肠淋巴再灌注加剧SMAO休克多器官损伤的作用机制

目的： 探讨肠淋巴再灌注（MLR）加剧肠系膜上动脉闭塞性（SMAO）休克大鼠多器官损伤的作用机制。方法: Wistar雄性大鼠均分为4组：sham组,仅麻醉与手术;MLR组,夹闭肠系膜淋巴管（ML）1 h,再灌注2 h;SMAO组,夹闭肠系膜上动脉（SMA）1 h,再灌注2 h;MLR+SMAO：夹闭ML和SMA1 h,再灌注2 h。制备肝、肾、心、肺组织匀浆,检测自由基、一氧化氮（NO）、髓过氧化物酶（MPO）、细胞膜泵活性。结果: SMAO组及MLR+SMAO组多个器官组织匀浆的MDA、NO含量及NOS、MPO活性均显著高于sham组及MLR组,且MLR+SMAO组肝、肾、心、肺组织匀浆的这些指标高于SMAO组;SMAO组及MLR+SMAO组有多个器官组织匀浆SOD和ATPase活性显著低于sham组及MLR组,MLR+SMAO组均低于SMAO组。结论: MLR加剧SMAO休克多器官损伤的作用机制与加剧自由基损伤、NO合成与释放、中性粒细胞扣押、降低细胞膜泵活性有关,肠淋巴途径在SMAO休克的发病学中具有重要作用。     

肠淋巴再灌注对肠系膜上动脉闭塞性休克多器官损伤的影响

目的：观察肠淋巴再灌注（MLR）对肠系膜上动脉闭塞性（SMAO）休克大鼠血压、存活率以及器官功能的影响。方法:Wistar雄性大鼠均分为4组：sham组，仅麻醉与手术；MLR组，夹闭肠系膜淋巴管（ML）1 h，再灌注2 h；SMAO组，夹闭肠系膜上动脉（SMA）1 h，再灌注2 h；MLR+SMAO：夹闭ML和SMA1 h，再灌注2 h。观察3 h期间平均动脉血压（MAP）变化后，观察肺、肝、肾、心肌功能和形态学变化。记录24 h存活率。结果:①sham、MLR、SMAO组大鼠24 h存活率（分别为100%、83.3%、66.7%）显著高于MLR+SMAO组（0%）。②夹闭SMA或ML前10 min，组间MAP无差异；SMAO组MAP在夹闭后多个时点显著高于MLR+SMAO和sham组；再灌注后，MLR和sham组MAP无明显变化，SMAO和MLR+SMAO组MAP迅速下降，后逐渐回升，SMAO组多个时点低于MLR和sham组，MLR+SMAO组在所有时点均低于MLR、sham和SMAO组。③MLR+SMAO组天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cre）、乳酸脱氢酶-1（LDH-1）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）均显著高于sham组、MLR组、SMAO组，且SMAO组的这些指标显著高于sham组、MLR组。形态学观察显示sham组与MLR组的肺、肝、心、肾结构基本正常，SMAO组各脏器有一定的组织学损伤，而MLR+SMAO组则可见炎症、出血、核浓缩、破碎等严重病变。结论:MLR可加剧SMAO休克多个器官损伤，肠淋巴途径在SMAO休克的发病学中具有重要作用。     

肠淋巴再灌注加重肠系膜上动脉闭塞性休克大鼠的脑损伤

目的:观察肠淋巴再灌注(MLR)对肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克大鼠脑组织形态学以及神经递质的影响;从氧自由基、一氧化氮(NO)、中性粒细胞、膜泵、能量代谢等方面揭示其机制。方法:24只Wistar雄性大鼠均分为4组:sham组,仅麻醉与手术;MLR组,夹闭肠系膜淋巴管(ML)1h,再灌注2h;SMAO组,夹闭肠系膜上动脉(SMA)1h,再灌注2h;MLR+SMAO:夹闭ML和SMA1h,再灌注2h。再灌注2h后,选择固定位置留取脑组织,制备病理切片,观察形态学;同时制备脑组织匀浆,检测乙酰胆碱转移酶(ChAT)、乙酰胆碱酯酶(AChE)、多巴胺(DA)、去甲肾上腺素(NE)以及乳酸(LA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、NO、一氧化氮合酶(NOS)、髓过氧化物酶(MPO)、细胞膜泵(ATPase)及三磷酸腺苷(ATP)水平或活性。结果:Sham与MLR组大鼠脑组织结构基本正常;SMAO组大鼠可见神经元有坏死、变性,偶见肿胀;MLR+SMAO组神经元损伤情况较SMAO组重。SMAO与MLR+SMAO组脑匀浆MDA、NO、LA含量、AChE、NOS与MPO活性均显著高于、ChAT活性与DA、NE含量显著低于MLR与sham组,且MLR+SMAO组脑匀浆MDA、NO含量、AChE、NOS与MPO活性均显著高于SMAO组;SMAO组脑匀浆SOD、Na+-K+-ATPase活性显著低于sham与MLR组、Mg2+-ATPase活性、ATP含量显著低于MLR组;MLR+SMAO组脑匀浆的SOD、Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性均显著低于sham与MLR组,且DA含量、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性、ATP含量均显著低于SMAO组。结论:MLR加重SMAO休克大鼠的脑损伤、降低脑组织DA水平、增高AChE活性,其机制可能与MLR加重或增加脑组织氧自由基损伤、NO合成与释放、中性粒细胞扣押、能量代谢障碍及降低脑组织细胞膜泵活性等因素有关。     

肠淋巴再灌注对SMAO休克大鼠多器官ICAM-1、RAGE的作用

目的:观察肠淋巴再灌注(MLR)对肠系膜上动脉闭塞性(SMAO)休克大鼠肺、心肌、肾、肝组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)含量的影响,探讨MLR加剧SMAO休克大鼠器官损伤的作用机制。方法:Wistar大鼠24只,随机均分为假手术组(Sham组)、MLR组、SMAO组和SMAO+MLR组,后三组大鼠分别夹闭肠系膜淋巴管和/或肠系膜动脉1h、再灌注2h。Sham组不夹闭。各组于相应时间点留取固定位置的肺、心肌、肾、肝组织,制备组织匀浆;应用酶联免疫方法检测各组织匀浆ICAM-1、RAGE含量。结果:Sham组和MLR组各指标无统计学差异;SMAO组和SMAO+MLR组肺、肾、心肌、肝组织ICAM-1、RAGE的含量均显著高于MLR组和Sham组(P均<0.01);SMAO+MLR组肺、肾、心肌、肝组织ICAM-1与RAGE含量显著高于SMAO组(P均<0.01)。结论:MLR加剧SMAO休克大鼠多器官损伤的作用机制与各器官组织ICAM-1、RAGE水平升高有关。     

酸中毒和微循环障碍在肠系膜上动脉闭塞性休克发病机制中的作用

通过夹闭成年大耳白兔肠系膜上动脉（ＳＭＡ）６０ｍｉｎ后松夹，复制肠系膜上动脉闭塞性休克（ＳＭＡＯ休克），以血压下降５０％为指针。休克组兔颈动脉血压下降，血气的变化为：ＰＨ值降低、ＰａＣＯ_２降低、ＢＥ负值增大，微循环障碍。对照组，上述指标的数值前后变化不显著。结果表明：酸中毒、微循环障碍，在ＳＭＡＯ休克的发病机制中起重要作用。     

在肠系膜上动脉闭塞性休克发生中循环血量和血液流变学变化

夹闭成年大耳白兔肠系膜上动脉,以复制SMAO休克动物模型。休克后,颈动脉血压下降,循环血量减少,血细胞压积升高,血小板聚集率下降;血压下降与循环血量减少密切相关(r=0.6958,P<0.05)。提示:血液浓缩、循环血量减少,是引起SMAO休克的一个重要因素。     

JAK/STAT通路在大鼠肠缺血再灌注所致肠损伤中的作用

目的: 探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)通路在大鼠肠缺血再灌注(I/R)所致肠损伤中的作用。方法: 雄性健康SD大鼠40只,体重230~255 g,随机分为5组(n=8):假手术组(sham组),仅分离肠系膜上动脉(SMA)但不夹闭;肠缺血再灌注组(I/R组),采用阻断SMA 60 min后开放120 min的方法制备肠I/R损伤模型;AG490(JAK特异性抑制剂)组,于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射8 mg·kg^-1 AG490,余同I/R组;雷帕霉素(STAT特异性抑制剂)组(RPM组),于夹闭SMA前30 min在大鼠侧腹部皮下注射0.4 mg·kg^-1 RPM,余同I/R组;二甲基亚砜组(DMSO组),于夹闭SMA前30 min侧腹部皮下注射2 μmol·kg^-1 DMSO,余同I/R组,DMSO系AG490和RPM的溶剂。所有大鼠均于再灌注120 min后取小肠观察肠黏膜形态学变化并行Chiu's评分,同时取肠黏膜组织检测髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及丙二醛(MDA)和乳酸(LD)含量,采集动脉血检测血清二胺氧化酶(DAO)活性及15-F_2t-isoprostane、内皮素-1(ET-1)和血栓烷素B₂(TXB₂)浓度。TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡情况并计算凋亡指数;采用Western blotting检测磷酸化的JAK2(p-JAK2)及STAT3(p-STAT3)的表达水平。结果: 与sham组比较,其余各组的Chiu's评分和肠黏膜细胞凋 亡指数均显著升高(P＜0.05);而I/R组和DMSO组的LD和MDA含量、DAO活性、MPO活性、15-F_2t-isoprostane浓度、ET-1浓度及TXB₂浓度均显著升高,p-JAK2及p-STAT3蛋白表达量也显著升高,SOD活性显著降低(P＜0.05)。与I/R组和DMSO组比较,AG490组和RPM组的DAO活性、MPO活性、肠黏膜上皮细胞凋亡指数、ET-1浓度、p-JAK2及p-STAT3蛋白表达均显著降低,SOD活性则显著升高(P＜0.05)。 结论: JAK/STAT信号通路的激活参与了肠I/R所致的肠损伤的发生,其作用与促进氧化应激损伤、中性粒细胞的聚集和肠黏膜细胞凋亡有关。     

肠系膜上动脉夹闭休克时大鼠肝线粒体损伤及其抗损伤的研究

本文探讨SMAO休克时大鼠肝线粒体损伤以及自由基清除酶(剂)对肝线粒体的保护作用。实验组线粒体RCR于松夹1 hr即明显下降(P<0.05),松夹2 hr下降更甚(P<0.01)。ADP/O值也明显降低(P<0.05)。单用ALLO或伍用SOD CAT,SOD ALLO,SOD CAT ALLO治疗对SMAO休克大鼠肝线粒体氧化磷酸化功能均有显著的保护作用,并且在松夹2 hr后,除单用ALLO组外,其它诸组RCR仍较对照组无显著下降(P>0.05),而且还明显高于实验组(P<0.01),其中以SOD CAT ALLO伍用效果最佳。提示脂质过氧化损伤是SMAO休克时肝脏线粒体损伤的重要原因;而伍用自由基清除酶(剂)是防止其损伤的理想选择。     

阻断肠淋巴液回流提升失血性休克大鼠的血管反应性和钙敏感性

目的:观察肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流对失血性休克(HS)大鼠血管反应性与钙敏感性的影响,探讨肠淋巴液在休克血管低反应性中的作用。方法:72只Wistar雄性大鼠随机均分为sham组(仅手术)、shock组(复制HS模型)、shock+ligation组(复制HS模型,行肠淋巴管结扎)、shock+drainage组(复制HS模型,行肠淋巴液引流)。记录所有动物在不同时点给予去甲肾上腺素(NE 3μg/kg)后平均动脉血压(MAP)的变化;维持低血压40 mmHg 3 h后,制备肠系膜上动脉(SMA)血管环(均n=36)。采用离体血管环张力测定技术,观察SMA血管环对NE反应性以及钙敏感性[梯度Ca2+、与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰岛素(Ins)分别孵育]的变化。结果:Shock组在休克即刻和0.5 h△MAP显著高于sham组,在1.5 h、2 h、2.5 h、3 h均显著降低;shock+ligation和shock+drainage组在休克即刻、0.5 h、1 h时△MAP显著高于sham组,在2.5 h和3 h时显著降低;shock+ligation和shock+drainage组在休克0.5 h后多个时点的△MAP均显著高于shock组。Shock、shock+ligation和shock+drainage组SMA血管环对NE的反应性和Ca2+的敏感性均显著低于sham组;shock+ligation和shock+drainage组SMA血管环对NE的反应性和Ca2+的敏感性均高于shock组。SMA与AngⅡ或Ins孵育后,shock、shock+ligation和shock+drainage组血管反应性和钙敏性均显著低于sham组,且shock+ligation和shock+drainage组均显著高于shock组。结论:以肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流阻断休克肠淋巴液回流,均可提高HS大鼠的血管反应性,其机制与提高钙敏感性有关。     

肠缺血后处理抑制大鼠肠缺血再灌注所致的急性肺损伤

目的： 研究肠缺血后处理对大鼠肠缺血再灌注（I/R）所致急性肺损伤的影响及机制。 方法： 40只SD大鼠随机分为5组（n=8）：假手术组（对照组）,仅分离而不阻断肠系膜上动脉（SMA）;肠I/R损伤组,阻断SMA 1 h后再灌注1 h;缺血预处理（IPC）组,在长时间阻断SMA前预先阻断SMA 10 min然后开放 10 min;缺血后处理（IPo）组,在阻断SMA 1 h后连续进行3个循环的开放 SMA 30 s /阻断SMA 30 s (总时间为3 min),然后开放1 h;延迟后处理（delay）组,在再灌注3 min （IPo的总时间）后行3个循环的 30 s 缺血/ 30 s再灌注的缺血后处理,余同IPo组。监测平均动脉压（MAP）,于再灌注1 h 后取肺组织光镜下观察肺形态学的变化,检测血清及支气管肺泡灌洗液蛋白含量并计算肺通透性指数,称肺湿重及干重并计算肺含水率,检测肺组织丙二醛（MDA）的含量,超氧化物歧化酶（SOD）及髓过氧化物酶（MPO）的活性,检测血清TNF-α及IL-6的浓度。结果： 缺血后处理与预处理都能显著改善肺损伤,显著降低肺通透性指数及肺含水率,同时降低血浆TNF-α与IL-6的浓度、肺组织MDA含量及MPO活性,升高SOD活性。后处理被延迟3min后,其肺保护作用消失,且不能显著改变上述指标。 结论： 缺血后处理与预处理都具有抗肠I/R后肺损伤的作用,可能与其清除氧自由基、抑制中性粒细胞的肺内聚集及炎症细胞因子的释放有关;而且,再灌注早期后处理对肺的保护作用最关键。     

细胞间黏附分子-1抑制参与大鼠小肠缺血后处理的保护作用

目的观察缺血后处理（I-postC）对缺血／再灌注（I／R）大鼠小肠组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）表达和髓过氧化物酶（MPO）活性的影响，探讨其减轻I／R损伤的机制。方法32只健康雄性Wistar大鼠随机分为假手术（Sham）、I／R、I-postC及缺血预处理（IPC）组，以无创动脉夹夹闭肠系膜上动脉建立小肠I／R损伤模型，常规制备病理切片，光镜下观察肠组织损伤情况。试剂盒测定MPO、超氧化物歧化酶（SOD）活性及丙二醛（MDA）含量，免疫印迹法检测小肠组织ICAM-1和NF-κBP65的表达。结果I-postC明显减轻I／R导致的小肠组织病理变化，抑制I／R所致的小肠组织MPO活性和MDA含量升高（分别为I／R组的68．7％和77、1％，P〈0.05），上调SOD活性（为I／R组的1．2倍，P〈0.05），并下调小肠组织NF-κBP65和ICAM-1表达（分别较I／R组低44．3％和49．0％，P〈0．01）。结论I-postC通过抑制ICAM-1表达和中性粒细胞游出而减轻小肠I／R损伤。     

Rho激酶在阻断休克肠淋巴液回流、提高大鼠血管钙敏感性中的作用

目的: 观察Rho激酶在肠淋巴管结扎或肠淋巴液引流提高失血性休克大鼠血管钙敏感性中的作用。方法: Wistar雄性大鼠随机分为假手术组(sham)、失血性休克组(shock)、休克肠淋巴管结扎组(shock+ligation,行肠淋巴管结扎)、休克肠淋巴液引流组(shock+drainage,行肠淋巴液引流),在休克3 h或sham组的相应时点,制备肠系膜上动脉(SMA)血管环,采用离体血管环张力测定技术,观察SMA血管环对梯度钙离子收缩性的变化;shock+ligation与shock+drainage组SMA血管环分别与Rho激酶激动剂血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)、抑制剂fasudil孵育后,观察钙敏感性变化。结果: Shock组SMA血管环的钙敏感性显著低于sham组;shock+ligation组与shock+drainage组SMA血管环钙敏感性显著高于shock组,但低于sham组。Shock+ligation组与shock+drainage组SMA血管环与AngⅡ或fasudil孵育后,AngⅡ不同程度地提高了shock+ligation组与shock+drainage组大鼠SMA血管环对梯度钙离子的收缩性与pD₂;fasudil显著降低了两组大鼠SMA血管环对梯度钙离子的收缩性与最大收缩力E_max,降低了shock+ligation组的pD₂。结论: Rho激酶在阻断休克肠淋巴液回流提高血管钙敏感性中发挥重要作用。     

Glucocorticoid-induced TNF receptor family gene (GITR) knockout mice exhibit a resistance to splanchnic artery occlusion (SAO) shock

In the present study, we used glucocorticoid-induced tumor necrosis factor (TNF) receptor family gene knockout (GITR-KO) mice to evaluate a possible role of GITR on the pathogenesis of splanchnic artery occlusion (SAO) shock, which was induced in mice by clamping the superior mesenteric artery and the celiac artery for 30 min, followed thereafter by release of the clamp (reperfusion). At 60 min after reperfusion, animals were killed for histological examination and biochemical studies. There was a marked increase in the lipid peroxidation in the ileum of the SAO-shocked, GITR wild-type (WT) mice after reperfusion. The absence of GITR significantly reduced the lipid peroxidation in the intestine. SAO-shocked WT mice developed a significant increase of ileum tissue, TNF-alpha, and myeloperoxidase activity and marked histological injury. SAO shock was also associated with a significant mortality (5% survival at 24 h after reperfusion). Reperfused ileum tissue sections from SAO-shocked WT mice showed positive staining for P-selectin, intercellular adhesion molecule 1 (ICAM-1), and E-selectin. The intensity and degree of P-selectin, E-selectin, and ICAM-1 were markedly reduced in tissue section from SAO-shocked, GITR-KO mice. SAO-shocked, GITR-KO mice also showed a significant reduction of the TNF-alpha production and neutrophil infiltration into the reperfused intestine, an improved histological status of the reperfused tissues, and an improved survival. Taken together, our results clearly demonstrate that GITR plays an important role in the ischemia and reperfusion injury and put forward the hypothesis that modulation of GITR expression may represent a novel and possible strategy.     

休克小肠再灌注损伤的研究Ⅰ.休克小肠的再灌注损伤

为研究缺血小肠的再灌注损伤,阻断家兔SMA血流1小时或35mmHg低压灌流SMA2小时,然后以90mm Hg恒压再灌注2小时。结果发现缺血小肠再灌注后出现逐渐加重的组织损伤,表现为血浆ACP活性、乳酸和镁进行性增加,小肠粘膜出血,小肠绒毛坏死和组织水肿进行性加重,以及体动脉压降低,心肌缺血损伤等。这种再灌注损伤,甚至比小肠持续缺血3小时者更严重。本文对缺血小肠再灌注损伤在休克发病学中的意义进行了讨论。     

硫化氢在休克肠淋巴液致肝损伤中的作用与机制

 目的： 应用硫化氢（H2S）合成酶胱硫醚γ-裂解酶（CSE）抑制剂DL-炔丙基甘氨酸（PPG）和H2S供体硫氢化钠（NaHS）作用于行肠淋巴液引流的大鼠,探讨H2S在肠淋巴液引流减轻休克大鼠肝损伤中的作用。方法：休克组、休克+引流组、休克+引流+PPG组（45 mg/kg,放血前0.5 h,ip）和休克+引流+NaHS（28 μmol/kg,放血前0.5 h,ip）组大鼠复制失血性休克模型,低血压1 h后行液体复苏,休克+引流组、休克+引流+PPG组和休克+引流+NaHS组在输液结束后,行肠淋巴液引流至液体复苏结束后3 h。观察肝组织形态,检测血浆肝功能生化指标以及肝组织H2S、CSE、Toll样受体4（TLR4）、白细胞介素（IL）-10、IL-12和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结果：休克组大鼠血浆天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆汁酸（TBA）以及肝组织H2S、CSE、TLR4、IL-10、IL-12、TNF-α含量均显著高于假手术组;肠淋巴液引流显著降低了休克组大鼠血浆AST、ALT、TBA以及肝组织H2S、CSE、IL-10、IL-12、TNF-α含量;PPG使休克+引流组大鼠血浆AST、ALT、TBA以及肝组织H2S、TLR4、IL-10、IL-12、TNF-α含量进一步降低;NaHS则提高了休克+引流组大鼠血浆AST、ALT与肝组织H2S、TLR4、IL-10、IL-12、TNF-α的含量。组织形态学观察表明,休克组和休克+引流+NaHS组大鼠出现了肝细胞损伤,假手术组、休克+引流组、休克+引流+PPG组大鼠肝细胞形态基本正常。结论：肠淋巴液引流减轻失血性休克大鼠肝损伤的作用机制与抑制H2S生成、减轻H2S介导的炎症反应有关。     

肠系膜淋巴管结扎对休克大鼠肾功能不全的干预机制

目的： 观察结扎肠系膜淋巴管对不同时期重症失血性休克大鼠肾组织自由基、炎症介质的影响，探讨肠淋巴途径对休克大鼠肾功能不全的干预机制。方法: 雄性Wistar大鼠78只，分为假手术组、休克组、结扎组。休克组与结扎组复制重症失血性休克模型，结扎组于休克复苏后行肠系膜淋巴管结扎术。于休克后90 min、输液复苏后0 h、1 h、3 h、6 h、12 h、24 h等时点处死大鼠，制备肾组织匀浆，检测MDA、SOD、NO、NOS、TNF-α、IL-6以及MPO水平，RT-PCR法测定各组大鼠肾组织iNOS mRNA表达。结果: 休克组大鼠输液复苏后不同时点肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA表达均有不同程度的升高，6 h-12 h持续在较高水平，均显著高于假手术组，肾组织匀浆SOD活性显著低于假手术组（P<0.01，P<0.05）；结扎组输液复苏后6 h、12 h、24 h肾组织匀浆MDA、NO、NOS、TNF-α、IL-6水平和MPO活性以及iNOS mRNA均显著低于休克组相应时点，SOD活性高于休克组相应时点（P<0.01，P<0.05）。结论: 肠系膜淋巴管结扎干预重症失血性休克大鼠肾功能不全的机制与减少肾PMN扣押、降低TNF-α、IL-6的释放、抑制NO生成及iNOS mRNA表达、减少自由基释放与SOD消耗等因素有关。     

外周血白细胞凋亡障碍与大鼠肠缺血-再灌注损伤的关系

目的： 探讨外周血白细胞和中性粒细胞凋亡障碍在肠缺血-再灌注（IR）损伤中的作用。方法：20只雄性SD大鼠随机分为肠IR组和假手术对照组,每组10只。肠IR组夹闭肠系膜上动脉（SMA）30 min后再灌注60 min;对照组只分离而不夹闭SMA。观察肠黏膜形态学变化;检测肠黏膜上皮细胞凋亡指数（TUNEL法）和caspase-3活性;Annexin-V/PI法检测外周血白细胞和中性粒细胞（PMN）凋亡比例;检测夹闭前、夹闭30 min、再灌注30 min、再灌注60 min外周血白细胞数量。结果：(1)光镜下,对照组未见肠黏膜损伤,而IR组肠黏膜损伤严重;（2）IR组肠黏膜上皮细胞凋亡指数和caspase-3活性比对照组明显增高（P<0.05）;（3）IR组外周血白细胞和PMN凋亡比例比对照组明显降低（P<0.05）;IR组外周血白细胞数量在缺血30min时明显增高,再灌注后进一步增高,与缺血前和对照组比都有显著差异（P<0.05）。(4)肠黏膜caspase-3活性与外周血白细胞凋亡比例有显著的负相关（r=-0.764, P<0.01）,与PMN凋亡比例也有显著的负相关（r=-0.845,P<0.01）;肠黏膜上皮细胞凋亡指数与PMN凋亡比例也有显著的负相关（r=-0.638, P<0.05）。结论：外周血白细胞数量增加及凋亡障碍与缺血-再灌注引起的肠黏膜细胞损伤密切相关。     

休克小肠再灌注损伤的研究Ⅱ.不同再灌注压对再灌注损伤的影响

结扎家兔肠系膜上动脉1小时后,用颈动脉血流经灌流泵再灌注SMA,比较不同的再灌注压对缺血小肠的影响。结果表明120mmHg的高压再灌注导致最严重的组织损伤,低压(60mmHg)和逐渐升压(60～175～90mmHg)较中压(90mmHg)灌注引起的组织损伤轻。进一步实验,在家兔晚期失血性休克模型上发现,迅速提高灌注压恢复灌流比逐步提高灌流压引起的组织损伤更严重,动物死亡率高。说明再灌注损伤与再灌压有密切关系。在休克治疗中,如何合理地恢复组织器官的灌流,值得进一步探讨。     

Effects of palmitoylethanolamide on intestinal injury and inflammation caused by ischemia-reperfusion in mice

Our primary aim in this study was to test the hypothesis that PEA, a member of the fatty acid ethanolamide family and an endogenous PPAR-α ligand, exerts anti-inflammatory effects on SAO shock, causing a severe form of circulatory shock and enhanced formation of ROS. SAO shock was induced by clamping the superior mesenteric artery and the celiac trunk, resulting in a total occlusion of these arteries for 30 min. After this period of occlusion, the clamps were removed. In this study, we demonstrated that the administration of PEA, 5 min before reperfusion, significantly reduced all of the parameters involved during inflammation, such as proinflammatory cytokine production (TNF-α, IL-1β), adhesion molecules (ICAM-1, P-selectin) expression, NF-κB expression, and apoptosis (Bax, Bcl-2, TUNEL assay) activation. In addition, to study whether the protective action of PEA on SAO shock is also related to the activation of PPAR-α, we have investigated the effect of PEA in PPAR-α KO mice subjected to SAO shock. Our study clearly demonstrates that PEA significantly attenuated the degree of intestinal injury and inflammation caused by I/R injury. Moreover, the positive effects of PEA were at least in part dependent on the PPAR-α pathway. The results clearly indicate that PEA exerts an anti-inflammatory effect, also in a SAO shock model, which could imply a future use of PEA in the treatment of I/R shock.     

肠淋巴液引流减轻失血性休克大鼠脾组织损伤的作用与机制

 目的：观察肠淋巴液引流对失血性休克大鼠脾组织形态、细胞凋亡、细胞周期与增殖指数的影响,探讨肠淋巴液在休克发病学中的意义。方法: 在休克组与休克+引流组大鼠中复制失血性休克模型,低血压1.5 h后行液体复苏,休克+引流组大鼠于低血压1 h起引流休克肠淋巴液至液体复苏结束后3 h。留取固定位置的脾组织,HE染色观察脾组织形态,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,免疫组织化学染色检测Bcl-2和Bax蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期和p53蛋白表达,计算增殖指数。结果：与假手术组比较,休克组大鼠脾组织出现了形态学损伤,凋亡细胞显著减少,Bax与p53蛋白表达显著升高,Bcl-2表达下降;休克+引流组大鼠脾组织G2/M期细胞数显著增多。与休克组比较,休克+引流组大鼠脾组织的损伤程度较轻,凋亡细胞和G0/G1期细胞显著减少,Bax与p53表达显著降低,G2/M期细胞显著增多,Bcl-2表达与增殖指数显著升高。结论: 休克肠淋巴液引流减轻了失血性休克大鼠的脾损伤,其作用机制可能与减少脾细胞凋亡有关。