曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)γ激动剂曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响.方法 以曲格列酮处理体外培养的肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,分化标记物E-钙黏蛋白和清蛋白分别用免疫细胞化学和溴甲酚绿法检测,化学发光法检测肿瘤标记物AFP.Western blot检测细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白的表达.结果 曲格列酮以浓度依赖性方式抑制肝癌细胞生长,使细胞周期明显阻滞于G0/G1,并诱导E-钙黏蛋白表达.经曲格列酮处理后,清蛋白分泌量显著增加,AFP明显下降,细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白表达水平下降.结论 曲格列酮可诱导肝癌细胞分化,抑制其生长,其机制可能涉及下调细胞周期蛋白D1和c-myc蛋白表达.     

15-脱氧-前列腺素J2激活过氧化物酶体增殖物激活受体信号抑制肝癌细胞侵袭转移的实验研究

目的探讨15-脱氧-前列腺素J2(15-d-PGJ2)对肝癌细胞SMMC-7721侵袭转移的影响及其内在的机制。 方法SMMC-7721肝癌细胞经天然配体15-d-PGJ2和(或)抑制剂GW9662处理,用伤口愈合实验和Transwell方法检测细胞的转移侵袭能力,用RT-PCR检测细胞PTEN和MMP-9 mRNA的表达,用Western blotting检测细胞PTEN和MMP-9蛋白的表达。 结果15-d-PGJ2对SMMC-7721细胞的转移侵袭具有抑制作用,并能上调PTEN mRNA和蛋白的表达,下调MMP-9 mRNA和蛋白的表达;单药GW9662无此效应,GW9662与15-d-PGJ2联合能够逆转此效应。 结论15-d-PGJ2是通过激活PPAR信号上调PTEN表达,下调MMP-9表达,抑制肝癌细胞的侵袭转移。     

PTEN基因在过氧化物酶体增殖物激活受体γ调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在肝癌细胞生长中的调节作用,以及PTEN和磷酸化蛋白激酶B（pAkt）在该过程中的变化,进一步揭示PPARγ调节肝癌细胞生长的机理。方法培养SMMC-7721肝癌细胞,经不同浓度的PPARγ配体15-脱氧-前列腺素J2（15-d-PGJ2）或匹格列酮（pioglitazone）作用不同时间后,用MTT法测定细胞活力,用流式细胞仪进行细胞周期分析,用RT-PCR检测细胞PTEN mRNA的表达,用Western blot检测细胞PTEN和pAkt蛋白的表达。结果15-d-PGJ2和pioglitazone对肝癌细胞的增殖均具有抑制作用,且呈时间和剂量依赖性,均能增加G0/G1期细胞的比例,减少S期细胞的比例,增加SMMC-7721细胞PTEN mRNA和蛋白的表达,减少pAkt蛋白的表达。结论PPARγ的配体能够呈时间和剂量依赖性地抑制肝癌细胞的增殖,其机理可能是部分通过上调PTEN的表达而实现的。     

绿脓杆菌菌毛株对肝癌细胞Hep-2生长的抑制作用

目的 观察绿脓杆菌菌毛株菌苗(PA-MSHA)对人肝细胞癌细胞株HepG-2的抑制作用及机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长抑制情况.原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡情况;透射电镜观察细胞超微结构.Western blot法检测bcl-2、bax、Caspase-3蛋白表达;裸鼠移植瘤内及瘤周药物注射观察不同药物浓度及作用时间的体内抑瘤作用.结果 肿瘤细胞的抑制率与药物浓度和作用时间成正比;高、低浓度实验组和对照组凋亡率差异有统计学意义(P＜0.01);电镜观察可见经PA-MSHA作用后的HepG2细胞呈现典型的凋亡表现;PA-MSHA作用后可引起bax、Caspase-3蛋白表达上调,bcl-2蛋白表达下调;高浓度PA-MSHA可明显抑制裸鼠移植瘤的生长,17 d抑瘤率为60%.结论 PA-MSHA可明显抑制HepG-2细胞的生长,诱导凋亡是其另外一个作用机制.     

三结构域蛋白28通过上皮-间充质转化对肝癌细胞侵袭迁移的影响

目的观察沉默三结构域蛋白28(TRIM28)表达对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响。方法通过RNA干扰技术(RNAi)构建干扰TRIM28表达的短发卡RNA(shRNA)质粒,对高表达TRIM28的肝癌细胞株HepG2和人高转移肝癌细胞(HCCLM3细胞)对照组及实验组转染shRNA 48 h后,应用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测TRIM28基因沉默效率。应用划痕迁移实验和Transwell侵袭实验检测TRIM28基因沉默对肝癌细胞迁移及侵袭能力的影响,并通过RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)表达。使用SPSS 19.0软件进行统计学分析,组间比较采用t检验。结果RT-qPCR结果显示实验组TRIM28表达(HepG20.84±0.02,HCCLM30.69±0.02)在两组肝癌细胞中均低于对照组(HepG21.00±0.05,HCCLM31.00±0.07,t=5.488、7.240,P<0.01),差异有统计学意义。划痕实验结果显示,48 h实验组HepG2和HCCLM3细胞迁移率[(57.83±0.02)%、(21.52±0.05)%]均明显低于对照组[(94.96±0.02)%、(38.10±0.03)%],差异有统计学意义(t=22.971、5.780,P<0.01)。Transwell侵袭实验结果显示,相应实验组穿膜细胞数分别为(57.88±5.24)、(3.33±1.36)个,明显低于对照组(265.52±9.31)、(26.03±3.13)个,差异有统计学意义(t=23.050、13.242,P<0.01)。Western blot结果显示,HepG2和HCCLM3细胞N-cadherin蛋白表达量(0.31±0.06,0.63±0.08,t=4.822、2.951,P<0.05)、Vimentin(0.41±0.03,0.32±0.02,t=2.909、7.944,P<0.05)及β-catenin(0.10±0.03,0.12±0.02,t=2.970、4.157,P<0.05)低于对照组,E-cadherin表达升高(0.25±0.05,0.27±0.07,t=3.242、5.021,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR结果显示,实验组E-cadherin表达高于对照组(1.80±0.30,1.40±0.17,t=4.571、3.095,P<0.01),差异有统计学意义,N-cadherin(0.42±0.01,0.84±0.03,t=22.460、8.441,P<0.01)、Vimentin(0.18±0.00,0.84±0.02,t=52.230、6.194,P<0.01)及β-catenin表达低于对照组(0.72±0.07,0.34±0.07,t=2.972、4.174,P<0.01),差异均有统计学意义。结论降低TRIM28表达能抑制肝癌细胞HepG2和HCCLM3的侵袭和迁移能力。     

替米沙坦上调肝细胞生长因子表达的分子机制研究

目的探讨替米沙坦对肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor, HGF）表达的影响及其机制研究。方法选取体外培养大鼠肾系膜细胞,观察不同浓度（0．1μmol／L、1．0μmol／L、10．0μmol／L）替米沙坦干预24h对HGF表达的影响;采用双荧光素酶报告基因分析系统检测HGF启动子活性和替米沙坦的PPAR7反应性。非放射性蛋白激酶检测系统及Westernblot检测PKA、CREB、pCREB蛋白表达。结果与正常对照组相比,替米沙坦能明显增加HGF蛋白表达,该作用呈浓度依赖性（P〈0．05）;荧光素酶检测证实HGF基因的-290／＋20序列存在潜在PPAR7反应元件,10μmol／L替米沙坦显著增强HGF启动子活性（P〈0．05）。同时蛋白检测提示替米沙坦抑制系膜细胞PKA活性,下调pCREB蛋白表达。结论替米沙坦上调HGF表达独立于PKA／CREB信号通路,可能通过结合HGF启动子PPAR7反应元件上调HGF表达。     

VK2对肝癌细胞株MHCC97H的抑制作用

目的 观察VK2对MHCC97H细胞在生长、黏附、侵袭、凋亡以及Caspase-3活性的影响.方法 噻唑蓝(MTT)法检测细胞生长;体外细胞黏附及侵袭实验检测细胞的黏附和侵袭能力;Annexin V-FITC Apoptosis Detection K和Caspase-3 Fluorescent Assay试剂盒分别检测细胞的凋亡及Caspase-3活性.结果 当VK2浓度从10-7mol/L增加到10-4mol/L时,细胞生长抑制率由12.5%增加到59.7%(P＜0.01).VK2对细胞的黏附抑制能力呈剂量依赖关系(P＜0.01);100μmol/L的VK2作用细胞3 h后,细胞对Fibronectin黏附抑制率为69.9%.作用48 h后,细胞侵袭抑制率为65.5%(P＜0.01);作用6 h后,细胞凋亡率为(28.5±1.6)%,与此同时,细胞Caspase-3活性为(226.0±6.4),与对照组(92.0±5.8)比较差异有统计学意义(P＜0.01);预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后,Caspase-3活性无明显变化90.0±4.3(P＞0.05).结论 VK2对体外培养的MHCC97H细胞具有抑制生长、抑制黏附、抑制侵袭和诱导凋亡作用;Caspase-3参与了细胞凋亡的调控.     

维生素K2对肝癌细胞株内的肝癌衍生生长因子表达的抑制作用

目的 检测维生素K2对肝癌细胞株内的肝癌衍生生长因子(HDGF)表达的作用。方法 半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测0、10、30μm维生素K2干预后肝癌细胞中HDGF的mRNA表达,Western blot法检测不同浓度维生素处理后的肝癌细胞中HDGF蛋白表达。结果 RT-PCR结果示96 h后10、30μm维生素K2干预组能呈剂量依赖性抑制肝癌细胞中HDGF的mRNA表达。Western blot法检测结果示96 h后的10、30 μm维生素K2干预组中HDGF的蛋白表达分别为无药对照组的(0.915±0.025)倍和(0.530±0.030)倍,差异有统计学意义(P＜0.01)。结论 维生素K2可下调肝癌细胞中的HDGF表达。     

Ciglitazone对裸鼠肝癌移植瘤的血管生成的抑制作用

目的 观察过氧化物酶体增殖激活受体配体Ciglitazone在肝癌治疗中对血管生成的作用.方法 3周龄裸鼠随机分为实验组(10只)、对照组(10只).皮下接种HepG2肝癌细胞,待肿瘤生长至约0.5 cm时,实验组瘤内注射100 μmol/L的Ciglitazone 100 μl,对照组注射100μ生理盐水,隔天注射连续15次.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测第31天的肝癌组织标本内PPAR的表达,免疫组织化学法和蛋白质定量分析法(Western blot)测定癌组织中因子Ⅷ和VEGF的表达.结果 肝癌组织内存在PPAR的表达,实验组PPARγ表达增高[(1.26±0.29)比(0.32 ±0.11),P<0.05],实验组的瘤块体积小、生长慢于对照组[(207.5 ±192.9)mm3比(445.0 ±150.9)mm3;P<0.05],实验组裸鼠体内肿瘤MVD低于对照组[(11.0 ±7.6)比(18.9 ±7.0),P<0.05];实验组裸鼠体内肿瘤VEGF的表达低于对照组(17.2±3.7比47.9 ±11.3,P<0.01).结论 Ciglitazone对肝癌的生长具有抑制作用,抗肿瘤血管形成可能是其中的作用机制之一.     

干扰素-α对CCL13/HBx细胞生长及侵袭转移潜能的抑制作用

目的 观察干扰素-α对恶性转化的CCL13/HBx细胞的生长和侵袭转移潜能的抑制效应.方法 采脂质体法将pcDNA3.1-HBx质粒转入CCL13细胞,将CCL13/HBx细胞分别在普通条件下培养或与干扰素-α共培养,采用绘制生长曲线、平板集落形成实验、划痕愈合实验、体外侵袭力、体内裸鼠成瘤实验分别检测CCL13/HBx、INF-α-CCL13/HBx、CCL13/PcDNA3.1细胞在体内、体外的生长及运动迁移能力的差异.结果 pcDNA3.1-HBx质粒转染CCL13细胞后在该细胞中稳定表达,CCL13/HBx细胞生长明显快于INF-α-CCL13/HBx和CCL13/PcDNA3.1细胞,克隆生成率明显增高(31.2%比10.8%比12.4%,P<0.05),划痕愈合能力明显增强,穿过人工基底膜的细胞数明显增多[(41.6±3.1)/HP比(7.4±1.2)/HP比(9.2±1.6)/HP,P<0.05].干扰素-α治疗组CCL13/HBx细胞裸鼠皮下成瘤体积减小[(2.4±0.2)cm3比(4.2±0.3)cm3,P<0.05].结论 CCL13/HBx细胞较CCL13/pcDNA3.1细胞具有更强的生长和侵袭转移潜能,干扰素-α能明显抑制HBx蛋白所诱导的细胞恶性表型.     

EFFECTS OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR ON THE INVASION ACTIVITY OF THE BLADDER CANCER CELL LINE

Purpose

Epidermal growth factor (EGF) is excreted in high concentrations in the urine and stimulates urothelial cell growth. The cultured bladder cancer cell line KU-1 was used to study the molecular mechanisms by which EGF affects urothelial tumor growth and invasion activity.

Materials and Methods

KU-1 cells were grown in cell culture in the presence or absence of EGF. Anchorage-independent cell growth assays and Matrigel invasion assays were performed. Expression of cytokeratins was examined by Northern and Western blot analyses. Chloramphenicol acetyltransferase assays were used to determine whether EGF stimulated matrix metalloproteinase expression.

Results

EGF enhanced anchorage-independent growth in soft agar and increased the number of cells penetrating into a Matrigel membrane. A transient transfection assay revealed that EGF increased the promoter activities of the matrix metalloproteinase 1 and 9 genes in KU-1 cells. Moreover, the morphology of KU-1 cells changed after the addition of EGF to the culture medium. Western and Northern blot analyses demonstrated that EGF decreased cytokeratin 19 expression, but did not affect expression, of cytokeratin 8 or 18.

Conclusion

EGF increased the invasive activity of KU-1 bladder cancer cells in part by increasing the secretion of matrix metalloproteinases. Morphologic changes may result from altered composition of cytoskeletal proteins.     

人肝癌多药耐药细胞模型的建立

为研究肝癌ＭＤＲ机制,采用５种抗癌药物通过不同的诱导方式建立一组人肝涪ＭＤＲ细胞模型。对其耐药机理的研究结果表明,ＳＭＭＣ７７２１／ＤＯＸ亚系由ｍｄｒ１基因介导耐药,ＳＭＭＣ７７２１／ＶＣＲ亚系由ＭＲＰ基因介导耐药,ＳＭＭＣ７７２１／ＣＢＰ亚系由ＬＰＲ基因介导耐药,ＳＭＭＣ７７２１／ＶＰ１６亚系由ＴｏｐｏⅡα基因介导耐药,ＳＭＭＣ７７２１／ＭＭＣ亚系由ＧＳＴｐ１基因介导耐药,多重ＭＤＲ亚系ＳＭＭＣ     

生长抑素对人大肠癌细胞株SW480作用的体外实验研究

用ＭＴＴ比色分析法和流式细胞术研究了８肽生长抑素（ＳＭＳ２０１·９９５），ＳＭＳ）对人大肠癌细胞株ＳＷ４８０的作用。结果显示：ＳＭＳ在１．５６３～２００ｎｇ／ｍｌ浓度范围内对ＳＷ４８０具有抑制作用，并以浓度５０ｎｇ／ｍｌ时的抑制作用为最强。浓度在５０ｎｇ／ｍｌ以上时抑制作用并不继续增加，提示生长抑素（ｓｏｍａｔｏｓｔａｔｉｎ，ＳＳ）的作用是通过受体发挥的；ＳＭＳ明显抑制了大肠癌细胞ＤＮＡ及蛋白质合成，抑制ＳＷ４８０细胞从Ｇ０／Ｇ１期过渡到Ｓ期和Ｇ２Ｍ期，提示生长抑素在受体后通过抑制ＤＮＡ及蛋白质合成，抑制细胞周期循环，从而抑制大肠癌细胞的生长。     

胃泌素受体拮抗剂丙谷胺对人大肠癌SW480细胞株作用及机理

目的，探讨胃泌素受体拮抗剂丙谷胺(PGL)对人大肠癌SW480细胞株活细胞散、DNA和蛋白质合成及细胞增殖周期的影响，为大肠癌病人应用丙谷胺治疗提供实验依据．方法：用MTT比色分析法测活细胞散，流式细胞术测DNA、蛋白质和细胞增殖周期。结果，PGL组括细胞散、DNA和蛋白质合成、细胞周期分布和增殖指数(PI)与对照组比无显著性(P均>0.05)。PG(5肽胃泌素)组活性细胞数明显高于对照组(P<0.01)，POL PG组活细胞散、DNA和蛋白质台成、S、G1M期细胞数及PI均明显低于PG组(P均<0．01)，G0/G1期细胞散明显高于PG组(P<0.01)，而与对照组比均无显著性(P均>0．05)。结论。PG对大肠癌SW480细胞株生长无明显影响，但可抑制胃泌素对大肠癌细胞的促增殖作用，其作用机理为抑制胃泌素对癌细胞的DNA和蛋白质的合成，从而抑制癌细胞从G0/G1期过渡S、G1M期。     

转染Caspase—1基因的人胃癌细胞生物学特性的研究

目的 探讨转染Caspase-1基因对胃癌细胞生物学特性的影响.方法 将人凋亡基因Caspase-1的重组逆转录病毒导入胃癌细胞株X-108,对转染阳性细胞的体外增殖、细胞培养液中CEA含量及裸鼠致瘤性进行分析.结果 导入的Caspase-1基因虽不能直接诱导细胞凋亡,但G_1期细胞数目增多,S期细胞数目减少.转染细胞培养液CEA含量有下降趋势.胃癌细胞株X-108-Caspase-1体外生长速度明显受抑,裸鼠体内致瘤性降低,肿瘤生长缓慢.结论Caspase-1不能促使X-108胃癌细胞凋亡,但可以使其增殖受抑,肿瘤细胞的恶性程度降低.     

长春新碱对5肽胃泌素促人结肠癌细胞株SW480增殖的影响及其临床意义

目的　从细胞信号传导方面探讨长春新碱抑制胃泌素促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０ 增殖的机理及临床意义。方法　采用噻唑氮蓝（ ＭＴＴ） 比色分析法、３Ｈ肌醇掺入法及Ｃａ２＋ 荧光测定技术和γ３２ＰＡＴＰ 掺入法，在体外观察长春新碱（ ＶＣＲ） 对５ 肽胃泌素（ＰＧ） 促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０ 增殖的影响。结果　ＰＧ＋ ＶＣＲ 组的ＳＷ４８０ 细胞活细胞数降低，与对照组相比Ｐ＜ ０ ．０１ ，与ＰＧ 组相比 Ｐ＜ ０ ．０１ ； ＰＧ＋ ＶＣＲ 组细胞内三磷酸肌醇及Ｃａ２＋ 浓度降低，与ＰＧ 组相比 Ｐ＜０ ．０１ ，与对照组相比Ｐ＞ ０ ．０５ ； ＰＧ＋ ＶＣＲ 组膜蛋白激酶活性降低，与ＰＧ 组相比Ｐ＜ ０ ．０５ ，与对照组相比 Ｐ＞ ０ ．０５ 。结论　长春新碱可能通过肌醇脂质信号通路而影响胃泌素促人结肠癌细胞株ＳＷ４８０ 的增殖，从而为结肠癌的抗信息传导治疗提供了实验依据。     

不同化疗药对人肝癌细胞BEL-7404端粒酶活性的影响

目的观察几种常用化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒酶活性的影响。方法利用端粒重复扩增实验(TRAP)结合非常性聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法,测定BEL-7404细胞经过多种化疗药物(顺铂、阿霉素、丝裂霉素、长春新碱)不同浓度和时间作用后端粒酶活性的变化。结果当各种药物大剂量处理细胞24 h后再去除药物,顺铂对端粒酶的活性完全抑制,丝裂霉素有部分抑制,阿霉素和长春新碱无抑制作用;小剂量药物处理细胞3d,其结果同大剂量相似。结论高浓度顺铂和丝裂霉素C在短时间内或低浓度长时间作用对人肝癌BEL-7404细胞端粒酶活性有显著抑制作用,抑制作用可能与药物的作用浓度和时间有关。     

不同转移潜能的人胰腺癌JF305单克隆细胞亚系的建立

为研究胰腺癌的转移机理,在我校原建立的人胰腺癌ＪＥ３０５细胞系基础上,利用细胞克隆,细胞电泳,流式细胞依及人癌小鼠原位移植技术,建立了具有不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５单克隆细胞亚系和具有不同转移潜能的人朱癌单克隆细胞亚系裸小鼠原位移植模型。结果表明该单克隆细胞亚系及其肿瘤移植模型的建立,为探讨胰腺癌转移机理提供了较理想的研究方法。     

不同转移潜能的人胰腺癌

为研究胰腺癌的转移机理,在我校原建立的人胰腺癌