亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞株恶性转化的影响

BACKGROUND: Studies have found that sodium arsenite can cause the malignant transformation and tumorigenicity of HaCaT cells, but whether low concentrations of sodium arsenite can cause the malignant transformation is rarely reported. OBJECTIVE: To study the effect of sodium arsenite on the malignant transformation of human immortalized keratinocyte cell lines. METHODS: HaCaT cells were treated with different concentrations of sodium arsenite. MTT assay was used to determine the effect of sodium arsenite on HaCaT cell morphology and proliferation, flow cytometry used to detect the effect of sodium arsenite on HaCaT cell cycle, and soft agar colony formation experiments assay used to determine the effect of sodium arsenite on HaCaT cell colony formation capacity. RESULTS AND CONCLUSION: HaCaT cells grew well when the concentration of sodium arsenite was 5 mol/L, but the cell growth was inhibited under intervention with 10 and 50 mol/L sodium arsenite. HaCaT cells treated with 0.1 mol/L sodium arsenite were passaged to the 20th generation, and cell morphology had no notable changes; cells at passage 25 exhibited enlarged size and multiple nucleoli, which had a continued proliferation trend. Compared with the primarily cultured cells, 0.1 mol/L sodium arsenite-treated HaCaT cells at passages 15 and 25 had an increased proportion at S phase and G2/M phase, with strengthened proliferation ability and increased colony-forming efficiency, and moreover, the proliferation ability and colony-forming efficiency of passage 25 cells were higher than those of passage 15 cells. These experimental data show that high concentrations of sodium arsenite reduce HaCaT cell viability, and low concentrations of sodium sulfite have a certain influence on the morphology, cell cycle, proliferation ability and colony-forming efficiency of HaCaT cells, and moreover, the proliferation ability and colony-forming efficiency of human immortalized keratinocytes will be strengthened with the increase of passage.      

角质形成细胞的分离培养和临床应用

角质形成细胞在修复各种原因造成的皮肤缺损创面方面有着广泛的应用前景，各国学者对角质形成细胞的各方面进行了深入的研究。就其分离、培养和临床应用等方面作一综述。     

角质形成细胞的分离培养和临床应用

角质形成细胞在修复各种原因造成的皮肤缺损创面方面有着广泛的应用前景,各国学者对角质形成细胞的各方面进行了深入的研究。就其分离、培养和临床应用等方面作一综述。     

角质形成细胞对红毛癣菌生长的体外抑制作用

目的探讨角质形成细胞在体外对红毛癣菌的抑制作用。方法将红毛癣菌菌株分为实验组(红毛癣菌+HaCaT细胞共孵育)和对照组(单纯红毛癣菌),菌落计数法计算真菌生长抑制率、Keratin-azure法测量角蛋白酶活性、扫描电镜观察真菌形态。结果细胞和真菌共孵育比例1∶1、2∶1和4∶1时,菌落计数法测得菌生长抑制率分别为(19.6±7.2)%、(54.5±2.6)%和(66.6±1.5)%;细胞和真菌共孵育12 h、24 h,菌落计数法测得菌生长抑制率分别为(31.6±7.0)%和(70.9±5.2)%。角质形成细胞与真菌合适孵育浓度比例为角质形成细胞:红毛癣菌=4∶1,细胞与红毛癣菌合适共孵育时间为24 h,实验组真菌角蛋白酶活性明显下降,扫描电镜显示实验组菌丝出现损伤。结论角质形成细胞在体外能抑制红毛癣菌的生长并能引起真菌损伤。     

纳米二氧化硅对人角质形成细胞超微结构的影响

目的:观察纳米二氧化硅(SiO2)颗粒对人角质形成细胞(HaCaT)的影响.方法:将不同浓度的纳米SiO2悬液加入培养的HaCaT细胞中,在37℃,5%CO2的细胞培养箱中共同孵育4h,收集细胞制样,在透射电镜下观察细胞超微结构的改变.结果:纳米SiO2粒径为40～50nm,在不同浓度下均能进入细胞并对细胞器造成影响,影响的严重程度与纳米SiO2颗粒的浓度呈正相关.结论:纳米颗粒可以通过吞噬作用和直接穿膜两种方式进入细胞,通过其表面能和离子效应影响细胞的超微结构.     

不同基底硬度对人肝癌细胞黏附、铺展和迁移的影响

目的研究不同基底硬度对肝癌细胞黏附、铺展和迁移行为的影响及对细胞骨架装配方式和细胞表面黏附蛋白整合素β1表达的调控,探讨基底的力学特性在肝癌细胞恶性转移过程中的作用。方法通过调节丙聚酰胺和双丙烯酰胺的比率制备不同硬度的聚丙烯酰胺基底,并在基底表面裱衬2.5μg/mL纤维连接蛋白为细胞提供黏附位点;用显微观察并记录不同硬度基底上细胞黏附、铺展和迁移的变化,并用Image J软件定量分析;分别运用免疫荧光和流式细胞仪的方法检测不同基底硬度对肝癌细胞骨架装配和细胞表面整合素β1表达的影响。结果硬基底利于肝癌细胞的黏附和铺展并缩短细胞的铺展时间。过软(1.1 kPa)或过硬(玻璃)的基底都不利于肝癌细胞的迁移,肝癌细胞在中间硬度的基底上(10.7 kPa)迁移速率最高。硬基底促进细胞骨架的装配和整合素β1表达。结论基底硬度通过调节细胞骨架装配和整合素的表达从而影响肝癌细胞的黏附、铺展和迁移。     

核因子E2相关因子2对人永生化角质形成细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)对过氧化氢(H2O2)诱导的人永生化角质形成细胞(HaCaT)氧化损伤的保护作用.方法 用慢病毒转染方式使HaCaT过表达Nrf2(Nrf2/HaCaT),并用MTT法和抗Ki67免疫荧光染色法检测其增殖活性.实验分为Nrf2/HaCaT组和HaCaT组,每组5个样本.应用20...     

成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的原代培养及其与乳鼠角质形成细胞的对比性研究

目的:探索成年小鼠背部皮肤角质形成细胞有效且高生长率的原代培养方法;对比乳鼠和成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的增殖、集落形成效率与凋亡能力。方法:取正常成年小鼠背部皮肤,分别利用4种方法分离其表皮与真皮,取表皮分离培养角质形成细胞;免疫荧光进行细胞鉴定;调整种板密度、种板方式观察细胞生长状况;利用CCK-8、EdU、结晶紫染色法和TUNEL染色检测乳鼠与成年小鼠背部皮肤角质形成细胞的增殖、集落形成效率与凋亡情况。结果:4种成年小鼠表皮-真皮分离方式中,二步消化法获得的细胞量最大、细胞增殖能力最强、集落形成效率高;水滴状种板法较普通平铺种板法集落形成率高;乳鼠角质形成细胞最适种板密度约为3. 2×10⁴/cm²,成年小鼠背部皮肤角质形成细胞最适种板密度约为1. 6×10⁴/cm²;与成年小鼠背部皮肤角质形成细胞相比,乳鼠角质形成细胞增殖能力较强、集落形成效率较高。结论:成功建立了较为完善的成年小鼠背部皮肤角质形成细胞原代培养体系。     

表皮细胞生长因子对角质形成细胞体外增殖作用的研究

目的：观察重组人表皮生长因（Recombinant human epidermal growth factor,rhEGF）对人角质形成细胞的细胞周期以及促切口愈合作用。方法：运用包皮环切术后收集培养角质细胞,不同浓度的重组人表皮细胞生长因子处理细胞,MTT法、↑3HtdR掺入法测细胞生长率;流式细胞仪检测细胞周期。结果：体外实验表明5～100ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子可促进人角质形成细胞生长,其中浓度为10ng·ml^-1促进细胞生长作用最为显著。流式细胞仪检测10ng·ml^-1重组人表皮细胞生长因子处理后细胞增殖明显,S和G2／M期细胞数明显增加。结论：重组人表皮细胞生长因子可促进细胞生长。     

二氧化钛纳米颗粒对人角质形成细胞超微结构的影响及毒性效应

目的:观察无机二氧化钛(TiO2,20～35 nm)纳米颗粒进入人角质形成细胞(HaCaT)后的超微结构变化及毒性效应的影响.方法:将TiO2纳米颗粒与HaCaT细胞共孵育4 h后,收集细胞.采用透射电镜观察TiO2纳米颗粒引起细胞超微结构,变化及在细胞内的分布;采用激光共聚焦扫描显微镜观察TiO2纳米颗粒进入细胞后引起的细胞凋亡和坏死;采用噻唑蓝比色法测定TiO2纳米颗粒对细胞存活的影响.结果:TiO2纳米颗粒通过吞噬方式进入细胞.实验组里TiO2纳米颗粒呈簇状存在于HaCaT细胞内,并使细胞有较大损伤;细胞质有溶解现象,内质网肿胀,线粒体嵴结构紊乱,并肿胀崩解;核周间隙扩大、核固缩.结论:TiO2纳米颗粒具有的毒性效应能够损伤HaCaT细胞超微结构并且抑制细胞的生长.     

周期性张应变作用下成骨细胞凋亡的体外研究

目的 研究机械周期性张应变对体外培养的成骨细胞凋亡的作用及其与细胞增殖和细胞分化之间的关系。方法 酶消化法分离培养新生SD大鼠颅顶骨成骨细胞,P2-P4代成骨细胞培养2d和4d后,用无血清培养法诱导成骨细胞凋亡,同时使用Flexcell 4000TM加力系统分别对细胞施加72h变形率为6%和13.6%的等轴循环牵张力。根据总培养时间分为5d和7d两组。运用流式细胞技术对成骨细胞凋亡水平进行检测,同时作细胞记数及碱性磷酸酶（ALP）蛋白含量检测。结果 与不加力的对照组相比,6%牵张力下5d组成骨细胞凋亡率下降了45%,成骨细胞数量增加了34%。在13.6%牵张力下7d组成骨细胞凋亡率增加了192%,细胞数量下降了64%。ALP活性在两种力值大小的牵张力刺激下均有下降。结论 周期性张应变对成骨细胞的凋亡有影响,不同力值大小的牵张力可通过促进或抑制细胞凋亡的方式调控成骨细胞的活性。     

肿瘤细胞癌胚抗原的细胞粘附活性研究

本实验对肿瘤细胞系的癌胚抗原(CEA)细胞粘附活性进行了研究。CEA 阳性肿瘤细胞系 LoVo及 HeLa 的单细胞悬液在37℃,RPMI1640全培养基中可以相互粘附而各自形成大小不等的细胞凝团。这种细胞间的粘附不仅可以被抗 CEA 多克隆抗体特异性阻断,而且受到外加 CEA 抗原的竞争抑制。细胞粘附试验也获得了同样结果。实验提示,CEA 为一粘附分子。     

周期性机械拉伸对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的探讨周期性机械拉伸对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLSs)增殖能力的影响。方法实验组细胞在周期性机械拉伸频率为1.0 Hz、拉伸幅度为3%、6%和9%的条件下,分别对RA-FLSs加载2、6和12 h。对照组细胞在保持与实验组培养条件一致的情况下不进行拉伸刺激。机械拉伸后,用流式细胞术和MTS检测细胞的增殖和活性。RT-PCR检测加载后细胞周期调控因子(CyclinD1、CyclinE1、CDK2、P27)在基因水平上的表达变化。结果 6%和9%的拉伸刺激持续作用6、12 h使RA-FLSs增殖和活性显著降低(P<0.05),同时CDK2和CyclinE1的mRNA表达降低,P27 mRNA的表达增高(P<0.05),周期性机械拉伸对CyclinD1表达的影响相对较小。结论周期性机械拉伸对RA-FLSs增殖能力的影响与拉伸强度以及持续的时间有关,6%和9%的机械拉伸刺激可以抑制RA-FLSs的增殖,而这种增殖抑制作用可能是通过调控CyclinE1,CDK2和P27的表达来实现的。本研究对于探讨力学刺激在类风湿性关节炎的发病机制以及临床防治中的作用具有一定意义。     

小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响

目的：研究小檗碱对高转移性人巨细胞肺癌PG细胞黏附特性的影响，以探讨其抑制肿瘤侵袭转移的可能机制。方法：小檗碱（5、10μg／m1）处理PG细胞24小时，采用MTF法观察PC细胞与PG细胞的黏附（同质黏附），PG细胞与细胞外基质（FN和Martrigel）的黏附；用虎红染色法观察PG细胞与人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的黏附。通过SABC免疫细胞化学法及图像分析软件，半定量PG细胞E—cadherin、CD44的表达；RT—PCR法检测PG细胞E-cadherinmRNA和CD44mRNA的表达。结果：小檗碱（10μg/ml）可促进PG细胞的同质黏附（P〈0．05）；小檗碱（5、10μg／ml）可抑制PG细胞与FN和Martrigel的黏附（P〈0．01），并可抑制PG细胞与HUVEC的黏附（P〈0．05．P〈0．01）。经小檗碱（10μg／ml）作用的PG细胞，E-cadherinm及其mRNA表达明显增高（P〈0．01），而CD44及其mRNA的表达明显减少（P〈0．05）。结论：小檗碱通过促进PG细胞E—cadherin的表达而促进PG细胞间的同质黏附，抑制PG细胞CD44的表达而抑制其与细胞外基质及血管内皮细胞的黏附，这可能是小檗碱抗肿瘤转移的机制之一。     

The mechanical response of active human muscle during and after stretch

Summary Five subjects contracted forearm supinator muscles which were stretched after development of maximal isometric torque. The ratio of torque at the end of stretch over isometric torque at that position was calculated as excess torque. Excess torque increased with stretch velocity and decreased with stretch amplitude, and it was not dependent upon final muscle length. The rate of decay of torque following stretch could not be shown to depend upon stretch variables.The absence of significant changes in myoelectric activity suggested that with high initial forces, reflex activity did not account for the observed changes. Time-constants of decay (0.15 s to 1.8 s) were much greater than time-constants of rise (approx. 0.07 s) of isometric torque at the same muscle length. This indicates that interaction of series elastic and contractile elements is not the sole cause of prolonged torque following stretch. It is concluded that stretch temporarily enhances the intrinsic contractile properties of a group of human muscles in a manner similar to, but quantitatively different from that seen in isolated muscle preparations.     

一种新型机械应变细胞加载装置的研制

目的研究开发一套具有自主知识产权的数控机械应变细胞加载装置,为细胞力学研究提供必要的研究手段。方法加载装置基于圆形基底形变技术,采用数字式测控系统和基于PC机平台的专用软件,实现对体外培养细胞加载牵张应变。采用MTT比色实验检测人牙周膜细胞在弹性硅橡胶细胞培养膜上的附着生长能力。采用该装置对体外培养人牙周膜细胞加载1%、10%、20%拉伸应变0.5、1和24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态、排列的变化。结果数控机械应变细胞加载装置可对体外培养细胞加载不同强度、频率和时间的拉伸应变,具有输出应变范围大、精度高、操作方便、显示直观等优点。硅橡胶膜和对照细胞培养板接种细胞1、2、4、7、8 d后,MTT比色实验光吸收值之间无统计学差异(P>0.05),显示弹性硅橡胶膜具有良好的细胞附着生长能力。人牙周膜细胞加载10%、20%拉伸应变24 h后,细胞形态、排列发生改变,胞体呈长梭形,并成栅栏状平行排列,细胞长轴垂直于拉伸应变方向。结论数控机械应变细胞加载装置可有效地对体外培养细胞加载动态机械拉伸应变,为体外细胞力学研究提供了必要的研究手段。     

An equilibrium model of endothelial cell adhesion via integrin-dependent and integrin-independent ligands

Endothelial cell adhesion can be enhanced by supplementing integrin-mediated adhesion via fibronectin with the high-affinity avidin-biotin system in which biotin is covalently linked to membrane proteins and avidin binds to biotinylated surfaces (Bhat et al. J Biomed Mater Res 1998;41:377-85). An equilibrium model was extended to explain detachment of spreading cells following exposure to flow for this two ligand system. The two different receptor-ligand systems were treated as springs in parallel in which the equilibrium dissociation constant was a function of the separation distance of the cell from the surface. Flow experiments were performed to measure the endothelial cell adhesion strength as a function of the extent of biotinylation of the endothelium. Surfaces contained adsorbed fibronectin, avidin or both ligands. The contact area between the cell membrane and substrate was measured using total internal reflection fluorescence microscopy. Estimates of the unstressed dissociation constant for fibronectin and avidin were determined from data for adhesion strength and contact area of each ligand separately. Using these unstressed equilibrium constants, the model predicted, with reasonable accuracy, the strength of endothelial cell adhesion to surfaces containing fibronectin and avidin. The results indicate that as the extent of biotinylation increases, the avidin-biotin system contributes a larger fraction of the total adhesion strength but the maximum contribution of the avidin-biotin system is less than 50%. The magnitude of the affinity constant and force per bond for the avidin-biotin system are consistent with detachment by extraction of receptors from the cell. The resulting increase in the adhesion strength on surfaces with both avidin-biotin and fibronectin is due to the increase in contact area and the larger number of bonds formed.     

周期性机械牵张刺激对C_2C_(12)小鼠成肌细胞增殖和有氧代谢能力的影响

目的探讨不同频率牵张刺激对C_2C_(12)小鼠成肌细胞增殖及细胞有氧代谢能力的影响。方法采用Flexercell细胞应力加载装置对体外培养的C_2C_(12)成肌细胞分别加载1、2 Hz不同频率的牵张刺激,牵张幅度为15%,牵张时长为2 h/d,连续进行4 d。以静置培养的C_2C_(12)成肌细胞作为对照组。实验期间通过倒置相差显微镜观察细胞生长状态,利用CCK-8试剂盒测定细胞增殖情况。实验结束后,分别收取各组细胞,经胰酶消化处理,然后利用荧光探针,通过能量代谢设备检测细胞耗氧量比率。结果细胞经机械牵张刺激后,显微镜下细胞形态为典型的长梭形,排列呈现一定方向性,与牵张刺激方向平行,生长状况良好;与对照组细胞相比,1、2 Hz频率牵张刺激均可显著促进细胞增殖(P0.05),且在第3、4 d,1 Hz实验组的增殖情况优于2 Hz实验组;实验组与对照组细胞耗氧量比率均有增加,但各组之间并无显著差异(P0.05)。结论周期性机械牵张刺激能有效促进C_2C_(12)小鼠成肌细胞增殖,且与牵张刺激的频率有关,其中1 Hz的牵张频率最佳,但牵张刺激对C_2C_(12)小鼠成肌细胞的有氧代谢能力无明显影响。     

癌胚抗原细胞粘附作用的机理研究

已经证实癌胚抗原(CEA)为一粘附蛋白.本实验用 CEA 阳性细胞系 LoVo 细胞对 CEA 参与的细胞粘附机理进行了初步研究.电镜观察发现,LoVo 细胞通过细胞表面的微绒毛交叉接触而发生粘附,并可见桥粒及间隙连接形成.温度、NaN3、EDTA 二钠及细胞松驰素 B 均可明显抑制细胞间的相互粘附,表明 CEA 参与的细胞粘附过程是一个二价正离子参与的耗能过程,与细胞内微丝运动密切相关.文中还提出了 CEA 参与的细胞粘附作用的模式图.