骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复皮肤缺损

目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)具有多向分化潜能和持续增殖能力,显示出作为组织工程种子细胞新来源的诱人前景。探讨MSCs作为皮肤组织工程种子细胞修复皮肤缺损的可能性。方法:采用密度梯度离心结合贴壁法分离纯化新西兰兔MSCs,经体外扩增后接种于胶原凝胶构建组织工程活性皮肤替代物。12只兔随机分成3组:MSCs复合胶原组织工程活性皮肤替代物实验组、单纯胶原对照组和空白对照组。将各组相应材料分别移植于兔耳皮肤缺损处,比较观察创面修复效果。结果:MSCs复合胶原实验组、单纯胶原对照组和空白对照组创面愈合时间分别为(14.2±1.9)d,(16.3±2.7)d和(20.1±4.1)d,差异有显著性意义(P<0.05)。组织学观察显示,MSCs复合胶原实验组成纤维细胞、微血管、胶原纤维均较单纯胶原对照组和空白对照组明显增多。结论:MSCs复合胶原构建的组织工程活性皮肤替代物移植后可加速新生血管形成、促进创面修复。提示以MSCs作为种子细胞复合胶原构建的组织工程皮肤可用于皮肤缺损的修复治疗。     

复方壳多糖人工皮肤促进创面愈合的作用

目的：证明复方壳多糖人工皮肤在体促进创面愈合能力，为该人工皮肤应用于临床尤其是覆盖感染创面提供实验依据。方法：健康雄性大鼠24只，每只背部做全层皮肤缺损创面2个，每个创面涂1&;#215;10^5克隆形成单位(colony foming unit，CFU)金黄色葡萄球菌，建立金黄色葡萄球菌污染创面大鼠模型，随机数字法分成实验组、对照组和空白对照组，每组16个创面，将复方壳多糖人工皮肤和复方胶原凝胶人工皮肤分别覆盖于实验组和对照组创面上，空白对照组无覆盖，通过细菌学、病理、免疫组化检查，了解两组之间的差别。结果：实验组和对照组的一般情况好，空白对照组差，实验组创面感染轻、创面收缩好，24h痂下细菌计量实验组为(8．09&;#177;2．51)&;#215;10^4CFU／g，明显少于对照组(5．91&;#177;2．51)&;#215;10^5CFU／g和空白对照组(5．55&;#177;2.18)&;#215;10^7CFU／g，差异有显著性意义；创周组织病理切片观察，实验组炎性细胞浸润少，愈合最快最好，对照组有炎性细胞浸润，空白对照组可见大量炎性细胞和渗出、出血、坏死；肌动蛋白免疫组化表明，实验组增生的纤维母细胞染色强阳性，对照组散在阳性，空白对照组染色阴性。结论：复方壳多糖人工皮肤有抗菌、抗感染和促进创面愈合作用，其作用优于复方胶原凝胶人工皮肤，是理想的创面覆盖物。     

新型支架材料羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合自体骨髓间充质干细胞修复关节软骨全层缺损

目的：观察自体骨髓间充质干细胞复合新型支架材料羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸修复兔膝关节软骨全层缺损。 方法：实验于2005-03／08在兰州大学骨科研究所完成。①抽取兔骨髓液经过密度梯度离心得到单个核细胞，在经过体外分离培养获得骨髓间充质干细胞，将骨髓间充质干细胞吸附于羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合材料上，再移植于兔膝关节全层软骨缺损模型处。②36只健康青紫兰兔被随机分成3组，每组各12只。细胞材料复合物组：将骨髓间充质干细胞与羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸复合物植入双侧股骨髁间窝软骨缺损处；单纯复合材料组：单纯植入羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸；空白对照组：不做任何植入。③分别于术后4，8，12周各处死4只兔子，取材进行大体、组织学及免疫组织化学染色观察。大体及组织学观察结果参照O’driscoll的评分标准进行评分。 结果：36只兔全部进入结果分析。①培养细胞的生物学特性观察：原代培养骨髓细胞7～10d后，多数细胞旋涡状排列。传代6h后细胞开始贴壁，5-7d铺满瓶壁。细胞形态均一呈梭形。②各组兔术后大体观察、股骨组织学检查：细胞材料复合物组术后12周大体评分明显低于单纯复合材料组和空白对照组（修复组织表面结构：0．45&;#177;0．25，1．15&;#177;0．25，2．47&;#177;0．39，P〈0．05；缺损填充深度：0．35&;#177;0．15。1．27&;#177;0．27，2．63&;#177;0．27，P〈0．05；与周围软骨结合情况：0．58&;#177;0．08，1．10&;#177;0．24。1．87&;#177;0．64，P〈0．05）。细胞材料复合物组12周关节软骨表面光滑，光镜下可见已形成正常软骨厚度的软骨层及完整的软骨下骨，与对照组有明显差异。修复组织Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性，强度与周围正常软骨无差别。软骨缺损处为透明软骨修复。组织学评分各项（缺损填充深度、与周围软骨结合情况、修复组织表面结构、细胞形态、潮线形成、甲苯胺兰染色）评分均显著低于单纯复合材料组和空白对照组。③各组兔修复组织吸光度值形态分析：修复方法在基质分泌方面优势顺序为：细胞材料复合物组〉单纯复合材料组〉空白对照组。 结论：自体骨髓间充质干细胞复合羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸材料以类透明样软骨组织完整修复缺损，是一种修复软骨缺损的行之有效的方法，羟基磷灰石／聚磷酸钙纤维／左旋聚乳酸可以做为组织工程软骨支架材料。     

转基因同种异体组织工程软骨修复兔膝关节全层缺损

目的：观察转人胰岛素样生长因子Ⅰ基因同种异体组织工程软骨对兔膝关节软骨全层缺损的修复作用。 方法：实验于2004～08／2005—08在军事兽医研究所病毒室及长春生物制品研究所实验室完成。①取出生28d新西兰白兔的关节软骨，采用机械分离及Ⅱ型胶原酶消化法获得分离的兔软骨细胞，用单层培养扩增。②用脂质体法使胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞。③以经过转染的兔关节软骨细胞作为种子细胞，牛Ⅰ型胶原作为支架，体外构建转基因同种异体组织工程软骨。④5个月龄的新西兰白兔80只制备关节软骨缺损模型，分别移植入不同组别的移植物：空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组，分别于术后4，8，16，24周处死各组动物4只取材，观察兔膝关节软骨全层缺损的修复情况。结果：①G418培养液筛选结果：通过G-418对于兔关节软骨细胞的最小致死剂量的测定得出，G418对软骨细胞的最小致死剂量为0．4g／L。转染后软骨细胞经0．4g／L G418筛选，2周后得到抗G418的阳性细胞克隆，而未转染细胞在含G418的培养液中逐渐全部死亡，初步证明人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的转染成功。②原位杂交检测结果：转染软骨细胞胞浆中有氯化镍紫蓝色颗粒阳性杂交信号说明有人胰岛素样生长因子1mRNA的表达；未转染细胞则未见阳性信号。③免疫组织化学检测结果：在转染的软骨细胞胞浆中有棕黄色颗粒样阳性信号，说明有Ⅱ型胶原蛋白表达，证明稳定表达人胰岛素样生长因子Ⅰ的转染软骨细胞保持Ⅱ型胶原的表达。④软骨缺损修复后的组织学评价结果：在试验所观察的24周内，软骨基本稳定，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因组织工程软骨显示出强烈的软骨基质分泌能力。转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对软骨缺损的修复效果明显优于空白对照组和单纯软骨细胞附和支架组[空白对照组、单纯支架组、单纯软骨细胞附和支架组、经过转染的软骨细胞附和支架组、自体软骨移植组修复软骨的组织学评分：术后4周为（12．00&;#177;0．79），（11．00&;#177;0．81），（8．10&;#177;0．90），（5．80&;#177;1．03），（5．20&;#177;0．46）分；术后8周为（10．20&;#177;0．96），（10．10&;#177;1．19），（7．10&;#177;1．34），（4．90&;#177;1．15），（4．00&;#177;0．58）分；术后16周为（8．00&;#177;1．24），（8．50&;#177;1．79），（5．20&;#177;1．88），（4．00&;#177;1．82），（2．00&;#177;1．96）分；术后24周为（7．00&;#177;0．90），（6．50&;#177;2．13），（4．30&;#177;2．00），（3．00&;#177;2．13），（1．20&;#177;0．78）分，P〈0．05]. 结论：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因转染兔关节软骨细胞后可以在细胞中表达，而且转胰岛素样生长因子Ⅰ基因的同种异体组织工程软骨对兔关节软骨全层缺损的修复效果明显。为进一步转基因组织工程软骨实验提供了依据。     

重组人血小板源生长因子促进糖尿病大鼠创面愈合机制的初步研究

目的：研究重组人血小板源生长因子(rhPDGF)对糖尿病大鼠全层皮肤缺损创面的修复作用及其可能机制。方法：在26只糖尿病大鼠背部制备4个全层皮肤缺损创面，创面随机分成3组，rhPDGF治疗组，凝胶剂基质组，空白组。观察伤后3，7和14d组织肉芽形成、胶原沉积、再上皮化速率，以及炎症细胞的浸润情况，并采用免疫组织化学方法观察创周和创基修复细胞增殖状况。结果：伤后7d，组织学检查显示，经rhPDGF。治疗的创面伤后7d肉芽组织生长活跃，其毛细血管胚芽与成纤维细胞数量显著多于其他组，大量的炎症细胞浸润和胶原沉积，rhPDGF治疗组伤腔容积减小至(0．03&;#177;0．03)mL，明显低于凝胶剂基质对照组(0．06&;#177;0．03)mL(P&;lt;0．05)和空白对照组(0．07&;#177;0．05)mL(P&;lt;0．05)。伤后7d,rh-PDGF治疗组的创面收缩明显，再上皮化速率达到46．1％，明显高于凝胶剂基质对照组(23．2％)和空白对照组(25．6％)。伤后14d，rhPDGF治疗组再上皮化速率达到99．9％，明显高于凝胶剂基质对照组(91．7％)和空白对照组(91．30％)。同时伤后组织中各类修复细胞PCNA的表达有显著差异。结论：rhPDGF对糖尿病大鼠创面有促修复作用，其对炎症细胞的趋化和修复细胞的增殖影响扮演重要角色。     

干细胞培养物表面滴注对豚鼠皮肤重度缺损的修复作用

背景：干细胞是动物和人的一种特殊功能的细胞，存在于多种组织之中，其大部分分化成各种特定组织器官，一部分保持干细胞状态，以备组织修复之用。有研究将间充质干细胞移植于烧伤创面，用以诱导皮肤干细胞的增生和活化，以达到治疗烧伤的目的。目的：观察采用体外培养干细胞培养液滴注于豚鼠皮肤重度缺损局部对创面愈合时间及愈合情况的影响。设计：随机分组，空白对照实验。单位：吉林大学公共卫生学院毒理学教研室。材料：成年健康豚鼠14只，体质量300～350g，雌雄不限。方法：实验于2003-03／09在吉林大学公共卫生学院毒理学教研室实验室完成。取10豚鼠，经颈部放血处死，提取骨髓，经过培养制成单细胞悬液备用。将14只豚鼠制成两侧重度皮肤损伤模型。随机选取10只豚鼠，其中一侧滴加干细胞培养物（干细胞组），而另一侧滴加培养液（培养液组）；剩余4只动物不做任何治疗，作为空白对照组。3d后，每两天用透明有机玻璃置创面上方，描画其形状，观察创面情况，并将其图形复制到透明玻璃纸上，在直角坐标纸上精确查出创面面积，计算创面愈合速度。主要观察指标：大体观察各组豚鼠创面愈合情况及平均愈合时间和速度。结果：14只豚鼠均进入结果分析。①各组豚鼠创面愈合情况：3d时，干细胞组创面干燥，无明显渗出，在创面底部有一层膜状物质，与纱布粘贴比较牢固，敷料不易脱离；培养液组创面情况与干细胞组基本一致，但无膜状物质形成，敷料易脱离；空白对照组动物创面炎症明显。②各组豚鼠创面愈合时间：干细胞组明显少于培养液组和空白对照组[（12．45&;#177;2．18）d比（26．29&;#177;1．38）d和〉30d，P〈0．05]。③各组豚鼠创面愈合速度：干细胞组明显快于培养液组和空白对照组[（40．42&;#177;2．14）mm^2／d比（15．53&;#177;5．22）mm^2／d和（10．27&;#177;4．57）mm^2／d．P〈0．051。结论：利用同种异体动物干细胞培养物进行皮肤表面滴注修复其损伤创面，干细胞能够在创面上生长，并向皮肤细胞转化，促进创面皮肤修复，用于皮肤重度缺损治疗是可行的。     

种植骨髓间充质干细胞的甲壳质人工神经修复周围神经缺损

目的：骨髓间充质干细胞(bone marrow stem，MSCs)在体外可以诱导分化为周围神经的许旺细胞，通过MSCs和生物降解支架材料复合后构建成的神经套管，探讨其桥接修复周围神经缺损的效果和MSCs的体内分化去向。方法：实验于2003—04／2004—02在北京大学人民医院创伤骨科实验室完成。培养纯化的成年大鼠MSCs，传代扩增。建立大鼠坐骨神经缺损的动物模型，缺损长度0．5cm，实验分3组，每组8只SD大鼠，各组均取右侧为实验侧，左侧为正常对照。A组：复合MSCs的甲壳质神经套管桥接组；B组：单纯神经套管桥接组；C组：造成神经缺损后原位神经移植组。术后4周和8周分别计算坐骨神经功能指数，行神经电生理和组织学检测评价疗效。结果：各组动物均有不同程度感觉和运动神经功能的恢复。术后8周各组的再生的神经纤维已越过套管缝合口，A，B，C组坐骨神经功能指数分别为45．2&;#177;1．32，54．2&;#177;1．47，66．5&;#177;1．40；运动神经传导速度分别为(36．10&;#177;3．71)，(32．89&;#177;4．01)，(25．45&;#177;3．78)m／s。上述各指标及远端神经轴突面积各组间比较均有：A组优于B组，B组优于C组，差异均有显著性意义(P&;lt;0．05)。结论：复合了MSCs的甲壳质神经套管修复周围神经缺损的效果优于单纯的甲壳质套管组，单纯套管组优于神经移植组。     

含有生肌液的组织工程皮肤修复兔皮肤缺损

背景：在皮肤开放创面上进行缺损修复与重建是组织修复领域的研究焦点。构建含有中药的组织工程皮肤修复创面缺损的研究并不多见。目的：将含有生肌液的皮肤支架与自体皮肤细胞复合，构建含药组织工程皮肤，修复兔皮肤缺损。设计：自体对照动物实验。单位：实验于2005—02／08在天津市天津医院骨科研究所细胞工程室完成。材料：同窝大耳白兔8只，体质量1．6～1．8kg。自行提取生肌液（1500g／L），成分为当归、生地、龟板、象皮、血余、生石膏、炉甘在；明胶-壳聚糖支架材为料天津大学提供，分别修剪成1-3cm直径的圆片，60Co照射灭菌；DR无细胞真皮基质由江苏省启动市医疗用品研究所提供。方法：分离培养兔皮肤细胞，获取第3代角质形成细胞与成纤维细胞。延兔脊柱两侧制作直径1．5cm的圆形全层皮肤缺损创面4个。分为4组，阴性对照组（明胶-壳聚糖支架贴附于创面后滴加生理盐水），人工真皮组（DR无细胞真皮基质贴附于创面后接种细胞悬液），非含药组织工程皮肤组（明胶壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液），含药组织工程皮肤组（生肌液明胶-壳聚糖支架贴附于创面后接种细胞悬液）。主要观察指标：①术后13d测量剩余创面面积。②术后7d、10d取材行组织学与免疫组织化学染色检测。结果：①术后13d各组创面面积均有不同程度的缩小，剩余面积阴性对照组〉人工真皮组〉非含药组织工程皮肤组〉含药组织工程皮肤组，非含药组织工程皮肤组、含药组织工程皮肤组与阴性对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。②术后10d，阴性对照组、人工真皮组、非含药组织工程皮肤组均有炎性肉芽组织增生，无表皮组织形成；含药组织工程皮肤组形成接近正常的上皮组织及幼稚的真皮组织。非含药组织工程皮肤组与人工真皮组BrdU标记弱阳性，含药组织工程皮肤组BrdU标记强阳性。结论：实验采用的方法使种子细胞在含有生肌液的明胶壳聚糖支架上增殖，在体修复皮肤损伤，能够有效扩展皮肤缺损处的覆盖面积，缩短皮肤缺损的愈合时间。     

骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建组织工程皮肤修复糖尿病皮肤缺损

背景：小肠黏膜下层已经被证实可以引导许多组织的特异性再生。目的：将骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建组织工程皮肤并移植修复兔糖尿病皮肤缺损,观察其对糖尿病皮肤缺损的愈合影响和疗效。方法：制作兔糖尿病皮肤缺损,将骨髓间充质干细胞与冻干、灭菌、水合后的猪小肠黏膜下层膜复合制作组织工程皮肤并覆盖修复兔糖尿病皮肤缺损,并与小肠黏膜下层支架组和空白对照组做对照。结果与结论：造模后1,2,4周,组织工程皮肤组缺损皮肤修复面积百分比显著大于小肠黏膜下层支架及空白对照组（P〈0.05）。缺损皮肤修复组织观察组织工程皮肤组组织生长明显快于小肠黏膜下层组与空白对照组。3组均未见明显皮肤附件结构。表明骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建的组织工程皮肤修复兔糖尿病皮肤缺损好于单纯小肠黏膜下层膜,无明显瘢痕组织的生成,可作为支架材料用于皮肤缺损的修复。     

兔耳增生性瘢痕形成与外科常见致病真菌感染的关系

目的：分析外科感染常见致病真菌对兔耳创面增生性瘢痕组织块形成的影响。 方法：实验于2004-02／07在新疆医科大学动物实验室和新疆医科大学病理科完成。选取新西兰大耳白兔12只，随机分为白色念珠球菌污染组、金黄色葡萄球菌污染组、空白对照组，4只／组。在各组兔耳腹侧制作直径为1cm全层皮肤缺损创面，创面形成时及术后第1天白色念珠球菌污染组分别于创面放置微量白色念珠球菌，金黄色葡萄球菌污染组于创面放置微量金黄色葡萄球菌，空白对照组不予任何干扰因素。观察各组创面愈合及增生性组织块发生情况，测定各组术后不同时间点成纤维细胞数及转化生长因子β1和胶原Ⅰ的表达。 结果：实验纳人12只兔，兔耳创面制作时因麻醉药物过量4只死亡，予以补充。①白色念珠球菌污染组和金黄色葡萄球菌污染组兔耳腹侧创面愈合后可出现类似人增生性瘢痕的增生组织块，愈合时间均长于空白对照组[（14．7&;#177;1．0），（15．3&;#177;1．1），（11．2&;#177;1．3）d，P〈0．01]；增生组织块出现率均高于空白对照组（85．4％，91．6％，62．5％，P〈0．05）；术后28，49，60d增生组织块成纤维细胞含量均明显高于空白对照组（P〈0．01）。②各组成纤维细胞中转化生长因子β1及胶原Ⅰ在术后28，49d均为强阳性表达，白色念珠球菌污染组最为显著，随时间的推移各组表达逐渐减弱直至消失。 结论：白色念珠球菌和金黄色葡萄球菌污染创面均易出现增生性组织块，其形成与创面愈合过程关系密切，创面愈合时间越长增生组织块的出现率越高，符合人增生性瘢痕变化规律，验证转化生长因子、成纤维细胞及胶原之间的密切关系构成了增生性瘢痕的生物学基础。     

全层皮肤缺损创面移植异种脱细胞真皮基质与薄自体皮重塑基底膜的实验观察

背景：异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植修复全层皮肤缺损创面取得了良好的效果，但对移植后基底膜的重塑尚不十分清楚。目的：观察异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植模型中基底膜重塑的变化规律。设计：随机对照实验研究。地点和材料：动物实验在上海市烧伤研究所完成，指标检测在上海第二医科大学细胞生物学教研室完成。清洁级雄性SD大鼠(由中国医学科学院上海实验动物中心提供)，体质量200-250g。干预：将SD大鼠随机分为两组，每组42只。所有动物均饲养在层流房间内，恒定的湿度与温度，单笼饲养。A组：单纯移植薄自体皮组；B组：脱细胞猪真皮基质(江苏启东医疗用品研究所提供)+薄自体皮复合移植。将异种(猪)脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植于大鼠创面，分别于移植后1，2，3，4，8，12，16周留取标本，采用免疫组化、透射电镜等方法。主要观察指标：观察基底膜中层粘连蛋白的变化规律及12周时基底膜的超微结构，同时以单纯薄自体皮移植进行对照。结果：B组移植后1，2，3，4，8，12，16周，层粘连蛋白的表达分别为88．32&;#177;2．72，89．22&;#177;2．16，88．84&;#177;3．43，93．49&;#177;4．59，87．57&;#177;3．33，95．87&;#177;1．84，86．57&;#177;2．45，A组分别为78．96&;#177;1．68，85．37&;#177;5．41，82．49&;#177;3．73，84．27&;#177;2．69，72．88&;#177;3．57，88．19&;#177;3．36，82．82&;#177;2．86，12周时复合皮移植组基底膜结构清晰连续，而单纯移植薄自体皮组基底膜模糊、不连续。结论：异种脱细胞真皮基质与薄自体皮复合移植后，基底膜中层粘连蛋白表达增高，可能有利于复合皮移植后基底膜的重塑，增强表皮和真皮之间的连接，进而改善创面愈合质量。     

骨髓间充质干细胞复合小肠黏膜下层构建组织工程皮肤修复糖尿病皮肤缺损

背景:小肠黏膜下层已经被证实可以引导许多组织的特异性再生.目的:将骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建组织工程皮肤并移植修复兔糖尿病皮肤缺损,观察其对糖尿病皮肤缺损的愈合影响和疗效.方法:制作兔糖尿病皮肤缺损,将骨髓间充质干细胞与冻干、灭菌、水合后的猪小肠黏膜下层膜复合制作组织工程皮肤并覆盖修复兔糖尿病皮肤缺损,并与小肠黏膜下层支架组和空白对照组做对照.结果与结论:造模后1,2,4 周,组织工程皮肤组缺损皮肤修复面积百分比显著大于小肠黏膜下层支架及空白对照组(P <0.05).缺损皮肤修复组织观察组织工程皮肤组组织生长明显快于小肠黏膜下层组与空白对照组.3 组均未见明显皮肤附件结构.表明骨髓间充质干细胞复合猪小肠黏膜下层构建的组织工程皮肤修复兔糖尿病皮肤缺损好于单纯小肠黏膜下层膜,无明显瘢痕组织的生成,可作为支架材料用于皮肤缺损的修复.     

电磁波治疗对皮肤内羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性的调节

目的观察电磁波照射后皮肤组织内羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性的变化。方法取健康白色豚鼠16只，随机分两组各8只，照射组采用电磁波照射仪进行治疗，对照组不照射，30d为1个疗程，检测照射前后皮肤组织内羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性的变化。结果16只豚鼠均进人结果分析。两组照射前皮肤组织内羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性比较，差异无显著性意义（P〉0．05）；照射后照射组羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性明显高于对照组[羟脯氨酸含量：（8．95&;#177;1．71），（7．03&;#177;1．68）mg／g；超氧化物歧化酶活性：（62．90&;#177;13．50），（49．52&;#177;12．90）NU／mg，（t=2．989，3．165，P〈0．01）1。结论电磁波照射治疗可提高皮肤组织内羟脯氨酸含量及超氧化物歧化酶活性，从而使细胞损伤减少，进一步促进组织修复。     

许旺细胞与脱细胞神经移植物共培养在周围神经损伤修复中的作用

目的：观察体外分离、培养、纯化的许旺细胞对脱细胞神经移植物修复神经损伤舯促进作用，为临床应用组织工程化神经修复周围神经缺损提供实验依据。 方法：实验于2004-04／2005-04在中国医科大学组织工程实验室完成。纳入普通级雄性Wistar大鼠24只，体质量180-220g。随机分为实验组、空白对照组、自体移植对照组共3组，每组8只。分笼饲养。另纳入5-8d龄spmgue-Dawley乳鼠40只，取其双侧坐骨神经与臂丛神经。实验组大鼠右后腿用种植许旺细胞的ARSN桥接人为造成的神经缺损。空白对照组大鼠右后腿用单纯ARSN桥接人为造成的神经缺损。酶反复消化法与差速贴壁法分离和培养许旺细胞；许旺细胞与10mm长的脱细胞神经移植物共培养后，应用外科手术移植到大鼠坐骨神经缺损处，自体移植对照组大鼠右后腿用单纯切断的神经上下颠倒原位桥接人为造成的神经缺损。13周取材通过透射电镜和扫描电镜观察神经纤维的再生情况。 结果：Wistar大鼠24只全部进入结果分析，没有脱失。①实验组较空白对照组的再生有髓神经纤维均匀，轴索略粗，髓鞘厚度有差别，部分神经纤维髓鞘还未形成板层结构，许旺细胞包绕神经纤维，轴索内微丝微管结构较清晰，无髓神经纤维直径较小，不均匀分布在有髓神经纤维之间，由一层纤维结缔包裹形成纤维束，实验组较自体移植对照组的髓鞘略薄，自体移植组再生神经纤维均较粗，许旺细胞包裹轴突形成排列规则、电子密度较高的髓鞘，髓鞘厚薄基本相同。②实验组可见大量许旺细胞呈双极梭形，并且首尾相连排列成链状或网状特征性分布。许旺细胞还可在神经纤维上的胶原丝上附着。③实验组有髓神经纤维数、髓鞘厚度、G率（有髓纤维总面积／神经干总面积）接近自体移植对照组，差异无显著性意义[（5344&;#177;592），（5514&;#177;373）；（3．13&;#177;0．16），（3．19&;#177;0．25）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（57．11&;#177;2．28）％；P〉0．05]；与空白对照组比较差异有显著性意义[（5344&;#177;592），（3191&;#177;236）；（3．13&;#177;0．16），（1．28&;#177;0．33）μm；（48．43&;#177;3．62）％，（31．05&;#177;4．19）％；P〈0.05]。 结论：与许旺细胞共培养的脱细胞神经移植物可加快宿主轴索再生，促进神经损伤修复，是临床修复神经缺损的可行办法。     

异种煅烧骨与Ⅰ型胶原复合骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损过程中的组织学与生物力学变化特征

目的：制备异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合材料，观察在骨缺损修复过程种的组织学和生物力学变化。 方法：实验于2004-07／2005-04在第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所实施。①采用小牛骨粒制备牛煅烧骨；胃蛋白酶液消化新鲜牛腱制备Ⅰ型胶原；牛骨形态发生蛋白及Ⅰ型胶原制备活性复合颗粒实验材料。②取兔36只，建立桡骨中段15mm骨缺损模型，随机分为4组，每组9只。空白对照组不植入材料；煅烧骨组植入单纯煅烧骨，将煅烧骨与骨水泥按1：1复合后制成长15mm，直径4mm柱件，至骨水泥面团期时填入骨缺损处；自体骨组植入自体骨；复合材料组植入活性复合颗粒，按1：1质量比将活性颗粒与骨水泥复合。植入物均不作固定，清洗，缝合，术后回笼喂养。③观察指标：术后4，12，24周每组各取3只兔，分别通过X射线检查，组织学观察，生物力学测定和扫描电镜等手段观察新骨形成和材料降解情况。 结果：36只兔均进入结果分析。术后各组动物均无毒性反应。①各组兔骨缺损区X射线检查结果：术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损已修复，而煅烧骨组，空白对照组未修复。②各组植入材料组织学观察结果：术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损有大量新骨形成，而煅烧骨组、空白对照组未见新骨形成。③复合材料扫描电镜观察结果：复合材料空隙率高，复合紧密。④各组植入材料生物力学测定：术后24周复合材料组最大扭转强度和最大载荷接近自体骨组[（0．76&;#177;0．05）N&;#183;m．（162．6&;#177;4．1）N，（0．82&;#177;0．03）N&;#183;m，（172．2&;#177;6．1）N，P〉0．05]，明显高于煅烧骨组[（0．26&;#177;0．01），（46．8&;#177;6．8）N，P〈0．05]。 结论：①异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合移植物具有较强的成骨作用及修复骨缺损能力。②复合材料组最大扭转强度和最大弯曲载荷接近自体骨组。③可望成为新型骨缺损修复材料。     

超声辐照后兔外阴皮肤组织中神经生长因子蛋白和mRNA的变化

目的：观察超声辐照后兔外阴皮肤组织中神经生长因子蛋白和mRNA的变化。方法：实验于2002—09／2003—03在重庆医科大学医学超声工程研究所进行。取雌性大白兔50只，单纯随机分为5组，每组10只：①辐照后1，4，7，14d组以CZF—1超声治疗仪样机对兔外阴皮肤真皮层进行1次连续直线辐照，采用移动法，辐照区域不重复。功率4W，频率10MHz，速度4-6mm／s，线间距约2mm，焦点皮下1mm。4组分别于辐照后1，4，7和14d麻醉状态下取辐照处外阴皮肤。②对照组：不辐照立即取材。采用免疫组织化学与原位杂交技术检测各组兔外阴皮肤组织中神经生长因子蛋白和mRNA的阳性表达的吸光度值。结果：50只兔进入结果分析。①神经生长因子蛋白的吸光度值：辐照后7d组高于对照组（0～54&;#177;0．011，0．137&;#177;0．009，P〈0．05），辐照后14d组为0．140&;#177;0．009，与对照组比较差异不屁著（P〉0．05）。②神经生长因子mRNA的吸光度值：辐照后7d组高于对照组（0．126&;#177;0．014，0．107&;#177;0.012 P〈0．05），辐照后14d组为0．111&;#177;0．012，与对照组比较差异不显著（P〉0．05）。结论：辐照后第7天兔外阴皮肤组织中神经生长因子蛋白和mRNA明显升高，2周时恢复正常。提示可通过超声的生物学效应可使组织发生可逆性损伤，神经生长因子生成增加，改善神经末梢的营养状况。     

应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤及移植实验

目的探讨应用表皮干细胞、间充质干细胞构建复合皮肤修复全层缺损皮肤的可行性。方法选择新西兰大白兔18只,在每只兔背上用常规手术方法切去3个大小相同的全层皮肤缺损创面,面积约2cm×2cm。将经处理的脱细胞真皮（acellular dermal matrix,ADM）接种骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）和表皮千细胞（epidermal stem cells,ESCs）制成复合皮肤。实验分A、B、C3组,A组移植复合皮肤;B组移植脱细胞真皮;C组用油纱布敷盖创面。观察各组移植后1～3周内创面愈合、肉芽组织生长及上皮化等情况,并进行创面组织HE染色。结果术后A、B、C3组创面愈合时间分别为（14．6±1．1）、（18．3±1．2）、（23．0±1．4）d,组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。术后14d创面标本HE染色观察：A组创面已上皮化,毛细血管、成纤维细胞数量增加,胶原合成增多,肉芽组织形成丰富;B、C组创面上皮化不全,仍可见许多炎性细胞,肉芽组织中毛细血管、成纤维细胞数量不如A组。结论表皮干细胞、间充质干细胞接种于脱细胞真皮构建复合皮肤,可加速新生血管形成及创面上皮化,可用于全层皮肤缺损创面的治疗,提高创面愈合质量。     

转染血管紧张素Ⅰ骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复烫伤后的创面

背景:组织工程皮肤作为可行的皮肤替代物,近年来已成为研究和开发的热点,为烧伤、皮肤溃疡等病变的创面治疗提供了新的解决途径.目的:观察转染血管紧张素Ⅰ基因的骨髓间充质干细胞复合胶原构建的组织工程皮肤对烫伤后创面的修复及促血管形成作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,丁2008-03/11在中山大学第一附属医院实验动物中心完成.材料:鼠龄4周的雄性SD大鼠45只,体质量120-150 g,用于制备烫伤模型;牛Ⅰ型胶原为美国Sigma公司产品.方法:脂质体介导质粒pEGFP-N1-hAng-Ⅰ转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染后与牛Ⅰ型胶原复合,体外构建组织工程皮肤,修复大鼠烫伤模型创面.45只SD大鼠按随机抽签法分为3组:血管紧张素Ⅰ,胶原移植组、骨髓间充质下细胞,胶原移植组和空白对照组,每组15只.在烫伤创面分别植入复合骨髓间充质干细胞,转血管紧张素Ⅰ的组织工程皮肤、单纯骨髓间充质干细胞复合的组织工程皮肤.空白对照组不移植任何组织和细胞,其他处理与实验组相同.主要观察指标:分别在移植后3,7,14,28 d取材,以扫描电镜、组织学、免疫组织化学分析等方法检测构建的组织工程皮肤结构、创面修复及血管再生情况.结果:pEGFP-N1-hAng-Ⅰ在阳离子脂质体的作用下,成功地进入大鼠骨髓间充质干细胞,转录出相应mRNA.蛋白免疫印迹分析显示转染细胞有与目的基因相对分子质量相符的血管紧张素Ⅰ抗体结合蛋白印迹条带.实验所构建的组织工程皮肤结构完整,细胞状态良好.血管紧张素Ⅰ/胶原移植组、骨髓间充质干细胞/胶原移植组和空白对照组创面的愈合时间分别为(12.6±1.9),(15.4±2.3),(28.4±3.6)d,P<0.05.组织学检查见转染细胞组毛细血管生长及新形成活跃,移植后7,14,28d骨髓间充质干细胞,胶原移植组和血管紧张素Ⅰ/胶原移植组微血管密度分别为(22.8±1.4),(34.3±2.6),(57.4±6.1)条/mm2;(38.2±3.4),(53.2±5.8),(74.2±6.9)条/mm2,P<0.05.结论:血管紧张素Ⅰ转染细胞组较对照组血供加强,创面修复加速,与细胞因子局部定向释放,加强血管形成有关.     

表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究

目的探讨表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的可行性。方法（1）用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,用Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化人表皮干细胞,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成人表皮干细胞培养基进行体外培养,测定克隆形成率。（2）将培养人表皮干细胞接种于制备的脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤,移植治疗兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果。（3）取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面,随机分为4组：A、B、C组分别用含表皮干细胞的组织工程皮肤、含角质细胞的组织工程皮肤和单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面;D组用创面空置为对照。观察创面修复情况、局部炎症反应,并记录创面愈合时间。结果体外培养的人表皮干细胞增殖稳定,克隆形成率明显高于角质细胞对照组（P〈0．05）。移植后A组创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较B、C、D组明显缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用于皮肤缺损创面的修复治疗。     

兔骨髓间充质干细胞复合小牛脱钙骨修复胫骨缺损的可行性

目的：通过兔骨髓间充质干细胞复合小牛脱钙骨对兔胫骨长段骨-骨膜缺损修复情况的观察，探讨骨髓间充质干细胞与小牛脱钙骨联合应用于负重骨修复的可行性。 方法：实验于2001—10／2002-08在牡丹江市第二人民医院放射科进行。①健康成年新西兰大白兔-24只，随机编号后从自体骨髓中分离出骨髓间充质干细胞，与小牛脱钙骨于体外复合培养，并将这24只大白兔制备成双侧胫骨中段10mm骨一骨膜缺损模型，行常规钢板螺钉固定。②随机选取其中的20只，对同一只兔将复合物植入右侧胫骨缺损处作为实验组，将小牛脱钙骨植入左侧胫骨缺损处作为对照组；另4只兔作为空白组，双侧骨缺损不植入任何材料。然后分栏放养，观察各组兔术后一般情况。③在8，12，16，24周各时间点分别取出骨缺损修复标本，进．行大体观察和骨密度测试，并进行统计学分析，以比较各组修复骨缺损的能力。 结果：实验大白兔24只均进入结果分析。①各组兔术后一般情况：术后各组动物恢复及进食均正常，伤口无炎性反应，愈合良好。②各组兔骨缺损修复标本大体观察：术后8周实验组骨缺损部分修复，12，16周骨缺损完全修复，8，12，16，24周时实验组的骨缺损修复和骨痂生长情况明显好于对照组；24周时空白组的各缺损区均未发现有骨组织形成。③各组兔骨缺损区的骨密度测量结果：术后8，12，16周时各缺损区的骨密度测量结果显示实验组明显高于对照组（实验组：0．945&;#177;0．063，1．246&;#177;0．027，1．568&;#177;0．059；对照组：0．601&;#177;0．024，1．001&;#177;0．023，1．219&;#177;0．033，P〈0.05）。24周时实验组与对照组比较无统计学意义（1．627&;#177;0．054，1．462&;#177;0．107，P〉0．05）。空白组骨缺损未修复。 结论：骨髓间充质干细胞构建的组织工程骨早期修复骨缺损能力较强，且与单纯小牛脱钙骨相比成骨量大、迅速，能够对负重骨缺损进行有效的修复。