YIGSR聚合衍生物对B16黑色素瘤细胞实验性肺转移的抑制作用

目的 :研究Tyr-Ile-Gly-Ser-Arg(YIGSR )均叉、杂叉聚合肽的抗肿瘤转移作用。方法 :观察药物对B16黑色素瘤细胞实验性肺转移的影响。结果 :尾静脉接种B16黑色素瘤细胞第21天 ,46例对照组和实验组小鼠肺转移瘤灶形成比例100 %。10例对照组小鼠平均肺转移结节数105 5±78 2。与瘤细胞共注射的适宜剂量YIGSR均叉、杂叉肽可明显降低实验组小鼠的肺转移结节数 ,并呈一定的剂量依赖关系。其中 ,100μg～200μgYIGSR均叉和同剂量杂叉肽组肺转移结节数与对照组比较 ,P<0.05和P<0.01 ;50μg均叉肽与对照组比较 ,P<0.05。但受试合成肽未明显降低已形成肺转移小鼠的肺脏重量。结论 :YIGSR聚合衍生物有较强的抗肿瘤转移作用 ,其机制与瘤细胞栓塞、滞留于远隔靶器官的微血管中并增殖 ,瘤细胞穿出血管或淋巴管 ,在靶器官内形成微转移灶有关     

土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用

土贝母[Bolbostemma paniculatum(Maxim)Franquet(Cucurbitaceae)]是一种传统中药。土贝母苷甲和苷乙都是从土贝母中分离、纯化出来的抗肿瘤活性成分，属齐墩果烷型三萜皂苷，苷甲和苷乙在结构上的惟一区别是苷乙16位碳上的羟基。苷甲和苷乙的构效关系研究表明，苷乙的抗肿瘤活性较苷甲更强，毒性更低。苷甲和苷乙都能诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡。     

茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠自发肺转移的抑制作用及其机制研究

目的 研究茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠自发肺转移的影响,并探讨其作用机制。方法 C57BL/6小鼠右腋皮下接种Lewis肺癌细胞,分为茯苓多糖高（0.50 mg/只）、低（0.33 mg/只）剂量组,顺铂组（顺铂0.04 mg/只）,模型组（生理盐水）,接种瘤细胞后第2天开始尾iv给药,隔天一次。观察小鼠一般状态,造模后第7天开始,隔天测量肿瘤体积。造模后21 d取肺,计数肺表面转移灶个数,HE染色检测肺微小转移灶个数,检测外周血白细胞数量及脾质量、脾指数。结果 茯苓多糖高、低剂量对实体瘤无明显抑制,茯苓多糖高剂量可减少肺表面转移灶个数,增加白细胞CD11bmRNA表达,不影响外周血白细胞数、脾质量及脾指数,一般状况较好;茯苓多糖低剂量对肺表面转移灶个数、外周血白细胞数、脾质量及脾指数无明显影响,可增加白细胞CD11b、CD18mRNA表达,一般状况较好。结论 茯苓多糖对Lewis肺癌小鼠实体瘤无明显抑制作用,但能够抑制其自发肺转移,对外周血白细胞数量、脾质量及脾指数无明显影响,可增加外周血白细胞CD11b、CD18mRNA表达,活化外周血白细胞可能是茯苓多糖抑制肿瘤转移的机制之一。     

土贝母苷甲在体外对人免疫缺陷病毒核心蛋白P24的产生和细胞病…

土贝母苷甲是首先在中国从土贝母中分离出的一种三匝皂苷，本文研究了它对人免疫缺陷病毒核心蛋白Ｐ２４的产生和人免疫缺陷病毒介导的细胞病变的影响，结果表明土贝母苷甲导的细胞病变的影响，结果表明土贝母苷甲既抑制Ｐ２４的产生，也抑制细胞病变，其中位有效浓度（ＥＣ５０）分别为２４．１和２２．９μｇ．ｍｌ＾－１。土贝母苷甲也有效地中和另外２种分离株的感染，因此，土贝母苷甲可能是一种有希望的治疗艾滋病的药物。     

芳基三氮烯甲氧嘧啶选择性抗小鼠Lewis肺癌转移的作用

本实验对比研究了芳香三氮烯甲氧嘧啶(ATMP)和环磷酰胺(CY)对小鼠Lewis肺癌的作用。ATMP在不影响原发瘤生长的同时,可明显减少自发性转移的发生,而CY对原发瘤及转移瘤都有抑制作用。³H-TdR部分参入实验证明,ATMP对Lewis肺癌的细胞毒作用很弱。ATMP对人工转移无影响;提前给药不影响自发性转移;不改变小鼠腹腔巨噬细胞Fc受体的活力。上述实验提示,ATMP具有选择性的抗转移作用,其作用环节可能是抑制肿瘤细胞从原发部位的脱落以致不能进入血液循环。     

土贝母苷甲诱导HeLa细胞周期阻滞和凋亡

目的 :研究土贝母苷甲 (下称苷甲 )抗肿瘤作用的机制 ,探索它对细胞周期和细胞凋亡的影响。方法 :采用MTT法检测苷甲对细胞生长的抑制作用 ;采用流式细胞术 ,光学、荧光和电子显微镜 ,以及DNA琼脂糖凝胶电泳检查和分析苷甲对细胞周期和细胞凋亡的影响 ;采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关基因bcl 2和bax表达的变化。结果 :苷甲对HeLa细胞的生长有强抑制作用 ,其 2 4、4 8和 72h的IC50 值分别为 35 .7,2 3.6 ,17.4 μmol·L-1。在苷甲的作用下 ,细胞周期阻滞在G2 M期 ,细胞在形态学和生物化学上都出现了细胞凋亡的典型证据。蛋白免疫印迹结果揭示bcl 2下调 ,bax过表达。结论 :苷甲诱导的细胞周期阻滞和凋亡在苷甲的抗肿瘤效果中可能起着重要作用 ,而苷甲诱导的细胞凋亡与bcl 2的下调及bax的过表达密切相关。     

芳基三氮烯甲氧嘧啶对小鼠Lewis肺癌转移的预防作用及形态学观察

前文报道,芳基三氮烯甲氧嘧啶(ATMP)可选择性地抑制Lewis肺癌的自发性转移,其作用环节可能是抑制原发瘤细胞的脱落。为了探讨ATMP抗转移的实际应用价值及作用机理,本文以Lewis肺癌为模型,模拟临床手术加化疗的治疗方案进行实验研究,并观察了ATMP对原发瘤的形态学改变以及对LA-795肺腺癌自发性转移的作用。     

氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16体内转移的作用及相关机制研究

目的:研究不同剂量氨氯地平抑制小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16转移的作用,并探讨其作用机制。方法:选取64只C57BL/6J小鼠,将黑色素瘤髙转移细胞株B16接种在小鼠腹股沟皮下(2×106个/只)。将接种后的小鼠以随机数字表法分为对照组和氨氯地平高、中、低剂量治疗组,对照组小鼠仅给予0.9%氯化钠注射液;治疗组小鼠给予不同剂量的氨氯地平治疗,分别为1 mg/kg(低剂量组)、3 mg/kg(中剂量组)和10 mg/kg(高剂量组)。观察各组小鼠肿瘤生长情况及身体情况;观察各组小鼠肿瘤肺转移情况,计算肺转移的结节及肿瘤抑瘤率;采用免疫组织化学法检测各组小鼠肿瘤组织中白细胞介素8(IL-8)蛋白表达水平;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组小鼠肿瘤组织中IL-8的信使核糖核酸(mRNA)表达水平。结果:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16的自发性肺转移有显著的抑制作用;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8蛋白表达均明显减弱,且随氨氯地平剂量的增加而减弱;治疗组小鼠肿瘤组织中IL-8的mRNA的表达明显低于对照组,且IL-8的mRNA的表达随氨氯地平剂量的增加而减弱。结论:氨氯地平对小鼠黑色素瘤高转移细胞株B16有一定的抑瘤和抑制肺转移作用,其作用可能与影响IL-8的表达有关。     

高效液相制备色谱制备土贝母中土贝母苷甲、乙、丙对照品的研究

目的：研究高效液相制备色谱从土贝母中制备土贝母苷甲、乙、丙对照品。方法采用大孔吸附树脂和制备液相色谱等多种方法进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构。结果分离得到3个化合物,分别鉴定为土贝母苷甲、土贝母苷乙、土贝母苷丙,收率分别为0.58%、0.13%、0.13%,HPLC归一化法测得质量分数均大于98%。结论本方法上样量大,重现性好,收率高,适合土贝母苷甲、乙、丙的大量制备生产。     

土贝母皂苷对人低分化上皮样鼻咽癌细胞(CNE-2Z)微管的作用

目的：探讨土贝母皂苷(皂苷)对人低分化上皮样鼻咽癌细胞株(CNE-2Z)微管的影响：方法：采用细胞免疫荧光法观察皂苷处理的CNE-2Z细胞微管的变化，蛋白免疫印迹法分析皂苷处理的CNE-2Z细胞中聚合和未聚合微管蛋白含量的变化。结果：免疫荧光图像结果表明，皂苷作用的CNE-2Z细胞丧失正常的微管网络，蛋白免疫印迹结果证实皂苷使CNE-2Z细胞未聚合的微管蛋白比例增加，而且这一作用与剂量和时间呈正相关。结论：皂苷能抑制CNE-2Z细胞内微管的聚合，提示皂苷是一种有效的抗微管剂、     

共轭亚油酸对B16—MB细胞系粘附和运动能力的影响

目的：观察共轭亚油酸（conjugated linoleic acid,CLA)对黑色素瘤细胞B16－MB黏附和运动能力的影响。探讨CLA预防肿瘤转移的可能作用途径。方法：采用鼠黑色素瘤B16－MB高转移细胞系，用0、25、50、100、200μmol/LCLA处理后，分别用黏附试验，随机运动试验、Transwell趋化运动型来研究CLA对细胞的黏附和运动能力的影响。结果：经CLA处理后，B16－MB向细胞外基质成分的黏附能力降低，同时随机运动能力降低，但趋向运动能力示当现变化。结果：CLA可能抑制肿瘤细胞的粘附和运动来发挥预防肿瘤转移的作用。     

蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16细胞蛋白质表达谱的影响

目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析。结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调。这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等。Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致。基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关。结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用。sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体。     

羧甲基壳聚糖对人高转移肺癌细胞——95-D增殖能力和体外转移能力的抑制作用

目的评价羧甲基壳聚糖对人高转移肺癌细胞——95-D增殖能力和体外转移能力的抑制作用.方法用软琼脂克隆形成实验、创伤实验、黏附实验和transwell小室实验来评价羧甲基壳聚糖对95-D细胞的影响.结果羧甲基壳聚糖浓度在0～150 μg·ml-1范围内,剂量依赖性地抑制95-D细胞的增殖能力、移动能力、浸润能力、黏附能力和克隆形成能力.结论羧甲基壳聚糖能有效抑制95-D细胞的增殖能力和体外转移能力.     

三氧化二砷抑制小鼠B16黑色素瘤生长作用及其机制

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )对小鼠B16黑色素瘤的生长及其血管生成的抑制作用 ;同时观察其对B16细胞增殖活性、细胞形态、细胞周期及凋亡的影响。方法　选用小鼠黑色素瘤B16细胞接种C5 7BL/ 6J小鼠 ,观察腹腔注射As2 O3 对实体瘤的重量及成瘤率的影响 ;应用HE染色、Ⅷ RAg免疫组化染色观测瘤组织内新生血管密度 ;采用CellTiter 96AqueousOne试剂检测B16细胞增殖活力 ;Giem sa染色、Feulgen染色观察细胞形态学变化 ;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡。结果　As2 O3 能显著抑制小鼠B16黑色素瘤的生长 ,治疗组成瘤率为 37 5 % ,抑瘤率达81 6 1% ,并能显著抑制瘤组织内血管生成 ;体外实验观察到As2 O3 能抑制B16细胞增殖 ,并存在浓度依赖效应 ,IC50 为32 99μmol·L-1;细胞形态学观察结果显示As2 O3 使B16细收稿日期 :2 0 0 4-0 2 -17,修回日期 :2 0 0 4-0 3 -2 8基金项目 :安徽省教育厅资助项目 ,No 2 0 0 4kJ2 79作者简介 :夏　俊 ( 1965 -) ,女 ,硕士 ,副教授 ,硕士生导师 ,研究方向 :肿瘤分子生物学 ,Tel:0 5 5 2 3 0 664 12 2 0 97,E mail:xia jun1965 @yahoo .com .cn崔秀云 ( 1941-) ,女 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向 :癌基因与抑癌基因 ,Tel:0 411 472 0 64 8,E mail:cuixy @dlmedu .edu .     

Suppression of the migration and invasion is mediated by triptolide in B16F10 mouse melanoma cells through the NF‐kappaB‐dependent pathway

Melanoma cancer is one of the major causes of death in humans worldwide. Triptolide is one of the active components of Tripterygium wilfordii Hook F, and has biological activities including induced cell cycle arrest and induction of apoptosis but its antimetastatic effects on murine melanoma cells have not yet been elucidated. Herein, we investigated the effect of triptolide on the inhibition of migration and invasion and possible associated signal pathways in B16F10 murine melanoma cancer cells. Wound healing assay and Matrigel Cell Migration Assay and Invasion System demonstrated that triptolide marked inhibiting the migration and invasion of B16F10 cells. Gelatin zymography assay demonstrated that triptolide significantly inhibited the activities of matrix metalloproteinases‐2 (MMP‐2). Western blotting showed that triptolide markedly reduced CXCR4, SOS1, GRB2, p‐ERK, FAK, p‐AKT, Rho A, p‐JNK, NF‐κB, MMP‐9, and MMP‐2 but increased PI3K and p‐p38 and COX2 after compared to the untreated (control) cells. Real time PCR indicated that triptolide inhibited the gene expression of MMP‐2, FAK, ROCK‐1, and NF‐κB but did not significantly affect TIMP‐1 and ‐2 gene expression in B16F10 cells in vitro. EMSA assay also showed that triptolide inhibited NF‐κB DNA binding in a dose‐dependent manner. Confocal laser microscopy examination also confirmed that triptolide inhibited the expression of NF‐κB in B16F10 cells. Taken together, we suggest that triptolide inhibited B16F10 cell migration and invasion via the inhibition of NF‐κB expression then led to suppress MMP‐2 and ‐9 expressions. © 2015 Wiley Periodicals, Inc. Environ Toxicol 31: 1974–1984, 2016.     

Elevation of 8-hydroxydeoxyguanosine in DNA from isolated mouse lung cells following in vivo treatment with aflatoxin B(1).

Aflatoxin B(1) (AFB(1)) is a mycotoxin produced by some strains of Aspergillus and is a recognized pulmonary and hepatic carcinogen. The most widely accepted mechanism of AFB(1) carcinogenicity involves bioactivation to AFB(1)-8,9-exo-epoxide and binding to DNA to form AFB(1)-N(7)-guanine. Another potential cause of DNA damage is AFB(1)-mediated stimulation of reactive oxygen species formation, leading to oxidation of DNA bases. The objective of this study was to determine the ability of AFB(1) to cause oxidative DNA damage in lung cell types of the A/J mouse. The formation of 8-hydroxy-2'-deoxyguanosine (8-OHdG) in freshly isolated mouse lung alveolar macrophages, alveolar type II cells, and nonciliated bronchial epithelial (Clara) cells was assessed by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection. An approximately 3-fold increase in 8-OHdG formation occurred in both alveolar macrophage and Clara cell preparations isolated from A/J mice 2 h following treatment with a single tumorigenic dose of 50 mg/kg AFB(1) ip (n = 3, p < 0.05). Prior treatment with 300 kU/kg polyethylene glycol-conjugated catalase prevented the AFB(1)-induced increase in 8-OHdG levels in all mouse lung cell preparations (n = 3, p < 0.05). These results support the possibility that oxidative DNA damage in mouse lung cells contributes to AFB(1) carcinogenicity.