非整倍体的发生机理及检测方法

好非整倍体对人类健康的影响，诱发因素和发生机理，并系统地归纳了非整倍体的检测系统和检测方法，以及非整倍体未来的研究方向。     

Y染色体微缺失和精子染色体非整倍体与不育关系的探讨

目的：探讨Y染色体AZF区微缺失和精子染色体非整倍体与男性不育的关系。方法：采用多重PCR-凝胶电泳技术对32例男性不育患者AZF4个区15个序列标签位点（STS）进行微缺失检测,并应用X、Y、18号染色体探针对其中16例弱精子症患者和8例健康男性进行三色荧光原位杂交,分析精子染色体非整倍体。结果：32例患者中4例在AZF区有微缺失,缺失率12.5%。病例组计数47691个精子,对照组计数28952个精子,杂交率分别为99.53%和99.93%。非整倍体主要类型为YY18、XX18、XY18、Y1818和X1818。病例组依次为（0.102±0.154）%、（0.103±0.073）%、（0.273±0.278）%、（0.381±0.493）%和（0.318±0.585）%,非整倍体率为5.64%;对照组则为（0.050±0.040）%、（0.030±0.031）%、（0.098±0.080）%、（0.093±0.087）%和（0.085±0.106）%,非整倍体率为4.28%,两组之间差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：Y染色体AZF区域发生微缺失和精子染色体非整倍体增加可能是男性不育的重要病因之一。     

丙烯酰胺诱导NIH 3T3细胞微核染色体的双色荧光原位杂交分析

目的 分析丙烯酰胺（ＡＡ）诱导的ＮＩＨ３Ｔ３小鼠成纤维细胞微核（ＭＮ）染色体组成,判断其遗传毒性。方法 用着丝粒和端粒ＤＮＡ探针双色荧光原位杂交检测ＭＮ的染色体组成。结果 ＡＡ诱导的ＮＨ３Ｔ３小鼠成纤维细胞总ＭＮ率和既含着丝粒信号的ＭＮ率均有显著的剂量－反应关系（r＝０．９９２９、０．９９３,Ｐ＜０．０１）。高剂量（４ ００rg/ml）时,ＡＡ诱导的ＭＮ中６５．９％既含着丝粒信号又含端粒信号;２６．０％     

荧光原位杂交法检测人精子染色体非整倍体

荧光原位杂交法(FISH)是检测精子非整倍体的简便快速的方法。本文综述了国外采用FISH方法检测精子非整倍体的最新进展。最新的研究表明,精子形态特别是某些特殊畸形如巨头或大头伴多尾的精子与精子非整倍体存在相关性;无精症患者中非阻塞性无精症睾丸精子的非整倍体率显著高于阻塞性无精症附睾精子和正常射精精子;化学物质如丙烯腈、吸烟、睾丸癌化疗等均可导致精子非整倍体率增加。     

荧光原位杂交法检测人精子染色体非整倍体

荧光原位杂交法(FISH)是检测精子非整倍体的简便快速的方法.本文综述了国外采用FISH方法检测精子非整倍体的最新进展.最新的研究表明,精子形态特别是某些特殊畸形如巨头或大头伴多尾的精子与精子非整倍体存在相关性;无精症患者中非阻塞性无精症睾丸精子的非整倍体率显著高于阻塞性无精症附睾精子和正常射精精子;化学物质如丙烯腈、吸烟、睾丸癌化疗等均可导致精子非整倍体率增加.     

荧光原位杂交法检测人精子染色体非整倍体

荧光原位杂交法(FISH)是检测精子非整倍体的简便快速的方法。本文综述了国外采用FISH方法检测精子非整倍体的最新进展。最新的研究表明，精子形态特别是某些特殊畸形如巨头或大头伴多尾的精子与精子非整倍体存在相关性；无精症患者中非阻塞性无精症睾丸精子的非整倍体率显著高于阻塞性无精症附睾精子和正常射精精子；化学物质如丙烯腈、吸烟、睾丸癌化疗等均可导致精子非整倍体率增加。     

微核流式细胞术检测研究进展

微核实验 ,具有结果稳定、重复性好的优点 ,且方法简便、易于开展 ,是广泛应用的致突变检测方法。然而 ,微核显微镜检测费时、费力 ,结果易受主观因素影响 ,难以满足大量毒理学检验任务的要求。而且微核属小概率事件 ,常规微核实验每只动物检测 5 0 0～ 2 0 0 0个细胞 ,敏感性尚有争议 ,而扩大检测细胞数量虽能提高结果的可信度 ,也大大增加了工作量 ,实际上难以做到[1] 。这促使人们建立微核自动化检测方法 ,已建立的方法主要有 :流式细胞术检测、计算机图像分析系统检测和激光扫描细胞仪检测等。我们就微核流式细胞术检测的发展综述如下。…     

环境化学物诱导人类染色体非整倍体的研究进展

非整倍体是引起人类出生缺陷、智力低下、自发性流产、死产及恶性肿瘤的重要因素.非整倍体的发生率较高,是最常见的染色体畸变,见于大约0.3%的新生儿、4%的死产、50%的自发性流产[1,2].在自发性流产的胚胎中所有染色体都有过三体的报道(1号染色体除外,有报道曾在体外受精的8细胞胚中观察到),在新生儿中只有13、18、21号及性染色体的三体儿可存活,而以21三体最为常见,在死产中最常见是性染色体三体,但在非整倍体发生率最高的自发性流产,以16三体最常见,约占1/3.     

苯诱导生殖细胞染色体非整倍体和DNA损伤的研究

[目的 ]研究苯对人生殖细胞染色体非整倍体和DNA的影响。 [方法 ]用地高辛标记 9号染色体着丝粒探针 (D9Z1)和生物素标记的 18号染色体着丝粒探针 (D18Z1)与接触工人间期精子核进行双色荧光原位杂交 ,测定精子染色体非整倍体率 ,并用改良的精子单细胞凝胶电泳 (SCGE)方法测定精子DNA损伤。 [结果 ]车间空气中苯平均几何浓度 86 49mg/m3 ,高于国家卫生标准 1倍 ;苯暴露工人尿粘糠酸显著高于对照组。对工人精子的分析 ,共计数 14名暴露工人 136 40 1条精子 ,16名对照工人15 6 95 5条精子。暴露组 9、18染色体双体精子率分别为 0 16 8%和 0 0 5 5 % ,二倍体精子率为 0 0 73% ,均高于对照组相应数值 (分别为 0 0 5 0 %、0 0 33%和 0 0 40 % )。其中 9号染色体双体率高于对照值 3倍 ,18号高于对照 1倍 ;暴露组 9、18号染色体缺体率分别为 0 2 0 6 %和 0 0 6 8% ,高于对照组值 ( 0 0 6 7%和 0 0 48% )。总数目畸变率 ( 0 5 70 % )亦高于对照组值 ( 0 2 18% )。 9、18号染色体双体率和缺体率接近 1∶1的比率 ,符合超倍体与亚倍体在减数分裂过程中同时产生 ,数目相同的遗传规律。SCGE检测结果 ,以精子DNA头部完整的百分比为检测参数 ,暴露组 (n =13)工人精子DNA头部完整的百分比为 70 18% ,明显低     

CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术检测研究

目的探索CD71荧光抗体和PI染色的微核流式细胞术自动化检测方法。方法采用-85℃甲醇固定细胞,CD71荧光抗体和PI染色,以伯氏疟原虫感染小鼠血细胞为微核模式生物调校流式细胞仪,建立微核流式细胞术检测方法,并对秋水仙素(COL)诱导的小鼠外周血含微核网织红细胞进行了检测。结果所建立的方法能明确分辨外周血含与不含微核的网织红细胞和成熟红细胞,COL处理小鼠的外周血含微核网织红细胞率呈明显的剂量依赖性升高,流式细胞术与显微镜检测的外周血含微核网织红细胞率有良好相关性(r=098)。结论微核流式细胞术检测方法能准确地检测小鼠外周血含微核网织红细胞。     

镉染毒小鼠网织红细胞微核流式细胞术研究

目的通过流式细胞术(FCM)检测外周血微核方法，研究氯化镉(CdCl2)染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率，评价流式细胞术在微核检测中的应用价值及探讨氯化镉的致突变作用。方法采用转铁蛋白受体CD71荧光抗体和碘化丙啶(PI)染色，并以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核模式生物调校流式细肛仪．检测10～60mg／kg环磷酰胺染毒和50～400μg／kg氯化镉染毒对小鼠的外周血含微核网织红细胞率的变化。结果不同剂量环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率和骨髓含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠，且二者之间相关性良好(r=0．955)；不同剂量氯化镉染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率未见明显升高。结论FCM测定外周血含微核网织红细胞率可替代传统显微镜检查骨髓含微核网织红细胞率用于遗传毒性评价；在本研究条件下未观察到氯化镉有明显的诱导小鼠外周血含微核网织红细胞形成的作用。     

流式细胞术检测血小板微粒及其临床应用

〔目的〕探讨血小板微粒 (PMPs)定量检测方法。〔方法〕应用流式细胞仪 ,以 3mm和 0 .8mm的标准微球作内参对照 ,建立血小板微粒的定量检测方法 ,并对其临床应用进行初步研究。〔结果〕80例健康人静血小板释放的PMPs为 1.2× 10 5± 5 .7× 10 4 ml ,活化血小板释放的PMPs为 1.6× 10 6 ± 9.1× 10 5 ml ;2 8例冠心病、2 2例急性脑梗塞和 2 2例慢性肾功衰竭患者血浆中PMPs较对照组明显增高 (P <0 .0 0 1) ,分别为 6.1× 10 5± 2 .5× 10 5 ml、6.8× 10 5± 3 .4× 10 5 ml和5 .9× 10 5± 3 .1× 10 5 ml,而 2 6例急性白血病化疗后伴严重血小板减少者的PMPs增高不明显 ,为 1.3× 10 5± 6.1× 10 4 ml。〔结论〕PMPs是监测血小板活化、预测和诊断血栓性疾病的一个重要指标 ,采用流式细胞术内参定位法可以准确而快速地定量分析PMPs ,有利于实验结果的室间比较和检测方法的标准化。     

利用3种抗体流式分选母血中胎儿细胞的比较

目的比较单克隆抗转铁蛋白受体抗体(CD71McAb)、单克隆抗血型糖蛋白A抗体(GPAMcAb)和抗血红蛋白-ξ抗体(ξ-Hb)3种胎儿有核红细胞(FRBCs)特异性抗体在流式细胞仪上分选母血中胎儿细胞的检出率,评价分选胎儿细胞的最适方法。方法收集55例孕妇外周血,利用淋巴细胞分离液从中分离出单个核细胞层后,每例标本分为5组,分别加入不同抗体第1组CD71Mchb单用;第2组GPAMcAb单用;第3组ξ-Hb单用;第4组CD71+GPA联用;第5组CD71+GPA+ξ-Hb联用,孵育后流式细胞仪进行分选,应用PEP-PCR检测分选后的胎儿细胞的SRY基因。结果5组FNRBC的阳性细胞检出率及鉴定符合率分别为2.74%,77.14%;5.25%,65.4%;0.22%,95.7%;0.72%,98.6%;0.02%,60%。结论利用CD71McAb和GPAMcAb双重标记胎儿细胞进行分选或者利用抗ξ-Hb特异性McAb分选FRBCs是更有效的分选方法。     

应用流式细胞术研究甲基对硫磷对大鼠睾丸生精细胞的毒性作用

目的探讨有机磷农药甲基对硫磷对雄性大鼠的睾丸毒性作用。方法20只SD雄性大鼠（220～240g）随机分为对照组和低（1．2mg／kg）、中（6mg／kg）、高（30mg／kg）剂量甲基对硫磷组,灌胃染毒,容量为5ml／kg,每日1次,连续6周。染毒结束次日处死小鼠,用流式细胞仪对大鼠睾丸生精细胞进行分析。结果①高、中剂量甲基对硫磷组细胞凋亡率均显著高于对照组（P〈0．05或P〈0．01）;②与对照组相比,各剂量甲基对硫磷组1C细胞显著减少,2C细胞显著增加（P〈0．05或P〈0．01）;③与对照组相比,高剂量染毒组G0／G1期细胞比例显著降低,G2／M期细胞比例显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。结论甲基对硫磷能够阻滞大鼠生精细胞的细胞周期进程,诱导生精细胞凋亡。     

流式细胞术在保健食品功能评价中的应用

目的 建立保健食品增强免疫力功能评价指标的流式细胞术检测方法,并初步评价其应用价值。方法 3种受试物蛋白粉、参茸膏和灵芝虫草菌丝体小鼠实验模型的实验剂量组均按人体推荐量的5、10、30倍进行灌胃,阴性及阳性对照组均给予等量纯净水,阳性对照组为给药结束前3d开始每天灌胃给予25mg／kg左旋咪唑,并于给药结束当天用2％绵羊红细胞进行免疫;大鼠实验模型采用拌饲法按人体推荐量的25、50倍给予受试物;实验结束后同步检测以下指标：（1）传统指标：包括刀豆素A诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验、小鼠脾自然杀伤（NK）细胞活性测定、绵羊红细胞诱导的小鼠迟发型变态反应实验、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。（2）流式细胞仪检测指标：小鼠外周血淋巴细胞计数,大、小鼠T、NK细胞表面活化抗原检测以及小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球功能。结果 给予受试物蛋白粉后,0．83、1．67、5．01g／kg剂量组小鼠T、B淋巴细胞的相对比例和绝对数量与阴性对照组间差异无统计学意义;给予受试物参茸膏后,3．75、7．50和15．0ml／kg剂量组的小鼠外周血T淋巴细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,与其他传统检测指标有良好一致性;蛋白粉0．83、1．67g／kg剂量组小鼠外周血NK细胞CD69表达阳性比例较阴性对照组明显升高,且与NK细胞活性测定结果有良好一致性;给予1．50g／kg剂量灵芝虫草菌丝体的大鼠外周血NK细胞CD25表达阳性比例较阴性对照组升高;小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能实验：传统检测方法未发现对照组与剂量组有明显差别,而流式细胞术检测结果显示：灵芝虫草菌丝体0．15、0．30和0．90g／kg剂量组总吞噬比例增加,0．30、0．90g／kg剂量组吞噬指数均提高。结论 应用流式细胞术检测保健食品增强免疫力功能指标,与传统方法检测结果具有良好一致性,且具有更高的敏感性,在检测和评价保健食品增强免疫力功能方面具有良好的应用价值,值得进一步研究和推广。     

CD71和HbF用于流式细胞仪分选母血中的胎儿细胞

目的:比较CD71单染、HbF单染和CD71、HbF双染对单个核细胞的标记情况,同时探讨孕妇外周血中胎儿有核红细胞的含量与孕周的关系。方法:选用红细胞特异性抗体CD71、HbF对正常孕妇外周血和胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞仪对有核红细胞进行分选。结果:用CD71和HbF进行双染色标记,正常孕妇和脐血单个核细胞的阳性标记率明显低于CD71和HbF单染色标记(t检验P<0.01)。孕早中期胎儿NRBC比例随孕周的增加呈上升趋势,至21~24周比例最大,约为1.92±0.84×10-2。结论:采用CD71和HbF双染色标记,可提高NRBC的特异性标记和分选纯度,分选胎儿细胞的最佳时间应在孕21~24周。     

氯化镍染毒对小鼠外周血网织红细胞微核形成的影响

目的研究氯化镍(NiCl2)诱导小鼠外周血网织红细胞微核形成的作用.方法将30只健康的成年雄性NIH小鼠随机分为6组,设生理盐水对照组、秋水仙素阳性对照组(剂量为0.75 mg/kg)、环磷酰胺阳性对照组(剂量为40.0mg/kg)和NiCl2染毒组(剂量分别为5.0、10.0、20.0 mg/kg),分2次腹腔注射染毒,间隔24 h,每次按0.1 ml/10 g体重腹腔注射.采用转铁蛋白受体荧光抗体和碘化丙碇染色,以疟原虫感染小鼠外周血红细胞为微核生物模型,调校流式细胞仪,检测秋水仙素、环磷酰胺和0、5.0、10.0、20.0 mg/kg NiCl2染毒后小鼠外周血含微核网织红细胞率的变化.结果秋水仙素和环磷酰胺染毒小鼠的外周血含微核网织红细胞率均明显高于对照组小鼠(P＜0.01),但不同剂量NiCl2染毒小鼠外周血含微核网织红细胞率均未见明显升高(P＞0.05).结论该研究条件下未观察到氯化镍有明显的诱导小鼠外周血网织红细胞微核形成的作用.     

流式细胞术检测重症肌无力患者调节性T细胞变化

目的：探讨并发胸腺疾病的重症肌无力患者的外周血和胸腺中调节性T细胞变化。方法：采用流式细胞仪多参数（三标CD4、CD25和Foxp3）逐层分析法分析并发胸腺疾病的重症肌无力患者的外周血和胸腺中调节性T细胞比例。结果：正常人、MG并胸腺增生者和MG并胸腺瘤者外周血中CD4＋阳性细胞中调节性T细胞比例差别无统计学意义（F=0.095,P=0.910）,胸腺中CD4＋阳性细胞中调节性T细胞比例差别有统计学意义（F=16.162,P〈0.001）。结论：调节性T细胞数量减少或功能异常在MG中起重要作用。用流式细胞仪多参数逐层分析法是淋巴细胞亚型分析的重要方法。