荧光定量PCR方法检测鼠疫耶尔森氏菌研究进展

鼠疫是由鼠疫耶尔森氏菌引起的一种严重危害人类健康的烈性传染病。鼠疫菌为短小的、无芽孢的革兰氏阴性杆菌,属于耶尔森氏菌属。目前我国诊断鼠疫的方法主要包括常规的"四步检验法"和血清学方法,如间接血凝试验(IHA),反向间接血凝试验(RIHA),酶联免疫吸附试验(ELISA),但方法对鼠疫     

应用内部对照PCR技术检测鼠疫菌DNA

目的调查吉林省长岭县鼠疫疫源地鼠疫活动信息。方法应用内部对照PCR方法直接检测鼠类脏器中鼠疫菌特有的基因片段并进行分析。结果共检查100份黄鼠标本,结果均为阴性,与细菌培养结果一致,未发现鼠疫信息。结论内部对照PCR检测技术可作为鼠疫菌DNA检测方法之一     

应用PCR方法检测鼠疫现场标本的研究

目的用PCR方法检测疑似鼠疫现场标本,以建立准确、简便和快速的诊断技术。方法对采自疫源地的自毙鼠标本用两种方法提取DNA,进行caf1、pla基因检测和染色体标识基因检测。结果 2份样本均能检测到caf1、pla基因(与Yersinia pestis caf1、pla基因序列比对同源性达到99%以上)和4个染色体标识基因ypo 2087、ypo 2090、ypo2094、ypo 2102,试剂盒提取方式敏感性高于煮沸法。结论优化模板提取方式、提高扩增效率、质粒和染色体多基因检测,可以提高鼠疫PCR诊断技术的检出率。     

鼠疫菌PCR检测方法的研究

本文采用聚合酶链反应技术，通过扩增鼠疫菌９．５ｋｂ质粒ｐｌａ基因上一个４５ｂｐ片段，用于鼠疫菌的快速论断对４株鼠疫菌参考株ＰＣＲ扩增后，琼脂糖凝胶电泳分析均呈现单一ＤＮＡ扩增区带，其分子量大小与预期结果相符。对１３株非鼠疫菌参考株作平行实验，ＰＣＲ扩增后未见扩增区带。其检测的敏感性为１０个ｃｆｕ。全部实验可在４ｈ内完成。     

鼠疫菌Pgm因子在阿拉善黄鼠体内的突变试验观察

用阿拉善黄鼠(Citellus alsachanicus)鼠疫疫源地的鼠疫菌Pgm~+和Pgm~-株,连续通过阿拉善黄鼠进行传代试验。在传代前后用阿拉善黄鼠测其毒力。Pgm~+株连续传代15代后未发现突变,其主要生化特性、抗原结构和毒力都没有发生改变。而含有0.1～0.3％Pgm~+鼠疫菌个体的Pgm~-株在连续传代5代后即突变为Pgm~+株,且毒力增强。但生化特性和抗原结构仍无改变。纯系Pgm~-株在连续传代8～11代后可突变为Pgm~+株,至20代仍未完全突变为Pgm~+,其他生化特性和抗原结构亦没有改变,但其毒力逐渐增强。作者分析鼠疫菌Pgm细胞突变与阿拉善黄鼠动物鼠疫流行和间歇有密切关系,这对研究该疫源地内鼠疫菌的保存机制及流行病学分析提供了参考资料。     

用PCR-EIA法快速检测鼠疫耶尔森氏菌

目前在全国鼠疫监测工作中,对鼠疫菌的检测都采用显微镜观察、培养、鼠疫噬菌体裂解实验和动物试验（称为四步检验）。这些传统的检测方法在鼠疫防治监测工作中发挥了重要的作用,但是,一旦遇到标本量大时,这些方法就显得烦琐、费时,而且也增加了检验者的工作量。近几年发展起来的ＰＣＲ－ＥＩＡ（Ｐｏｌｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ－Ｅｎｚｙｍｅ Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ）技术,敏感度高,特异性强,同时也保证了ＰＣＲ扩增技术的可靠性,可直接从动物脏器中检测出鼠疫苗ＤＮＡ,尤其是对大量标本的检测其优点更为突出…     

非鼠疫疫区方形黄鼠蚤鼠疫菌感染试验

方形黄鼠蚤阿尔泰亚种（C．tesquo。m．aha。ons以下简称为黄鼠蚤）是新疆灰旱獭一长尾黄鼠双宿主疫源地的主要寄生蚤之一。1982年钱存宁等曾在实验室对经区黄鼠蚤进行了感染率、菌性率方面的研究，并得出了该蚤的感染率和菌检率。据多方面指征，确认该蚤是鼠疫的主要传播媒介。那么非鼠疫疫区的方形黄鼠蚤对鼠疫菌感染的反应如何？就我frJ目前所查阅的文献中，尚未见研究报道。因此我们在实验室内对非疫区的黄鼠蚤进行了感染率方面的试验研究。1材料和方法工．且黄鼠蚤：采自经多次调查认为不存在鼠疫疫源性的和静县巴音布鲁克和巴仑台地…     

我国鼠疫菌pYC质粒PCR检测分析

目的分析全国其他类型鼠疫菌是否存在pYC质粒。方法设计yd1和yd2两对引物通过PCR 进行检查。结果共检查全国11块疫源地18个生态型鼠疫菌802份DNA,其中云南6份、广西5份、贵州6 份扩增阳性,云南另外的163份和全国其他菌株扩增结果均为阴性。结论 yd1和yd2基因仅存在于贵州、广西的菌株和云南的部分菌株中,可作为具有pYC质粒鼠疫菌的PCR诊断和标识基因;全国其他类型鼠疫菌无 6×103(pYC)新质粒。     

鼠疫菌EV76对达乌尔黄鼠体内微量元素含量的影响

微量元素与疾病的关系已引起越来越多科学工作者的兴趣。近年来,不少学者研究了鼠疫菌的生长、繁殖、毒性与某些元素的关系,然而涉及到黄鼠本身的尚未见报道。我们对用鼠疫菌EV76免疫后黄鼠体内微量元素的变化规律进行探讨,试找出某些元素在鼠疫动物病发生过程中的作用。     

PCR技术检测鼠疫菌的试验研究

鼠疫耶尔森氏菌是我国甲类一号传染病──鼠疫的病原体。对鼠疫菌的检测方法自５０年代起就一直应用常规的“四步”检验区［１］。这些方法虽然能够更直接地反映出疫源地的状态或鼠疫流行的强度及趋势,但这些方法也存在繁杂、费时和受材料腐败等诸多因素影响检出的痹病。因此建立一种具备快速、特异、敏感的方法,用于鼠疫的早期诊断是非常必要的。随着分子生物学的兴起,一系列新技术在鼠疫菌的检测中得到应用,如鼠疫菌的核酸探针技术区［２］和鼠疫菌的ＰＣＲ技术［２］等。本试验采用鼠疫菌９．５Ｋｂ质粒上的ｐｌａ基因和１００Ｋｂ质…     

用DNA探针技术鉴定鼠疫菌的研究

本试验采用的鼠疫菌ｆｒａ基因经ＰＣＲ扩增地高辛标记方法制备基因探针，通过菌落原位杂交试验进行部分鼠疫菌、假结核菌和大肠杆菌的鉴定、被试菌中ＥＶ、ＥＶ７６ｐａｒｉｓ、６１、Ｍ２３四株鼠疫菌呈现阳性反应，假结核菌和大肠菌均为阴性。     

宁夏阿拉善黄鼠鼠疫菌毒力特性实验报告

对宁夏黄鼠疫源地不同年代不同宿主分离的鼠疫菌毒力，Ｆ１抗原含量，ｐｓｔ１，ｌｃｒ反应及ｐｇｍ表型进行测定，发现６０年代分离的菌株与７０年代分离的菌株，毒力存在着明显的差异，６０年代菌株毒力强，流行范围广，ｌｃｒ反应及ｐｇｍ因子表型不同。ｐｇｍ＾＋株经黄鼠传递１５代，仍保持原有特性，而ｐｇｍ＾－经１５代传递有不同程度的改变，三次流行鼠疫菌株Ｆ１抗原含量基本相同，该疫源地菌株对三种试验动物敏感性相似。     

长尾黄鼠带鼠疫菌越冬实验观察

目的 通过长尾黄鼠(简称黄鼠)带鼠疫菌越冬实验,分析黄鼠是否存在带菌越冬的可能性,为探讨鼠疫菌在黄鼠体内越冬保存提供依据.方法 在2006年9月至2007年4月和2007年9月至2008年4月,于新疆乌苏古尔图鼠疫自然疫源地内,在自然条件下模拟黄鼠带菌越冬过程,按1000万个菌/鼠,将鼠疫菌注射到178只黄鼠鼠鼷部皮下,进行黄鼠人工感染.将感染鼠疫菌的黄鼠置于鼠疫疫源地内人工修建的全黑(温度:1～5℃)地下室(距离地面下2 m)内,使其与外环境的黄鼠同步自然冬眠,待次年4月自然醒眠后,观察存活黄鼠体内的带菌情况.结果 接种鼠疫菌的178只黄鼠,经过6个多月的冬眠期(当年的10月至下年的4月),醒眠后存活鼠68只,其余110只未度过冬眠期全部死亡,存活率为38.2%(68/178).未完成整个冬眠期死亡的110只黄鼠进行解剖和脏器鼠疫菌培养,67只阴性(-),43只阳性(+),阳性牢为39.1%(43/110).在这些鼠疫菌阳性鼠中,可见明显的肺充血水肿,心、肝、脾、肾及注射部位可见明显出血性炎症等病理改变;阴性鼠未见任何病理改变.完成整个冬眠期醒眠后存活的黄鼠,正常饲养20 d后处死,经解剖观察,脏器中未见任何病理改变;取心、肝、脾、肺等脏器及注射部位进行鼠疫菌培养,全部呈阴性(-);抗体检查阳性率为69.1%(47/68),抗体滴度范围主要在1:32～1:64.结论 黄鼠可以带菌冬眠,但带菌过程未能覆盖整个冬眠期,呈不完全迁延性带菌过程;完成整个冬眠期存活的黄鼠未能检出鼠疫菌,表明黄鼠不能带菌越冬.     

广东省鼠疫静息期3种耶尔森氏菌鼠疫PCR检测

目的应用PCR试验对广东省3种耶尔森氏菌进行鼠疫的特异性基因检测。方法应用含内部对照PCR技术,以鼠疫菌特异基因fra、pla的2对引物进行PCR实验。结果假结核菌1株、11株小肠结肠炎菌O∶3、5株O∶9、1株中间型,结果全为阴性。结论该试验菌没有鼠疫菌的特异性基因fra、pla,可以进一步说明从1973～1986年雷州半岛用鼠疫IHA、RIHA从鼠类检出的阳性材料是特异的。     

不同PCR联合用于鼠疫耶尔森菌的检测

目的 建立一种用4对不同引物快速鉴定鼠疫耶尔森菌的PCR方法。方法 分别采用4对针对V抗原，cafl，pla和inv4种基因的引物，在4只管中进行相同循环参数的扩增。结果 用这4对引物能特异性地扩增出鼠疫耶尔森菌217，478，524，295bp的目的DNA片段。结论 该法可用于鼠疫耶尔森菌简便、快速和准确的检测。     

用PCR法检测小儿胃液中幽门螺杆菌DNA

幽门螺杆菌(Hp)在儿童中的感染比较普遍.检查Hp方法比较多,例如Hp培养法、组织HE染色检查法、呼气试验、尿素酶试验、粪便Hp抗原检测、HpDNA检测等.本文讨论用荧光PCR法检测胃液中HpDNA以诊断Hp感染.     

宁夏阿拉善黄鼠鼠疫抗体动态及鼠疫菌检出率的关系

阿拉善黄鼠感染鼠疫菌５ｄ出现抗体，２１～２３ｄ为高峰，阳性率为１００％，阳性滴度为ＧＭＴ９６９～１１３０，１００ｄ仍有阳性；鼠疫菌感染黄鼠２ｄ检出鼠疫菌，３～４ｄ达高峰，阳性率为１００％，以后逐渐下降，７ｄ后很少出现菌血症，仅有感染局部带菌。在鼠疫流行高峰期，抗体滴度高，检菌率也高；鼠疫流行处于末期或静息期，就很难检出鼠疫菌。因此在鼠疫监测工作中，检菌和检查鼠疫抗体应同步进行。