黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌柯萨奇病毒受体基因表达的影响

目的　探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎 (VM)小鼠心肌柯萨奇 腺病毒受体 (CAR)基因表达影响。方法　Balb/c小鼠 1 0 0只 ,分为 6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液 ,分为正常对照组 (A组 ,1 0只 ,以羧甲基纤维素钠 0 .1mL灌胃 7d)、9%黄芪甲甙对照组 (B组 ,1 0只 ,9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d) ;余 80只小鼠以柯萨奇病毒 (CVB3)腹腔无菌注射制作病毒性心肌炎模型 ,VM小鼠随机分为心肌炎对照组和 1 %、3 %、9%黄芪甲甙干预心肌炎组 ,分别以生理盐水、1 %、3 %、9%黄芪甲甙 0 .1mL灌胃 7d(分别为C、D、E、F组 ,每组 2 0只 )。 1 4d后处死一小部分鼠并取其心脏。采用RT PCR检测心肌CARmRNA表达水平。结果　F组小鼠死亡率较C组明显降低 (1 0 %与 45 %比较 ) ,(χ2 =6 .1 4　P <0 .0 5) ,B组无小鼠死亡 ;与C组相比较 ,CARmRNA表达水平以心肌病变积分在F组显著下降 ,而 1 %、3 %黄芪甲甙对心肌炎小鼠CARmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论　 9%黄芪甲甙可抑制CAR表达 ,提高心肌炎小鼠生存率 ,减轻心肌损害 ,安全有效 ,对VM有良好的治疗作用。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶B mRNA表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中组织蛋白酶B(cathepsinB,CB)mRNA表达的影响。方法Balb/c小鼠100只随机分为6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1mL灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为VM对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预VM组,分别以生理盐水、1%、3%、9%黄芪甲甙0.1mL灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT-PCR半定量检测心肌CBmRNA表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20)vs45%(9/20),χ2=6.14P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组比较CBmRNA表达水平及心肌病变积分在F组显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对VM小鼠CBmRNA表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制CB表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠神经生长因子表达的影响

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VM)小鼠心肌中神经生长因子(NGF)表达的影响。方法Balb/c小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组[A组,10只,以羧甲基纤维素钠(CMC)0.1 mL灌胃7 d]、高剂量对照组(B组,10只,9%黄芪甲甙液0.1 mL灌胃7 d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VM模型,VM小鼠随机分为心肌炎对照组和低、中、高剂量干预组,分别以CMC、1%、3%、9%黄芪甲甙液0.1 mL灌胃7 d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14 d后处死小鼠并取其心脏,采用RT-PCR和免疫组织化学检测NGF mRNA及蛋白表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低,B组无小鼠死亡;与C组比较,NGF mRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分在F组均显著下降,而低、中剂量黄芪甲甙对心肌炎小鼠NGF mRNA、蛋白表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制NGF表达,对Balb/c小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

黄芪甲甙对病毒性心肌炎小鼠心肌组织蛋白酶L表达的作用

目的探讨黄芪活性成分黄芪甲甙对病毒性心肌炎(VMC)小鼠心肌中组织蛋白酶L(cathepsinL,CL)表达的作用。方法BALB/C小鼠100只,随机分成6组。非感染小鼠腹腔无菌注射病毒培养液,分为正常对照组(A组10只,以羧甲基纤维素钠0.1ml灌胃7d)、9%黄芪甲甙对照组(B组10只,9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d);余80只小鼠以柯萨奇病毒(CVB3)腹腔无菌注射制作VMC模型,VMC小鼠随机分为心肌炎对照组和1%、3%、9%黄芪甲甙干预心肌炎组,分别以羧甲基纤维素钠及1%、3%、9%黄芪甲甙0.1ml灌胃7d(分别为C、D、E、F组,每组20只)。14d后处死全部小鼠并取其心脏。采用RT_PCR和免疫组化半定量检测心肌CLmRNA及蛋白表达水平。结果F组小鼠较C组死亡率明显降低[10%(2/20例)vs45%(9/20例),χ2=6.14,P<0.05],B组无小鼠死亡;与C组相比,CLmRNA、蛋白表达水平以及心肌病变积分在F组均显著下降,而1%、3%黄芪甲甙对心肌炎小鼠CLmRNA、蛋白表达及心肌病变积分无明显影响。结论黄芪甲甙可能通过抑制cathepsinL表达,对BALB/C小鼠CVB3心肌炎具有良好的治疗作用。     

黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠IGF-1及相关蛋白表达的作用研究

目的：探讨黄芪甲甙在治疗病毒性心肌炎过程中对胰岛素样生长因子-1（IGF-1）及相关蛋白的影响。方法：65只4周龄Balb/C小鼠随机分为正常对照、黄芪对照、病毒对照及黄芪小剂量、黄芪大剂量等5组。后3组腹腔接种柯萨基B组病毒（CVB3）病毒。黄芪小剂量、黄芪大剂量每日分别给予0.07、0.6 mg/kg黄芪甲甙液灌胃1次。15 d后采血、取心肌组织,用酶标免疫吸附测定法(ELISA)测血浆中IGF-1的表达,用免疫组织化学法检测心肌组织中IGF-1及相关蛋白的蛋白表达,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测心肌组织IGF-1基因表达。结果：感染CVB3病毒后小鼠心肌组织IGF-1及相关蛋白明显升高,大剂量黄芪甲甙干预可调节小鼠IGF-1及相关蛋白的表达;小剂量黄芪甲甙则无明显效果。结论：大剂量黄芪甲甙对急性病毒性心肌炎小鼠心肌组织的保护作用可能是通过影响IGF-1及相关蛋白表达的途径来实现。     

柯萨奇B3病毒致小鼠慢性心肌炎的初步研究

目的 探讨在建立慢性病毒性心肌炎及扩张型心肌病动物模型（ＤＭＣ）的实验途径,获得制造该模型所需的必要实验数据。方法 对柯萨奇Ｂ３亲心肌株病毒（ＣＶＢ３ｍ）进行驯化,感染不同品系的纯系实验小鼠,观察并记录感染小鼠的死亡及发病情况。结果 实验组昆明鼠和ＮＩＨ小鼠的死亡率分别为２．５％和７．５％,二者的心肌未见有明显的病理改变,Ｂａｌｂ／ｃ雄鼠感染ＣＶＢ３ｍ后死亡率为５１．７％,且发病较重,Ｂａｌｂ／ｃ     

黄龙口服液治疗小鼠柯萨奇B3病毒性心肌炎的疗效观察

为探讨“黄龙”口服液治疗病毒性心肌炎的疗效，对３２只小鼠柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎进行实验性治疗。结果表明：治疗组３２只，死亡１６只，病死率为５０％；对照组４０只，死亡３６只，病死率为９０％（χ２＝１４．１８，Ｐ＜０．０１）。治疗组平均死亡时间为２２±４天，对照组为５±２天（ｔ＝２３．０２，Ｐ＜０．０１）。电镜观察结果发现治疗组心肌细胞变性、溶解和坏死改变较对照组轻，存活时间长者的心肌细胞的形态和结构更接近正常。提示，“黄龙”口服液对小鼠实验性病毒性心肌炎有显著疗效。     

黄龙口服液治疗小鼠柯萨奇B2病毒性心肌炎的疗效观察

为探讨“黄龙”口服液治疗病毒性心肌炎的疗效，对３２只小鼠柯萨奇Ｂ３病毒性心肌炎进行实验性治疗。结果表明：治疗组３２只，死亡１６只，病死率为５０％；对照组４０只，死亡３６只，冱死率为９０％。     

克隆测序鉴定柯萨奇病毒B3m诱导BALB/c小鼠急性心肌炎模型

小儿病毒性心肌炎发病率的逐年增高,越来越受到专家学者的关注.关于病毒性心肌炎的发病机制及药物防治等基础性与应用性研究都需要一个可靠而稳定的动物模型[1].我们以质粒克隆测定BALB/c心肌炎模型小鼠的心肌组织中CVB3m序列,对测序结果与已知CVB3m cDNA全序列进行了比较,并配合病理观察,鉴定小鼠心肌炎模型. 材料与方法 1. 材料:(1)病毒:CVB3m(上海第二军医大学沈茜教授惠赠),Hela细胞传代,TCID50为3.67×10-4.(2)动物:70只BALB/c小鼠,5～6周龄,雄性,体重18 g左右(中国医科大学动物中心提供,SPF级).(3)仪器:DNA测序仪(ABI PRISMTM 377X)、蛋白核酸分析仪(美国Beckman DU-600)、PCR仪(美国PE-9600),倒置显微镜(德国LEICA)、超薄切片机(LKB-V)、电子显微镜(日本HITACHI H-600)、低温高速离心机(德国Heraeus Biofuge 28RS)、电泳仪(上海天能EPS-300);CMIAS医学图像分析管理系统、天能凝胶分析系统.(4)试剂:TRIZOL总RNA提取试剂(GIBCO公司)、RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司)、AmpliTaq DNA聚合酶循环反应试剂盒(PE公司).(5)引物:CVB3m特异引物为软件设计所得,CVB3m上游引物(2458-2476)为 5＇- GTG GAA GAC GCG ATA ACA - 3＇,下游引物(3286-3269)为5＇- CAT TGT AGT GAT GCT TTG - 3＇,扩增片段计828 bp;测序用引物F(M13-47)与引物R(RV-M),分别为 5＇- CGC CAG GGT TTT CCC AGT CAC GAC- 3＇与5＇- GAG CGG ATA ACA ATT TCA CAC AGG - 3＇.引物由宝生物工程(大连)有限公司合成. 2.实验方法:(1)分组与小鼠CVB3m急性心肌炎模型的建立:70只小鼠按体重随机分为对照组(A组)与模型组(B组).B组经腹腔注射接种0.2 ml含TCID50的CVB3m.A组予以等量不含病毒的Hela 细胞培养上清液.(2)取材:各组分别于感染后3、5、7、10、14 d随机活杀6只鼠,取心肌组织,分别用于克隆测序及病理组织学检查.(3) RT-PCR:①提取总RNA:取心肌组织加TROZOL制成匀浆,经超声破碎、提取,氯仿、异丙醇等分离、沉淀,最后用适量的无RNase水溶解RNA沉淀.②合成 cDNA:将总RNA 反转录合成第一条cDNA .条件:65℃ 1 min、30 ℃ 5 min、15～30 min内匀速升温至 65 ℃、65 ℃ 15～30 min、98 ℃ 5 min、5 ℃ 5 min.③PCR扩增:将反转录的cDNA进一步扩增,扩增参数:94℃ 3 min,94 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72℃ 1 min,30个循环后72 ℃ 5 min.④产物测定:选取模型组CVB3m引物RT-PCR扩增产物,再次扩增,以蛋白核酸分析仪测吸光度A值(曾称光密度)并计算DNA产量.⑤ RT-PCR产物检测: 5 V/cm电压电泳45 min,确定目标DNA,以天能凝胶分析系统拍摄、分析.(4) RT-PCR扩增产物克隆与测定序列:①回收目的DNA:切取目的DNA片段,加入Nacl溶液,加热融化,缓冲液反复洗,离心,回收上清液即得.②连接与转化:将DNA、载体(pMD18)及连接酶混匀, 16℃恒温1 h;与JM109感受态细胞冰浴1 h;加葡萄糖和SOB,37 ℃摇床1 h;取20 μl涂平板,培养过夜.③质粒扩增与纯化:将培养的质粒再次扩增,并用碱裂解法提取质粒,限制性内切酶切割,得到纯化的质粒.(5)序列测定与比较:应用DNA测序仪测定克隆序列,将测定序列结果与已知CVB3m cDNA全序列比较[2].     

黄芪和大青叶治疗小鼠病毒性心肌炎的对比研究

目的：通过中药单剂黄芪、大青叶治疗小鼠病毒性心肌炎(VM C)的疗效观察,探讨VMC的有效治疗措施。方法：Balb/C小鼠给予柯萨奇病 毒B3(CVB3)稀释液腹腔注射后,随机分为感染对照组、黄芪治疗组和大青叶治疗组,于CVB3 感染后第3,5,7,10,14,21天分批处死,作HE染色,比较各组小鼠心肌病变积分,并行 心肌组织病毒分离。于感染后第7天各组小鼠电镜观察心肌细胞超微结构改变。结果：黄芪治疗组自CVB3感染后第5～21天、大青叶治疗组在CVB3感染后第5天和7天时,其心肌病变积分较感染对照组明显减轻(P＜0.05)。而大青叶治疗组CVB3感染后 第10～21天心肌病变积分与感染对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。电镜观察发 现感染对照组小鼠心肌细胞线粒体肿胀、嵴断裂、肌浆网扩张、肌丝溶解,治疗组上述病变轻,且大青叶治疗组可见大量溶酶体。病毒分离结果显示3组小鼠CVB3感染后第3天即可分离 出病毒,阳性率均为66.7%,第5～10天3组均为100%,第14天感染组病毒分离阳性率为33.3%,治疗组均未分离到病毒,第21天时3组均未分离出病毒。不同时间点的3组间病 毒分离阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论：黄芪具有保护心肌 的作用。大青叶在CVB3感染早期对VMC的病理改变具有显著影响。     

苦瓜素对柯萨奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的观察苦瓜素对柯萨奇B3病毒（CVB3）所致病毒性心肌炎大鼠心肌组织TNF-α水平、基因转录及相应蛋白质表达的影响，探索苦瓜素治疗病毒性心肌炎的药理机制。方法50只Balb／c实验小鼠随机分为苦瓜素治疗组（20只）、病毒感染空白对照组（20只）、正常对照组（10只）。苦瓜素治疗组与病毒感染空白对照组分别予腹腔注射0．1mL内含1&#215;10^5TCID。的PRIM1640液，而正常对照组予腹腔注射同等体积培养液。苦瓜素剂量为25mg／（kg&#183;d），1次／d，疗程7d。第15天取小鼠心肌采用ELISA进行TNF-α测定，HE染色行心肌病理检查，RT-PCR检测TNF-αmRNA转录水平，免疫组织化学测定TNF-α蛋白表达。结果与病毒感染空白组比较，苦瓜素治疗组小鼠心肌病理积分明显减少[（3．26&#177;0．84）m（1．56&#177;0．48），t=3．90 P〈0．01]，大鼠心肌组织TNF—α水平明显降低[（85．6&#177;16．7）vs（34．5&#177;10．3），t=5．24P〈0．01]，大鼠TNF-α mRNA转录水平亦显著减少[（0．09&#177;0．02）vs（0．41&#177;0．06），t=7．37 P〈0．01]。结论苦瓜素通过抑制TNF—α基因转录与蛋白质表达、降低心肌TNF—α水平，对Balb／c小鼠CVB，致病毒性心肌炎具有明显的治疗作用。     

柴胡 黄芩 炙甘草对小鼠CVB3心肌炎治疗作用的研究

目的：探讨单剂柴胡、黄芩、炙甘草对柯萨奇病毒B3(CVB3)感染的病毒性心肌炎小鼠的治疗作用。方法：用CVB3感染Balb/C小鼠造成病毒性心肌炎模型,分别用生理盐水、柴胡、黄芩、炙甘草灌胃治疗,观察病毒感染后不同时间点的心肌组织病理变化。结果：柴胡组小鼠在感染后第 5 ,7,10天心肌病理积分为1.33±0 .82 ,1.6 0± 0 .6 3和 1.87± 0 .74 ,明显低于对照组 (2 .2 2± 1.37,3.2 7± 0 .96 ,2 .6 0± 1.0 6 ) (P <0 .0 5或 0 .0 1)。炙甘草组小鼠在感染后第5 ,7天心肌病理积分为 1.2 6± 0 .88和 1.80± 0 .6 8,明显低于相应对照组 (P <0 .0 5或0 .0 1)。黄芩组小鼠在感染第14 ,2 1天后心肌病理积分(1.5 3± 0 .74 ,0 .80± 0 .5 6 )与对照组 (2 .33± 0 .98,1.4 0±0 .83)比较差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论：单剂柴胡、黄芩、炙甘草在不同的时间点对心肌细胞起保护作用     

腺样体提取物对小鼠细胞免疫功能的影响

目的探讨腺样体提取物对Balb/c小鼠淋巴细胞转化、细胞免疫功能的影响。方法制备小鼠骨骼肌、脾脏提取物,随机将28只Balb/c小鼠分为空白对照组、腺样体提取物高、中、低剂量注射组,每组各7只,对其进行腺样体提取物腹腔注射,观察各组小鼠外周血T淋巴细胞数、淋巴细胞总数的变化。结果与小鼠骨骼肌、脾脏提取物比较,腺样体提取物能促进由ConA所诱导的小鼠淋巴细胞转化;小鼠外周血T淋巴细胞数、淋巴细胞总数随注射小儿腺样体提取物剂量增加而增加。结论小儿腺样体提取物有促进淋巴细胞转化,增强小鼠细胞免疫功能的作用。     

Effect of digitoxin on vaginal epithelial differentiation in the Balb/c mouse

Vaginal epithelial differentiation (VED) in the mouse and the human is the replacement of columnar by squamous epithelium in the vagina. This occurs in humans in late first and second trimesters of pregnancy and in mice after birth. In both diethylstilbestrol (DES) exposure during the process is associated with persistence of columnar epithelium and later reproductive tract tumor. Cardiac glycosides are estrogenic in both species. The concern: could cardiac glycosides produce similar effects to those seen after DES? Digitoxin was administered to Balb/c neonates at increasing doses. VED occurred by 10 days in three low-dose groups. Cardiotoxic mortality precluded study at higher doses. Therefore digitoxin did not affect VED.     

氧化苦参碱对慢性病毒性心肌炎小鼠心肌的保护作用

目的观察慢性病毒性心肌炎(CVMC)小鼠血清抗心肌肌球蛋白抗体(AMA)的表达和心肌胶原容积积分(CVF),以及氧化苦参碱对其的干预作用和对心肌的保护作用。方法以柯萨奇病毒B3株(CVB3)重复增量感染BALB/c小鼠,建立CVMC模型(n=60)。正常对照组(n=8)同期腹腔注射等体积9 g.L-1盐水。42 d将CVMC模型组存活小鼠随机分为CVMC对照组(n=8)、氧化苦参碱干预组(n=8)。氧化苦参碱干预组小鼠给予氧化苦参碱100 mg.kg-1.d-1灌胃,1次.d-1。CVMC对照组及正常对照组同期给予9 g.L-1盐水灌胃。干预28 d后处死各组小鼠。计算各组小鼠心脏/体质量比(HW/BW);心肌切片行胶原组织特异性染色,计算心肌组织中CVF;ELISA法检测其血清AMA的表达。结果CVMC对照组小鼠HW/BW(0.007 9±0.000 3)、CVF[(15.30±1.08)%]及血清中AMA吸光度(A)值(0.286±0.053)较正常对照组HW/BW(0.005 5±0.000 2)、CVF[(6.84±1.11)%]及AMAA值(0.160±0.050)均显著增高(Pa<0.01)。AM...