Beclin 1、LC3在前列腺癌中表达及其与淋巴转移的关系

目的 检测自噬相关蛋白Beclin1及LC3在良性前列腺增生、前列腺癌标本及盆腔淋巴结中的表达并探讨其意义。方法 应用免疫组织化学方法,检测自噬相关蛋白Beclin1及LC3蛋白在41例前列腺癌组织、60例良性前列腺增生组织,17例转移淋巴结组织及24例正常盆腔淋巴结组织的表达。结果 免疫组织化学方法检测Beclin 1、LC3在正常前列腺增生组织中阳性表达率明显高于前列腺癌组织（P<0.05）,不同Gleason分级间前列腺癌的Beclin l、LC3表达差异无统计学意义（P >0.05）。晚期前列腺癌（C+D期） Beclin1、LC3表达水平高于早期（A+B期）。Beclin 1、LC3在转移淋巴结组织中阳性表达率高于正常盆腔淋巴结组织（P<0.05）。结论 自噬相关蛋白Beclin1、LC3参与前列腺癌的发生及发展,在不同临床分期发挥不同作用,细胞自噬抑制剂与化疗药物结合有望成为一个新的治疗靶点。     

血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3的表达

目的 观察血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠海马CA1区自噬及微管相关蛋白1轻链3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3,MAP1LC3,LC3)的表达,探讨自噬在血管性痴呆发病中的可能作用。方法 大鼠随机分为假手术组(sham组)、血管性痴呆模型组(VD组)和Wortmannin自噬抑制剂组(WM组),每组又随机分为模型制备后1、2、4、8、12周5个亚组。采用四血管阻断法制作血管性痴呆模型,Morris水迷宫法检测学习记忆能力,透射电镜观察自噬体的形成,蛋白质印迹法检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ 的比值作为自噬活性的指标。结果 与假手术组相比,VD组大鼠平均逃避潜伏期延长(P<0.05或0.01),穿越平台次数减少(P<0.05或0.01);与VD组比较,WM组大鼠逃避潜伏期缩短(P<0.05或0.01),穿越平台次数增加(P<0.05或0.01)。VD组大鼠海马CA1区1周时神经细胞核膜凹陷,胞核浓缩,线粒体肿胀,可见自噬体、溶酶体;4周时自噬体、溶酶体数量显著增多;12周时仍可见自噬体。WM组神经元损伤较VD组减轻,自噬体数量减少。VD组大鼠海马CA1区LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值在1周时升高,4周时达到高峰,8周时开始下降,12周时仍较高。WM组各时间点LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值较VD组低,差异有统计学意义(P<0.05或0.01)。结论 血管性痴呆大鼠海马CA1区自噬活性被激活,可能参与了血管性痴呆的发生发展。     

自噬相关蛋白Beclin1和LC3在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨自噬相关蛋白Beclin1和LC3在结肠癌组织中的表达及临床意义。方法收集2011年1月—2014年1月结肠癌患者80例,取结肠癌组织标本及相应的正常组织标本各80份。用免疫组化法检测结肠癌和正常结肠组织中自噬相关蛋白Beclin1和LC3的表达,分析二者和结肠癌临床病理学参数,包括年龄、分化程度、TNM分期和淋巴结转移等的关系。结果结肠癌和正常结肠组织中Beclin1的阳性表达率分别为33.8%(27/80)、73.8%(59/80),LC3阳性表达率分别为22.5%(18/80)、68.8%(55/80),Beclin1和LC3在结肠癌的阳性表达率显著低于正常结肠组织(P<0.01)。不同年龄、分化程度结肠癌组织中Beclin1和LC3的表达差异无统计学意义(P>0.05),而不同TNM分期(P<0.01)和淋巴结转移结肠癌组织中Beclin1和LC3表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论自噬相关蛋白Beclin1和LC3的低表达可能与结肠癌的发生发展和预后不良有关。     

膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白的表达及与患者肿瘤特征、预后的相关性分析

目的 观察膀胱癌组织中自噬基因Beclin1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）蛋白表达状况,并分析两者与预后的相关性。方法 选取2020年1月—2021年8月新疆医科大学附属肿瘤医院病理资料完整的110例膀胱癌患者。观察患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达状况,记录病理参数,并对患者进行为期1年的随访。统计预后情况,观察不同病理参数及预后的膀胱癌患者膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达,并分析两者与患者预后的相关性。结果 膀胱癌组织Beclin1、LC3Ⅱ蛋白高表达率较癌旁组织低,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达率较癌旁组织高（P <0.05）。高组织学分级、T₂～T₄分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者Beclin1蛋白高表达率低于低组织学分级、T_a～T₁分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者（P <0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者Beclin1蛋白表达率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。高组织学分级、T₂～T₄分期、浸润性、淋巴结转移、预后不良的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白高表达率低于低组织学分级、T_a～T₁分期、非浸润性、无淋巴结转移、预后良好的患者（P <0.05）。不同性别、年龄、肿瘤直径、血管侵犯的膀胱癌患者LC3Ⅱ蛋白表达率比较,差异无统计学意义（P >0.05）。经Phi系数相关性分析,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白与预后不良均呈负相关（Phi=-0.277和-0.222,均P <0.05）。多因素逐步Logistic回归分析结果显示：Beclin1高表达［O^R=3.892（95% CI：1.504,10.072）］、LC3Ⅱ蛋白中低表达［O^R=3.358（95% CI：1.165,9.677）］是预后不良的危险因素（P <0.05）。结论 膀胱癌组织中Beclin1、LC3Ⅱ表达与预后密切相关,Beclin1、LC3Ⅱ蛋白中低表达是预后不良的危险因素。     

转录因子Foxp1在TGF-β1诱导的VSMC表型转化中的作用

目的：研究转录调节因子叉头框蛋白P1(Foxp1)在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁的表达情况并探讨Foxp1在TGF-β1诱导的主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）表型转化中的作用。方法：收集急性Stanford A型主动脉夹层手术切除的主动脉标本,通过RT-PCR和Western Blot方法检测标本中Foxp1的mRNA与蛋白表达情况。Foxp1重组质粒转染大鼠主动脉平滑肌细胞,通过荧光显微镜观察其转染结果;将大鼠主动脉平滑肌细胞进行不同处理并分为3组（+TGF-β1、Foxp1质粒转染、Foxp1质粒转染+TGF-β1）,以未做处理的大鼠主动脉平滑肌细胞为空白对照,通过RT-PCR和Western Blot方法检测4组细胞中Foxp1、收缩型细胞标志物α-SMA、SM22α以及合成型细胞标志物骨桥蛋白(OPN)的表达情况。结果：在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中Foxp1的mRNA与蛋白表达显著降低（均P<0.05）;荧光显微镜下观察可见大量转染成功的细胞;与空白对照组细胞相比,Foxp1质粒转染组大鼠主动脉平滑肌细胞中Foxp1的mRNA与...     

胰腺癌中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达及临床意义

目的探讨胰腺癌中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达及临床意义。方法本次实验选取外科手术切除的胰腺癌组织标本36例为研究组,并选取相应癌旁正常组织中自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62的表达情况为对照组进行结果分析。结果采用免疫组织化学法检测Beclin1蛋白在影响组织及癌旁正常组织中呈阳性的表达率分别为27.8%、91.7%;LC3蛋白的阳性表达率则为36.1%、75%;P62蛋白的阳性表达率是77.8%、47.2%。结论自噬相关蛋白Beclin1、LC3和P62参与了进展期胰腺癌的发展,胰腺癌自噬蛋白中Beclin1与LC3表达水平具有正比例关系,P62表达水平则与TNM分期相关。     

Beclin 1、LC3在恶性纤维组织细胞瘤中的表达

目的 研究自噬蛋白Beclin 1、LC3在恶性纤维组织细胞瘤的表达.方法 选取云南省肿瘤医院2011年11月至2014年10月经手术切除的MFH组织标本, 应用免疫组织化学SP方法检测恶性纤维组织细胞瘤组织中Beclin 1、LC3蛋白表达情况.结果 在本组21例标本中Beclin 1、LC3基因表达均显著升高, P<0.05.结论 Beclin 1、LC3在恶性纤维组织细胞瘤组织中呈高表达, 并且两者间显著相关, 可能与恶性纤维组织细胞瘤的发生及发展密切相关.     

恶性肺结节中自噬蛋白Beclin1和LC3的表达变化及临床意义

目的 通过检测恶性肺结节中Beclin1和LC3的表达,探讨Beclin1和LC3的表达变化及临床意义。方法 采用免疫组化SP法检测40例恶性肺结节标本中Beclin1和LC3的表达情况,分析不同临床病理特征恶性肺结节患者Beclin1和LC3的表达差异及二者之间的关系。结果 Beclin1和LC3在恶性肺结节中的阳性表达率分别为30.00%、27.50%,在良性肺结节的阳性表达率分别为43.33%、53.33%,且二者在良恶性结节中的表达均低于癌旁组织(100.00%,100.00%),差异有统计学意义(P<0.05)。Beclin1和LC3的表达均与年龄有关(P<0.05)。Beclin1和LC3在恶性肺结节中的表达呈正相关性(r=0.452,P<0.05)。结论 自噬蛋白Beclin1和LC3在恶性肺结节中低表达,低于良性肺结节以及癌旁组织,提示自噬蛋白Beclin1和LC3活性的降低与恶性肺结节存在负相关性。     

Fibulin-2调控的TGF-β/Smad信号通路在VSMCs凋亡中的作用

目的:了解腓骨蛋白-2(Fibulin-2,FBLN2)在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁的表达情况并研究FBLN2调控的TGF-β/Smad信号通路在血管平滑肌细胞凋亡中的作用。方法:通过免疫组化染色和Western Blot检测急性Stanford A型主动脉夹层手术切除的主动脉标本FBLN2表达,并以重组FBLN2作用于体外培养的小鼠主动脉血管平滑肌细胞,通过Western Blot检测TGF-β1、Smad2/3和磷酸化Smad2/3的表达改变,同时使用A83-01阻断TGF-β1信号,观察平滑肌细胞凋亡情况。结果:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中表达显著升高(P<0.01),主要分布在主动脉中层。重组FBLN2可上调小鼠主动脉平滑肌细胞TGF-β1、pSmad2/3的表达(P<0.01),并抑制小鼠主动脉平滑肌细胞的凋亡(P<0.01)。当TGF-β1的作用被A83-01阻断时,重组FBLN2对主动脉平滑肌细胞凋亡的抑制作用显著减弱(P<0.05)。结论:FBLN2在急性Stanford A型主动脉夹层患者主动脉壁中层表达上调,并通过调控TGF-β/Smad信号通路抑制血管平滑肌细胞凋亡。FBLN2有可能参与急性Stanford A型主动脉夹层的发生。     

自噬相关蛋白 Beclin1、LC3在甲状腺癌合并颈部淋巴结转移中的表达及临床意义

目的:探究分析与细胞自噬相关的蛋白Beclin1及LC3在甲状腺癌合并颈部淋巴结转移中的表达及其在临床治疗中的意义。方法:采用免疫组织化学方法检测,选取48例我院2012年2月至2014年2月收集的甲状腺癌组织、30例癌旁正常组织用以检测Beclin1及LC3蛋白表达,另取38例甲状腺癌转移淋巴结以及30例的正常淋巴结临床标本,用以检测Beclin1及LC3蛋白表达。结果:在取材的所有样本中均有表达Beclin1,但在甲状腺癌组织中含量低于癌旁正常的甲状腺组织(P<0.01),转移淋巴结中Beclin1水平明显低于正常淋巴结组(P<0.01);免疫组化结果显示在所有样本中也检测到LC3蛋白表达,在甲状腺癌组织中的含量最低,并且显著低于癌旁甲状腺组织(P<0.01),在发生转移的淋巴结组织中,LC3含量低于正常淋巴结组织(P<0.01)。结论:自噬功能相关蛋白Beclin1与LC3的表达与甲状腺癌是否发生转移密切相关,是肿瘤向囊外扩展的直接标记。该蛋白具有作为甲状腺癌淋巴结转移的术前评估指标的潜在可能,具有一定的指导意义。     

多囊蛋白-1在急性主动脉夹层发病机制中的作用

目的 探讨多囊蛋白-1(PC-1)在急性主动脉夹层(AD)发病机制中的作用及分子机制。方法 收集2019年10月至2020年1月于郑州大学第一附属医院行主动脉弓置换术的6例急性AD患者的病变主动脉组织标本作为AD组,另选择6例非主动脉疾病的器官捐赠者的正常主动脉组织标本作为对照组。采用Western blot法检测主动脉组织中PC-1、凋亡相关蛋白及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的磷酸化位点的表达,SM22α免疫荧光/DNA末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法双标染色法检测主动脉平滑肌细胞(VSMC)凋亡情况。结果 对照组和AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量分别为1.00±0.07和0.72±0.04,AD组受试者主动脉组织中PC-1蛋白的相对表达量显著低于对照组(t=7.614,P<0.01)。对照组和AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度分别为59.03±4.57和71.26±8.25,AD组受试者主动脉VSMC凋亡的荧光强度显著高于对照组(t=3.178,P<0.05)。AD组受试者主动脉组织中cleaved c...     

铅暴露时间对大脑皮质ATG5、Beclin1、 LC3B 表达的影响

目的 通过复制成年动物铅暴露模型,研究铅暴露时间长短对大脑皮质自噬蛋白ATG5、 Beclin1、LC3B 表达的变化。方法 选取18 只豚鼠随机分为4 组：对照组（3 只）,以及铅暴露15、60 和 90 d 组（每组5 只）。用0.2% 醋酸铅饮用水复制动物铅暴露模型,对照组给予等量的生理盐水喂养;免疫组 织化学法检测ATG5、Beclin1 和LC3B 的表达。结果 与对照组相比,不同时间铅暴露组自噬蛋白ATG5、 Beclin1 和LC3B 的阳性表达升高（P <0.05）。铅暴露90 d 组的ATG5 表达水平与各暴露组比较,差异有统 计学意义（P <0.05）。铅暴露15 d 组与60 d 组的ATG5 表达水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）。各暴 露组Beclin1 和LC3B 蛋白水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 环境铅饮用水可通过自噬蛋白 ATG5、Beclin1 及LC3B 引起大脑皮质区的自噬反应,推测铅暴露激活的早期自噬反应可能对大脑皮质发挥 神经毒性作用,对成年豚鼠大脑造成不可逆转的损害。     

葛根素通过AMPK-mTOR通路激活自噬改善大鼠激素性股骨头坏死的研究

目的 探讨葛根素通过自噬信号通路对激素性股骨头坏死早期血管内皮细胞自噬的干预作用。方法 48只雄性SD大鼠随机分成4组（每组12只）。对照组：单纯肌肉注射生理盐水，2ml/只/次，共3次，间隔24h；模型组：肌肉注射甲基强的松龙，20mg/kg共3次，间隔24h。葛根素干预组：同模型组方法造模，在最后一次臀肌注射完甲基强的松龙后给予葛根素（100mg/kg?d)腹腔注射。雷帕霉素干预组：同模型组方法造模，在最后一次臀肌注射完甲基强的松龙后同时给予雷帕霉素（1.2mg/kg?d，自噬特异性激动剂)腹腔注射。造模后二周、四周后处死实验动物，取出双侧后肢的股骨头及主要供血血管。HE染色光镜下观察股骨头坏死情况；利用免疫组化法和RT-PCR方法检测Beclin1、LC3、P62、AMPK,mTOR和ULK1的mRNA与蛋白的表达；采用ELISA法检测血管内皮损伤标记物6-keto-PGF1a的表达。结果 与对照组比较，模型组大鼠骨细胞坏死加重，血管内皮细胞6-keto-PGF1a的表达增加（P<0.05），血管内皮细胞中自噬相关蛋白AMPK、ULK1、Beclin1、LC3表达降低（P<0.05）、mTOR、P62表达增高（P<0.05）；与模型组比较，葛根素干预组大鼠的骨坏死程度明显改善，6-keto-PGF1a的表达降低（P<0.05），自噬相关蛋白AMPK、ULK1、Beclin1、LC3表达增高（P<0.05）、mTOR、P62表达降低（P<0.05）。结论 葛根素可能通过AMPK-mTOR-Ulk1 信号通路激活血管内皮细胞的自噬，从而减轻激素所造成的股骨头坏死。     

Bax抑制因子1通过促进视神经萎缩蛋白1表达抑制小鼠动脉血管钙化

目的 探讨Bax抑制因子1（BI-1）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）蛋白对血管钙化的影响。方法 ApoE-/-糖尿病小鼠高脂喂养12周后予以腹腔注射Nε（- 1-羧甲基）-L-赖氨酸16周建立血管钙化模型,实验将小鼠分为4组,6只/组：对照组（ApoE-/-小鼠普通饲料喂养）、钙化组（ApoE-/-小鼠建立钙化模型）、钙化+BI-1TG组（血管特异性过表达BI-1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）和钙化＋BI-1TG＋OPA1-/-组（血管特异性过表达BI-1和基因敲除OPA1的ApoE-/-小鼠建立钙化模型）。另β磷酸甘油诱导血管平滑肌细胞建立细胞钙化模型。使用von Kossa染色检测血管钙化程度,使用ELISA检测主动脉钙含量,使用免疫组织化学方法检测Runt相关转录因子2和骨形态发生蛋白2表达、使用TUNEL检测细胞凋亡率,使用Western blot检测BI-1、OPA1、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2和活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3水平的表达。结果 血管钙化后,BI-1和OPA1蛋白表达均下降（P=0.0044）,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达增加（P=0.0041）。过表达BI-1促进OPA1蛋白表达,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达均减少（P=0.0006）。基因敲除OPA1蛋白后,钙沉积、Runt相关转录因子2、骨形态发生蛋白2及活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3又明显增多（P=0.0007）。结论 BI-1可能通过促进OPA1表达,减轻钙沉积、细胞骨型分化和细胞凋亡,继而抑制血管钙化。     

血管平滑肌细胞自噬对小鼠主动脉夹层形成的影响

研究血管平滑肌自噬对小鼠主动脉夹层形成的影响。     

MAD1基因在主动脉夹层中的表达及对主动脉平滑肌细胞的影响

收集病变的升主动脉中膜组织标本为主动脉夹层组；收集同期在本院行尸检且无手术史、大血管病变史的升主动脉壁内组织标本18份为对照组；RT-PCR和Western blot检测有丝分裂阻滞缺陷蛋白(MAD1) mRNA和蛋白表达水平。在体外建立MAD1基因高表达人主动脉血管平滑肌细胞(HA-VSMC)模型,检测细胞增殖和凋亡情况以及凋亡相关蛋白。结果显示主动脉夹层组患者主动脉夹层中MAD1 mRNA和蛋白相对表达量明显高于对照组(P<0.05)。随着转染时间的延长,各组细胞增殖水平均逐渐增加,转染48 h、72 h后MAD1过表达组细胞增殖情况低于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。转染48 h后,MAD1过表达组细胞凋亡率明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.01)。MAD1过表达组含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA和蛋白相对表达量明显高于空白对照组及空载体转染组(P<0.05)。实验结果表明,MAD1过表达可通过抑制细胞增殖,激活细胞外凋亡途径和细胞内凋亡途径来促进人主动脉平滑肌细胞HA-VSMC细胞凋亡,参与主动脉夹层的发生与发展。     

子宫内膜癌患者NLRC5与自噬蛋白表达的相关性及其临床意义

目的 分析子宫内膜癌患者NLR家族含CARD结构域5(NLRC5)表达与自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达的相关性，并探讨NLRC5、Beclin1、LC3与子宫内膜癌预后的相关性。方法 采集2020年1月—2022年1月安徽医科大学第二附属医院90例子宫内膜癌患者癌组织作为子宫内膜癌组，另取90例正常子宫内膜作为子宫内膜组。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）测定两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达。子宫内膜癌组患者术后接受12个月的随访，按照实体瘤疗效标准分为预后良好组（72例）与预后不良组（18例）；比较两组NLRC5、Beclin1、LC3 mRNA的表达，采用多因素一般Logistic回归模型分析影响子宫内膜癌预后的因素，绘制受试者工作特征（ROC）曲线分析NLRC5、Beclin1、LC3对子宫内膜癌患者患者预后的预测价值。结果 子宫内膜癌组与正常子宫内膜组NLRC5、Beclin1和LC3 mRNA相对表达量的比较，差异均有统计学意义（P <0.05）；子宫内膜癌组NLRC5 mRNA相对表达量较正常子宫内膜组...     

Expression of Beclin1 in osteosarcoma and the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity

To explore the expression of Beclin1 in osteosarcoma and investigate the effects of down-regulation of autophagy on the chemotherapeutic sensitivity to cisplatin （DDP）, the expression of Beclin1 in 28 specimens of osteosarcoma （group A） and 19 specimens of normal bone tissues （group B） were immunohistochemically detected. The expression of Beclin1 mRNA in MG63 cells treated with different concentrations of DDP was examined with RT-PCR. After down-regulation of autophagy in MG63 cells by an autophagy inhibitor, 3-methyladenine （3-MA）, the cell proliferation inhibition rate of MG63 cells treated with DDP was evaluated by using the MTT assay. The positive rates of Beclin1 were 67.85% in group A and 94.73% in group B. Its expression was lower in osteosarcoma than in normal bone tissues, with a significant difference found between them （P〈0.05）. RT-PCR showed that the expression of Beclin1 mRNA in the cells treated with high-dose DDP were higher than that in the non-treated cells, and no significant difference in the expression of Beclin1 mRNA was found between the cells treated with low-dose DDP and the non-treated cells. There was a positive correlation between the level of Beclin1 mRNA expression and the concentration of DDP. MTT assay showed that the proliferation inhibition rates of the cell treated with 3-MA and DDP combined were substantially increased when compared with those treated with DDP alone （P〈0.01）. This study demonstrated that autophagy may be implicated in the carcinogenesis of osteosarcoma, and DDP may induce autophagy in the MG63 cells. It also suggests that the down-regulated autophagy could increase chemotherapeutic sensitivity of DDP to osteosarcoma.