three common sites of variation (nucleotide 350 in E6, which has previously been associated with the progression from CIN III to ICC, and nucleotides 3979 and 4042 in E5) resulted in the distinction of three major oncogene lineages encompassing more than 95% of the cases, and two minor oncogene lineages. Simple comparison of the distribution of the individual variations or oncogene lineages between CIN III and ICC showed no significant difference, but the number of variations in addition to the three common ones was significantly higher in ICC. This novel classification scheme, based on the variations in the E6, E7 and E5 region, is considered to be a major improvement over the classical 'prototype-variant' classification, and can help to clarify the interpretation of HPV sequence data in relation to the progression of cervical cancer.     

宫颈癌组织中HPV16,18E6蛋白表达的观察

目的观察ＨＰＶ１６、１８早期蛋白Ｅ６在人宫颈鳞状细胞癌中的表达并评价Ｅ６单抗的应用价值。方法采用ＳＰ免疫组化染色法,检测４０例宫颈鳞状细胞癌,３０例慢性宫颈炎及３０例正常宫颈组织中ＨＰＶ１６、１８Ｅ６蛋白的表达。结果癌组中Ｅ６的阳性率为６７．５％（２７／４０）,慢性宫颈炎中为３．３％（１／３０）,正常宫颈组织中均为阴性,良、恶组ＨＰＶ１６、１８Ｅ６的阳性率差异有显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论ＨＰＶ１６、１８感染与本地区宫颈癌病因学密切相关,Ｅ６单抗可作为预测ＨＰＶ１６、１８感染及宫颈癌早期诊断的标记之一。     

Primary human cervical carcinoma cells require human papillomavirus E6 and E7 expression for ongoing proliferation

Repression of human papillomavirus (HPV) E6 and E7 oncogenes in established cervical carcinoma cell lines causes senescence due to reactivation of cellular tumor suppressor pathways. Here, we determined whether ongoing expression of HPV16 or HPV18 oncogenes is required for the proliferation of primary human cervical carcinoma cells in serum-free conditions at low passage number after isolation from patients. We used an SV40 viral vector expressing the bovine papillomavirus E2 protein to repress E6 and E7 in these cells. To enable efficient SV40 infection and E2 gene delivery, we first incubated the primary cervical cancer cells with the ganglioside GM1, a cell-surface receptor for SV40 that is limiting in these cells. Repression of HPV in primary cervical carcinoma cells caused them to undergo senescence, but the E2 protein had little effect on HPV-negative primary cells. These data suggest that E6 and E7 dependence is an inherent property of human cervical cancer cells.     

人乳头瘤病毒E6、E7的表达对足叶乙甙作用下细胞凋亡的影响

目的探讨人乳头瘤毒(HPV)16早期基因E6和E7的表达对NIKS细胞凋亡表型的影响。方法用含有HPV16的E6、HPV16E7、HPV16E6E7病毒癌基因的逆转录病毒感染角质生成细胞株NIKS,puromycin筛选稳定表达细胞;基因组PCR和Western blot方法验证E6和E7的表达;转染后的NIKS细胞用不同浓度的足叶乙甙处理,流式细胞仪和Annexin V染色检测细胞凋亡情况。结果经逆转录病毒感染后,建立表达E6、E7及E6E7的NIKS细胞株,基因组PCR证明E6和E7整合入NIKS细胞基因组;Western blot证实表达的E6、E7具有生物学活性,能够分别降解p53和pRB;在足叶乙甙处理后,E6、E7以及E6E7表达细胞发生明显的细胞死亡,E6和E7具有叠加作用,且具有剂量依赖性,Annexin V染色证实细胞发生凋亡,凋亡率分别为(33.5±3.2)%、(38.3±2.4)%和(56.7±4.3)%。结论人乳头瘤病毒E6和E7的表达都可以促进细胞对DNA损伤药物的敏感性,提示乳头瘤病毒感染状态有可能影响肿瘤细胞对化疗的敏感性。