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pcDNA3.0/hTH和 pcDNA3.1/hGDNF共转染SH-SY5Y细胞的克隆筛选和鉴定 总被引：1，自引：1，他引：0
我们采用多基因表达技术把携带人胶质细胞源性神经营养因子 (ＧＤＮＦ)和酪氨酸羟化酶 (ＴＨ)基因的重组质粒转入ＳＨ ＳＹ5Ｙ细胞中 ,构建同时分泌人ＴＨ和ＧＤＮＦ的工程细胞 ,为探讨双基因治疗帕金森病 (ＰＤ)提供依据 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1.实验材料 :ｐｃＤＮＡ3.0 /ｈＴＨ和ｐｃＤＮＡ3.1/ｈＧＤＮＦ重组质粒 (普林斯顿大学崔振中博士构建 )。真核表达载体ｐｃＤＮＡ3.1:5 .6ｋｂ ,非功能区含ＨｉｎｄⅢ和ＢａｍＨⅠ酶切位点 ,带有抗潮霉素和氨苄青霉素标记基因 ,含有ＣＭＶ启动子和ＳＶ40增强子。细胞培养液 :采用最低… 相似文献
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为探讨ｐ16基因在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其在膀胱癌基因治疗中的应用前景 ,我们将野生型ｐ16基因导入缺失 ｐ16基因的ＢＩＵ 87细胞中 ,观察 ｐ16基因的肿瘤抑制功能。一、材料与方法1.ｐ16基因重组表达载体的构建与鉴定 :质粒 ｐＧＲＥ5 1含全长 0 .96ｋｂ的人 ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,用ＥｃｏＲＩ和ＸｈｏＩ双酶切 ｐＧＲＥ5 1分离出ｐ16ｃＤＮＡ基因片段 ,将其插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ3( 5 .4ｋｂ)的ＥｃｏＲＩ/ＸｈｏＩ酶切位点间 ,构建成重组质粒 ,命名为 ｐｃＤＮＡ3 ｐ16,酶切、电泳鉴定。2 .ｐ16基因转染ＢＩＵ 87细… 相似文献
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血管内皮生长因子反义寡核苷酸及抗KDR抗体对人肝癌细胞系HHCC的生长抑制作用 总被引：13，自引：1，他引：12
本研究采用ＶＥＧＦ反义寡核苷酸 (ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ,ＯＤＮ)抑制ＶＥＧＦ分泌及抗ＫＤＲ抗体封闭ＫＤＲ的方法 ,观察它们对体外培养的肝癌细胞系ＨＨＣＣ细胞生长情况的影响 ,以探讨ＶＥＧＦ及其受体在肝细胞癌中的作用。材料与方法1.细胞株 :人肝癌细胞株ＨＨＣＣ由第四军医大学病理学教研室 86 3课题组保存并提供 ,培养于含 10 0ｍｌ/Ｌ胎牛血清的ＲＰＭＩ 16 40培养液中。2 .寡核苷酸及抗体 :ＯＤＮ由上海生工合成 ,ＰＡＧＥ电泳纯化。反义ＯＤＮ为针对ＶＥＧＦ第 3外显子单链区第 37 5 5共 19个碱基设计而成 ,… 相似文献
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男性糖尿病病人 95 %属于Ⅱ型糖尿病 ,是勃起功能障碍 (ＥＤ)的高发人群。为评价西地那非对治疗Ⅱ型糖尿病病人ＥＤ的疗效 ,2 19例病人 (平均年龄 5 9岁 )被采用双盲法随机给予西地那非 (2 5～ 10 0ｍｇ ,ｎ =110 )或对照安慰剂 (ｎ =10 9)服用 12周 ,并与糖化血红蛋白浓度 (ＧＨｂ)和慢性糖尿病并发症进行了比较。主要评价标准包括ＩＩＥＦ 5评分第 3项 (获得 1次勃起 )和第 4项 (保持 1次勃起 ) ,次级评价标准包括全球有效性问卷 (ＧＥＱ)、生活满意度评分和ＩＩＥＦ的其它 3项指标。结果表明 ,12周后 ,服用西地那非组ＩＩＥＦ 5第3项及第… 相似文献
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单链抗体 (ＳｃＦｖ)因其能较好地保持对抗原亲和活性 ,分子量小 ,穿透力强 ,抗原性弱 ,且易与效应分子相拼接 ,是构建免疫毒素和双功能抗体的较理想元件。我们在已克隆抗胶质瘤单抗ＳＺ39重链可变区 (ＶＨ)和轻链可变区(ＶＬ)基因的基础上 ,构建了抗人脑胶质瘤ＳｃＦｖ基因 ,并克隆于表达载体ｐＧＥＸ 5Ｘ 1,在大肠杆菌中诱导表达 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1.材料 :(1)菌种与质粒载体 :ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＨ、ｐＧＥＭ Ｔ 39ＶＬ为含有ＶＨ、ＶＬ基因的克隆质粒 ,由本室构建。ｐＳＷ1 ＳｃＦｖ为含有一编码疏水性多肽接头 (Ｇｌｙ4 … 相似文献
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血管内皮生长因子反义寡核苷酸对肝癌血管形成的抑制作用 总被引：3，自引：0，他引：3
本研究旨在通过人工合成的血管内皮生长因子 (ＶＥＧＦ)反义寡核苷酸片段 ,在细胞水平检测其对肝癌细胞ＶＥＧＦ表达的抑制作用 ,探求一种新的抑制肝癌血管形成的基因治疗方法。一、材料和方法1.寡核苷酸 (ＯＤＮ)为上海生物工程公司利用美国ＰＥ公司 391型ＤＮＡ自动合成仪合成 ,ＰＡＧＥ电泳纯化 ,碱基序列为 :反义ＯＤＮ 5′ ＧＣＡＧＴＡＧＣＴＧＣＧＣＴＣＡＴＡＧＣＧＣ 3′,正义ＯＤＮ5′ ＣＴＡＴＣＡＧＣＧＣＡＧＣＴＡＣＴＧＣ 3′ ;人肝癌细胞系 772 1由第四军医大学病理86 3课题组提供。2 .以 1ｇ/ＬⅣ型胶原酶 (Ｓｉｇｍａ公司… 相似文献
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bFGF基因转染对成骨细胞生物学行为的影响 总被引：7，自引：0，他引：7
碱性成纤维细胞生长因子 (ｂＦＧＦ)是调控成骨细胞增殖和分化的首选生长因子之一 ,而且还是一种强大的毛细血管增殖刺激剂。但外源性生长因子半衰期短 ,需反复给药 ,且价格昂贵[1,2 ] 。我们将ｂＦＧＦ基因由体外转入兔骨膜源成骨细胞 ,观察了其对成骨细胞生物学的影响 ,报告如下。1.材料与方法 :含有ｂＦＧＦｃＤＮＡ的克隆载体ｐｕｃ13 ｒｂＦＧＦ由日本Ｉｎａｗａｓｈｉｒｏ博士惠赠 ,用ＥｃｏＲⅠ酶切ｐｕｃ13 ｒｂＦＧＦ及真核表达载体ｐｃＤＮＡ3,用Ｔ4ＤＮＡ连接酶连接后构建ｐｃＤＮＡ3 ｂＦＧＦ重组表达质粒并鉴定。无菌条件下取 … 相似文献
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《中国男科学杂志》2000,(4)
[ 1] Ｓｏｌｉｓ ＥＡ ,ｅｔａｌ[Ｒｏｕｎｄｃｅｌｌｓｉｎｓｅｍｅｎａｎｄｇｅｎｉｔａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ]Ａｒｃｈ Ｅｓｐ Ｕｒｏｌ 2 0 0 0Ｍａｒ;5 3(2 ) :10 1-5[2 ] Ｇｒｉｔｓｅｎｋｏ ＶＡ ,ｅｔａｌ.[Ｎｏｎｅｎｔｅｒｉｃｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｐｒｏｂｌｅｍｏｆｈｕｍａｎｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅｈｅａｌｔｈ ]Ｚｈ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ Ｉｍ ｍｕｎｏｂｉｏｌ 2 0 0 0Ｍａｒ-Ａｐｒ;4(2 ) :111-5[3] Ｂｕｋｈａｒｉｎ ＯＶ ,ｅｔａｌ.[Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｔｈｅｍｉｃｒｏｂ… 相似文献
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血管抑素K(1～3)基因片段的克隆与序列测定 总被引：1，自引：0，他引：1
我们用自己设计的一对引物,应用ＰＣＲ法成功获得血管抑素(ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｎ)Ｋ(1～3)基因片段,为进一步研究其表达和实体瘤抗血管生成治疗创造条件,现将结果报道如下。一、材料和方法1.菌种、载体及模板:大肠杆菌Ｅ.ＣｏｌｉＤＨ5α,基因型ｓｕｐＥ44,ｈｓｄＲ17ｒｅｃＡｌｅｎｄＡｌｇｙｒＡ96ｔｈｉ1ｒｅｌＡ1,载体ｐＧＥＭ3Ｚｆ( )为本室保存;人白细胞ｃＤＮＡ文库购自美国Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司。2.引物设计 克隆血管抑素Ｋ(1～3)Ｎ端功能区的引物如下,在其末端引入ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ酶切位点,引物由上海生物工程公司合成。… 相似文献
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肝癌自杀基因治疗与基因体内导入方法和途径的实验研究 总被引：4，自引：0，他引：4
我们采用携带单纯疱疹病毒胸苷激酶 (ＨＳＶ ｔｋ)基因的质粒型ＥＢ病毒(ＥＢＶ)复制子表达载体ｐＤＲ2 /ｔｋ ,研究其转染人肝癌细胞 (ＳＭＭＣ 772 1)后对更昔洛韦 (Ｇａｎｃｉｃｌｏｖｉｒ,ＧＣＶ )和阿昔洛韦(ＡＣＶ)的敏感性 ,包括杀伤作用和“旁观者效应”。在此基础上 ,根据肝脏的血供及肝癌手术治疗特点 ,利用携带人ＩＬ 2基因的ＥＢＶ复制子表达载体ｐＤＲ2 /ＩＬ 2 ,研究肝癌基因治疗中接近临床应用的最佳体内直接基因转移方法和途径。1.材料和方法 :表达载体ｐＤＲ2 /ｔｋ和ｐＤＲ2 /ＩＬ 2在中国预防医学科学院病毒所国家重点实… 相似文献
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银杏叶提取物促进大鼠坐骨神经再生的实验研究 总被引：5，自引：0，他引：5
研究显示 ,银杏叶提取物 (ｅｘｔｒａｃｔｏｆｌｅａｖｅＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ,ＥＧｂ)具有良好的神经保护作用[1 4 ] 。我们进行了ＥＧｂ对神经再生影响的研究。1.材料与方法 :雄性ＳＤ大白鼠 48只 ,随机分成损伤实验组 (ｎ =2 4)和对照组 (ｎ =2 4) ,ＥＧｂ由美国ＰＨＡＲＭＡＮＥＸＩＮＣ公司提供。制作坐骨神经挤压伤模型 ,术后对照组给予生理盐水 2ｍｌ灌胃 ,实验组给予ＥＧｂ 2 0ｍｇ (溶于 2ｍｌ生理盐水中 )灌胃。分别于术后第 2、4、6周作以下观察 :坐骨神经功能指数(ＳＦＩ) ;电生理检测 :用ＥｓａｏｔｅＰｈａｓｉｓ肌电仪测… 相似文献
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5-Fu对急性胰腺炎炎症相关细胞因子的调节作用 总被引：8，自引：0，他引：8
我们通过动物实验观察了 5 Ｆｕ对急性胰腺炎时血中炎症性细胞因子、ＴＮＦα、ＩＬ 1、ＩＬ 6和抗炎症细胞因子ＴＧＦβ和ＩＬ 10的抑制作用和胰腺炎病情改善的关系。1.材料和方法 :(1)动物模型和试验分组 :实验用雄性ＳＤ大鼠共分 3组 :Ａ组 :正常对照组 (ｎ =6 ) ;Ｂ组 :胰腺炎组 ,采用开腹胰管注射 5 %牛黄胆酸钠 (1 0ｍｌ/ｋｇ)制备急性胰腺炎动物模型 ;Ｃ组 :5 Ｆｕ治疗组 ,胰腺炎诱导成功后 0 5ｈ经阴茎背静脉注射 5 Ｆｕ 40ｍｇ/ｋｇ。Ｂ、Ｃ组在手术后 2、6、2 4ｈ处死动物 (每时段ｎ =7) ,分别抽血查ＴＮＦα、ＩＬ 1、ＩＬ 6… 相似文献
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神经生长因子对脊髓损伤后神经元N-甲基-D-天门冬氨酸受体和一氧化氮生成的影响 总被引：5，自引：3，他引：2
我们用原位杂交法通过检测神经生长因子 (ＮＧＦ)作用于损伤脊髓前后Ｎ 甲基 Ｄ 天门冬氨酸受体 (ＮＭＤＡＲ) 1及固有型一氧化氮 (ＮＯ)合酶 (ｎｃＮＯＳ)ｍＲＮＡ的表达变化来探讨ＮＧＦ保护损伤脊髓的机理 ,现报道如下。一、材料和方法1 .动物及分组 :Ｗｉｓｔａｒ大鼠 65只 ,体重 2 0 0～ 2 50 ｇ ,雌雄不分 ,随机分成 3组 :正常组 :5只 ,不作手术 ,作为测量脊髓ＮＭＤＡＲ1和ｎｃＮＯＳ的正常数值 ;生理盐水 (ＮＳ)组 :30只 ,经蛛网膜下腔导管注入生理盐水 ;ＮＧＦ组 :30只 ,经导管注入ＮＧＦ。2 .动物模型的建立 :以 1 0 ｇ× 2 .5ｃ… 相似文献
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山莨菪碱对急性坏死性胰腺炎肺损伤的治疗作用 总被引：2，自引：1，他引：1
我们以牛磺胆酸钠诱导大鼠 ,观察山莨菪碱对急性坏死性胰腺炎 (ＡＮＰ)大鼠肺脏形态和功能变化的影响以及对炎症介质的调节作用。一、材料和方法1 .材料 :雄性ＳＤ大鼠 69只 ,体重32 0～ 350 ｇ。肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)测试盒为Ｅｎｄｏｇｅｎ公司产品。2 .方法 :(1 )ＡＮＰ模型制备 :ＡＮＰ模型制备参照文献 [1 ]。假手术组 (ＳＯ)大鼠仅作剖腹术。 (2 )实验分组 :大鼠随机分 3组 :ＡＮＰ +ＮＳ组 (ｎ =2 3)、ＡＮＰ +山莨菪碱组 (ｎ =2 3)和ＳＯ组 (ｎ =2 3)。ＡＮＰ山莨菪碱治疗组术后 2、5、8、1 1ｈ分次经腹腔注射山莨菪碱生理盐… 相似文献
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血管内皮生长因子 (Ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)在 80年代早期被Ｄａｏｒａｋ[1,2 ] 及其同事发现 ,能够引起血管内液渗漏 ,所以又将其命名为血管通透因子 (ＶａｓｃｕｌａｒＰｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙｆａｃｔｏｒ ,ＶＰＦ) ,随后的 80年代后期 ,几个研究机构发现ＶＰＦ具有刺激血管内皮细胞增殖的作用 ,是一种潜在血管生成因子 ,又将其命名为ＶＥＧＦ。是迄今所发现最强的一种血管生成因子。ＶＥＧＦ的 5种形式一、ＶＥＧＦ是一种糖蛋白 ,分子量为 34～ 46ＫＤ ,为同二聚体分子。由于其ｍＲ… 相似文献
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恶性骨肿瘤中血管内皮生长因子表达的定量研究 总被引：2，自引：0，他引：2
目的 观察血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）在恶性骨肿瘤中的表达，并探讨ＶＥＧＦ在恶性骨肿瘤中的表达水平与ＤＮＡ倍体、细胞增殖活性及肿瘤侵袭性的关系。方法 应用流式细胞仪及免疫荧光技术检测几种恶性骨肿瘤（骨肉瘤、软骨肉瘤、滑膜肉瘤）的ＶＥＧＦ表达量（荧光指数ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｉｎｄｅｘ，ＦＩ）、ＤＮＡ含量（ＤＮＡ指数值ＤＮＡ ｉｎｄｅｘ，ＤＩ）及细胞增殖活性（增殖指数ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ 相似文献
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应用免疫组织化学方法检测乳腺良、恶性肿瘤中微血管密度 (ｍｉｃｒｏｖｅｓｓｅｌｄｅｎｓｉｔｙ,ＭＶＤ)和ＶＥＧＦ(ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)表达情况 ,评价ＭＶＤ及ＶＥＧＦ与乳腺癌的临床病理特征的关系及对预后判断的价值。资料与方法1.一般资料 :1989～ 1991年间于我院住院经手术治疗 ,病理证实为乳腺癌的女性患者 74例 ,年龄 33～ 6 4岁 ,平均 47岁 ;腋淋巴结阴性者 31例 ,阳性 43例 ;肿瘤最大径≤ 5ｃｍ者43例 ,>5ｃｍ者 31例 ;组织学分级Ⅰ级 10例 ,Ⅱ级 12例 ,Ⅲ级 5 2例 ;雌激… 相似文献
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胆系恶性肿瘤VEGFmRNA、bFGFmRNA、PDGFmRNA表达及意义 总被引：1，自引：1，他引：0
肿瘤的生长和转移均需血管生成 ,主要的促血管生成因子有血管内皮生长因子 (ｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｆａｃｏｔｒ ,ＶＥＧＦ)、碱性成纤维细胞生长因子 (ｂａ ｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ｂＦＧＦ)和血小板衍生生长因子 (ｐｌａｔｅｌｅｔｄｅｒｉｖｅｄｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ ,ＰＤＧＦ)。近年研究发现ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ及其ｍＲＮＡ表达与一些恶性肿瘤生物学行为、转移发生及其预后有密切关系〔13〕。作者应用原位杂交染色技术研究胆囊癌和肝外胆管癌组织中ＶＥＧＦ… 相似文献
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血管内皮生长因子 (ＶａｓｃｕｌａｒＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ,ＶＥＧＦ)是主要的肿瘤血管形成调节因子。ＶＥＧＦｍＲＮＡ含 4种异构体 (ＶＥＧＦ12 1、ＶＥＧＦ165、ＶＥＧＦ189、ＶＥＧＦ2 0 6) ,蛋白质为 46Ｋｄａ ,ＶＥＧＦ诱导血管生成后肿瘤易发生转移 ,患者预后不良 ,较少注意ＶＥＧＦ与肿瘤病理特征的联系。本研究以乳腺癌为模型 ,探讨ＶＥＧＦ表达与肿瘤生物学行为的关系。资料和方法1.标本来源 :连续收集我院普外科 1996年 12月至 1997年 6月的Ⅰ～Ⅳ期乳腺导管癌手术标本 30例 ,切取癌组织和癌旁组织各 … 相似文献