热休克蛋白70在人胃癌中呈过度表达

目的：研究热休克蛋白７０（ＨＳＰ－７０）在人胃癌组织中的表达。方法：应用抗人ＨＳＰ７０单克隆抗体对１９０例手术及胃镜活检胃癌及非癌胃粘膜病变石蜡标本,以免疫组织化学ＡＢＣ法检测ＨＳＰ７０的表达。结果：ＨＳＰ７０在胃癌、慢性浅表性胃炎、肠上皮化生及不典型增生组织中的阳性率分别为７３％、３２．５％、６６％及７２％;地表达率分别为５６％、５．８％、２９．２％及３３．３３％。ＨＳＰ７０在肠上皮化生、不典型     

人肺癌组织热休克蛋白70-肿瘤肽纯化方法比较

目的 从人体肺癌组织分离纯化热休克蛋白70-肿瘤肽（HSP70-肿瘤肽）,比较两种层析系统分离纯化的结果。方法 采用快速蛋白液相层析（FPLC）自动系统及简单离子交换层析系统,运用亲和层析、离子交换层析、SDS—PAGE、Western-blot方法从肺癌病人手术切除肿瘤组织分离纯化HSP70-肿瘤肽。结果收集两种方法所纯化蛋白洗脱液,经电泳显示于70KD处有一纯蛋白带,定性鉴定该蛋白确系HSP70肽蛋白。结论两种层析系统均能够纯化出纯度较高的热休克蛋白70-肿瘤肽,两种方法均切实可行,实验室可根据自身条件选择应用。     

不同人肝癌细胞中热休克蛋白70表达的动态研究

目的：探讨ＨＳＰ７０在人肝癌细胞中的表达。方法：不同人肝癌细胞经４２℃休克２ｈ,分别于休克后４ｈ、８ｈ、１２ｈ、１６ｈ、４８ｈ收集细胞爬片;采用ＥＮＶＩＳＩＯＮ免疫组化法检测ＨＳＰ７０在细胞中的表达;采用间接免疫荧光法定量分析ＳＭＭＣ－７７２１细胞休克前及休克后１６ｈ ＨＳＰ７０的表达。结果：免疫组化和免疫荧光检测显示热休克前后不同人肝癌细胞中ＨＳＰ７０表达明显增加,以１６ｈ表达达高峰。结论：不同人肝癌细胞休克前后ＨＳＰ７０表达的动态研究,为今后进行ＨＳＰ７０抗原肽的提取和纯化以及抗癌免疫研究奠定了基础。     

热休克蛋白70在人食管癌组织中的表达

目的：探讨人食管癌组织热休克蛋白70(HSP70)表达的规律及意义。方法：SABC法检测人食管癌组织HSP70的表达。结果：40例食管癌组织中有80％(32／40)存在HSP70的表达，不同癌组织存在胞浆、胞膜和胞核表达强度及部位的差异。结论：人食管癌组织存在HSP70的表达，癌组织的异质性出现了胞浆、胞膜和胞核的表达差异，HSP70在人食管癌组织的表达规律为以后实验的研究作了铺垫。     

宫颈癌放疗前后热休克蛋白70的表达

目的:探讨热休克蛋白70在宫颈癌放疗前后的表达及意义.方法: 采用免疫组织化学法分别检测50例宫颈癌患者放疗前后热休克蛋白70的表达.结果: 放疗后热休克蛋白70的表达与放疗前相比明显降低,放疗前热休克蛋白70的表达与病理分级正相关,而放疗后其表达与病理分级负相关.结论: 热休克蛋白70的表达水平测定可以做为宫颈癌细胞的增殖、分化及放射敏感性的一个重要指标.     

NSCLC热休克蛋白70过表达与自发性细胞凋亡

热休克蛋白 (ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｓ,ＨＳＰｓ)广泛存在于原核及真核细胞中 ,是细胞受刺激后被诱导产生的一组应激蛋白 ,除热损伤外 ,能由多种损伤因素诱导 ,具有维持细胞蛋白自稳 ,与甾体激素受体结合及调节细胞周期等多种重要功能。ＨＳＰ70是含量最多的ＨＳＰｓ。我们研究了ＮＳＣＬＣ中ＨＳＰ70过表达与自发癌细胞凋亡的关系。非小细胞肺癌 (ＮＳＣＬＣ)组织标本 118例 ,其中男 94例 ,女 2 4例 ,年龄 3 872岁 ,中位年龄4 8岁。鳞癌 80例 ,腺癌 3 8例。根据 1989年国际抗癌联盟(ＵＩＣＣ)分期标准 ,Ⅰ期 2 6例 ,Ⅱ期 76例 ,…     

热休克蛋白70与肿瘤细胞凋亡

热休克蛋白70(Heat shock protein 70,HSP70)是热休克蛋白家族中重要成员之一.它作为"分子伴侣",在细胞生长过程中与许多促凋亡和抗凋亡分子相互作用,调节其靶蛋白的活性和功能,因此与细胞凋亡有着密切联系.本文仅就HSP70与肿瘤细胞凋亡相关性的最新研究进展作一综述.     

基因工程人β干扰素的原核表达及纯化研究

目的摸索一种适合于中试生产的点突变重组人β干扰素(17Ser-IFN-β)发酵与纯化工艺。方法研究不同培养基和热诱导时间对17Ser-IFN-β表达的影响;观察pH、蛋白浓度和层析条件对17Ser-IFN-β纯化的影响。结果17Ser-IFN-β工程菌在含甘油、酪蛋白水解物及微量元素的M9培养基中,17Ser-IFN-β表达量明显增加。灰度扫描显示热诱导4h后的表达量最高,目的蛋白可达菌体总蛋白的20%以上。17Ser-IFN-β可以相对特异性地被仲丁醇抽提至有机相中,纯度达80%,经S200凝胶过滤柱层析后纯度达90%,用G25柱转换缓冲液,使缓冲液pH值＞8,同时去除缓冲液中的还原剂DTT,将复性后的样品用C4反相柱层析进行精制,最终获得纯度＞98%和比活性>3×107U/mg的17Ser-IFN-β制品。结论成功地建立了注射用新型重组人β-干扰素的中试生产工艺,为随后进行的临床前研究及临床试验打下基础。     

热休克蛋白70与肿瘤的关系

热休克蛋白（ＨｅａｔＳｈｏｃｋＰｒｏｔｅｉｎ,ＨＳＰ）是由Ｒｉｔｏｓｓａ在１９６２年研究果蝇唾液腺染色体时发现的,将２５℃培养的果蝇幼虫置于３０～３２℃的环境中,发现其巨大的唾液腺染色体上出新的膨突。继后正常蛋白质的合成被抑制,却合成了一组特殊的蛋白质,由于是在热刺激下产生的一组蛋白质,故称其为热休克蛋白（ＨＳＰ）。后来,人们发现除高温外的各种刺激如缺血、缺氧、重金属、病毒感染、恶性变等均可诱导ＨＳＰ的合成,并关闭正常蛋白的合成,故也有人称其为应激蛋白［１～４］。在ＨＳＰ家庭中ＨＳＰ７０是功能最广研究最…     

热休克蛋白70与肿瘤

热休克蛋白７０（ＨＳＰ７０）是一组重要应激蛋白。在肿瘤细胞中表达异常,能与癌基因、抑癌基因产生结合,并与肿瘤细胞的细胞周期调控、增殖、凋亡、分化、多药耐药、肿瘤免疫以及肿瘤细胞的发生发展密切相关。     

人NY-ESO-1基因的原核表达、纯化和初步应用

目的：克隆人NY-ESO-1基因，进行原核表达和分离纯化，并初步应用于肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测。方法：通过RT-PCR技术从人肝癌组织中扩增NY-ESO-1基因片段，插入原核表达载体pGEX4T-1( )中，构建重组表达质粒pGEx／ESO1，导入大肠杆菌BL21(DE3)，诱导目的蛋白表达，经包涵体透析复性和GSTrap亲和层析纯化目的蛋白，Westem blot鉴定。应用间接ELISA方法初步检测50例肝癌患者血清和20例正常人血清NY-ESO-1抗体的表达。结果：扩增得到NY-ESO-1基因3′端276bp片段，与GeneBank公布序列一致，构建的pGEX／ESO1原核表达质粒经IPTG诱导，在大肠杆菌中表达分子量约36kD的GST-ESO1融合蛋白，纯化后蛋白纯度为90％。50例肝细胞癌患者血清中4例检测到NY-ESO-1抗体(8％)，正常人血清均为阴性。结论：成功构建pGEX／ESO1重组表达质粒，得到有活性的NY-ESO-1融合蛋白，对肝癌患者血清NY-ESO-1抗体的检测有-定的应用价值。     

胃癌癌变过程中热休克蛋白70,p53蛋白的表达及其意义

目的 探讨热休克蛋白７０（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ７０）在胃癌中的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化Ｓ－Ｐ法检测ＨＳＰ７０和ｐ５３蛋白在正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化生、不典型增生及胃癌组织中的表达情况。结果胃癌中ＨＳＰ７０及ｐ５３蛋白呈高表达（Ｐ〈０．０１）,ＨＳＰ７０在正常胃粘膜、慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎伴肠化生、不典型增生及胃癌组织的表达呈递增形式;有淋     

人肺腺癌GLC-82 细胞热休克蛋白70多肽复合物的提取及对细胞毒性T 淋巴细胞作用的实验研究

 目的 探讨GLC-82细胞中HAC-70的提纯方法及其诱导的CTL表型变化和CTL及其上清液抗瘤效应。方法 GLC-82细胞热休克诱导HSP表达，离子交换层析提纯HAC-70，SDS-PAGE和ELISA法进行定量和定性检测，活化PBMC，T淋巴细胞亚群试剂盒测定HAC-70诱导CTL细胞表型变化情况，MTT法测定CTL及上清液杀瘤活性。结果 热休克处理能使GLC-82细胞HAC-70表达增加，离子交换层析可提纯GLC-82细胞中HAC-70。经热休克处理的HAC-70诱导T淋巴细胞，其CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺细胞与对照组的CTL细胞阳性率明显提高，其诱导的CTL杀瘤活性显著提高，且其CTL培养上清液肿瘤杀伤活性最高。结论 离子交换层析可提纯GLC-82的HAC-70；HAC-70可使CTL细胞CD4⁺／CD8⁺倒置，活化的CTL及上清液有较高的杀瘤活性，为肺癌肿瘤疫苗的制备和临床应用提供了实验依据。     

维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞增殖分化和热休克蛋白70表达的影响

背景与目的 :研究维生素E琥珀酸酯(VitaminESucciaate,VES)对人胃癌SGC_7901细胞增殖和分化作用及其可能机制。材料与方法 :采用噻唑蓝(3_[4,5_dimethylthiazol_2_yl]_2,5diphenyltetrazoliumbroide,MTT)法检测细胞的生长 ;流式细胞术检测细胞周期的分布 ;分光光度法检测分化标志酶的活性 ;WesternBlot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC_7901细胞热休克蛋白70(HSP70)的影响。 结果 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长 ;VES作用48h可使细胞出现G0/G1期停滞 ,分化标志酶AKP、LDH活性降低 ,并使HSP70蛋白表达降低。结论 :VES可抑制SGC_7901细胞的生长并诱导分化 ,其机制可能是通过抑制HSP70的表达而使细胞发生G0/G1 期阻滞 ,从而抑制肿瘤细胞的增殖 ,诱导SGC_7901细胞发生分化。     

肿瘤热休克蛋白70对荷瘤鼠Th1型细胞因子表达的影响

目的：研究应用肿瘤来源的热休克蛋白70治疗后荷瘤小鼠外因中几种Th1型细胞因子水平的动态变化，探讨其打破荷瘤机体的免疫耐受、诱导抗肿瘤免疫的机制，为其应用于治疗人类的恶性肿瘤提供有价值的参考依据。方法：细胞培养、蛋白质纯化技术、电泳技术、Western-blot法、毛细管电泳、动物实验、ELISA等。结果：肿瘤来源的热休克蛋白70具有明显的抑瘤作用，并且能够诱升荷瘤小鼠外周血中几种主要的Th1型细胞因子（IL－2，TNF－β，IFN－γ）的水平，随HSP70的应用频次增加而逐渐升高，在最后治疗的2周后仍未见下降趋势，与对照组相比，差异显著（P＜0．01）。结论：肿瘤来源的HSP70对荷交谈小鼠Th1型细胞因子有明确的诱升作用，进而诱导机体产生并维持有效的抗肿瘤免疫效应，该作用是其抗肿瘤免疫效应的一个重要方面。     

重组人微小染色体维持蛋白MCM5的原核表达与纯化

 MCM5蛋白是一种DNA复制调控蛋白，属于MCM蛋白质家族。MCM5蛋白的表达作为一种增殖细胞的标记物受到关注，抗MCM5蛋白的抗体可以用来检测肿瘤细胞。MCM5蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体形式表达，通过洗涤、层析可以得到纯度较高的MCM5包涵体蛋白。本研究的成功为进一步进行相应抗体的制备奠定了基础。     

热休克蛋白70、90在白血病细胞K562巨噬细胞样分化过程中的表达研究

目的 复制hexamethylene bisacetamide(HMBA)诱导白血病细胞K562向巨噬细胞样分化的模型，检测热休克蛋白70、90（HSP70，HSP90）在这一分化过程中的表达变化。方法 用HMBA诱导K562细胞并通过联苯胺、萘酚AS－D氯醋酸酯酶及吉姆萨－瑞氏染色、电镜观察、流式细胞仪证实其分化方向，并用Western blot方法检测K562细胞分化前后HSP70、HSP90的表达变化。结果 成功地复制了这一模型，并检测到HSP70、HSP90蛋白在K562细胞向巨噬细胞样分化后表达增高。结论 HSP70、HSP90可能在K562细胞向巨噬细胞样分化过程中有重要作用。     

新城疫病毒感染体外诱导胃癌细胞热休克蛋白70的表达及意义

目的 :观察NDV在体外抗胃癌细胞活性 ,研究NDV感染诱导胃癌细胞热休克蛋白 70 (HSP70 )的表达及其意义。方法 :应用倒置显微镜观察细胞形态 ,MTT法测细胞生长抑制状况 ,血凝试验检测NDV在细胞中的增殖状况 ,免疫组化染色观察细胞中HSP70表达情况 ,流式细胞术检测胃癌细胞HSP70的表达。结果 :NDV在体外可使BGC 82 3胃癌细胞形成明显的细胞病变效应及生长抑制作用 ,且这种抑制作用与肿瘤细胞被NDV感染后HSP70表达增加呈正相关。结论 :NDV的抗BGC 82 3胃癌细胞活性显著 ,其杀伤机制之一为通过感染而诱导BGC 82 3产生过多的HSP70。     

Inhibition of Nucleolar Function and Morphological Change by Adriamycin Associated with Heat Shock Protein 70 Accumulation

Adriamycin (ADR) has been considered to target mainly DNA metabolism in the nucleus. Recently, we observed the nuclear translocation of heat shock protein 70 (HSP70) after ADR treatment. We examined which intranuclear changes might be related to this alteration of HSP70 localization. We found considerable alternations in the nucleolar morphology and function in ADR-treated tumor cells, i.e., a ring-shaped segregation of granular components of almost all nucleoli and a dramatic reduction of nucleolar 45S ribosomal precursor RNA biosynthesis in HeLa cells exposed to 100 μ M ADR for 2 h. Concomitantly with these changes, HSP70 was concentrated into the nucleoli, as in the case of heat shock treatment. These results indicate a novel anticancer effect of ADR via the suppression of cellular protein biosynthesis, in addition to its effect on DNA.     

大肠癌组织中HSP70 和p53 蛋白的表达及其意义

 目的 探讨大肠癌组织中HSP70和p53蛋白的表达特点及其相互间关系。方法 运用SP法结合图像分析，探讨HSP70和p53蛋白在大肠癌组织、癌旁组织及正常组织中的表达。结果 在31例大肠癌、癌旁、正常组织标本中，HSP70表达的平均光密度值分别为：0．5917±0．0678、0．3363±0．0485、0．1742±0．0193；癌组织中HSP70的表达水平显著升高，与癌旁、正常组织中的表达比较差异有统计学意义（P〈0．01）。p53蛋白表达的平均光密度值分别为：0．7547±0.2732、0．5388±0.1542、0．3770±0．0682；癌组织中p53蛋白的表达水平显著升高．与癌旁、正常组织中的表达比较差异有统计学意义（P〈0．01）。HSP70和p53在大肠癌组织中的表达存在依从关系（P〈0.01），二者呈直线相关，相关系数r为0．795。结论 HSP70和p53蛋白在大肠癌组织中高表达，提示二者在大肠癌的发生发展中起一定的作用，是细胞恶变的指标之一；他们在大肠癌的发生发展中具有协同作用，或者在大肠癌组织中可能存在着HSP70-p53蛋白的复合物形式。