肿瘤坏死因子-α诱导大鼠L6细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的采用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)体外诱导培养法建立大鼠骨骼肌细胞胰岛素抵抗(IR)模型,为研究IR的发生机制及筛选改善IR的药物和功能食品提供一种简便可靠的IR细胞模型。方法以大鼠肌细胞系L6细胞为研究对象,在含10ng/ml小鼠TNF-α培养液中培养24h,同时设立空白对照组和胰岛素对照组。之后各组细胞分别加入100nmol/L胰岛素。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)法检测培养液中残存葡萄糖含量,[3H]标记的脱氧葡萄糖转运检测细胞内葡萄糖的摄取量评价模型建立的效果。结果在无胰岛素刺激下,TNFα诱导组培养液中残存葡萄糖含量和细胞内的葡萄糖摄取量,与空白对照组比较没有差异(P0.05);在胰岛素刺激下,TNFα诱导组培养液中残存葡萄糖含量和细胞内的葡萄糖摄取量,与胰岛素对照组比较差异具有显著性(P0.05)。结论用含10ng/ml TNFα的培养液培养24h的L6细胞产生胰岛素抵抗,作为IR肌细胞模型可广泛用于胰岛素抵抗的机制研究和筛选辅助降血糖的药物或功能食品的功能评价。     

锌对L6细胞葡萄糖消耗量和蛋白激酶B/糖原合酶激酶3β表达的影响（英文）

目的以L6细胞为研究对象,观察锌对正常L6细胞及棕榈酸诱导的胰岛素抵抗L6细胞葡萄糖消耗量及胰岛素信号通路关键分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK3β)表达的影响。方法培养L6成肌细胞,分化后用0.4 mmol/L棕榈酸作用24h造胰岛素抵抗细胞模型,用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50,100μmol/L)作用3h,葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下细胞对葡萄糖的摄取量;用100 nmol/L胰岛素和不同浓度的锌(0,10,20,50μmol/L)作用15 min,Western blot法检测磷酸化AKT及磷酸化GSK3β表达水平。结果 10⁵0μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,1050μmo/L的锌能明显提高正常L6细胞葡萄糖的消耗量和AKT/GSK3β的磷酸化表达,锌与胰岛素共刺激能显著激活AKT/GSK3β;而对于胰岛素抵抗L6细胞,10⁵0μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,1050μmo/L锌单独作用可明显提高其葡萄糖消耗量和GSK3β的磷酸化,10⁵0μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论1050μmo/L锌与胰岛素共刺激能激活AKT的磷酸化表达。结论10⁵0μmol/L的锌可提高L6细胞的葡萄糖消耗量,这种作用可能与其增强AKT和GSK3β磷酸化水平有关。     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及缺陷位点研究

目的研究游离脂肪酸诱导人肝细胞(HepG2)引起胰岛素抵抗及信号转导缺陷位点。方法用含0.25mmol/L的软脂酸(PA)或100nmol/L胰岛素的DMEM培养基培养HepG2细胞24h后,用100nmol/L胰岛素刺激不同时间后,分别测定培养液的葡萄糖浓度,细胞内的糖原含量,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)活性以及磷酸化的蛋白激酶B(P鄄Ser473PKB)的蛋白水平。磷酯酰肌醇3激酶(PI鄄3K)的抑制剂Wortmannin加入培养基,终浓度10-6mol/L。结果与正常对照组相比,PA处理组和高胰岛素组培养液中葡萄糖含量增高(P<0.05);PA处理组胰岛素刺激的PEPCK活性高于正常对照组(P<0.01),P鄄Ser473PKB蛋白水平低于正常对照组(P<0.01)。用Wortmannin处理后,正常对照组中PEPCK活性差别有统计学意义(P<0.01),PA处理组中的PEPCK活性差别无统计学意义(P>0.05);正常对照组和PA处理组中P鄄Ser473PKB差别均有统计学意义(P<0.01)。结论0.25mmol/L的AP培养24h后,细胞产生了胰岛素抵抗并且胰岛素信号转导途径存在障碍,可能蛋白激酶B(PKB)及下游分子缺陷参与了肝胰岛素抵抗的形成。     

TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达的影响

[目的]观察TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达水平以及胰岛素刺激下的葡萄糖摄取率的影响.[方法]体外培养3T3-L1前体脂肪细胞,诱导分化为成熟脂肪细胞后,应用不同浓度(10、25、50 ng/mL)重组TNF-α干预成熟脂肪细胞16 h,或以10 ng/mL重组TNF-α分别干预24、48、72 h,采用实时荧光定量RT-PCR技术检测TNF-α干预后3T3-L1脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平;另外,采用[3H]-2-脱氧葡萄糖掺入法检测TNF-α干预24、48、72h后成熟脂肪细胞葡萄糖摄取率.[结果]1)不同浓度TNF-α均能显著上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因表达(P均<0.001),在0～25 ng/mL浓度范围内呈现浓度依赖性,随TNF-α干预浓度增高,NYGGF4小鼠同源基因的表达水平逐渐升高;2)TNF-α对3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因的表达调节具时间反应性,呈现随干预时间延长该基因表达逐渐上调的特征,10 ng/mL TNF-α干预人成熟脂肪细胞24 hNYGGF4小鼠同源基因mRNA表达水平即显著上调(P<0.001);3)TNF-α干预48 h,3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖摄取率与未干预组比较下降50%以上,干预72 h,胰岛素刺激的葡萄糖摄取受到进一步抑制.[结论]TNF-α可以上调3T3-L1成熟脂肪细胞中NYGGF4小鼠同源基因[目的]表达,抑制3T3-L1成熟脂肪细胞胰岛素刺激下的葡萄糖摄取.     

不同时间持续缺氧对3 T3-L1脂肪细胞炎症因子mRNA的影响

目的探讨不同时间持续缺氧孵育后脂肪细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)表达的变化。明确肥胖缺氧状态下是否存在炎症因子表达增加导致胰岛素抵抗(IR)。方法将3T3-L1脂肪细胞随机分为4组,即常氧和缺氧4 h、12 h、24 h组,实时定量PCR(q RT-PCR)法测定各时间点脂肪细胞缺氧诱导因子1-α(HIF-1α),葡萄糖转运子-1(GLUT-1),TNF-α,IL-6,IL-1β的mRNA。结果与常氧组相比,缺氧12 h、24 h组HIF-1α,GLUT-1 mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05)。结论缺氧使脂肪细胞HIF-1α,GLUT-1升高,确认脂肪细胞缺氧状态形成,在缺氧状态下炎症因子TNF-α,IL-6,IL-1β mRNA水平升高,缺氧处理24 h变化最为明显。     

2型糖尿病合并冠心病患者胰岛素抵抗与炎性因子的关系研究

目的 探讨2型糖尿病合并冠心病患者胰岛素抵抗与超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的关系.方法 检测糖尿病合并冠心病60例患者(糖尿病组)血清空腹胰岛素、空腹血糖、hs-CRP、IL-6、TNF-α水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并与50例健康体检者(对照组)比较.结果 糖尿病组hs-CRP、II-6、TNF-α水平分别为(13.35±2.41) mg/L、(119.6±90.4) ng/L、(17.89 ±4.56) ng/L,与对照组的(5.39±1.83) mg/L、(47.4±20.8)ng/L、(7.52±1.28) ng/L比较差异有统计学意义(P＜0.01).糖尿病组HOMA-IR为7.37±1.84,显著高于对照组的2.34±1.58,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 2型糖尿病合并冠心病患者胰岛素抵抗与hs-CRP、IL-6、TNF-α相关.     

替米沙坦对高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性的影响

目的探讨替米沙坦对高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性的影响。方法在细胞培养皿上均匀接种人脐静脉内皮细胞(HUVECs),随机分为高糖组(HG)与替米沙坦处理组(HG+TM)共2组。HG组在含葡萄糖(Glucose)33mmol/L的DMEM完全培养液培养48h。HG+TM组先在含33mmol/LGlucose的DMEM完全培养液培养24h,然后在含替米沙坦500μg/L+Glucose33mmol/L完全培养液培养24h。按照上条件处理结束后,两组细胞在含5.5mmol/L Glucose的DMEM(无血清)继续培养4h,加入终浓度为5mIU/L胰岛素继续培养10 min,最后将两组细胞上清液进行收集,检测细胞上清液中TNF-α、IL-6、NO及ET-1水平进行比较。结果与HG组相比,HG+TM组NO水平升高,TNF-α、IL-6、ET-1水平下降,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论替米沙坦可增加高糖状态下血管内皮细胞胰岛素敏感性,其机制可能降低TNF-α、IL-6炎症因子水平有关。     

不同剂量胰岛素联合生长激素对内毒素刺激后单核细胞分泌细胞因子的影响

目的:通过体外培养,观察胰岛素协同生长激素(GH)对内毒素刺激后的单核细胞分泌细胞因子的影响。方法:分离8名健康志愿者外周血单核细胞,用内毒素刺激后,根据GH与胰岛素浓度不同分为五组,即对照组;GH组(GH为100 ng/ml,无胰岛素);GH+胰岛素500μU/ml组、GH+胰岛素1 000μU/ml组和GH+胰岛素2 000μU/ml组。以上各组培养24 h后,采用双抗夹心ELISA法检测单核细胞分泌促炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)和抗炎细胞因子(IL-4、IL-1)含量的变化。结果:当培养液中加入100 ng/ml的GH时,TNF-α、IL-1β和IL-6的浓度较对照组明显升高(P0.01);同时IL-4和IL-10也明显升高(P0.01)。当不同剂量胰岛素加入培养液后,IL-1β和IL-6浓度均明显低于GH组(P0.01),并随胰岛素剂量的增加而不断下降;与GH组相比,IL-4的含量在GH+胰岛素1 000μU/ml组和GH+胰岛素2 000μU/ml组中均明显升高(P0.01);而IL-10仅在GH+胰岛素2 000μU/ml组中升高显著(P0.01)。结论:GH具有明显促进内毒素刺激后的单核细胞分泌促炎与抗炎细胞因子的效应;而胰岛素联用GH后,促炎细胞因子明显降低,而抗炎细胞因子则进一步升高。     

雌激素对去卵巢大鼠肝细胞胰岛素受体底物-1和2表达的影响

目的观察雌激素对去卵巢大鼠肝细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)和胰岛素受体底物-2(IRS-2)表达的影响,以探讨其改善胰岛素抵抗的机制。方法取6周SD雌性大鼠随机分为3组:假手术组(Sham组)、手术组(OVX组)和戊酸雌二醇组(E_2组),E_2组每天灌胃戊酸雌二醇水溶液(1 mg/kg),而其他组给予相应体积的蒸馏水,连续给药12周。然后采用葡萄糖氧化酶法测定血糖,实时荧光定量PCR法检测肝细胞IRS-1和IRS-2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肝细胞IRS-1和IRS-2蛋白的表达。结果 OVX大鼠终末体重、肝重、内脏脂肪指数KITT显著高于Sham组,而葡萄糖利用常数KITT显著低于Sham组(P0.05);与OVX组大鼠相比,E_2组大鼠终末体重、肝重、内脏脂肪指数显著降低,而葡萄糖利用常数显著升高(P0.05);免疫组化结果显示,OVX大鼠肝组织IRS-1、IRS-2表达阳性细胞数目及染色程度较Sham组显著减少,而雌激素替代治疗后肝组织IRS-2阳性表达细胞数目及染色程度显著改善,但IRS-1改善不显著;OVX大鼠肝细胞IRS-1和IRS-2mRNA表达水平显著低于Sham组,而E_2组大鼠IRS-1和IRS-2 mRNA表达水平显著高于OVX组(P0.05)。结论雌激素可上调去卵巢大鼠肝细胞IRS-1和IRS-2的表达水平,进而改善胰岛素抵抗。     

维生素D水平对妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗指数、胰岛素分泌指数及Toll样受体表达的影响

目的探讨维生素D水平对妊娠期糖尿病患者胰岛素抵抗指数、胰岛素分泌指数及Toll样受体表达(TLRs)结局影响,为妊娠期糖尿病孕妇补充维生素D提供理论依据。方法选取2015年6月-2017年5月妊娠期糖尿病孕妇79例为观察组、健康体检孕妇52例为对照组,观察和比较两组研究对象补充维生素D前后血糖状况、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、维生素D水平、TLRs和计算体质指数(BMI)、胰岛素抵抗指数、胰岛素分泌指数,分析维生素D与CRP、TNF-α、TLRs、BMI、胰岛素抵抗指数、胰岛素分泌指数相关性。结果干预前,观察组维生素D水平(12. 00±7. 15) ng/ml明显低于对照组(23. 16±8. 49) ng/ml,胰岛素抵抗指数(5. 91±1. 44)高于对照组的(1. 76±0. 95),胰岛素分泌指数(168. 50±27. 00)%低于对照组的(189. 40±34. 10)%,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。干预后,观察组维生素D水平(20. 00±8. 04) ng/ml、胰岛素分泌指数(184. 00±32. 00)%均高于干预前,胰岛素抵抗指数(1. 98±0. 87)低于干预前,差异有统计学意义(P<0. 05)。干预后,两组研究对象维生素D水平和胰岛素抵抗指数、胰岛素分泌指数比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。干预前,观察组TLR2表达(3. 01±0. 70)、TLR4表达(2. 92±0. 48)高于对照组的(1. 63±0. 49)、(1. 58±0. 62),差异有统计学意义(均P<0. 05)。干预后,观察组TLR2表达(1. 82±0. 44)、TLR4表达(1. 64±0. 59)均低于干预前,差异有统计学意义(P<0. 05)。干预后,两组研究对象TLR2、TLR4表达比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。干预前,观察组BMI (26. 50±4. 00)kg/m~2、CRP (5. 30±1. 20) mg/L、TNF-α水平(118. 50±6. 94) pg/ml高于对照组BMI (22. 10±3. 18) kg/m~2、CRP (1. 54±0. 50) mg/L、TNF-α水平(70. 50±4. 11) pg/ml,差异有统计学意义(P<0. 05)。干预后,观察组BMI (28. 30±3. 04) kg/m~2高于干预前,CRP (1. 75±1. 02) mg/L和TNF-α(68. 20±3. 00) pg/ml低于干预前,对照组BMI水平(27. 69±3. 10) kg/m~2高于干预前,差异均有统计学意义(均P<0. 05)。干预后,两组研究对象BMI、CRP、TNF-α水平比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。维生素D水平与BMI、CRP、TNF-α、胰岛素抵抗指数、TLR2表达、TLR4表达呈负相关性,与胰岛素分泌指数呈正相关性,差异均有统计学意义(均P<0. 05)。结论维生素D水平与妊娠期糖尿病发病及病情具有一定相关性,适当补充维生素D,利于改善胰岛功能,为妊娠期糖尿病的防控提供了新方法和新思路。     

碘过量对胰岛β细胞功能的影响及机制

目的探索碘过量暴露对小鼠胰岛素瘤细胞系β-TC-6胰岛素分泌功能影响及机制。方法β-TC-6细胞在对数生长期暴露于0、0.01、0.1、1、10和100 mmol/L碘24 h,采用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞存活率。细胞经0.01、1、和100 mmol/L碘干预24 h后,用5.6 mmol/L葡萄糖刺激细胞1 h,酶联免疫分析(ELISA)法检测上清胰岛素含量。蛋白印迹法(Western blot)检测GRP78、IRE1α、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果与对照组比较,1~100 mmol/L碘处理组细胞存活率显著降低(P<0.05);1 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著增加(P<0.05),100 mmol/L组细胞胰岛素分泌量显著下降(P<0.05),1和10 mmol/L组GRP78、IRE1α和Bax蛋白表达量显著增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.05)。5.6 mmol/L葡萄糖+0 mmol/L碘组、5.6 mmol/L葡萄糖+0.01 mmol/L碘组和5.6 mmol/L葡萄糖+1 mmol/L碘组分别与相应对照组比较,细胞胰岛素分泌量组间差异显著(P<0.05)。结论过量碘可降低β-TC-6细胞胰岛素分泌量,损害胰岛素分泌功能,其机制很可能与内质网应激和Bcl-2/Bax蛋白表达比例失衡密切相关。     

妊娠期糖尿病患者胎盘中炎症介质表达量与母体胰岛素抵抗、脂代谢的相关性研究

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)胎盘中炎症介质表达量与母体胰岛素抵抗、脂代谢的相关性,为临床提供参考。方法选择2015年5月-2017年4月在庆阳市人民医院诊断为GDM的98例患者作为研究的GDM组,同期规律产检且经GDT试验证实糖耐量正常的124例孕妇作为对照组。检测胎盘中炎症介质及糖代谢指标的表达量、血清中胰岛素抵抗指标及脂代谢指标的含量。结果 GDM组胎盘中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)的mRNA表达量均显著高于对照组(P0.05),血清中空腹葡萄糖(FPG)、空腹胰岛素(F-Ins)、Vaspin、Chemerin、Visfatin、Apelin、Leptin的含量以及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的水平均显著高于对照组,胎盘中胰岛素受体底物-1(IRS-1)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)、葡萄糖转运体-1(GLUT-1)、葡萄糖转运体-4(GLUT-4)的mRNA表达量均显著低于对照组(P0.05);GDM组患者胎盘中TNF-α、IL-1、IL-6、CRP的mRNA表达量与血清中FPG、F-Ins、Vaspin、Chemerin、Visfatin、Apelin、Leptin的含量以及HOMA-IR的水平呈正相关关系,与胎盘中IRS-1、IRS-2、GLUT-1、GLUT-4的mRNA表达量呈负相关关系。结论 GDM胎盘中炎症介质的高表达与母体胰岛素抵抗、脂质代谢紊乱的发生密切相关。     

糖皮质激素加重高糖诱导的胰岛素抵抗

目的 探讨糖皮质激素和高浓度糖（高糖）共同作用诱导胰岛素抵抗的分子机理。方法 分离的大鼠脂肪细胞在5.25mM葡萄糖或加地塞米松（Dex）0.3μM培养基中孵育24h，然后测定葡萄糖的转运率，胰岛素受体底物（IRS）1／2的酪氨酸磷酸化、IRS1／2及蛋白激酶B（PKB）的蛋白表达。结果 高糖抑制了这些细胞的糖摄取率、IRS1酪氨酸磷酸化及蛋白表达，Dex加重高糖的以上抑制作用；高糖增加IRS2蛋白表达，Dex部分对抗高糖的此作用及抑制IRS2酪氨酸磷酸化。结论 高糖能诱导胰岛素抵抗，Dex加重高糖的此作用。其作用机制与影响胰岛素信号蛋白磷酸化及蛋白表达等因素有关。     

代谢综合征患者血清脂肪细胞因子与胰岛素抵抗的关系

目的探讨代谢综合征(metabolic syndrome,MS)患者血清脂肪细胞因子水平与胰岛素抵抗的关系。方法选择2013年1月—2014年6月279例MS患者作为病例组及250例同期健康体检者作为对照组,检测两组研究对象空腹血糖(fasting blood-glucose,FBG)、胰岛素浓度(fasting serum insulin,FIN)和胰岛素抵抗指数(homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR),ELISA法检测血清脂联素(adiponectin,APN)、瘦素和TNF-α水平。计量资料比较采用t检验,两变量间的相关关系采用Pearson相关分析,P0.05为差异有统计学意义。结果病例组患者FPG、FIN和HOMA-IR水平[(8.05±1.89)mmol/L、(13.61±3.57)m U/L(4.90、±1.18)]高于对照组[(5.17±1.06)mmol/L、(9.35±1.88)m U/L(2.13、±0.51)],差异均有统计学意义(均P0.05);病例组患者血清APN水平为(2.68±0.69)ng/ml,低于对照组的(4.43±1.05)ng/ml,血清瘦素和TNF-α水平[(6.79±1.20)ng/ml、(72.60±20.15)μg/L]高于对照组[(4.84±0.79)ng/ml、(34.54±9.38)μg/L],差异均有统计学意义(均P0.05)。病例组患者血清APN水平与HOMA-IR呈负相关(r=-0.584,P0.05),而瘦素和TNF-α水平与HOMA-IR呈正相关(r=0.487、0.514,均P0.05)。结论 MS患者的血清脂肪细胞因子表达异常,并与胰岛素抵抗密切相关,共同参与MS的发生发展。     

妊娠期糖代谢异常患者中肿瘤坏死因子-α基因多态性的研究

[目的]探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因多态性与胰岛素抵抗、3种相关炎症因子的血浆水平以及与妊娠期糖代谢异常(GDM、GIGT)的发病关系.[方法]采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测78例糖代谢异常孕妇(GDM组)及78名正常孕妇(对照组)TNF-α启动子区第308位基因型.采用ELISA法测定血浆TNF-α、Leptin 、IL-6 水平及胰岛素抵抗指数.[结果]GDM组A等位基因频率(58.3%)高于对照组(30.8%),GA AA型基因频率(73.1%)也高于对照组(38.5%),每2组比较差异有统计学意义(P＜0.05).GDM组孕妇血浆TNF-α水平为(5.4士1.4) ng/ml,对照组为(3.6士1.3) ng/ml,Leptin水平为(10.29士2.07) pg/ml,对照组为(7.96士1.56) pg/ml,IL-6水平为(50.0士4.4) pg/ml,对照组为(40.91士4.85) pg/ml,2组比较差异均有统计学意义(P＜0.01).GDM组胰岛素抵抗指数(5.8士1.4)高于对照组(3.5士1.0),差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]TNF-α启动子-308基因多态性与GDM发病有关,其机制可能通过增加TNF-α、Leptin 、IL-6 水平、产生胰岛素抵抗而致GDM的发生.     

术中自体血回输对脊柱手术炎性因子的影响

目的观察术中自体血回输,对脊柱手术肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)等炎症因子的影响。方法选择行脊柱手术患者30例,随机分成自体血液回收组(A组)和异体输血组(B组),检测并对比不同时点2组TNF-α、IL-6、IL-10的变化。结果使用异体输血的B组患者输血前TNF-α为(7.16±0.66)ng/ml、输血后1h为(15.78±2.58)ng/ml;IL-6输血前为(52.1±9.9)ng/ml、输血后1h为(73.2±8.1)ng/ml;IL-10输血前为(18.8±6.7)ng/ml、输血后1h为(25.7±12.5)ng/ml,差异均有统计学意义(均P<0.05),自体输血可减轻TNF-α,IL-6和IL-10的升高程度。结论骨科手术中使用自体血回输技术,可明显减轻TNF-α、IL-6、IL-10等炎症因子表达程度的改变。     

不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及Toll样受体4表达的影响

目的观察不同类型脂肪酸对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及探讨可能的作用机制。方法 250μmol/L的棕榈酸(PA)、花生四烯酸(AA)以及二十碳五烯酸(EPA)分别与HepG2细胞共同培养24 h,葡萄糖氧化酶法测定细胞上清液中葡萄糖含量,酶联免疫吸附法测定炎性因子白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,以及实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测Toll样受体4(TLR4)mRNA的表达。结果 PA组培养液中葡萄糖含量显著高于空白对照组(P<0.05),EPA组可增加葡萄糖消耗量,与PA组及AA组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。各脂肪酸干预组细胞上清液中炎性因子IL-6和TNF-α含量均增加,EPA组增加量最低,PA组和AA组上清液中IL-6含量与空白组比较差异有统计学意义(P<0.05)。各脂肪酸干预组与空白组比较TLR4 mRNA表达量均增加(P均<0.05),EPA组增加量最低。结论高浓度PA降低了HepG2细胞对胰岛素的敏感性,能够引起胰岛素抵抗,AA具有降低胰岛素敏感性的趋势,而EPA则具有增加胰岛素敏感性的趋势,TLR4信号转导通路及其启动的炎症反应可能是其重要的作用机制。     

锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量影响

目的探讨锌对胰岛素抵抗靶细胞活力和葡萄糖消耗量的影响。方法建成Hep G2细胞、3T3-L1细胞和L6成肌细胞胰岛素抵抗模型后,用10-7mol/L胰岛素和不同浓度锌(0、20、50、100、200、400μmol/L)孵育细胞,通过MTT法和葡萄糖氧化酶法测定基础状态和胰岛素刺激状态下3种胰岛素抵抗细胞葡萄糖的消耗量。结果不同剂量的锌孵育3种细胞3 h后,200、400μmol/L的锌可明显抑制各组细胞的活力(P<0.05);50~100μmol/L的锌干预3 h能在不同程度上提高Hep G2、3T3-L1正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量,但其作用效果明显低于胰岛素;其中100μmol/L的锌与胰岛素共同作用的效果分别优于胰岛素或锌单独作用的效果(P<0.05);对于L6肌细胞,20、50和100μmol/L锌均能明显提高基础状态下正常细胞和胰岛素抵抗细胞的葡萄糖消耗量(P<0.05);仅有20μmol/L锌和胰岛素共同作用的效果优于胰岛素或锌单独作用的效果(P<0.05)。结论不同浓度的锌可以在一定程度上提高3种胰岛素抵抗的靶细胞葡萄糖摄取量,且不同的细胞具有不同的适宜作用剂量。     

高胰岛素血症诱导胰岛素抵抗与血糖浓度增加有关

目的 探讨高浓度胰岛素和高浓度葡萄糖共同作用对原代培养老鼠脂肪细胞的糖转运活动、细胞内胰岛素信号肽及葡萄糖转运子4（GLUT4）易位的影响。方法 分离的老鼠脂肪细胞在胰岛素（10^4μU/ml)和不同浓度葡萄糖（5、10、15、25mM)培养基中孵育24h,然后测定糖的转运活动;用Western blot方法测定这些细胞内胰岛素受体底物（IRS）1／2、肌醇磷脂－3－激酶85亚单位（p85)、蛋白激酶B（PKB）和GLUT4的蛋白表达。结果 胰岛素和不同高浓度葡萄糖培养24h,以一种剂量依赖的方式诱导糖摄取率的减少,抑制了IRS蛋白表达,而不影响p85、PKB和GLUT4的表达,但抑制了GLUT4易位至质膜;胰岛素加正常或不同高浓度葡萄糖治疗,均抑制了IRS2蛋白表达。结论 慢性胰岛素治疗诱导的胰岛素抵抗与周围环境中葡萄糖浓度增加有关,可能影响了胰岛素受体底物蛋白表达以及GLUT4易位等。