肌肽对血管平滑肌细胞钙化的影响及机制研究

目的:探讨肌肽对β 磷酸甘油诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)钙化形成的影响及可能的机制.方法:原代分离和培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为对照组(正常培养液)、钙化组(10mMβ-磷酸甘油)和干预组(10mMβ-磷酸甘油和10mM肌肽),连续处理10d.茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)活性测定各组细胞钙化情况,We...     

Bcl-2/Bax与大鼠主动脉钙化的关系

目的探讨Bcl-2/Bax表达与大鼠主动脉钙化的关系。方法 16只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组和钙化组,每组8只。钙化组大鼠给予维生素D3300 000 U·kg-1肌肉注射,每日1次;尼古丁25 mg·kg-1溶于花生油中早、晚各灌胃1次诱导大鼠血管钙化模型。对照组大鼠同时间点给予灌服等量生理盐水。干预6周后股动脉放血处死大鼠,Von Kossa染色观察主动脉形态变化,免疫组织化学法和免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2/Bax蛋白表达。结果钙化组大鼠主动脉血管中膜弹性纤维间可见大量黑色颗粒沉积,而对照组大鼠无黑色颗粒。免疫组织化学法检测结果显示,与对照组比较,钙化组大鼠主动脉平滑肌细胞中Bcl-2表达无明显变化(P>0.05),而Bax阳性表达率显著增高(P<0.05)。Western blot检测结果显示,与对照组比较,钙化组大鼠主动脉平滑肌细胞中Bcl-2蛋白表达无明显变化,Bax蛋白表达显著增加(P<0.05)。结论凋亡系统Bcl-2/Bax失衡可能为血管钙化的机制之一。     

Wnt/β-catenin信号通路在慢性肾脏病血管钙化中作用的研究进展

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者血管钙化(vascular calcification, VC)的发生率高、危害性大,具体发病机制仍未明确。近期研究发现Wnt/β-catenin信号通路参与VC的发生与发展,与慢性肾脏病矿物质和骨异常(chronic kidney disease-mineral and bone disorder,CKD-MBD)的骨-血管轴密切相关,并且在CKD病程中的调节出现异常,本文就Wnt/β-catenin信号通路在慢性肾脏病血管钙化中作用的研究进展做一综述。     

慢性肾脏病血管钙化大鼠血清炎症因子抗体芯片检测及分析

目的应用抗体芯片技术检测慢性肾脏病(chronic renal disease,CKD)血管钙化大鼠模型血清中的炎症细胞因子水平,并探讨炎症与血管钙化之间的关系。方法 30只SD雄性大鼠分成对照组和模型组,每组15只。模型组大鼠联合腺嘌呤灌胃和阿霉素尾静脉注射建立大鼠慢性肾脏病血管钙化模型;对照组大鼠给予相应的生理盐水处理。给药28 d后取材检测肾功能、电解质等生化指标,天狼猩红染色法检测肾纤维化病变,HE染色检测血管病理改变,von Kossa染色法检测血管钙化程度,免疫组织化学染色法检测平滑肌肌动蛋白α(α-SMA)及Runt相关转录因子2(Runx2)表达。细胞因子抗体芯片检测两组大鼠血清中27种细胞因子水平的变化。结果模型组大鼠血肌酐、尿素氮及钙磷水平升高;天狼猩红染色显示模型组大鼠肾有明显的纤维化病变; HE染色显示主动脉中膜有弹性纤维断裂; von Kossa染色显示模型组大鼠主动脉中膜层有大量黑色颗粒沉积;免疫组织化学染色显示模型组较对照组α-SMA表达减少而Runx2表达增多。抗体芯片结果显示模型组CINC、GM-CSF、IFN-γ、IL-1α、IL-6、MCP-1、ICAM-1、TIMP-1、L-selectin、IL-2及IL-10较对照组均有不同程度的升高,而IL-4、IL-13、fractaikine、IL-1β、TNF-α较对照组降低。结论慢性肾脏病血管钙化大鼠发生了明显的炎症反应失衡,其中致炎因子占主导作用。     

腺嘌呤诱导慢性肾脏病大鼠模型的骨与矿物质代谢异常

目的观察腺嘌呤诱导的慢性肾脏病(CKD)大鼠模型矿物质代谢生化标志物、血管钙化和肾性骨病改变的特点。方法 20只雄性SD大鼠随机分2组:正常对照组和CKD组。第2周末,行血清生化标志物检测。第6周末处死大鼠,行血清生化标志物检测、主动脉血管病理学检查和血管钙磷含量测定,取股骨和第五腰椎做骨密度(BMD)检查、骨形态计量学分析。结果在第2和第6周末,CKD组大鼠血肌酐、尿素氮、血磷、血清甲状旁腺激素较正常对照组均明显升高,血钙明显下降。CKD组有50%的大鼠发生中膜血管钙化,正常对照组无血管钙化发生。CKD组的血管钙、磷含量均明显大于正常对照组。BMD检查,与正常对照组比较,CKD组的全股骨、股骨皮质骨、股骨小梁骨和第五腰椎BMD均明显降低。骨形态计量学方面,CKD组大鼠的小梁骨骨吸收和骨形成均处于高水平,处于高转换状态;CKD组大鼠小梁骨和皮质骨骨量明显低于正常对照组大鼠;CKD组大鼠小梁骨骨矿化与正常对照组大鼠比较无明显差别。结论腺嘌呤诱导的CKD大鼠模型表现为低血钙、高血磷和高血清甲状旁腺激素;血管钙化表现为中膜钙化;肾性骨病表现为小梁骨高转换、正常矿化和低皮质骨和小梁骨骨量,也符合纤维性骨炎的特点。腺嘌呤诱导的慢性肾脏病大鼠模型可以作为未来开展慢性肾脏病骨及矿物质代谢异常研究的良好载体。     

冠脉通片防治慢性肾脏病大鼠血管钙化的作用研究

[目的] 观察冠脉通片对大鼠慢性肾脏病（CKD）血管钙化的防治作用。[方法] 采用灌胃给予腺嘌呤加髙磷饮水的方法制备大鼠CKD血管钙化模型。造模同时灌胃给予不同剂量冠脉通片,连续10周。腹主动脉取血检测血清尿素、肌酐、钙、磷水平,试剂盒检测腹主动脉钙含量,苏木精-伊红（HE）染色观察肾和血管组织变化,硝酸银染色观察血管钙化情况。[结果] 冠脉通片0.46、0.23 g/kg组能显著降低模型大鼠血清尿素、肌酐及磷水平,升高钙水平;明显降低腹主动脉钙含量;肾脏HE染色结果提示,与正常组相比,模型组大鼠肾小球结构紊乱,肾小管代偿性扩张,局部见棕褐色结晶沉积,肾脏间质弥漫淋巴和单核细胞浸润,大量成纤维细胞增生,形成广泛纤维化,肾脏血管明显减少。与模型组比较,冠脉通片组正常肾小球数目增多,肾小管扩张程度降低,炎性细胞数量下降,腺嘌呤结晶减少。其中,冠脉通片0.46 g/kg组效果更好。HE与硝酸银染色显示,与模型组相比,冠脉通片0.46、0.23 g/kg组大鼠胸主动脉钙化灶面积明显缩小,其中冠脉通片0.46 g/kg组效果更好。[结论] 冠脉通片对CKD血管钙化大鼠有明显防治作用,可改善肾功能,纠正钙、磷代谢紊乱,降低动脉钙含量,缩小钙化面积。     

氧化苦参碱对大鼠血管平滑肌细胞钙化抑制作用的研究

目的 观察氧化苦参碱(Oxymatrine, OMT)对血管钙化的影响,探讨血管钙化的发生机制.方法 以a-甘油磷酸盐诱导大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMCs)钙化,OMT干预.采用磷酸苯二钠法测定碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa染色鉴定细胞钙化,比色法测定细胞钙含量,硫代巴比妥酸法测定细胞丙二醛(MDA)含量.结果 a-甘油磷酸盐可诱导VSMCs发生钙化,钙化组细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量明显增高,OMT呈浓度依赖性地降低细胞总钙含量、ALP活性和丙二醛含量,VSMCs的钙化程度亦明显减轻.结论 OMT能有效抑制a-甘油磷酸盐诱导的大鼠主动脉VSMCs钙化,其机制可能与减轻细胞的氧化损伤有关.     

miRNA103在高磷诱导的血管平滑肌细胞钙化中的作用

目的 观察微小RNA103(microRNA103,miR-103)在高磷诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)钙化过程中的作用及机制.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,将VSMCs随机分为正常组和高磷(HP)组(给予10 mmol/Lβ-甘油磷酸盐刺激),刺激...     

改良腺嘌呤饮食诱导慢性肾脏病大鼠血管钙化

目的 建立高效稳定的慢性肾脏病(CKD)大鼠血管钙化模型,为进一步研究提供基础。方法 38只大鼠随机分为对照组 (正常饮食)8只、模型组(0.75%腺嘌呤高磷饮食)15只、改良组(0.3%腺嘌呤高磷含乳糖、酪蛋白饮食)15只;每2周收集血、尿液标本,测定血清肾功能、磷、白蛋白及尿磷水平;8周时进行生存分析、大鼠主动脉钙含量测定和Von Kossa染色评估主动脉钙化。结果 8周时改良组大鼠存活率明显高于模型组(P＜0.05)。与对照组比较,模型组和改良组大鼠BUN、SCr、血磷及尿磷升高;体质量和ALB下降(P＜0.05);但改良组指标变化更缓慢(8周与模型组6周时比较),BUN、SCr水平近似(P＞0.05),血磷、尿磷、ALB水平更高(P＜0.05)。改良组主动脉钙含量比模型组更高(P＜0.05),且两组均显著高于对照组(P＜0.05)。Von Kossa染色改良组和模型组主动脉出现中膜黑色钙化,改良组主动脉钙化积分明显高于模型组(P＜0.05)。结论改良腺嘌呤饮食喂养大鼠模型具有更长生存期和稳定的血管钙化,可进一步用于相关研究。     

氢氧化镧抑制慢性肾衰高磷血症所致血管钙化的作用机制

[摘要] 目的：研究氢氧化镧对慢性肾衰竭血管钙化的药理学作用,探究NF-κB通路对慢性肾衰血管钙化的影响。方法：使用腺嘌呤建立Wistar大鼠慢性肾衰模型,造模成功后,将模型鼠随机分为氢氧化镧低、中、高剂量组（LH 0.1,0.2,0.4 g/kg）、碳酸镧组（LC 0.3 g/kg）、 碳酸钙组（CC 0.42 g/kg）和Model组,另选15只Wistar大鼠作为Control组。给药8周后进行血清中的磷,钙,肌酐,尿素氮,甲状旁腺素（PTH）和成纤维细胞生长因子23（FGF23）的检测,胸主动脉的 Von-kossa、EVG 染色进行组织病理学观察,qRT-PCR 和 Western Blot 检测SM22α、Runx2以及 NF-κB 通路 TRAF6和 NF-κB 的基因及蛋白的表达情况。结果： (1)氢氧化镧可显著降低CKD大鼠血清磷、肌酐、尿素氮、PTH、FGF23血清水平。(2)氢氧化镧各剂量组均可减少胸主动脉钙化沉积,改善弹性纤维的断裂。(3)氢氧化镧可剂量依赖性升高SM22α的蛋白表达,降低Runx2、TRAF6和细胞核内NF-κB的蛋白表达。结论： (1)氢氧化镧可通过调节钙磷代谢,抑制血管钙化的发生及发展。(2)氢氧化镧抑制血管钙化的作用机制可能是通过抑制NF-κB通路的激活实现的。     

2型糖尿病大鼠模型血管钙化及相关因素分析

目的观察2型糖尿病大鼠模型血管钙化发生情况并分析其危险因素。方法用高脂肪、高热量饲料加腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立大鼠糖尿病模型,对照组予常规饲料。通过VonKossa染色和原子分光光度计方法观察2组大鼠血管钙化情况,同时检测血糖、胰岛素、尿白蛋白和肌酐清除率(Ccr)等变化。结果血糖、胰岛素和腹腔注射葡萄糖糖耐量试验等结果证实造模成功。2组大鼠胸主动脉HE、VonKossa染色未见明显钙盐沉积,原子分光光度计定量检测显示实验组大鼠血管钙含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。相关分析未发现体质量、血糖、血胰岛素、尿白蛋白和Ccr与血管钙含量相关。结论用高脂肪、高热量饲料和腹腔注射STZ建立的糖尿病大鼠模型的胸主动脉钙含量明显增加,其血管钙化的原因和机制有待于进一步研究。     

高龄大鼠血管钙化及血管壁骨桥蛋白、骨钙素表达的研究

目的研究高龄大鼠血管钙化的发生情况,以及骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、骨钙素(osteocalcin,OC)在高龄大鼠动脉血管壁表达的变化。方法选择20只20月龄的SD大鼠为实验组,20只3月龄的SD大鼠为对照组,取大鼠的主动脉条、心脏和肾组织备检。HE染色观察血管形态,Von Kossa染色判断钙盐沉积程度,免疫组化和蛋白质印迹法(Western-blot)测定血管壁OPN、OC的表达情况。结果实验组大鼠血管平滑肌细胞排列紊乱,中膜层厚度增加,弹力板断裂,血管纤维化程度增高;对照组大鼠血管内膜内皮细胞、血管平滑肌细胞排列整齐,弹力板完整。实验组大鼠的大动脉和微小动脉内均可见钙盐沉积,对照组动脉未见钙盐沉积。实验组大鼠血管壁OPN、OC的表达较对照组明显上调(P0.05)。结论血管中膜钙化可能是血管老化的病理表现,血管钙化的形成可能与骨形成相关蛋白OPN和OC的表达上调有关。     

慢性肾病大鼠血管钙化与骨代谢标志物的相关性研究

目的研究慢性肾病(CKD)大鼠血管钙化与血清骨代谢标志物的相关性。方法将36只雄性SD大鼠随机分为对照组(18只)和CKD血管钙化组(18只)。钙化组予以腺嘌呤联合高磷饲料,对照组予以生理盐水和普通饲料。实验第2、4、6周末处死大鼠,留取主动脉行Von Kossa染色和钙含量检测钙化程度,留取血、尿检测尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和骨代谢标志物:钙(Ca)、磷(P)、1,25-二羟基维生素D3(1,25(OH)2D3)、甲状旁腺素(PTH)、骨源性碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、总Ⅰ型前胶原氨基末端肽(tPINP)、β-Ⅰ型胶原交联羧基末端肽(β-CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)及24 h尿蛋白定量(24 h-Upro)。结果对照组各时间点主动脉Von Kossa染色均未见黑色物质沉积,CKD血管钙化组随时间进展黑色物质沉积逐渐增多。与对照组相比,CKD血管钙化组BUN、Scr、24 h-Upro、主动脉钙含量升高(P<0.05);Ca、1,25(OH)2D3、PTH、tPINP、β-CTX、TRACP-5b降低(P<0.05),P、Ca*P升高(P<0.05),BALP、OC升高(P>0.05);经二元logistic回归发现血清Ca*P升高、PTH和TRACP-5b降低是血管钙化的独立危险因素。根据主动脉钙化程度,将CKD血管钙化组进一步分为轻中度钙化(2 W和4W)和重度钙化(6 W)两个亚组。与轻中度钙化组相比,重度钙化组BUN、Scr、主动脉钙含量升高(P<0.05),24 h-Upro升高(P>0.05);Ca、P、1,25(OH)2D3、tPINP、TRACP-5b升高(P>0.05),Ca*P、PTH、BALP、β-CTX升高(P<0.05),OC降低(P<0.05);进行血管钙化严重程度的危险因素分析发现血清Ca*P升高和OC降低是血管钙化严重程度的独立危险因素。相关性分析显示血清Ca*P、PTH、BALP、β-CTX水平与血管钙化程度呈正相关,OC与血管钙化程度呈负相关。结论 CKD大鼠血管钙化与骨代谢密切相关,检测血清骨代谢标志物有助于评估血管钙化的发生和判断血管钙化的严重程度及进展。     

慢性肾脏病5期患者桡动脉钙化相关因素分析

目前血管钙化(vascular calcification,VC)被认为是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)患者常见的并发症,血管钙化的程度是强有力的心血管病死率的预测因素[1]。血管钙化患者可出现血管顺应性降低、动脉舒张能力减弱、心脏后负荷增加、难以控制的高血压及脏器缺血等。因此,早期发现及预防CKD患者血管钙化,对于预防心血管事件的发生具有重要意义。     

磷酸二酯酶在鼠胸主动脉中的表达及其对血管张力的调节作用

目的 观察磷酸二酯酶(PDE)1和PDE3亚型在大鼠胸主动脉中的表达及其对血管张力的调节作用.方法 采用RT-PCR检测PDE1和PDE3亚型mRNA的表达.将大鼠胸主动脉制备成2～3 mm的血管环,苯肾上腺素(PE)诱导血管环收缩后,分别用特异性PDE1抑制剂IC86340和PDE3抑制剂milrinone处理去除内皮组和保留内皮组的血管环,测定两组舒张血管的作用.结果 ①PDE1A、PDE1B、PDE1C、PDE3A和PDE3B亚型mRNA在大鼠胸主动脉均有表达.②在保留内皮组和去除内皮组,IC86340均舒张PE诱发的血管收缩(P<0.01);并且对去除内皮组的舒张作用小于保留内皮组(P<0.01).③在保留内皮和去除内皮组,milrinone均可舒张PE诱发的血管收缩(P<0.01);但milrinone在低浓度时(1×10-6.5～1×10-6 mol/L),去除内皮组舒张血管的作用大于保留内皮组(P<0.05),而高浓度(1×10-5.5～1×10-5 mol/L)时两组差异无统计学意义(P>0.05).结论 PDE1和PDE3亚型mRNA在大鼠胸主动脉表达并参与血管张力的调节.PDE1部分通过血管内皮依赖的机制调节血管张力,PDE3则通过内皮非依赖的途径调节血管张力.     

选择性阻断环鸟苷酸依赖性蛋白激酶Ⅰ对盲肠结扎穿孔致脓毒症大鼠血管环收缩功能的影响

目的探讨选择性阻断环鸟苷酸依赖性蛋白激酶Ⅰ(PKG-Ⅰ)对脓毒性休克大鼠血管低反应性的影响。方法将雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(SHAM组)、模型组(CLP组)、一氧化氮合成酶抑制剂组(L-NAME组)和PKG-Ⅰ特异性抑制剂组(DT-2组),每组20只。采用盲肠结扎穿孔法建立脓毒症模型,每组分别于造模后2、4、6h各取5只大鼠,分离胸主动脉制成血管环,L-NAME组和DT-2组血管在检测前分别与L-NAME或DT-2孵育30min。观测血管环对苯肾上腺素(PE)的浓度梯度效应曲线、最大收缩力(Emax)及产生Emax的半数有效浓度(EC50)。于造模后4h,每组各另取5只大鼠分离胸主动脉,采用光谱法定量检测其PKG-Ⅰ活性。结果造模后2、4、6h,CLP组的血管环收缩功能均显著低于SHAM组和L-NAME组(P值分别<0.05、0.01);造模后6h,L-NAME组显著低于SHAM组(P<0.05);造模后4h,DT-2组显著高于CLP组(P<0.05)。与SHAM组比较,CLP组造模后2、4、6h的Emax值均显著降低,但EC50值均显著升高(P值分别<0.05、0.01)。与CLP组比较,L-NAME组造模后2、4、6h的Emax值均显著升高,EC50均显著降低(P值分别<0.05、0.01)。DT-2组造模后4h的Emax值较CLP组显著升高,EC50显著降低(P值分别<0.05、0.01)。造模后4h,CLP组的PKG-Ⅰ活性值(0.905)较SHAM组(0.640)显著升高(P<0.01),L-NAME组及DT-2组的PKG-Ⅰ活性值(0.672、0.724)均较CLP组显著降低(P值均<0.05)。结论选择性阻断PKG-Ⅰ可部分恢复脓毒症大鼠血管环低反应性。     

三氧化二砷诱导大鼠血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导血管平滑肌细胞(VSMCs)凋亡的机制。方法建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞增殖模型。通过透射电镜、流式细胞仪观察As2O3作用后细胞凋亡形态学和细胞胞浆游离钙离子(Ca^2 )浓度的变化。结果经As2O3处理的VSMCs电镜下呈现凋亡的特征性改变,形态学上表现为细胞胞膜完整、染色质固缩及核碎裂。流式细胞仪分析显示,VSMCs在As2O3作用后出现凋亡峰,而As2O3能通过促进细胞外Ca^2 内流和细胞内Ca^2 池的释放提高胞浆游离Ca^2 浓度。结论As2O3可诱导VSMCs凋亡,并可能与胞浆游离Ca^2 浓度升高有关。     

慢性肾病血管钙化的发病机制研究进展

血管钙化是慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)患者并发心血管疾病的主要原因,钙磷代谢紊乱、脂肪因子、炎症、微生物菌群以及氧化应激等一系列因素引起的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)成骨样转化与凋亡、基质囊泡和凋亡小体的形成、钙调因子的失衡共...     

慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的影响

目的 探讨慢性间歇性低氧对大鼠胸主动脉内皮细胞的损伤变化。方法 将12只10～12周龄的雄性SD大鼠采用抽签法分为对照组和实验组,每组各6只。实验组大鼠每天10点至18点置于间歇性低氧环境中暴露,对照组大鼠不做低氧处理,共4周。饲养时间结束后取大鼠胸主动脉标本行苏木精-伊红染色（hematoxylin and eosin staining,HE染色）及原位末端转移酶标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL）染色观察细胞病变情况,并计算病变细胞、凋亡细胞在视野中所占比例。结果 HE染色光镜下实验组可见血管内皮细胞肥大,排列不规则,细胞核、胞质着色淡,平滑肌细胞核肿胀;对照组见血管内皮细胞和平滑肌细胞排列规则、细胞核形态及染色正常。TUNEL染色光镜下实验组可见多个凋亡细胞,对照组偶见凋亡细胞。实验组大鼠主动脉组织的细胞病变率及凋亡率均显著高于对照组（P<0.01）。结论 阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征所产生的慢性间歇性低氧可损伤大鼠胸主动脉...     

选择性阻断cGMP依赖性蛋白激酶对内毒素孵育的大鼠血管环收缩功能的影响

目的观察选择性阻断cGMP依赖性蛋白激酶(PKG)对恢复内毒素(LPS)孵育的大鼠血管环收缩功能的影响。方法取SD大鼠胸主动脉血管环,随机分为正常对照组(生理盐水)、LPS组(75μg/mL LPS)、N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)组(75μg/mL LPS+0.1 mmol/L L-NAME)和DT-2三氟醋酸盐(DT-2)组(75μg/mL LPS+0.002 mmol/L DT-2)。在体外测定LPS孵育2、3、4 h后各组血管环在苯肾上腺素(PE)作用下收缩的浓度效应曲线、最大收缩力(Emax)和产生最大收缩力的半数有效浓度(EC50)。结果 LPS孵育后各时间点血管环的收缩浓度效应曲线与对照组比较明显降低(P<0.05)。L-NAME可以提高LPS孵育2、3、4 h时血管环的收缩功能,Emax和EC50较LPS组差异有统计学意义(P<0.05)。DT2可以显著提高LPS孵育3 h时血管环的收缩功能(P<0.01),Emax和EC50的差异具有统计学意义(P<0.01),但在2 h和4 h时,DT-2组与LPS组血管环收缩的浓度效应曲线比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论选择性阻断cGMP依...