大鼠心肌损伤对环磷酸腺苷信号转导相关基因表达的影响

目的 观察大鼠心肌损伤后心肌组织环磷酸腺苷(cAMP)信号转导系统相关基因表达的变化及与心室重构、心功能变化的关系.方法雄性Wistar大鼠28只,体质量220～250 g.将大鼠按体质量随机分为急性心肌损伤组(AMD,n=10)、慢性心肌损伤组(CMD,n=9)和对照组(n=9).AMD和CMD组大鼠开胸,结扎左前降支,建立急性心肌损伤动物模型;对照组开胸后不做结扎.在术后24 h,处死AMD和对照组大鼠,CMD组大鼠8周后处死,大鼠处死前进行心脏超声和血流动力学检查.TUNEL法检测行心肌细胞凋亡,放射免疫法测量心肌组织中环磷酸腺苷(cAMP)水平,实时定量(RT)-PCR法测定受损心肌周围组织中诱导性cAMP早期阻遏物(ICER)mRNA、cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA、磷酸二酯酶3A(PDE3A)mRNA和bcl-2mRNA表达.结果心脏超声和血流动力学显示,AMD、CMD、对照组左心室舒张末内径(LVEDD)、舒张末压(LVEDP),左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)、下降速率(-dp/dtmax),左心室收缩压(LVSP)、射血分数(EF)、短轴缩短率(FS)组间比较差异有统计学意义(F值分别为285.9、196.8、83.2、80.4、54.9、196.6、95.2,P均＜0.01).其中AMD和CMD组,LVEDD[(7.03±0.28)、(8.20±0.27)mm]和LVEDP[(11.19±2.89)、(19.76±3.34)mmHg]明显高于对照组[(5.05±030)mm、(-5.62±3.01)mmHg,P均＜0.01];左室内压+dp/dtmax [(2964±449)、(2214±434)mmHg/s]和-dp/dtmax[(-2617±441)、(-1891±424)mmHg/s]、左室LVSP[(94.19±4.03)、(85.85±6.39)mmHg]、EF[(41.6±5.9)%、(35.9±4.1)%]和FS[(36.9±4.6)%、(23.1±4.9)%]均显著低于对照组[(4759±406)mmHg/s、(-4327±388)mmHg/s、(116.29±8.25)mmHg、(80.9±5.6)%、(53.1±4.3)%,P均＜0.01];与AMD组相比,CMD组上述改变更显著(P＜0.05或＜0.01).心肌凋亡指数、cAMP、ICER、CREB、PDE3A、bcl-2 mRNA表达,组问比较差异有统计学意义(F值分别为172.5、141.0、540.8、246.8、165.1、563.9,P均＜0.01).其中AMD和CMD组心肌凋亡指数[(32.8±4.2)%、(18.4±3.9)‰]和cAMP[(9.95±0.30)、(5.60±0.25)nmol/kg]明显高于对照组[(3.9±1.7)‰、(2.48±0.29)nmol/kg,P均＜0.01],CMD组低于AMD组(P＜0.01);ICER、CREB mRNA表达,AMD(1.434±0.093、5.70±0.50)和CMD组(0.942±0.076、2.64±0.51)明显高于对照组(0.154±0.063、1.08±0.35,P均＜0.01),AMD组高于CMD组(P＜0.01);PDE3A mRNA表达,AMD和CMD组(48.98±8.14、16.68±8.46)明显低于对照组(105.94±12.61,P均＜0.01),CMD组低于AMD组(P均＜0.01);bcl-2 mRNA表达AMD组(4.55±0.27)高于对照组(2.18±0.30,P＜0.01),CMD组(0.35±0.15)明显减少(P均＜0.01).结论慢性心肌损伤较急性心肌损伤心室重构更明显,cAMP信号转导系统过度激活后形成ICER和cAMP的自循环,致使ICER mRN升高,PDE3A mRN减少,可能是心肌损伤后心室重构和心力衰竭发生发展的原因之一.     

PM2.5通过线粒体介导的大鼠心肌细胞损伤作用机制的初步研究

目的 初步探讨PM2.5对大鼠心肌细胞的损害及线粒体介导的相关作用机制.方法 培养大鼠心肌细胞株H9C2细胞,给予PM2.5刺激,24 h后检查肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）,比色法检测线粒体的活性氧（ROS）和ATP酶的活性,流式细胞仪检测线粒体肿胀度及膜电位.结果 PM2.5组心肌细胞CK和LDH明显升高[（702±80）U/ml比（987±92）U/ml,（339±72）U/L比（485±84）U/L）],ATP酶活性下降明显[（34.2±5.2）U/mgprot比（54.1±6.9） U/mgprot],细胞内ROS明显增多[（67.2±8.2）U/well比（25.4±7.3） U/well],差异均有统计学意义（P＜0.05）.同时PM2.5组心肌细胞线粒体明显肿胀,线粒体膜电位明显下降（0.3476±0.1232比0.6476±0.1021）,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 PM2.5可以导致心肌细胞损伤,其机制可能与PM2.5损害线粒体的结构与功能相关.     

缺血预处理时环磷酸腺苷含量及其依赖蛋白激酶活性的变化

目的:应用大鼠在体缺血/再灌注模型,探讨心肌缺血预处理程序(PC)中环磷酸腺苷(cAMP)含量及cAMP依赖蛋白激酶(PKA)活性的变化及意义。方法:选择36只SD大鼠,进一步分为PC1-、2-、3-(缺血)组和PC1 、2 、3 (再灌注)组。用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注。损伤后取心脏用放射免疫法测cAMP水平,生化法测PKA活性变化。结果:心肌缺血预处理程序中cAMP含量及PKA活性随缺血及再灌注呈周期性波动。在5min缺血预处理时表现为反复明显增高,而在间隔的再灌注程序中恰呈相反改变,明显下降。再预处理程序中,5min缺血期相对于同一周期中的5min再灌注期,cAMP含量及PKA活性均有显著差异(P<0.01)。结论:cAMP及PKA的周期性波动变化可能是激发心肌缺血预适应(IP)的机制之一,cAMP可能在预处理保护作用中起重要作用。     

辛伐他汀抑制大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌的机制研究

目的 观察辛伐他汀对大鼠胰岛β细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的抑制作用及其机制.方法 8周龄健康雄性Wistar大鼠60只,体重250～300 g,饲养1周内分批处死.采用胆管注射胶原酶法提取大鼠胰岛,将新鲜分离或经24 h培养的大鼠胰岛按体积大小分为对照组(胰岛数=60)和辛伐他汀组(胰岛数=60),对照组给予Kreb-Ringer碳酸氢盐缓冲液,辛伐他汀组以100μmol/L辛伐他汀水浴30 min或过夜培养24 h.两组经2.8、5.5、11.1、16.7、25.0 mmol/L葡萄糖刺激后,采用37 ℃水浴法观测胰岛β细胞GSIS变化,选用生物化学发光法测定腺苷三磷酸(ATP)含量.两组间数据比较采用t检验.结果 100 μmol/L辛伐他汀水浴30 min后,在25.0 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛β细胞ATP含量较相应对照组明显下降[(9.2±1.6)vs(12.1±1.9)pmol/胰岛,t=2.97,P＜0.05],GSIS较相应对照组明显减少(2.31±0.38 vs 3.19±0.41,t=3.154,P＜0.05).100μmol/L辛伐他汀过夜培养24 h后,在11.1 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛β细胞ATP含量较相应对照组明显降低[(9.2±1.4)vs(11.9±2.0)pmol/胰岛,t=2.514,P＜0.05];在2.8 mmol/L葡萄糖刺激下,胰岛素分泌即已明显受到抑制(0.28±0.03 vs 0.47±0.05,t=2.460,P＜0.05).辛伐他汀浓度超过30 μmol/L时,可剂量依赖性地抑制GSIS(2.49±0.21 vs 3.17±0.23,t=2.445,P＜0.05).结论 高浓度辛伐他汀可能通过抑制胰岛β细胞ATP生成而抑制GSIS.     

牛膝多肽通过抑制氧化应激减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤

目的 探讨牛膝多肽（ABPP）预处理对心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤的影响及其机制。方法 建立大鼠MI/R模型,将成年SD大鼠随机分为 Sham（假手术）组、MI/R组、药物预处理（ABPP＋MI/R）组。检测血流动力学、用氯化三苯基四氮唑和伊文思蓝双染法检测心肌梗死(MI)面积、以血浆肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）活性检测心肌损伤情况、以超氧化物、丙二醛（MAD）和超氧化物歧化酶（SOD）含量检测心肌氧化应激以及Western blot方法测定心肌组织中gp91phox的表达。用TUNEL法检测心肌细胞的凋亡指数(AI),荧光分析法检测caspase 3活性。结果 与MI/R组比较,ABPP预处理使左心室上升、下降最大速率（±LVdP/dtmax）升高（P<0.05）,MI面积显著减少〔MI/R组为（36.0±3.0）%,ABPP组为（26.5±3.5）%,P<0.05〕,血浆CK和LDH水平分别降低到（1251±72）U/L和（1961±122）U/L（P<0.05）,TUNEL阳性染色显著降低（P<0.05）,caspase-3的活性增加（P<0.05）,超氧化物蓄积减少（P<0.05）,显着降低了gp91phox的表达（P<0.05）,MDA的含量显著减少（P<0.05）,SOD活性增加（P<0.05）。结论 ABPP降低氧化应激和对MI/R损伤的心肌具有保护作用。     

坎地沙坦对高血压合并2型糖尿病患者血浆尾加压素Ⅱ和脂联素的影响

目的：比较坎地沙坦和非洛地平对高血压合并2型糖尿病患者的降压作用及血浆尾加压素Ⅱ（UⅡ）、脂联素（ADI）水平的影响。方法纳入2011年5月~2012年6月湖北医药学院太和医院高血压合并2型糖尿病患者84例,随机分为坎地沙坦组（n=43）和非洛地平组（n=41）。前者予坎地沙坦（4mg, qd）,后者予非洛地平片（5mg,qd）,疗程均为16周。比较两种药物的降压效果,并分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）及放射免疫法测定治疗前后患者静脉血中UⅡ、ADI和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的水平,观察这两种不同的降压药物对上述血管活性物质的影响。结果两组患者血压均较治疗前下降,但两组间无统计学差异。治疗前两组血浆UⅡ、ADI、AngⅡ水平无统计学差异（P＞0.05）,治疗16周后,与非洛地平组比较,试验组患者血浆中UⅡ水平明显下降[（6.17±1.45）pmol/L vs.（8.92±1.21）pmol/L, P＜0.01],ADI水平明显升高[（6.13±1.45）mg/L vs.（4.12±1.46）mg/L,P＜0.01],AngⅡ水平两组间无统计学差异[（149.72±22.89）mg/L vs.（143.27±23.88）mg/L,P＞0.05]。结论坎地沙坦与非洛地平治疗合并2型糖尿病高血压疗效接近,同时可改善胰岛素抵抗,增加血管弹性。     

糖尿病大鼠在心肌缺血及二氮嗪预处理中一氧化氮信号通路表达受抑的研究

目的:探讨糖尿病对心肌缺血预处理(IPC)及二氮嗪预处理(DPC)效果的影响及其机制。方法:取糖尿病及非糖尿病SD大鼠各40只,建立离体心脏Langendorff灌注模型,各分为5组(每组8只):①对照组(Con组):仅行全心灌流120min,不做其他处理;②缺血再灌注组(I/R组):心脏平衡灌流30min,缺血30min,再灌注60min;③IPC组:缺血30min前,心脏平衡灌流10min,2次缺血5min,再灌注5min后,余同I/R组;④DPC组:心脏依次平衡灌流10 min,重复2次灌注含二氮嗪(浓度为100μmol/L)的K-H液5min,间隔灌注K-H液5min,余同I/R组;⑤二甲基亚砜组(DMSO组):用DMSO取代二氮嗪,过程与DPC组处理相同。比较各组冠状动脉流出液中肌酸激酶(CK)、心肌组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及环磷酸鸟苷(cGMP)、NO、一氧化氮合成酶(NOS)含量的变化。电镜对心肌线粒体行Flameng评分。结果:①灌流液CK含量:缺血前各组间差异无统计学意义(P0.05)。再灌注后CK含量比较(与I/R比较):非糖尿病大鼠的IPC组和DPC组明显降低(P0.01);而糖尿病大鼠的IPC组和DPC组无明显降低,(与I/R组比较)差异无统计学意义(P0.05)。②心肌MDA含量:非糖尿病大鼠的IPC组和DPC组含量明显比I/R组降低(P0.01),而糖尿病大鼠的各组差异无统计学意义(P0.05)。心肌SOD含量:非糖尿病大鼠的IPC组和DPC组明显高于I/R组(P0.01),而糖尿病大鼠的各组间差异无统计学意义(P0.05)。③心肌cGMP、NO、NOS含量的变化:非糖尿病大鼠的IPC组及DPC组与I/R组比较明显增加(P0.01);而糖尿病大鼠的组间比较差异无统计学意义(P0.05)。④心肌线粒体Flameng评分:糖尿病大鼠各组间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:IPC及DPC对非糖尿病大鼠心肌有明显的保护作用,能正调NO、cGMP及NOS的表达。而糖尿病可抑制IPC及DPC的心肌保护作用,其机制可能与糖尿病大鼠心肌NO信号通路表达受抑制有关。     

“冠心颗粒”抗缺血／再灌注损伤作用及JNK蛋白信号通路在其中的调节作用

目的：观察具有抗心肌缺血／再灌注（I／R）损伤作用的中药“冠心颗粒”（GXKL）对心肌I／R损伤的拮抗作用及其可能的机制。方法：将36只SD大鼠随机分为3组：对照组,I／R组及GXKL组,每组12只大鼠。制备大鼠离体心脏心肌I／R模型再灌注30rain时,分别检测①离体心脏功能指标：左室收缩压（LVDP）、心率（HR）、左室舒张末压（LVEDP）及心室内压最大变化率（±dp／dtmax）;②心律失常评分;③应用生化法检测肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的活性;④应用蛋白印迹法检测再灌注0min时,心肌组织中JNK的磷酸化水平。结果：与I／R组比较,GXKL组：①可明显提高I／R大鼠心肌中的±dp／dtmax[（2327．1±334．5）US．（1823．1±499．8）mmHg／s,P〈0．05],并明显改善LVDP、LVEDP等指标[LVDP：（39．6±9．1）vs．（24．2±10．1）mmHg,P〈0．05;LVEDP：（19．9±9．9）摊．（31．0±9．4）mmHg,P〈0．05];②可明显降低心律失常的评分（11．58±4．81郴．6．33±1．88,P〈0．05）;③可明显降低LDH和CK的水平[（282．2±29．6）YS．（222．9±30．2）U／L和（299．8±45．4）US．（251．9±41．8）U／L,P〈0．05];④可明显降低缺血心肌组织中磷酸化JNK的水平（0．75±0．07椰．1．54±0．10,P〈0．05）。结论：GXKL可明显改善缺血心肌抗缺血、缺氧的能力,增加心肌收缩力,减轻心律失常;其对离体心肌I／R的拮抗作用可能与JNK途径密切相关。     

骨髓间充质干细胞对大鼠梗死心肌胶原重构的双重调节作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(MSC)对梗死心肌胶原重构的调节作用。方法 采用结扎冠状动脉前降支的方法复制大鼠心肌梗死(MI)模型,随机分为假手术组（仅穿线不结扎冠状动脉,n=8）、MI+ PBS组（结扎冠状动脉+心肌注射PBS溶液,n=8）和MI+ MSC组（结扎冠状动脉+心肌注射MSC,n=8）。通过心脏超声检查、血液动力学检查和组织学染色方法分别检测左心室射血分数(LVEF)、短轴缩短率(FS)、左心室收缩末压力(LVSP)、左心室舒张末压力(LVEDP)、左心室压最大升降速率（±dp/dtmax）、心肌梗死面积和梗死扩张指数等指标,评价MSC对大鼠心功能及心室重构的影响。同时采用免疫组化、RT-PCR、Western blot等方法,测量胶原蛋白表达情况。结果 (1)MI大鼠心室重构和心脏功能指标的检测结果：MI+ MSC组大鼠心肌梗死面积显著小于MI+ PBS组[(38.27±2.70)％比(46.20±3.17)％,t=5.386,P＜0.001],FS显著高于MI+ PBS组[(29.98±4.50)％比(23.43 ±3.34)％,t=-3.305,P=0.005],LVSP显著高于MI+ PBS组[(113.63±10.81)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)比（99.25±16.76）mm Hg,P＜0.05],LVEDP显著低于MI+PBS组[(12.10±4.28) mm Hg比(20.08±4.26) mm Hg,P＜0.05],+dp/dtmax显著高于MI+ PBS组[（4616.63±363.34）mum Hg/s比(3912.75±248.79) mm Hg/s,P＜0.05],- dp/dtmax显著高于MI+ PBS组[(4254.63±324.34) mm Hg/s比（3530.88±309.71）mm Hg/s,P＜0.05]。(2)Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达水平的检测结果：MI+ MSC组大鼠梗死区Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均显著高于MI+ PBS组,而非梗死区Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均显著低于MI+ PBS组（P均＜0.05）。结论 MSC通过促进MI大鼠梗死区胶原蛋白修复性合成,减少非梗死区胶原蛋白沉积,从而抑制心室重构,改善心脏功能。     

非酒精性脂肪性肝病合并HBV感染患者临床特征分析

目的 对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）合并慢性乙型肝炎（CHB）患者的临床特征进行分析。方法 对120例NAFLD合并CHB患者和60例CHB患者血生化指标和体质特征指标进行比较分析。使用ALOKA210型超声诊断仪检查诊断脂肪肝,常规检测血生化指标。结果 NAFLD合并CHB患者与CHB患者血清ALT分别为[（72.74±10.14） U/L和（56.25±5.43） U/L,P＜0.05],AST分别为[（77.84±10.38）U/L和（54.28±6.53） U/L,P＜0.05];血TG分别为[（3.51±0.35） mmol/L和（2.76±0.29） mmol/L,P＜0.05],TC分别为[（5.77± 1.43） mmol/L和（4.28±1.13） mmol/L,P＜0.05],空腹血糖分别为[（5.92±1.15）mmol/L和（5.31±1.07） mmol/L,P＜0.05];NAFLD合并CHB患者与CHB患者体质量分别为[（70.1±10.2） kg和（5.31±1.07）kg,P＜0.05]、BMI分别为[（26.0±4.1） kg/m2和（5.31±1.07） kg/m2,P＜0.05],WHR分别为[（0.91±0.04）和（0.79±0.02）,P＜0.05]。结论 NAFLD合并CHB患者血生化指标和体质指标显著高于CHB患者,可能给治疗带来困难,需注意鉴别和针对性的处理。     

腺苷预适应对心脏的保护效应及机制探讨

目的探讨腺苷预适应对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤的保护作用.方法通过建立家兔心脏I/R模型,观察腺苷预适应对I/R心肌损伤的保护效应,以左心室功能恢复率、心肌梗死面积、心肌细胞肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的变化作为观察指标.结果腺苷预适应组心功能恢复明显好于对照组(P均＜0.01),CK、LDH漏出率及心肌梗死面积均低于单纯I/R组(P均＜0.01),这些心脏保护效应均被腺苷A1受体拮抗剂DPCPX阻断.结论腺苷通过其A1受体的激活介导了缺血预适应对I/R损伤的保护效应.     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌的保护作用

目的 观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注（I/R）心肌的保护作用。方法 选择高血脂SD大鼠36只,随机分为3组,即假手术组、I/R组和缺血后处理组,每组12只。制备大鼠心肌I/R模型。I/R组:收紧结扎线缺血40 min,放松结扎线再灌注240 min。缺血后处理组:缺血40 min后,再灌注10 s,缺血10 s,连续3个循环,然后再灌注240 min。假手术组:开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线。用全自动生化仪测定血清肌酸激酶（CK）的含量,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物岐化酶（SOD）的活性。采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛（MDA）的含量,用伊文氏蓝-红四氮唑（TTC）染色法测定心肌梗死的范围。结果 ①血清CK活性的测定:再灌注结束后,缺血后处理组和I/R组的活性CK的活性明显高于假手术组［分别为（712.94±20.68）、（946.58±27.43） vs （232.12±18.26）U/L,P<0.05,1 U=16.67 nkat］,缺血后处理组明显低于I/R组(P<0.05)。②血清SOD和MDA的含量:缺血后处理组血清SOD 的含量高于对照组(P<0.05);MDA的含量明显低于对照组(P<0.05)。③心肌梗死范围:再灌注结束后,缺血后处理组和I/R组的心肌缺血区与左室面积的比率无明显差异。缺血后处理组的心肌坏死区与缺血区的比率显著低于I/R组［分别为(25.3±6.6）% vs （39.2±7.1）%,P<0.05］。结论 缺血后处理对高血脂大鼠I/R心肌具有保护作用。     

降主动脉扩张性疾病合并冠心病患者临床特点分析

目的 分析降主动脉扩张性疾病患者合并冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的发病率、发病危险因素及临床特点,为今后的诊断、治疗提供参考.方法 回顾性分析2002年4月至2013年10月在沈阳军区总医院心内科住院,同时行降主动脉扩张性疾病介入诊治术及冠状动脉造影术患者427例的临床资料.根据冠状动脉造影结果分为冠心病组与非冠心病组,比较两组患者的基线资料、临床特点.结果 冠心病组患者138例（32.32％）,其中单支血管病变79例（占冠心病患者57.25％）,双支血管病变37例（占冠心病患者26.81％）,三支血管病变22例（占冠心病患者15.94％）（包括合并左主干病变4例）.非冠心病组患者289例（67.68％）,其中冠状动脉狭窄＜50％的患者50例（11.71％）,冠状动脉正常的患者239例（55.97％）.冠心病组比非冠心病组年龄大[（60.62±9.66）岁vs.（55.12±11.42）岁,P＜0.001],≥60岁的老年患者比例高（50.72％vs.32.53％,P＜0.001）,并发糖尿病（8.70％ vs.2.77％,P=0.012）及脑血管病（19.57％ vs.11.76％,P=0.038）的患者比例多,高三酰甘油血症发病率高（26.81％ vs.14.53％,P=0.005）,血浆纤维蛋白原含量高[（5.41±2.94）g/L vs.（4.88±1.93）g/L,P=0.037],差异均有统计学意义.非冠心病组患者白细胞计数[（10.33±3.55） ×10^9/Lvs.（9.55 ±3.17）×10^9/L,P=0.029]、肌酸激酶[（128.29±149.95）U/L vs.（98.92±102.05）U/L,P=0.038]及肌酸激酶同工酶[（13.90±9.91）U/L vs.（11.59±5.15）U/L,P=0.010]高,主动脉破口距左锁骨下动脉外缘更近[（15.92±22.98）mm vs.（24.74±29.78）mm,P=0.001],降主动脉扩张性疾病急性发病率高（66.09％ vs.54.35％,P=0.025）,差异均有统计学意义.两组并发高血压患者比例及高血压分级比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.多因素Logistic回归分析结果显示,年龄（OR=1.049,95％CI：1.024-1.075,P＜0.001）、糖尿病史（OR=3.87     

异甘草酸镁对大鼠肢体缺血再灌注肝损伤时磷脂酶A2的影响

目的 探讨异甘草酸镁(MI)对大鼠肢体缺血再灌注肝损伤时磷脂酶A2(PLA2)的影响.方法 选取健康、雄性、清洁级SD大鼠24只,体质量(230±30)g,随机分成3组(每组8只):对照组(C组)、缺血再灌注组(I/R组)、异甘草酸镁治疗组(MI组).C组仅麻醉,肢体没有缺血操作; I/R组于再灌注前颈外静脉注入生理盐水1 ml;MI组于再灌注前同法给异甘草酸镁30mg/kg,计1ml.以橡皮带环绕结扎大鼠左后肢根部至趾掌无血流信号达4h后放开橡皮带,再灌注6h建立大鼠后肢缺血再灌注肝损伤模型.再灌注6h后各组处死动物采集标本,分别取大鼠的血清测定ALT、AST、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK),取肝组织做10％的匀浆,采用硫代巴比妥酸法测匀浆及血清的丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)值,采用酶联免疫法测匀浆及血清PLA2、肿瘤坏死因子α(TNF α),电镜观察肝组织的超微结构改变.结果 (1)C组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为(74.1± 3.1)μg/g、(152.4±7.9)ng/g、(2.02±0.16)nmol/g、(0.20±0.03)活力单位/g；血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为(80.3±3.9)μg/L、(121.7± 6.6) ng/L、(4.89±0.64) nmol/ml、(65.62±8.33)活力单位/ml; I/R组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为(94.83±21.99)μg/g、(361.3±46.6)ng/g、(3.038±0.391)nmol/g、(0.422±0.062)活力单位/g;血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为(118.4±9.3) μg/L、(152.7±15.7) ng/L、(7.30±0.73) nmol/ml、(94.83±21.99)活力单位/ml;MI组肝匀浆PLA2、TNFα、MDA、MFO分别为(84.3±5.8) μg/g、(314.4±13.9)ng/g、(2.49±0.07) nmool/g、(0.31±0.05)活力单位/g ;血清PLA2、TNFα、MDA、MPO分别为(96.0±4.4) μg/L、(137.0±5.5) ng/L、(5.61±0.36) nmol/ml、(74.26±5.81)活力单位/ml,与C组比较,I/R组肝匀浆及血清PLA2、TNFα、MDA、MPO均升高,t值分别为10.743、12.504、5.458、8.939和12.303、5.154、7.019、3.513,P值均＜0.01,差异有统计学意义.与I/R组比较,MI组肝匀浆及血清PLA2、TNFα、MDA、MPO均降低,t值分别为6.170、2.726、3.409、3.946和6.543、2.676、5.926、2.558,P值均＜0.05,差异有统计学意义.(2)C组血清中ALT、AST、CK、LDH分别为(64.0±8.9)U/L、(113.4±18.2) U/L、(286.5±26.5) U/L、(190.8±39.0) U/L;I/R组分别为(381.0±133.8) U/L、(1227.0±383.8)U/L、(3944.9±552.0)U/L、(3050.0±833.3)U/L; MI组分别为(205.6±68.7) U/L、(851.8±126.7)U/L、(1252.5±196.3) U/L、(1177.5±244.0)U/L,与C组比较,I/R组血清中ALT、AST、CK、LDH均明显升高,t值分别为6.687、8.197、19.188、9.376,P值均＜0.01,差异有统计学意义.与I/R组比较,MI组血清中ALT、AST、CK、LDH均明显降低,t值分别为3.298、2.626、12.998、6.100,P值均＜0.05,差异有统计学意义.(3)电镜下组织超微结构I/R组中肝组织损伤明显,而用MI组肝组织的损伤明显减轻. 结论 异甘草酸镁能够通过降低PLA2和TNFα生成而减少炎症介质的释放、抑制氧自由基代谢产物MDA的产生和减少MPO的活性,对肢体缺血再灌注过程中的肝损伤有一定的保护作用.     

ErbB2受体在糖尿病心肌病大鼠中表达和磷酸化的改变

目的探讨糖尿病心肌病大鼠心肌中ErbB2受体表达和磷酸化的改变。方法选取8周龄雄性SD大鼠36只。按电脑随机数法分为：4周糖尿病组、4周对照组、12周糖尿病组、12周对照组。腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导糖尿病模型。分别在诱导糖尿病后第4、12周测定大鼠心脏质量,计算心脏质量/体质量,采用心脏超声评估大鼠心功能;采用Masson染色方法观察大鼠心肌间质纤维化程度并计算心肌胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）;采用实时聚合酶链反应（PCR）方法检测大鼠心肌组织ErbB2受体mRNA的表达水平;采用蛋白免疫印记法（Western-blot）检测大鼠心肌组织ErbB2受体蛋白磷酸化水平。结果与同期对照组相比,第4,12周糖尿病组心脏质量/体质量均明显增高,差异有统计学意义[（3.41±0.12）mg/g vs.（2.32±0.22）mg/g,P〈0.01;（3.72±0.38）mg/g vs.（2.39±0.0.26）mg/g,P〈0.01]。第4,12周糖尿病组心肌CVF均明显高于同期对照组,差异有统计学意义[4.48%±0.21%vs.2.79%±0.36%,P〈0.01;15.29%±0.67%vs.3.01%±0.13%,P〈0.01]。4周糖尿病组的左心室收缩末内径、左心室射血分数、心肌组织ErbB2受体mRNA表达和蛋白磷酸化水平与4周对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。12周糖尿病组左心室收缩末内径大于12周对照组,差异有统计学意义[（3.570±0.232）mm vs.（3.060±0.376）mm,P〈0.05]。12周糖尿病组左心室射血分数小于12周对照组,差异有统计学意义[72.5%±3.81%vs.82.6%±2.97%,P〈0.01]。与12周对照组比较,12周糖尿病组心肌组织ErbB2受体mRNA表达显著减少,差异有统计学意义（0.73±0.22vs.1.05±0.33,P〈0.01],ErbB2受体蛋白磷酸化水平也显著减少（0.87±0.01vs.0.95±0.02,P〈0.01）。结论糖尿病大鼠心肌组织中ErbB2受体mRNA表达和蛋白磷酸化水平的下调参与了糖尿病心肌病的发展。     

成年大鼠心肌缺血预处理的心肌保护作用及其对脂联素表达的影响

目的 通过建立大鼠心肌缺血预处理(IPC)模型及心肌梗死模型,探讨IPC对心肌的保护作用及其对脂联素表达的影响.方法 成年大鼠(4月龄)建立IPC模型及IPC后心肌梗死模型,随机分为空白对照组(0、6、12和24 h亚组)、IPC组(0、6、12和24 h亚组)、单纯心肌梗死(MI)组及IPC+MI组.采用Masson三色染色法测量心肌梗死面积(乳头肌平面梗死心肌与左心室心肌面积的比值,%),免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法检测脂联素在心肌组织中的蛋白和mRNA表达水平,利用大鼠血浆标本做酶联免疫吸附实验,观察循环中脂联素含量的变化.结果 IPC+MI组大鼠心肌梗死面积明显小于MI组[(20±2)%比(31±3)%,P＜0.05＝.IPC组6和12 h亚组大鼠心肌组织中脂联素mRNA的表达分别是空白对照组相应时间点亚组的2.2倍和2.1倍(P均＜0.05＝.免疫组织化学结果 可见空白对照组及IPC组非缺血区心肌组织中脂联素未染色,而缺血的心肌组织局部脂联素染色加深,即脂联素在缺血区的表达明显高于非缺血区(P＜0.05＝.IPC组0、6和12 h亚组大鼠血浆中脂联素水平均显著高于空白对照组各相应时间点亚组(0 h:10.90±1.74比7.40±0.47;6 h:10.98±1.74比8.18±1.41;12 h:9.31±0.96比6.97±1.02,P均＜0.05＝.结论 IPC可减少心肌梗死的面积.IPC后心肌组织和血浆中脂联素表达水平均升高,提示脂联素参与了IPC的心肌保护作用.     

缺血后处理对高血脂大鼠缺血/再灌注心肌Caspase-3活性的影响

目的：观察缺血后处理对高血脂大鼠缺血再灌注心肌Caspase（半胱氨酸天冬氨酸酶）-3活性的影响。方法：选择高血脂SD大鼠48只,随机分为3组：假手术组（开胸后穿线做套环,但不收紧结扎线）、缺血再灌注组（收紧结扎线缺血40min,放松结扎线再灌注240min）、缺血后处理组（缺血40min后,再灌注10s,缺血10s,连续3个循环,然后再灌注240min）,每组16只。再灌注结束后自右颈动脉采血,测定血清肌酸激酶（CK）活性,再灌注心肌凋亡程度,及Caspase-3活性,并进行比较分析。结果：再灌注结束后,①缺血后处理组和缺血再灌注组CK活性明显高于假手术组[（745.26±62.18）U/L比（926.38±76.49）U/L比（237.67±21.82）U/L],缺血后处理组明显低于缺血再灌注组（P均〈0.05）;②心肌凋亡细胞计数：假手术组未见明显细胞凋亡（〈5%）,缺血后处理组心肌细胞凋亡率明显低于缺血再灌注组[（11.7±2.6）%比（20.8±3.4）%,P〈0.05];③缺血后处理组缺血区心肌组织Caspase-3活性明显低于缺血再灌注组[（545.79±98.25）μmol PNA/mg比（739.83±113.57）μmol PNA/mg,P〈0.01]。结论：缺血后处理可以减轻高血脂大鼠缺血再灌注损伤,其心肌保护作用可能与降低Caspase-3活性有关。     

α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞在早期心肌缺血中的作用

目的 探讨α-平滑肌肌动蛋白(o-SMA)阳性细胞(周细胞)在早期心肌缺血中的作用.方法 将30只雌性Wistar大鼠皮下多点注射异丙肾上腺素(Isp),对照组注射生理盐水,于0(对照)、4、6、12、24、48 h分别麻醉5只大鼠,眼球取血,分离血清,取大鼠心脏,用4％的多聚甲醛溶液固定.生化自动分析仪测定各组大鼠血清天门冬氨酸胺基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平,采用免疫组织化学染色技术及形态定量分析方法检测心肌组织α-SMA、波形蛋白(vimentin)的表达情况,观察周细胞在心肌缺血早期的变化.结果 皮下注射Isp后,12、24、48 h组的大鼠血清AST[( 160.25±3.86)、(172.60±8.82)、(192.20±25.35)U/L]、LDH[(1466.25±643.38)、(1645.20±326.83)、(1701.60±640.06)U/L]水平均高于对照组[(129.18±19.65)、(849.45±248.54)U/L,P均＜0.05];4、6、12、24、48 h组的大鼠血清CK水平[(1097.60±301.57)、(1247.20±243.84)、(1263.75±271.22)、(1448.00±647.00)、(1268.40±479.81)U/L]、CK-MB水平[(217.12±35.89)、(229.08±97.11)、(251.70±46.82)、(318.80±77.76)、(249.04±98.54)U/L]均高于对照组[(713.45±146.30)、(147.05±25.75)U/L,P均＜0.05];4h组大鼠心肌周细胞的数量[(61.00±17.25)个]组高于24、48 h组[(28.20±5.81)、(18.20±2.17)个],48 h组低于6h组[(50.00±3.61)个,P均＜0.05].6、12、24、48 h组大鼠心肌vimentin表达水平(4.17±2.49、5.24±2.84、8.37±2.18、7.73±2.49)均高于对照组和4h组(1.88±1.85、2.21±1.54,P均＜0.05),24、48 h组均高于6、12 h组(P均＜0.05).结论 缺血早期周细胞的数量多于其他间质细胞,周细胞可能是心肌纤维化的主要效应细胞.     

心肌脂联素信号通路增强可能是心肌缺血预处理保护心肌的部分新机制

目的 探讨脂联素(APN)信号通路在心肌缺血预处理中的作用及机制。方法 建立对照组,心肌缺血预处理(ischemic preconditioning,IPC)和缺血/再灌注(myocardial ischemia/reperfusion,MI/R)损伤小鼠模型,每组8只C57BL/6J小鼠。ELISA法检测血浆APN水平,超声检测心功能,TTC法观察心肌梗死面积,TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,Western blot检测APN受体（adiponectin receptor,AdipoR）, 腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)分子的表达。结果 与对照组血浆APN〔(19.08±2.15)μg/ml〕相比,IPC组和MI/R组缺血30 min后血浆APN水平降低（P<0.01）;与IPC组血浆APN〔(15.4±2.09)μg/ml〕相比,MI/R组血浆APN水平降至更低〔(13.95±1.75)μg/ml〕（P<0.05）;与对照组左室射血分数(76.37±7.24)相比,MI/R组和IPC组左室射血分数（57.15±7.32和66.37±6.09）均降低（P<0.05）;与MI/R组左室射血分数相比,IPC组左室射血分数升高（P<0.01）;与对照组左室短轴缩短率(52.13±4.80)相比,MI/R组和IPC组左室短轴缩短率（37±8.14和44.9±6.52）降低（P<0.01）;与MI/R组左室短轴缩短率相比,IPC组左室短轴缩短率升高（P<0.01）;与对照组左室舒张末内径〔(3.13±0.59)mm〕相比,MI/R组和IPC组左室舒张末内径增加〔(3.50±0.48)mm和(3.23±0.50)mm〕（P<0.05）;与MI/R组左室左室舒张末内径相比,IPC组左室舒张末内径减少（P<0.01）;与对照组左室收缩末内径（1.95±0.59）mm相比,MI/R组和IPC组左室左室收缩末内径增加分别为〔(2.26±0.48)mm和(2.15±0.21)mm〕（P<0.05）;与MI/R组左室左室收缩末内径相比,IPC组左室收缩末内径减少（P<0.01）;与对照组心肌梗死面积相比,MI/R组和IPC组心肌梗死面积增加（45.7±3.92,40.9±4.1）（P<0.01）;与MI/R组心肌梗死面积相比,IPC组心肌梗死面积增加减少（P<0.05）;与对照组TUNEL阳性细胞相比,MI/R组和IPC组TUNEL阳性细胞增加（12.16±1.93和8.96±1.49）（P<0.01）;与MI/R组TUNEL阳性细胞相比,IPC组TUNEL阳性细胞减少（P<0.05）;与对照组Caspase-3活力〔(1.93±1.82)nmol/(h·mg)〕相比,MI/R组和IPC组Caspase-3活力增加〔(5.82±2.72和4.68±2.31）nmol/（h·mg）〕（P<0.01）;与MI/R组Caspase-3活力相比,IPC组Caspase-3活力减少（P<0.05）;与对照组心肌AdipoR1的表达(0.86±0.26)相比,MI/R组和IPC组心肌AdipoR1表达减少（0.57±0.15和0.72±0.22）（P<0.05）;与MI/R组心肌AdipoR1的表达相比,IPC组心肌AdipoR1的表达增加（P<0.05）;而AdipoR2的表达没有变化;与对照组心肌pAMPK/AMPK的表达(1.6±0.24)相比,MI/R组和IPC组心肌pAMPK/AMPK的表达减少（1.04±0.13和1.28±0.13）（P<0.05）;与MI/R组心肌pAMPK/AMPK的表达相比,IPC组心肌pAMPK/AMPK的表达增加（P<0.01）。结论 缺血预处理减轻心肌再灌注损伤机制部分可能在于心肌APN/AdipoR/AMPK信号通路增强。     

双下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用的研究

目的 研究双下肢缺血预处理对未成熟心肌保护作用,探讨未成熟心肌保护方法。方法 采用经典心脏缺血预处理和双下肢缺血预处理动物Langendorff灌注模型分为3组：缺血／再灌（I／R,n=6）,建立模型,灌注15min转为工作心15min,心脏缺血预处理组（IPC,n=60,建立模型,灌注15min转为工作心15min,反复2次缺血5min,再灌5min;双下肢缺血预处理组（DL－IPC,n=6）,反复2次阻断双下肢血流5min,松开5min,建立模型,灌注15min转为工作心15min;然后各组全心停灌45min,恢复灌注15min改为工作心30min。以左室功能恢复、心肌含水量、血清肌酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）漏出率、心肌组织ATP和丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性作为观察指标,结果 IPC和DL－IPC组在左室功能恢复优于I／R组（P＜0.050,在ATP含量、SOD活性均优于I／R组（P＜0.010,在心肌含水量低于I／R组（P＜0.05）,在MDA含量、CK、LDH漏出率方面均低于I／R组（P＜0.01）。结论 双下肢缺血预处理与心脏缺血预处理对未成熟心肌具有同等的心肌保护作用。