人胃癌细胞株和胃癌组织中XAF1基因表达缺失机制的研究

背景：X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）相关因子1（XAF1）是新发现的肿瘤抑制因子，其在多种肿瘤细胞株中表达降低或缺失。目的：探讨XAF1在人胃癌细胞株和胃癌组织标本中表达缺失的机制及其潜在临床意义。方法：收集46例原发性胃癌手术切除石蜡包埋组织标本和30例非肿瘤患者内镜活检胃黏膜标本，提取基因组DNA。采用逆转录聚合酶链反应（RT．PCR）和蛋白质印迹法检测人胃癌细胞株BGC-823和AGS中XAF1mRNA和蛋白水平的表达。采用重亚硫酸盐修饰的基因组DNA序列PCR（BS．PCR）检测胃癌细胞株中XAF1启动子区域CpG位点的甲基化状态：采用甲基化特异性（MS）-PCR和非甲基化特异性（US）-PCR检测胃组织标本中相同区域的甲基化状态。结果：XAF1在BGC-823和AGS细胞中低表达，同时伴有异常DNA高甲基化；经5-氮-2’-脱氧胞苷（5-Aza—CdR）处理48h后．XAF1表达显著增强。胃组织标本中，XAF1甲基化阳性率在癌组织中为78_3％（36／46），癌旁组织中为65．2％（30／46），癌远端切缘正常组织中为28_3％（13／46），差异有统计学意义（P〈0．05）；癌组织与癌远端切缘正常组织比较，XAF1甲基化阳性率差异有统计学意义（P〈0．01）；非肿瘤胃黏膜XAF1甲基化阳性率仅为6．7％（2／30），较癌远端切缘正常组织明显降低，但差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：XAF1基因组DNA异常高甲基化是人胃癌组织中XAF1表达缺失的重要原因之-。XAF1高甲基化检测可作为-个潜在的胃癌早期诊断指标。     

人胃癌,肝癌的c—myc癌基因甲基化的研究

目的：了解人胃癌和肝癌相关癌基因的甲基化情况。材料与方法：将22例进展期胃癌的癌区、癌旁和外周正常区组织和33例原发性肝癌的癌区、癌旁区及10例正常肝组织的DNA，以限制性内切酶Hpall／Mspl消化、Southernblot分析其c－myc癌基因片段的甲基化情况。结果：发现47％（10／22）的胃癌区、59％（13／22）的胃癌旁和30％（10／33）的肝癌区、13％（4／33）的肝癌旁组织的c－myc癌基因呈低甲基化状态。结论：在消化系常见的恶性肿瘤的发生中，某些癌基因甲基化水平降低。     

人原发性肝细胞癌中总基因组DNA甲基化变化的研究

目的：研究原发性肝细胞癌组织中总基因组DNA甲基化水平及其与病理学及生物学行为的关系。方法：以甲基化酶温育3H-腺苷甲硫氨酸掺入、液闪计数法分析33例中晚期肝癌手术标本的癌灶和癌旁组织细胞内总基因组DNA甲基化水乎，并以10例正常肝组织作对照比较。结果：肝癌灶内的DNA甲基化水平显著低于癌旁组织（P＜0．05）和正常对照肝组织（P＜0．01），其甲基化水平降低程度与肿瘤的大体形态（多发性或单灶性．结节型或区块型）有关，而与组织学改变（Edmondson分级）、门脉癌栓有否及血清AFP水平无明显关系。结论：人原发性肝细胞癌组织中DNA的甲基化水平有显著降低，值得进一步研究肝细胞癌组织个别癌基因片段甲基化及mRNA表达状况。     

胃癌组织Runx3基因甲基化的检测及意义

目的探讨胃癌组织中Runx3基因甲基化情况及其意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR技术（MSP）对35例胃癌患者手术切除的肿瘤组织及癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用RT—PCR检测Runx3mRNA的表达。结果胃癌及癌旁组织Runx3基因的甲基化发生率分别为40．0％和8．5％;胃癌组织Runx3mRNA表达较癌旁正常组织下调（P〈0．05）;Runx3mRNA的表达与胃癌分化程度及淋巴结转移有关。结论Runx3基因甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关。     

SIRT1在胃癌组织、细胞中的表达及意义

目的观察SIRTl在胃癌组织及胃癌细胞中的表达情况,探讨SIRTl同胃癌临床病理特征之间的关系。方法应用Real．timePCR方法检测SIRTlmRNA在21例新鲜胃癌及癌旁组织中的表达情况;应用Westernblot和Real．timePCR方法在蛋白和mRNA水平检测SIRT1在胃癌、胃黏膜上皮细胞中的表达;应用免疫组织化学染色法检测130例胃癌组织及癌旁正常组织中SIRT1蛋白的表达,分析SIRTl蛋白表达与胃癌临床病理特征的关系。结果SIRTImRNA在新鲜胃癌组织中较正常癌旁组织表达增高（P〈0．05）,SIRT1mRNA及蛋白在胃癌细胞中均比正常胃黏膜上皮细胞中表达增高（P均〈0．05）。免疫组化染色结果表明,SIRTl蛋白在胃癌组织中较正常癌旁组织表达增高（P〈0．05）。SIRT1蛋白表达水平同胃癌患者的年龄及肿瘤浸润深度、淋巴结转移、TNM分期、大小有关（P均〈0．05）,同生存时间呈负相关（r=-0．5023,P〈0．05）。结论SIRT1在胃癌组织和胃癌细胞中呈高表达,其在胃癌发生中充当癌基因的角色。     

组织芯片检测胃腺癌上皮细胞钙黏蛋白和β-连环蛋白的表达及其临床意义

背景：近年来组织芯片已越来越多地应用于恶性肿瘤的相关研究．但用于胃癌研究的报道较少。目的：研究胃腺癌、癌旁组织和外周正常黏膜组织中上皮细胞钙黏蛋白（E—cadherin）和β-连环蛋白（β—catenin）的表达及其临床意义。方法：取102例胃腺癌、97例癌旁组织和98例外周正常黏膜组织分别制成282点、156点和156点三块组织芯片，以免疫组化方法检测组织芯片中E—cadherin和β—catenin的表达。结果：胃腺癌组织中E—cadherin和β—catenin的表达异常率（84．0％和76．0％）显著高于癌旁组织（2613％和23．2％）和外周正常黏膜组织（6．2％和7.3％）（P=0．000，P=-0．000）。E—cadherin和β—catenin表达异常与胃腺癌分化程度（P=0．004，P=0．020）和浸润深度（P=0．033，P=0．024）有关，与其他临床病理参数无关。结论：胃腺癌组织中E—cadherin和β—catenin异常表达可能是胃腺癌发生的早期事件，与胃腺癌的分化程度和侵袭能力密切相关。检测E—cadherin和β-catenin的表达可能是判断胃腺癌分化程度和浸润深度的客观指标。     

胃癌组织中CTGF蛋白表达及其临床意义

目的探讨结缔组织生长因子（CTGF）蛋自在胃癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化法检测10份正常胃黏膜组织、50份胃癌组织及其癌旁组织中CTGF蛋白表达情况。结果胃癌组织中CTGF阳性表达高于癌旁组织及正常胃黏膜组织,P〈0．05;癌组织CTGF阳性表达率明显高于正常黏膜组织（P〈0．01）,CTGF的高表达与胃癌分化程度、淋巴结转移密切相关（P均〈0．05）;与肿瘤浸润的深度无明显关系。结论CTGF蛋白可作为胃癌前病变及胃癌早期诊断和预后判断的指标。     

抑癌基因PTEN在胃癌中的表达及其临床意义

应用免疫组织化学SP法检测68例胃癌组织及33例癌旁正常组织中张力蛋白同源物基因（PTEN）蛋白的表达水平。结果癌旁正常组织中第10号染色体缺失的磷酸酶和PTEN蛋白阳性表达率为100％，胃癌中PTEN表达阳性率为61．8％；PTEN表达与胃癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移和临床分期关系密切（P〈0．01，〈0．05），与患者年龄、肿瘤部位无关（P〉0．05）。PTEN异常表达可为胃癌诊断和判断其生物学特性提供可靠的指标。     

蛋白激酶B在胃癌中的表达及其生物学意义

目的研究丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶（Akt）在胃癌中的表达、活化情况及其与血管内皮生长因子C（VEGF—C）的关系，以初探Akt表达和活化的生物学意义及其可能的机制。方法采用RT—PCR法检测20例新鲜胃癌及癌旁正常组织标本中Akt1、Akt2和Akt3 mRNA的表达；Western印迹法检测Akt和磷酸化Akt（pAkt）蛋白的表达；免疫组化检测pAkt蛋白和VEGF-C在55例胃癌配对组织中的原位表达。结果20例胃癌及相应癌旁正常组织中Akt1、2、3mRNA的表达阳性率皆为100％，且三者在癌和正常组织中的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。Western印迹显示Akt蛋白在胃癌组织中的表达水平为正常组织的2．7倍（P〈0．001），而pAkt蛋白的表达水平为癌旁正常组织的4．1倍（P％0．01）。免疫组化分析表明，pAkt表达于67．3％（37／55）的胃癌组织，且较高表达于组织分化较差（X^2=9．751，P％0．01）和TNM分期较晚（X^2=7．684，P〈0．05）者；VEGF—C在胃癌组织中的表达阳性率为61．8％（34／55），其表达与肿瘤的TNM分期（X^2=9．298，P〈0．01）及淋巴结转移（X^2=7．605，P〈0．05）密切相关，统计分析表明，pAkt与VEGF—C的表达呈显著性正相关（Pearson r=0．524，P〈0．05，Spearman，rho=0．747，P〈0．01）。结论Akt及pAkt蛋白特异性过表达于胃癌组织，可能是蛋白翻译水平和（或）代谢水平改变的结果。Akt蛋白的磷酸化可能促进胃癌细胞的恶性转化和淋巴结转移，VEGFC可能在其中发挥重要的介导作用。     

组织芯片检测β-连环蛋白、c-erbB2在胃腺癌中的表达及其临床意义

近年来组织芯片已越来越多地应用于恶性肿瘤的相关研究,但用于胃癌研究的报道较少。目的：探讨胃腺癌、癌旁组织和外周正常黏膜组织中β-连环蛋白和c—erbB2的表达及其临床意义。方法：取102例胃腺癌、97例癌旁组织和98例外周正常黏膜组织分别制成含282点、156点和156点的3块组织芯片。以免疫组化法检测组织芯片中β-连环蛋白和c—erbB2的表达,并分析其与胃腺癌临床病理特征的关系。结果：胃腺癌组织中β-连环蛋白和c—erbB2阳性表达率显著高于癌旁组织和外周正常黏膜组织（57．0％对22．1％和7．3％,P=0．000;29．0％对5．3％和0％,P=0．000）。β-连环蛋白和c-erbB2异常表达与胃腺癌的分化程度（P=0．027,P=0．001）和浸润深度（P=0．033,P=0．011）有关,与其他临床病理特征无关。胃腺癌中β-连环蛋白表达与c—erbB2表达呈明显正相关（P〈0．05）。结论：c-erbB2异常表达可能导致靶基因β-连环蛋白异常表达,从而在胃腺癌的发生、发展中起重要作用。     

alkB基因在胃癌和萎缩性胃炎黏膜组织中的表达改变

背景:DNA或RNA分子异常甲基化导致的抑癌基因沉默、突变或其他功能性障碍是胃癌发生的关键机制之一。最近研究发现alkB基因产物具有修复DNA和mRNA碱基异常甲基化、纠正基因突变、复制转录障碍等功能,但对其在胃癌及其癌前病变组织中的表达情况尚不了解。目的:探讨alkB基因在胃癌及其癌前病变组织中的表达改变。方法:收集11例胃癌、癌旁和远离癌灶正常黏膜组织以及107例慢性萎缩性胃炎和121例非萎缩性胃炎患者的内镜活检黏膜,应用基因表达谱芯片实验评估alkB基因在各组织中的表达。以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检验上述结果。结果:与远离癌灶正常黏膜组织相比,alkB基因在胃癌中的表达降低(Ratio值为0.208);与非萎缩性胃炎黏膜组织相比,alkB基因在萎缩性胃炎黏膜组织中的表达降低(Ratio值为0.378);而alkB基因在癌旁和远离癌灶正常黏膜组织中的表达无显著差异(Ratio值为0.726)。结论:alkB基因在胃癌和萎缩性胃炎黏膜组织中的表达下调,可能参与了胃癌发生过程中基因甲基化紊乱的机制。alkB基因是有潜在研究价值的分子靶标。     

胃癌组织中肿瘤相关基因甲基化及其表达与叶酸和代谢酶MTHFR基因多态性的关系

目的:探讨人胃癌组织中癌基c-myc,抑癌基因p16INK4A,p21WAF1,错配修复基NhMLH1和hM2SH2的甲基化状态及其表达与叶酸、MTHFR基因多态性的关系．方法:胃癌38例手术切除标本的癌区、癌旁和外周正常黏膜组织,运用FOL ACS:180自动化学发光系统测定叶酸含量,PCR-RFLP技术检测MTHFR基因677(C→T)和1298(A→C)两个常见多态,并分别以Real—time RT-PCR和甲基化特异性PCR (MSP)技术检测肿瘤相关基因的表达和甲基化状态．结果:c-myc表达升高,p16INK4A,hMLH1和hMSH2表达降低的胃癌黏膜组织其基因启动子区异常甲基化．p21WAF1,hMSH2表达降低, p16INK4A高甲基化者叶酸水平明显降低,c-myc低甲基化和表达升高者中均存在低叶酸水平．MTHFR 677CC基因型的胃癌黏膜组织p16INK4A甲基化升高且表达降低,而其余肿瘤相关基因的甲基化及其表达与MTHFR两个常见多态均无明显相关性．结论:DNA甲基化在胃癌的发生、发展中具有重要作用,叶酸水平和MTHFR基因多态性通过影响部分肿瘤相关基因的甲基化状态而调控其表达．     

胃癌和癌旁组织中hMSH2和p27蛋白的表达及其意义

背景:错配修复(MMR)基因是保证DNA复制高保真度的重要基因,与消化道肿瘤的发生密切相关。抑癌基因p27可阻止细胞周期G1/S期转换,p27表达下调在肿瘤的进展、转移过程中起有一定作用。目的:探讨MMR基因hMSH2和p27在胃癌和癌旁组织中的表达及其意义。方法:以免疫组化方法检测93例胃癌患者癌组织和癌旁组织中hMSH2和p27蛋白的表达。结果:胃癌组织中hMSH2蛋白的阳性表达率为65.6%,显著高于癌旁组织的38.7%(P<0.01);p27蛋白的阳性表达率为46.2%,显著低于癌旁组织的80.6%(P<0.01)。胃癌组织中hMSH2蛋白的表达与肿瘤临床病理特征无相关性;p27蛋白的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期相关。hMSH2和p27蛋白在胃癌组织中的表达呈负相关。结论:MMR基因hMSH2表达异常和抑癌基因p27表达下调可能与胃癌的发生有关。     

Folate levels in mucosal tissue but not methylenetetrahydrofolate reductase polymorphisms are associated with gastric carcinogenesis

INTRODUCTION Methylation of gene regulatory elements is a well-documented epigenetic change that can lead to gene inactivation. Human gastric carcinogenesis is suggested to be associated with the decrease of total genomic DNA methylation, hypomethylation …     

人胃癌组织DNA甲基化酶、去甲基化酶与肿瘤相关基因的表达

目的 探讨胃癌组织中甲基化酶、去甲基化酶基因与肿瘤相关癌基因和抑癌基因的关系。方法 取28例胃癌手术标本的癌区、癌旁、正常组织，分别以RT—PCR法和定量RT—PCR法检测DNA甲基化酶1(DNMT1)、去甲基化酶mbd2、甲基化结合蛋白MeDP2和p16^INK4A、c—myc等基因的转录水平，以相关分析等统计学处理研究各基因表达之间及分别与病理组织学之间的关系。结果 癌组织平均DNMT1和mbd2 mRNA分别明显高于和低于正常组织。胃癌组织中c—myc的表达增强，而MeCP2和p16^INK4A无明显变化。在正常组织中，MeCP2与mbd2，p16^INK4A与MeCP2、mbd2，c—myc与MeCP2的转录水平表现出一定的相关性，而当肿瘤发生后仅发现c—myc与mbd2的表达呈负相关。以上各基因与肿瘤生物学行为均无相关性。结论 肿瘤相关基因mRNA的表达与甲基化酶DNMT1无关，而与甲基结合蛋白有关。