DNA试剂盒在人员血样检验中的分型效果观察

提取DNA扩增或直接扩增,采用AB公司所提供的3130或3500XL测序仪电泳进行检测,基因分型采用GMID-X软件分析。人员血样检验中所使用的7类商业化法医DNA试剂盒均获得较为理想的STR分型。文中所列举的DNA试剂盒可很好的满足相关法医人员进行血样检验的需求,其研究的目的在于探讨分析DNA试剂盒在人员血样检验中的分型效果。     

接触性生物检材提取DNA方法的比较

目的 建立提取接触性生物检材DNA的新方法.方法 用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒提取各类接触性生物检材DNA并STR分型;将检验成功并可以重复的检材各取5份,用Chelex-100法、M48磁珠法和Chelex-100+纯化法3种方法提取接触性检材DNA,洗脱体积为50 μL,用Identifiler Plus复合扩增,并对检验结果分析比较.结果 对于接触性生物检材,采用PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒STR分型的成功率最高,并将该方法加以实际应用.结论 PrepFiler ExpressTM法医DNA提取试剂盒是提取接触性生物检材DNA的一种新方法,可应用于法医实际案件检验.     

几种常用PCR扩增试剂盒检验血样DNA的结果比较

目的探讨Profiler PlusTM、IdentifilerTM与Powerplex 16HS3种试剂盒对检验血样DNA的结果,探讨3种方法的扩增不平衡和/或基因丢失现象发生机率。方法选取600名无血缘关系的中国汉族个体为研究对象,采其血样,先用其中2种试剂盒对600份血样进行DNA检验,选出出现不同检验结果的标本,再分别用3种试剂盒对以上具有不同结果的同一样本进行检验,比较检验结果,观察3种试剂盒扩增不平衡和/或基因丢失现象的发生机率。结果 600份血液样本的检验差异率为1.333%;用3种试剂盒分别对以上8份样本进行DNA检验,等位基因缺失发生率均为0.1667%;Profiler PlusTM、IdentifilerTM与Powerplex 16HS3种试剂盒的扩增不平衡的发生率分别为1.167%、0.1667%和0.1667%。结论 3种试剂盒在检验血样DNA时均会出现等位基因缺失和扩增不平衡现象,等位基因缺失的发生率之间无统计学差异,但Profiler PlusTM试剂盒扩增不平衡的发生率较另外2种较高,具有统计学差异。在实际工作中,在使用一种主要试剂盒的同时,还应注意备用其他试剂盒作为相互验证之用,减少因等位基因缺失和扩增不平衡带来的误差。     

不同PCR扩增试剂盒检验血样DNA的检验结果对比研究

目的:讨论研究Profiler PlusTM、IdentifilerTM以及Powerplex16扩增试剂盒用于检验血样DNA检验结果的差异,并研究其扩张不平衡和基因丢失现象的发生几率。方法:选取150例完全无血缘关系的个体作为研究对象并采集其血样,分别使用两种扩增试剂盒进行检验。对所得不同结果的同一对象再使用3种扩增试剂盒进行检验。将检验所得结果进行比较。结果:3种试剂盒检测的等位基因缺失率比较差异无统计学意义(P0.05)。Profiler PlusTM检测扩张不平衡率显著高于其余两种试剂盒(P0.05)。结论:使用PCR扩增试剂盒对血样DNA进行检测时,会出现不同位置的异常基因,可表现为基因缺失及扩增不平衡。但Profiler PlusTM检验扩增不平衡发生率显著高于其余两种试剂盒。在实际生活对血样DNA进行检测时,除需准备主要检测扩增试剂盒外,还需准备其他不同类备用试剂盒用于互相验证及对比,尽量降低基因等位缺失及扩张不平衡发生率。     

血浆游离DNA的STR分型检测研究

目的：探讨利用血浆中游离DNA进行短串联重复序列（short tandem repeat,STR）分型检测,解决法医学个体识别和亲权鉴定问题的可行性。方法采集36例无关健康个体EDTA-Na2抗凝血样,分离血浆,采用经典酚-氯仿法分别处理血浆和血细胞,对提取的DNA进行15个STR基因座常规PCR扩增和荧光标记复合扩增,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和毛细管电泳检测2种STR分型方法进行检测。结果常规PCR扩增银染检测和荧光标记复合扩增毛细管电泳检测两种STR分型方法的结果表明,同一个体的血浆游离DNA和血细胞DNA STR分型一致,且分型效果接近。结论血浆游离DNA可作为一种有效的生物学样本进行STR分型检测,应用于法医个体识别和亲权鉴定。     

STR 试剂盒在快速数据库建设中的应用

目的：评价 STRtyper-21G Plus 试剂盒在 DNA 数据库建设中的应用。方法针对各种纸质血样本特性，优化扩增体系和引物量、样本的取样量及循环次数，缩短 PCR 扩增时间，以建立适合批量样本直接快速扩增检验的方法，将其应用于2000份数据库样本的检验中，并与 PowerPlex?21试剂盒进行比较。结果采用10μL 扩增体系时，得到了 STRtyper-21G Plus 试剂盒批量样本检验的最适取样量和扩增循环次数，建立了快速扩增反应程序，2000份样本的直接快速扩增检验成功率为98．7％，批量检验92份样本（1个96孔板）从取样到电泳结束只需5 h；PowerPlex?21试剂盒分别为98．1％和6 h。结论STRtyper-21G Plus 试剂盒的应用，省去样本 DNA 提取过程，操作方法简单、快速，获得信息量大，适用于 DNA 数据库建设的需要。     

一种快速聚合酶链式反应方法的探究和法医学应用

目的 优化和建立一套快速聚合酶链式反应(PCR)扩增体系和程序,缩短扩增时间,提高短串联重复序列分型的速率和办案效率.方法 运用AmpFLSTR(R) Identifiler(R) Plus试剂盒和7种快速扩增酶进行筛选和优化,最后对筛选出的酶优化其扩增体系和扩增程序,并对几种常规检材中提取的DNA进行扩增和检测,然后对其分型结果进行验证和讨论.结果 最终优化的扩增程序由常规的3h左右缩短至24 min,DNA检验结果与常规方法一致.结论 应用优化后的快速PCR扩增体系可以成功准确扩增DNA样本,显著提高DNA分型速率.     

荧光标记引物miniCTTA复合扩增系统的建立

目的建立扩增片段<130bp,包括CSF1PO、TH01和TPOX及性染色体amelogenin基因座的miniCTTA扩增系统。方法采用不同荧光染料标记引物,通过PCR扩增,利用ABI3100遗传分析仪进行片段长度分析,对100份无关个体血样,10个家系样本以及30份高度降解检材进行检测。结果miniCTTA系统DNA分型结果与AmpFLSTRIden-tifiler试剂盒完全一致。结论miniCTTA系统可以应用于个人识别和亲权鉴定,为降解DNA样本分型提供了新的方法。RR     

D10S1248,D2S441,D16S1677 3个miniSTR基因座在山东汉族人群中遗传多态性的调查研究

高度降解检材的DNA分型一直是法医DNA领域的一大难题,面对命案现场或重大群体性灾难事件中的一些高度腐败降解检材,应用现有的短串联重复序列(short tandom repeats, STR)分型技术往往不能获得成功分型及明确的分型结果,为案件侦破或失踪人员的认定带来困难.     

微量接触DNA的浓缩与回收

目的对纯化后的微量DNA进行进一步浓缩,提高DNA检验成功率。方法将30ml（约600pg）纯化后的微量DNA,分别采用Amicon离心超滤管和DNAClean＆ConcentratorTM-5试剂盒进行浓缩回收,用Identifiler试剂盒进行PCR扩增及分型检测,比较STR分型图谱的平均峰高、峰面积和等位基因丢失率。检验24枚白纸上的汗潜指纹,比较浓缩前后的检验效果。结果经过Amicon离心超滤管回收后,STR分型平均峰高85．3RFU,平均峰面积为1130．8,等位基因丢失率为66．13％。经过DNAClean ＆ ConcentratorTM-5试剂盒回收后,STR分型平均峰高147．5RFU,平均峰面积为1960．2,等位基因丢失率为35．14％。汗潜指纹的DNA检验通过DNAClean＆concentralor^TM-5试剂盒纯化浓缩,获得有效分型的数量由浓缩前的9枚提高为20枚。结论DNAClean＆C0ncentrator^TM-5试剂盒可以明显提高微量DNA检材的检验成功率,效果优于Amicon离心超滤管。对白纸上的指纹,DNAClean＆Concentrator^TM-5试剂盒浓缩后检验成功率升高。