人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2启动子区CpG岛的甲基化状态

目的探讨人胚肺成纤维细胞复制性衰老及过氧化氢诱导的早衰过程中Foxa2的表达改变及其启动子区CpG岛的甲基化水平变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞[第22代细胞,即22 PDL(populationdoubling levels,群体倍增水平)]组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。用荧光定量PCR方法检测人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2的mRNA表达改变,应用甲基化特异性PCR(MSP)检测启动子区-777～-478 bp甲基化的变化情况,并用亚硫酸氢盐修饰基因组结合克隆测序检测启动子区域CpG岛的甲基化水平。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组人胚肺成纤维细胞Foxa2 mRNA的表达水平无明显变化;而复制性衰老细胞组和早衰细胞组人胚肺成纤维细胞Foxa2的mRNA表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。早衰细胞组的启动子区具有一定的甲基化水平;年轻细胞组、复制性衰老细胞组及早衰细胞组Foxa2启动子区CpG岛的甲基化水平分别为5.7%,17.1%和43.6%。结论人胚肺成纤维细胞衰老过程中Foxa2的mRNA表达水平逐渐降低,其启动子区CpG岛甲基化水平逐渐升高,参与其表达调控。     

Alteration of Histone Modifications for P66Shc Promoter during Cellular Senescence of Human Embryonic Pulmonary Fihroblast Cells

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化.方法 按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(pretnature senescence,PS)组.检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).在P66Shc IPI启动子区(-1641-1392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰.结论 在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

人胚肺成纤维细胞衰老过程中P66Shc启动子区组蛋白修饰变化

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导细胞早衰阶段P66Shc启动子区的组蛋白修饰变化。方法按传代情况将人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞(22 population doubling levels,22PDL)组、中年细胞(35PDL)组、复制性衰老细胞(49PDL)组和氧化应激诱导的早衰细胞(premature senescence,PS)组。检测P66Shc的mRNA表达及其启动子区IP1、IP2组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化修饰。结果与年轻细胞组比较,中年细胞组、复制性衰老细胞组和早衰组人胚肺成纤维细胞P66Shc mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。在P66Shc IP1启动子区(-1 641～-1 392 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组以H4乙酰化修饰为主,而早衰细胞组受H3、H4乙酰化和H3(Lys4)甲基化的联合修饰;在P66Shc IP2启动子区(-129～45 bp),中年细胞组和复制性衰老细胞组受H3(Lys4)甲基化修饰,而早衰细胞组受H4乙酰化和H4(Lys4)甲基化联合修饰。结论在细胞衰老过程中,P66Shc启动子区的组蛋白修饰参与其mRNA表达调控,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

细胞衰老过程中P16表观遗传学修饰研究

目的 检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用.方法 在细胞复制性衰老过程(同步培养的22 PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50%融合度时进行400μmol/L H2O2处理,每天用H2O2染毒工作液染毒1次,每次2 h,持续4 d)中,将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组(22 PDL)、中年细胞组(35 PDL)、复制性衰老细胞组(49 PDL);将经400μmol,L H2O2染毒4 d的22 PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7 d,设为早衰细胞组.荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平,甲基化特异PCR检测其肩动子区-846～-639 bp的甲基化水平,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况,包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3(Lvs4)及H4(Lvs20)甲基化修饰.结果 与年轻细胞组相比,中年细胞组P16的mRNA表达降低,复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).在P16启动子区,第一外显子上游-1 000 bp内,其CpG岛片段长度为995 bp,甲基化特异性PCR(MSP)扩增片段位于CpG岛内-84～-639 bp之间,长度为208 bp.中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.42、0.34、0.47,未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0.61、0.96、0.79.在P16 IP1启动子区(-685～-489 bp),复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4(Lys20)甲基化修饰为主;在P16 IP2启动子区(-229～-60bp),复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4(Lys20)甲基化联合修饰,早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主.结论 细胞衰老过程中,P16启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异.     

人胚肺成纤维细胞衰老过程中胰岛素样生长因子2表观遗传活化作用

目的观察体外培养人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程中及过氧化氢诱导早衰持续阶段胰岛素样生长因子2(IGF2)表观遗传学修饰。方法荧光定量PCR检测IGF2的mRNA表达,甲基化特异PCR检测其启动子区甲基化改变,染色质免疫沉淀结合定量PCR检测组蛋白修饰,包括组蛋白H3、H4乙酰化,H3(Lys4)及H4(Lys20)甲基化修饰。结果细胞复制性衰老过程中,中年细胞组及复制性衰老细胞组IGF2的mRNA表达升高,早衰持续组升高显著;细胞衰老过程中,仅复制性衰老细胞组在启动子区-658～-456bp具有一定的甲基化水平;复制性衰老细胞组的组蛋白修饰在启动子区-856～-634bp以H4乙酰化,H3甲基化修饰为主;+9～+145bp的修饰,复制性衰老细胞组受组蛋白H3及H4甲基化联合修饰,早衰持续组以H3甲基化修饰为主。结论细胞衰老过程中,IGF2启动子区组蛋白修饰联合调控其mRNA表达,复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

白藜芦醇对D-半乳糖诱导的WI-38衰老细胞的保护作用

目的探讨白藜芦醇对D-半乳糖诱导的WI-38衰老细胞的保护作用以及对MORF4基因表达的影响。方法D-半乳糖诱导WI-38细胞构建衰老模型;不同浓度白藜芦醇(25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L,200μmol/L)对衰老模型作用24h,并与对照组比较:MTT法检测细胞增殖活力,SA-β-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老程度,比色法检测SOD活性;反转录半定量PCR检测MORF4基因的表达。结果与衰老模型组相比,白藜芦醇组(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)细胞存活率升高(F=81.95,P0.05),SA-β-半乳糖苷酶染色率下降(P0.05),白藜芦醇各组总SOD活力均高于衰老模型组(P0.05)及对照组(P0.05),以100μmol/L白藜芦醇浓度最明显。100μmol/L白藜芦醇能明显上调MORF4基因的表达(P0.05)。结论白藜芦醇对衰老WI-38细胞有保护作用,以100μmol/L白藜芦醇的保护作用最强,可以明显上调衰老细胞MORF4基因的表达。     

鼠尾草酸延缓人胚肺二倍体成纤维2BS细胞衰老的实验研究

目的研究鼠尾草酸(carnosic acid,CA)延缓细胞衰老的作用及相关机制。方法采用体外细胞模型人胚肺二倍体成纤维2BS细胞系,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定CA对2BS细胞活力的影响,筛选获得最佳CA培养浓度,再用该浓度的CA对2BS进行传代培养,观察其对细胞代龄、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)活性、脂质过氧化产物丙二醛(MDA)水平、细胞周期分布和衰老相关蛋白p53、p21的影响。结果 MTT实验表明CA在1μmol/L、5μmol/L能够上调2BS细胞活力;采用含1μmol/L CA的培养液对2BS细胞从30PD(population doubling,倍增次数,亦称作"代")开始培养,直至完全停止生长,同时设立对照。对照组细胞于54PD左右发生衰老,SA-β-Gal染色阳性率达85%,而55PD的CA处理组仅为20%左右,接近年轻细胞水平;此时CA组细胞内MDA水平显著低于对照组,处于G1/G0期细胞的比例显著低于对照组,而S期比例则显著高于对照组,p53、p21蛋白水平均显著低于对照组,CA组细胞继续培养至61PD左右才出现衰老。结论 CA在1μmol/L剂量下能延缓2BS细胞的复制性衰老,该作用可能与其抗氧化能力有关。     

细胞衰老过程中用6表观遗传学修饰研究

目的检测体外培养的人胚肺成纤维细胞复制性衰老过程及细胞早衰阶段中P16的表观遗传学调控作用。方法在细胞复制性衰老过程（同步培养的22PDL正常人胚肺成纤维细胞于约50％融合度时进行400Ixmol／LH2O2处理，每天用H2O2染毒工作液染毒1次，每次2h，持续4d）中，将正常人胚肺成纤维细胞分为年轻细胞组（22PDL）、中年细胞组（35PDL）、复制性衰老细胞组（49PDL）；将经400umol／LH2O2染毒4d的22PDL人胚肺成纤维细胞继续培养7d，设为早衰细胞组。荧光定量PCR检测P16的mRNA表达水平，甲基化特异PCR检测其启动子区-846- —639bp的甲基化水平，染色质免疫沉淀结合定量PCR检测其相应启动子区组蛋白修饰情况，包括组蛋白H3、H4乙酰化和H3（Lys4）及H4（Lys20）甲基化修饰。结果与年轻细胞组相比，中年细胞组P，6的mRNA表达降低，复制性衰老细胞组和早衰细胞组P16的mRNA表达升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。在用6启动子区，第一外显子上游-1000bp内，其CpG岛片段长度为995bp，甲基化特异性PCR（MSP）扩增片段位于CpG岛内-846-639bp之间，长度为208bp。中年细胞组、复制性衰老细胞组、早衰细胞组甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0．42、0．34、0．47，未甲基化引物扩增产物的相对含量分别为0．61、0．96、0．79。在P16IP1启动子区（-685—489bp），复制性衰老细胞组及早衰细胞组以组蛋白H4（Lys20）甲基化修饰为主；在川6IP2启动子区（-229- -60bp），复制性衰老细胞组受组蛋白H3、H4乙酰化和H4（Lys20）甲基化联合修饰。早衰细胞组以H3、H4乙酰化修饰为主。结论细胞衰老过程中，用6启动子区的组蛋白修饰联合调控其mRNA表达，复制性衰老与早衰的调控机制存在差异。     

细胞复制衰老与H2O2诱导细胞早衰过程中P66SHC基因表达谱及组蛋白修饰研究

目的研究细胞复制衰老与H2O2诱导细胞早衰过程中P66SHC基因表达变化及复制衰老过程中组蛋白修饰改变。方法人胚肺成纤维细胞固定传代直至停止增殖以制备复制衰老模型,过氧化氢诱导细胞早衰模型。采用Q-PCR方法动态观察细胞复制衰老与早衰过程中P66SHC以及组蛋白乙酰化酶EP300和去乙酰化酶HDAC1的基因表达,采用染色质免疫沉淀技术观察年轻细胞与衰老细胞P66SHC基因启动子区的组蛋白修饰情况。结果 P66SHCmRNA表达与染毒剂量正相关(R=0.909,P=0.000),EP300表达与染毒剂量负相关(R=-0.922,P=0.000),HDAC1与染毒剂量不相关(R=-0.066,P=0.839)。P66SHC表达与群体倍增代数正相关(R=0.743,P=0.006),EP300表达和HDAC1表达与群体倍增代数负相关(R=-0.709,P=0.010;R=-0.599,P=0.040)。与复制衰老组相比,早衰组细胞P66SHC、EP300及HDAC1的基因表达量均有显著性差异(t=-19.733,P=0.000;t=11.103,P=0.000;t=9.728,P=0.001)。老年细胞的P66SHC基因调控区的H3组蛋白修饰丰度均降低;在转录起始点上游3.0kb处抑制基因转录的H3K9-tri-Me修饰几乎为零,选择启动子(转录起始点下游3.8kb)处的组蛋白修饰以活化转录的修饰为主。结论 P66SHC、EP300和HDAC1均可能参与细胞衰老和氧化应激诱导的细胞早衰,早衰组细胞P66SHC基因表达与复制衰老组不同;组蛋白修饰参与P66SHC的基因表达调控。     

脱氢表雄酮抗衰老机制的实验研究

目的体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞(WI-38),从细胞信号转导途径深入研究脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone DHEA)对细胞生长的影响。方法体外培养人胚肺二倍体成纤维细胞,45代以后细胞应用β-半乳糖甘酶染色方法检测,以阳性细胞比例达到90%以上的细胞为衰老模型;实验分6组,对照组28代,模型组56代,低、中、高剂量组(56代细胞中加入DHEA终浓度分别为5 nmol/ml、50 nmol/ml和100 nmol/ml),抑制剂组(56代细胞中加入终浓度为20 nmol/ml PD98059和100 nmol/ml DHEA);四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察细胞活力、流式细胞仪检测各组细胞周期、免疫组化检测细胞外调节蛋白激酶(Extra cellular regulated protein kinases,ERK)蛋白表达变化。结果 (1)各组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率均高于对照组(P0.01),中剂量组和高剂量组阳性细胞率低于模型组(P0.05);除高剂量组外其余四组细胞活力均低于对照组(P0.05),中、高剂量组细胞活力高于模型组(P0.05);(2)除高剂量组外其余四组G0/G1期细胞比例均高于对照组(P0.05),中、高剂量组G0/G1期细胞比例低于模型组(P0.05);除中、高剂量组外其余三组S期细胞比例低于对照组(P0.05),高剂量组S期细胞比例高于模型组(P0.05);(3)除高剂量组外,其余四组ERK蛋白表达IOD值均低于对照组(P0.05),中、高剂量组ERK蛋白IOD值高于模型组(P0.05)。结论 DHEA能够延缓人胚肺二倍体成纤维细胞衰老,其作用可能与激活ERK信号转导通路有关。     

共济失调毛细血管扩张基因和Rad3相关基因介导电离辐射诱导的A549细胞早衰作用研究

目的:研究共济失调毛细血管扩张突变(ATM)基因和ATM-Rad3相关基因(ATR)对早衰相关的p53蛋白及p16蛋白的促进作用。方法:通过阐明ATM、ATR在电离辐射诱导的A549细胞早衰中是否发挥作用,对ATM、ATR与A549细胞早衰的关系做进一步验证。将采用ATM、ATR抑制剂处理的A549细胞定义为实验组,将采用二甲基亚砜(DMSO)处理的A549细胞定义为对照组,1 h后进行4 Gy X射线照射,72 h后利用蛋白免疫印迹法检测p62蛋白的表达、β-半乳糖苷酶(β-Galactosidase)染色试剂盒检测细胞早衰的发生。结果:实验组在ATM、ATR抑制剂处理后72 h,A549细胞中p62蛋白的表达水平升高,与对照组相比差异有统计学意义(t=51.68,P<0.001)。ATM、ATR抑制剂处理后72 h,A549细胞早衰水平升高,实验组与对照组相比A549细胞早衰减少,差异有统计学意义(t=6.018,P<0.001);当4 Gy X射线照射实验组与对照组细胞后,实验组细胞发生早衰的数量较对照组明显下降,差异有统计学意义(t=6.030,P<0.001)。结论:抑制ATM、ATR可促进A549细胞p62蛋白的表达,同时抑制细胞早衰的发生;在4 Gy X射线照射A549细胞72 h后,ATM、ATR具有调控X射线诱导的A549早衰的作用。     

Restrictions and supplementations effects of vitamins B6, B9 and B12 on growth,vasculogenesis and senescence of BG01V human embryonic stem cell derived embryoid bodies

Of biologically active B-complex vitamins, vitamins B6, B9 and B12 has been reported to influence maintenance of red blood cells, stem cells, nervous and immune systems, tissue regeneration and wound healing. However, the collective effects of restrictions/supplementations of vitamins B6, B9 and B12 on growth, vasculogenesis and senescence of BG01V human embryonic stem cell (hESC) derived human embryoid bodies (hEBs) is not understood. This study was proposed to understand the collective effects of restrictions/supplementations of vitamins B6, B9 and B12 on growth, vasculogenesis and senescence of hEBs. The collective effect of four different media conditions like deficient (0%), marginal (30%), adequate (70%) and supraphysiological levels of vitamins B6, B9 and B12 restrictions/supplementations on growth and viability of hEB derived vasculogenesis were studied by photometric analysis. Morphology and senescence of hEB derivatives were examined and compared using inverted microscopy and scanning electron microscopy. Out of four different media conditions like 0%, 30%, 70% and supraphysiological levels of vitamins B6, B9 and B12, media supplied with adequate level of vitamins B6, B9 and B12 to hESCs grown on 100% restriction were able to resume all activities at normal. The BG01V hESC-hEBs grown without vitamins B6, B9 and B12 showed cell disintegration, cell floating, SA-β-gal expression, cell lose, decrease size, number and metabolic activity. The hEB derived vascular cell like structures grown on similar conditions showed compromised self-renewal capacity, vulnerable growth and early senescence. The initial damages due to restrictions may be reversed by adequate (70%) supply of vitamins B6, B9 and B12; however reversal of damage may not be 100%.     

α-硫辛酸对氧化损伤大鼠肝细胞及代谢酶影响

目的 探讨α-硫辛酸(α-liplic acid,α-LA)对过氧化氢(H_2O_2)氧化损伤的大鼠肝细胞及糖代谢酶的影响.方法 分别将50,100,200 μmol/Lα-LA作用于大鼠肝细胞24 h后,用H_2O_20.2 moVL损伤1 h,分别检测细胞活力、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)、细胞中葡萄糖激酶(GK)、糖原合成酶激酶-3(GSK-3)的含量.结果 α-LA各剂量组GsH-Px活力与SOD活性分别为141.552～208.171和10.852～13.151U/(mg·prot),均高于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组MDA含量为12.064～14.142 nmol/(mg·prot),明显低于H_2O_2损伤组(P<0.05).α-LA各剂量组葡萄糖激酶(GK)含量为0.928～1.020 mg/L,明显高于H_2O_2损伤组(P<0.05),不同剂量α-LA组GSK-3含量与H_2O_2损伤组比较差异无统计学意义(P<0.05).结论 α-LA对H_2O_2所致大鼠肝细胞氧化损伤具有一定的保护作用,且提高葡萄糖激酶含量.     

Stress-induced premature senescence (SIPS)--influence of SIPS on radiotherapy

Replicative senescence is a fundamental feature in normal human diploid cells and results from dysfunctional telomeres at the Hayflick cell division limit. Ionizing radiation (IR) prematurely induces the same phenotypes as replicative senescence prior to the Hayflick limit. This process is known as stress-induced premature senescence (SIPS). Since the cell cycle is irreversibly arrested in SIPS-induced cells, even if they are stimulated by various growth factors, it is thought that SIPS is a form of cell death, irreversibly eliminating replicating cells. IR-induced-focus formation of DNA repair proteins, a marker of DNA damage, is detected in SIPS as well as replicative senescent cells. Furthermore, both processes persistently induce cell cycle checkpoint mechanisms, indicating DNA damage created by ionizing radiation induces SIPS in normal cells, possibly by the same mechanisms as those occurring in replicative senescence. Interestingly, IR induces SIPS not only in normal cells, but also in tumor cells. Due to the expression of telomerase in tumor cells, telomere-dependent replicative senescence does not occur. However, SIPS is induced under certain conditions after IR exposure. Thus, cell death triggered by IR can be attributed to apoptosis or SIPS in tumor cells. However, metabolic function remains intact in SIPS-induced cancer cells, and recent studies show that senescence eliminate cells undergoing SIPS secrete various kinds of factors outside the cell, changing the microenvironment. Evidence using co-culture systems containing normal senescent stromal cells and epithelial tumor cells show that factors secreted from senescent stroma cells promote the growth of tumor epithelial cells both in vitro and in vivo. Thus, regulation of factors secreted from SIPS-induced stromal cells, as well as tumor cells, may affect radiotherapy.     

黑加仑提取物保护血管内皮细胞氧化损伤的实验研究

目的研究黑加仑提取物对过氧化氢所致血管内皮细胞ECV-304损伤的影响。方法建立体外过氧化氢损伤模型,测定细胞存活率、上清液中丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力、一氧化氮(NO)、内皮素(ET)和前列环素(PGI2)含量,并运用流式细胞仪观察黑加仑提取物对过氧化氢对内皮细胞ECV-304凋亡的影响。结果黑加仑提取物各剂量都能显著提高H2O2损伤内皮细胞的存活率(P<0.05);显著抑制H2O2损伤引起内皮细胞的LDH和ET的释放(P<0.05);显著减少H2O2损伤的内皮细胞MDA的生成(P<0.05);增加H2O2损伤的内皮细胞NO和PGI2水平(P<0.05)。黑加仑提取物的各组、阳性对照组和正常对照组早期凋亡率和总凋亡率明显低于H2O2模型组(P<0.05)。结论黑加仑提取物对过氧化氢损伤的脐静脉内皮细胞ECV-304具有保护作用;黑加仑提取物可降低H2O2诱导的ECV-304凋亡的早期凋亡率和总凋亡率,以达到保护内皮细胞的作用。     

Dietary Nucleotides Retard Oxidative Stress-Induced Senescence of Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Several lines of evidence suggest an inhibitory role of dietary nucleotides (NTs) against oxidative stress and inflammation, which promote senescence in age-associated cardiovascular diseases. We sought to test whether the dietary NTs could retard the hydrogen peroxide (H₂O₂)-induced senescence of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and to elucidate the efficiency of different NTs as well as the potential mechanism. Senescence was induced in HUVECs by 4 h exposure to 200 µM H₂O₂ and was confirmed using senescence-associated-β-galactosidase staining (SA-β-gal), cell viability, and Western blot analyses of p16^INK4A and p21^Waf1/Cip1 after 24 h administration of growth medium. We find that NTs retards oxidative stress-induced HUVECs senescence, as shown by a lower percentage of SA-β-gal-positive cells, lower expression of p16^INK4A, and p21^Waf1/Cip1 as well as higher cell viability. GMP100 was the most excellent in delaying HUVECs senescence, which was followed by the NTs mixture, NMN, CMP50, and UMP50/100, while AMP retards HUVECs senescence by specifically reducing p15^INK4b expression. NTs all have significant anti-inflammatory effects; AMP and CMP were more prominent in restoring mitochondrial function, GMP and CMP were more competent at eliminating ROS and MDA, while AMP and UMP were more efficient at enhancing antioxidant enzyme activity. The role of the NTs mixture in retarding HUVECs senescence is full-scaled. These results stated that the mechanisms of NTs retarding HUVECs senescence could be related to its antioxidant and anti-inflammation properties promoting cell proliferation and protecting mitochondrial function activities.     

美罗华通过ROS增加Raji细胞对X射线的辐射敏感性

目的 观察CD20单抗美罗华(R)对X射线所致人Burkitt淋巴瘤细胞系Raji细胞损伤的影响及与细胞内活性氧(ROS)的关系。方法 Raji细胞与低浓度H₂O₂或美罗华(终浓度20mg/L)孵育24h后,给予X射线照射;Raji细胞经美罗华联合不同浓度H2O2处理,常规培养48h,采用SRB法检测细胞存活,AO/EB双染观察细胞凋亡变化,激光共聚焦显微镜动态检测细胞内活性氧水平。结果 联合美罗华后,Raji细胞对X射线诱导的细胞死亡分数明显提高,美罗华+照射组和照射组的ID50分别为2.80 Gy、5.08 Gy;20μM或40μM的低剂量H₂O₂也可以提高Raji细胞对辐射的敏感性,并呈现浓度依赖性。与单照射组相比较,美罗华+照射组在处理后24h,出现明显细胞凋亡,可被抗氧化剂NAC部分抑制。美罗华联合照射组ROS产生明显高于单照射组,同时,美罗华可增加Raji细胞对不同浓度H₂O₂所致氧胁迫的敏感性,表现为细胞生长抑制和凋亡诱导增加。结论 美罗华可以增加耐辐射的淋巴瘤细胞系Raji细胞对X射线的敏感性,ROS作为细胞内外重要的信号分子,可能发挥重要作用。     

桑椹提取物对β-淀粉样蛋白致PC12细胞损伤保护作用的初步研究

目的观察桑椹提取物(ME)对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致PC12细胞损伤的保护作用,并初步探讨相关机制。方法将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及(25、50、100、200、400和800μg/ml)ME预孵育组(ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用MTT法确定ME的干预浓度。在此基础上,将细胞分为对照组(未加任何处理因素)、ME组(200μg/ml ME作用24h)、Aβ25-35组(20μmol/L Aβ25-35损伤24h)以及ME预孵育+Aβ25-35组(200μg/ml ME预孵育24h后再给予20μmol/L Aβ25-35继续损伤24h),采用分子探针DCFH-DA及Hoechst33342染色法分别进行细胞内活性氧(ROS)含量及细胞凋亡的测定。结果 (1)与对照组相比,Aβ25-35组细胞存活率显著降低(P<0.05);与Aβ25-35组相比,100、200μg/ml ME预孵育组细胞存活率显著提高(P<0.05)。(2)与对照组相比,200μg/ml ME组细胞ROS的生成及细胞凋亡率无显著变化(P>0.05),而Aβ25-35组细胞内ROS的生成显著升高(P<0.05)、细胞凋亡率也明显增加(P<0.05);与Aβ25-35组相比,200μg/ml ME预孵育组细胞内ROS的生成显著减少(P<0.05)且细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。结论桑椹提取物对Aβ25-35致PC12细胞损伤有明显的保护作用,机制与其抗氧化及抑制凋亡作用有关。     

胰岛素样生长因子-1调控下染料木黄酮对睾酮诱导RWPE-1细胞增生的抑制作用

目的研究在胰岛素样生长因子(IGF-1)调控下,染料木黄酮(Gen)对睾酮诱导的人前列腺上皮细胞RWPE-1增生的抑制作用及对细胞周期影响的分子机制。方法采用睾酮刺激RWPE-1细胞增生,观察细胞形态学变化,用0.63、1.25、2.5、5、10、20、40和80μmol/L的Gen与0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4和12.8nmol/L的IGF-1处理RWPE-1细胞24h、48h、72h后,测定各组细胞存活率;流式细胞仪检测对照组、40μmol/LGen组、6.4nmol/LIGF-1组和40μmol/LGen+6.4nmol/LIGF-1组的细胞周期变化,WesternBlot检测细胞周期蛋白cyclinB1、cyclinD1和细胞周期蛋白激酶CDK4。结果 2μmol/L睾酮可显著诱导RWPE-1细胞增生,2.5～80μmol/LGen均能抑制其增生,且抑制作用随着浓度增高和时间延长而增强,6.4nmol/LIGF-1调控下40μmol/LGen可显著减少G0/G1期细胞百分比,增加G2/M期细胞百分比,上调cyclinB1的表达,下调cyclinD1、CDK4的表达。结论 IGF-1调控下Gen可影响细胞周期素和周期素依赖激酶的表达,诱导G2/M期细胞阻滞,抑制睾酮诱导的RWPE-1细胞增生。