天麻素通过抑制细胞凋亡保护谷氨酸诱导的PC12细胞损伤

目的：研究天麻素（Gastrodin）对谷氨酸诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的影响及可能机制。方法：以谷氨酸建立体外培养PC12细胞损伤模型并采用MTT比色法测定细胞存活率;AO/EB双染法经荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用流式细胞术检测细胞内活性氧含量以及Annexin V/PI染色后的细胞凋亡率;Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白表达。结果：天麻素可明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1～10μmol/L剂量呈一定的量效关系;同时,天麻素可明显抑制谷氨酸引起的活性氧（ROS）的累积,降低谷氨酸诱导的活性Caspase-3蛋白的表达,降低PC12细胞的凋亡率,在0.1～10μmol/L剂量呈量效相关性。结论：在一定剂量范围内,天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与减少ROS的生成,阻止氧化损伤的发生,抑制Caspase-3途径依赖的细胞凋亡相关。     

PC12细胞中氧化还原因子-1对过氧化氢和谷氨酸损伤的不同反应

目的通过研究PC12细胞抗氧化应激的氧化还原因子-1(apurinic/apyrimidimic endonuclase/redox factor1,APE/Ref-1)分子在过氧化氢和谷氨酸损伤过程中表达水平的变化,探讨谷氨酸对神经细胞损伤的分子机制。方法以PC12细胞作为神经细胞模型,以200和400μmol/L浓度的过氧化氢或以10和20mmol/L谷氨酸钠处理PC12细胞,用噻唑蓝法(MTT法)检测细胞的损伤程度,以Western blot方法测定APE/Ref-1表达水平。结果过氧化氢对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达具有诱导作用。谷氨酸对PC12细胞的APE/Ref-1蛋白表达无影响。结论谷氨酸对PC12细胞的损伤过程中,所产生的氧化应激作用的水平很低,远不足以引起抗氧化应激的APE/ref-1蛋白的代偿反应。     

藁本内酯对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的保护作用

研究藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞凋亡的保护作用。采用MTT比色法检测细胞存活率;Annexin V-FITC/propidium iodide(PI)双染法流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;Fluo-3/AM荧光染色法检测钙离子含量;Western blot法检测线粒体和胞浆中细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)及凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达。结果显示,谷氨酸具有细胞毒性,其半数抑制浓度(IC50)为15 mmol·L-1;不同浓度藁本内酯(1、5、15μmol·L-1)预处理可显著提高细胞存活率。与正常对照组相比,谷氨酸单独给药组的细胞凋亡率为13.39%;藁本内酯给药组(1、5、15μmol·L-1)使细胞的凋亡率分别减少到9.06%、6.48%和3.82%。并且藁本内酯可以显著减少谷氨酸所致的钙离子内流,Western blot结果显示,藁本内酯可能通过减少线粒体Cyt C的释放,抑制Caspase-3活性,同时升高Bcl-2/Bax比值来保护谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡。结果表明,藁本内酯对谷氨酸诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用。该保护作用可能与抑制细胞内钙离子内流及阻断Cyt C从线粒体释放入胞浆有关。     

胡黄连苷Ⅱ在谷氨酸诱导的PC12细胞损伤中的保护作用

目的：以谷氨酸为工具药建立氧化应激模型,观察胡黄连苷Ⅱ的保护作用并初步探讨其作用机制。方法：分别用不同浓度的胡黄连苷Ⅱ和10mmol/L的谷氨酸处理PC12细胞,通过MTT法检测细胞的活力,CDCFH染色法检测细胞氧自由基水平,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,Western blot检测bcl-2表达。结果：胡黄连苷Ⅱ能明显减轻谷氨酸对PC12细胞的损伤,提高细胞的存活率,降低细胞内的氧自由基水平,上调Bcl-2蛋白的表达,抑制细胞凋亡。结论：胡黄连苷Ⅱ对谷氨酸引起的PC12细胞损伤有保护作用,其作用机制可能与抑制或清除谷氨酸诱导的细胞内活性氧的生成,调节凋亡相关基因Bcl-2蛋白的表达有关。     

甘草次酸对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用及其机理

目的 考察甘草次酸对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用及作用机制.方法 使用20 mmol·L-1谷氨酸处理大鼠嗜铬细胞瘤细胞株(PC12),构建细胞凋亡模型.采用药物预处理给药方法,MTT法测定细胞存活率,Fluo-4 AM染色测定胞内钙离子浓度,JC-1染色测定线粒体跨膜电位变化,western blot测定Bcl-2和Bcl-X1蛋白表达.结果 甘草次酸可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞的还原能力,抑制细胞LDH的释放,提高细胞存活率;抑制兴奋性谷氨酸所引起的细胞内钙离子内流;还原谷氨酸引起的线粒体跨膜电位的减弱,增加Bcl-2和Bcl-X1蛋白的表达量.结论 甘草次酸可通过线粒体依赖途径有效抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡.     

银杏叶内酯N对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

目的 观察银杏叶内酯N(GN)对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用及与银杏叶内酯B(GB)的药效比较.方法 采用谷氨酸诱导的PC12细胞损伤作为脑缺血损伤的体外研究模型,采用MTT比色法和乳酸脱氢酶(LDH)活力检测法,观察GN对谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用.结果 GN能明显改善谷氨酸诱导损伤的PC12细胞的活...     

盐酸埃他卡林对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究盐酸埃他卡林(Ipt)对谷氨酸(Gli)所致细胞损伤的保护作用。方法 采用培养PC12细胞,MTT法测细胞存活率。结果 Ipt 1×10~(-10)～1×10~(-4)mol·L~(-1)可拮抗Glu介导的神经毒作用,提高细胞存活率,该保护作用可被10 μmol·L~(-1)格列苯脲(ATP敏感性钾通道拮抗剂)所取消。结论 Ipt可拮抗Glu介导的神经毒作用,该保护作用可能与ATP敏感性钾通道相关。     

梓醇对L-谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

梓醇是地黄中含量较高的活性成分,研究表明其对动物模型及培养细胞有明显神经保护作用[1～3].本室研究发现,梓醇可保护Aβ25～35损伤PC12细胞及脑内注射Aβ25～35拟AD小鼠的胆碱能神经系统功能,改善AD的病理变化,但其作用机制不明,既不是胆碱酯酶抑制剂,也不是M受体激动剂或阻断剂[4].兴奋性神经递质谷氨酸(glutamate,Glu)神经毒性在AD发病过程中起重要作用[5],梓醇的神经保护作用是否与影响L-Glu的毒性作用有关,本文利用PC12细胞对此进行了研究.     

7,8-二羟基-4-甲基香豆素对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用

目的探讨7,8-二羟基-4-甲基香豆素(Dhmc)对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞损伤凋亡模型,给予Dhmc处理后,MTT法检测细胞增殖;化学检测法测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量、细胞上清液中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)水平;采用Annexin-V-FITC双染法检测细胞凋亡率;采用荧光法检测活性氧(ROS)的生成;采用流式细胞仪检测线粒体膜电位(MMP);Western blot法检测Bcl-2、Bax、Cyt C、cleaved caspase-3蛋白表达。结果 Dhmc可显著降低由谷氨酸诱导的细胞损伤,提高了细胞存活率,减少LDH漏出量,降低MDA含量,增加SOD活性,抑制ROS的生成,维持线粒体膜电位水平,下调Bcl-2/Bax比率,减少Cyt C的释放,降低Caspase-3活性。结论 Dhmc具有减轻由谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的作用,其机制可能与抗氧化应激和减轻线粒体损伤有关。     

氯化钴诱导PC12细胞凋亡的分子机制

目的确定氯化钴(CoCl2)诱导PC12细胞凋亡的分子机制。方法500μmolLCoCl2诱导PC12细胞24h后,检测活性氧(ROS)生成量的变化以及抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)、二硫代苏糖醇(DTT)对细胞存活率和ROS生成量的影响;琼脂糖凝胶电泳检测NAC、DTT对CoCl2诱导PC12细胞DNA片段化的影响;利用RTPCR法检测凋亡相关基因bclxl和bax在PC12细胞调亡过程中的表达及NAC、DTT对基因表达的影响;化学发光法检测NAC、DTT对Caspase3表达的作用。结果在CoCl2诱导PC12细胞凋亡中,ROS生成量明显上升,为正常时的2.92倍;NAC、DTT可提高细胞存活率,由53.1%上升为94.8%和92.3%(P<0.01),并有效抑制ROS的生成,为正常时的24.2%和82.1%(P<0.01);同时抑制DNA片段化的发生。bclxl在细胞凋亡过程中表达明显下降,bax表达无明显变化;NAC和DTT可使bclxl的表达明显上升。Caspase3在细胞凋亡中被激活,NAC、DTT可抑制Caspase3的表达(P<0.01)。结论ROS介导了CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,这一过程与抑制bclxl表达,激活Caspase3有关。     

Neuroprotective effects of chlorogenic acid against apoptosis of PC12 cells induced by methylmercury

Chlorogenic acid (CGA) widely exists in edible and medicinal plants. We aimed to evaluate the effect of CGA on the protection from apoptosis by methylmercury (MeHg) in PC12 cells. Cell viability was evaluated by MTT assay. Apoptosis was assayed by flow cytometry detection. Caspase-3 activity was measured by confocal microscopy. Intracellular GSH levels were determined by bicinchoninic acid protein assay. Intracellular reactive oxygen species (ROS) was assessed by means of chloromethyl-dihydrodichlorofluorescein diacetate. Glutathione peroxidase (GPx) activity was determined by UV. In order to elucidate the action of CGA, the protective effects of CGA were compared to Vit.E. CGA was effective at protecting PC12 cells against MeHg-induced damage in dose-dependent manner. CGA not only suppressed the generation of ROS, the decrease of activity in GPx and the decrease of GSH, but also attenuated caspase-3 activation in PC12 cells by MeHg. CGA eventually protected PC12 cells against MeHg-induced apoptosis. The results highlighted that CGA may exert neuroprotective effects through its antioxidant actions.     

miR-132对谷氨酸诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的　探讨微小RNA-132（miR-132）对PC12细胞的保护作用及其可能的作用机制。方法　研究时间为2021年9月至2022年3月。取对数生长期PC12细胞,采用谷氨酸处理,建立兴奋性损伤模型;实验组采用瞬时转染法转染miR-132 mimics,培养24 h后加入谷氨酸处理24 h。采用CCK8法检测各组PC12细胞存活率;流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）及丙二醛（MDA）,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6的表达。采用LSD-t检验和χ²检验。结果　谷氨酸处理后的PC12细胞,miR-132表达水平低于对照组（P<0.01）。转染miR-132 mimics后PC12细胞的活力均高于转染NC mimics后（P<0.05）。转染miR-132 mimics后的氧化应激水平较NC mimics组降低（均P<0.05）。miR-132 mimics细胞炎症因子下调。结论　miR-132可促进PC12细胞的增殖、抑制PC12细胞凋亡,其机制可能为抑制氧化应激,下调炎症调节相关因子IL-1β、IL-6的表达。     

The effect of salidroside on cell damage induced by glutamate and intracellular free calcium in PC12 cells

Salidroside (Sald), was extracted from Rhodiola rosea L, a traditional Chinese medicine which has been used for long time for anti-aging, anti-cancer and anti-oxidative stress etc. In present experiment, salidroside could protect the PC12 cell against injuries caused by exposure of PC12 cells to 2 mmol/L glutamate for 15 min followed by incubation with serum-free medium for 24 h, which resembled the excitotoxin in vivo system. Furthermore, saldroside could decrease the [Ca²⁺]i of PC12 cells in Mg²⁺-free Hanks' solution and D-Hanks' solution but there was no effect on basal [Ca²⁺]i in Hanks' solution. The studies also indicated that salidroside inhibited the increases of [Ca²⁺]i induced by KCl and glutamate. In conclusion, salidroside may protect PC12 cell against glutamate excitotoxic damage through suppressing the excessive entry of Ca²⁺ and the release of the calcium stores.     

The effect of salidroside on cell damage induced by glutamate and intracellular free calcium in PC12 cells

Salidroside (Sald), was extracted from Rhodiola rosea L, a traditional Chinese medicine which has been used for long time for anti-aging, anti-cancer and anti-oxidative stress etc. In present experiment, salidroside could protect the PC12 cell against injuries caused by exposure of PC12 cells to 2 mmol/L glutamate for 15 min followed by incubation with serum-free medium for 24 h, which resembled the excitotoxin in vivo system. Furthermore, saldroside could decrease the [Ca2+]i of PC12 cells in Mg2+-free Hanks' solution and D-Hanks' solution but there was no effect on basal [Ca2+]i in Hanks' solution. The studies also indicated that salidroside inhibited the increases of [Ca2+]i induced by KCl and glutamate. In conclusion, salidroside may protect PC12 cell against glutamate excitotoxic damage through suppressing the excessive entry of Ca2+ and the release of the calcium stores.     

对氨基水杨酸钠对铅诱导体外培养PC12细胞凋亡的影响

目的探讨对氨基水杨酸钠(PAS-Na)对铅诱导PC12细胞凋亡的影响。方法 PC12细胞培养至其对数生长期后,正常对照组和正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组细胞于正常培养液中培养24 h后弃培养液,前者加入正常培养液、后者加入PAS-Na继续培养24 h。醋酸铅模型组及醋酸铅+PAS-Na 20,100和500μmol·L~(-1)组先与醋酸铅(终浓度10μmol·L~(-1))共培养24 h后弃培养液,再加入相应浓度PAS-Na继续培养24 h。用MTT法测定细胞存活率,试剂盒方法测定细胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量,Hoechst33342荧光染色检测凋亡率,AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测PC12细胞早期凋亡率,Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和P53蛋白水平。结果与正常对照组比较,醋酸铅模型组细胞存活率降低(P<0.05),细胞凋亡形态变化典型,细胞早期凋亡率增高(P<0.05),细胞内GSH含量降低(P<0.01),P53蛋白水平升高(P<0.01),Bax/Bcl-2比值升高(P<0.01);正常+PAS-Na 500μmol·L~(-1)组上述指标未见明显变化。与醋酸铅模型组比较,醋酸铅+PAS-Na组细胞存活率增高(P<0.05),细胞凋亡率和早期凋亡率均降低(P<0.05),细胞内GSH含量增高(P<0.01),P53蛋白水平和Bax/Bcl-2比值降低(P<0.05)。结论 PAS-Na对铅致PC12细胞凋亡有一定的拮抗作用,其机制可能与PAS-Na抗脂质过氧化损伤和降低Bax/Bcl-2比值有关。     

科罗索酸对大鼠嗜铬细胞瘤PC12细胞缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 研究科罗索酸(三萜类降血糖药)对PC12细胞缺氧缺糖损伤的保护作用.方法 用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)合并缺糖,致PC12细胞缺氧缺糖损伤模型,用MTT法测定细胞活力;用紫外分光光度法测定细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放量、细胞内乳酸(LD)和超微量ATP酶的活力.结果 与模型对照组比较,2个浓度(10,1μmol·L-1)科罗索酸可显著升高细胞活力,降低上清液LDH和细胞内LD含量,增强损伤细胞内Na+一K+ATP酶活力(P<0.05,P<0.01).结论 科罗索酸对PC12细胞缺氧缺糖损伤模型有明显的保护作用.