妥泰对海人酸致癎大鼠海马神经元线粒体损伤的保护作用

目的观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）、大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及妥泰（TPM）的保护作用。方法用TPM干预。用KA诱导大鼠SE2h,并于癫痫终止后3h制作脑切片,用光镜观察神经元的大体损伤,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果KA组和TPM组大鼠均出现了线粒体超微结构的损伤,TPM组大鼠的损伤明显减轻。结论KA诱导的SE可导致海马神经元线粒体损伤,妥泰对此具有保护作用。     

海人酸致癫癎持续状态大鼠海马神经元线粒体损伤及caspase-3表达

目的观察海人酸诱导的癫痫间持续状态(status ep ilepticus,SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体损伤及caspase-3的表达。方法用海人酸诱导大鼠SE 2 h;于SE终止后第3、6、24 h取海马,光镜观察神经元的变化,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构;免疫组化方法检测caspase-3的表达。结果SE终止后3h电镜下可见到线粒体嵴的肿胀和膜的崩解;SE后24 h神经元呈坏死样改变;caspase-3的表达在SE后6 h开始增加(与对照组比较,P<0.05),于第24 h明显增高(P<0.01)。结论在实验性SE模型中早期即出现线粒体超微结构的损伤,其后出现caspase-3的表达增高及神经元形态的改变,提示线粒体的损伤是SE后神经元损伤的关键环节。     

托吡酯对癫癎大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨托吡酯(TPM)对癫疒间发作大鼠海马神经元凋亡的保护作用。方法给予戊四氮(PTZ)致疒间大鼠TPM 80 mg/(kg.d)(大剂量TPM组)、40 mg/(kg.d)(中剂量TPM组)和生理盐水(对照组)灌胃,共14 d。用原位末端标记(TUNEL)方法标记DNA片段,原位检测大鼠海马CA1和CA3区的凋亡神经元。结果各组大鼠海马CA1、CA3区均出现TUNEL阳性细胞。对照组海马CA1、CA3区TUNEL阳性细胞数分别为(35.83±4.58)个和(36.83±3.87)个;中剂量TPM组分别为(31.52±3.43)个和(32.35±4.69)个;大剂量TPM组分别为(23.50±2.81)个和(25.50±3.72)个。大剂量TPM组与对照组比较差异有非常显著性(均P<0.001),与中剂量TPM组比较差异有显著性(均P<0.05);中剂量TPM组与对照组相比差异无显著性(均P>0.05)。结论大剂量TPM对癫疒间发作后的神经元损伤具有一定的保护作用。     

海人酸致痫大鼠海马神经元凋亡研究

目的　研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡的时空分布。方法　采用海人酸 (KA)诱导大鼠癫痫模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后 6h、1d、3d、7d海马神经元凋亡。结果　对照组及KA致痫后 6h组 ,海马区均未发现凋亡细胞。KA致痫后 1d ,海马CA1、CA3及CA4区开始出现凋亡细胞 ,3d时明显增多 ,7d时最多。KA致痫后 1d、3d、7d ,海马CA1锥体层线性长度1mm的TUNEL阳性细胞数分别为 (6 .6 0± 3.6 9)个、(13.5 7± 5 .17)个和 (2 5 .96± 4 .87)个 ;CA3区分别为 (6 .4 8± 2 .4 5 )个、(13.89± 2 .5 2 )个和 (2 8.80± 5 .39)个 ;CA4区分别为 (4 .6 0± 1.4 5 )个、(12 .2 0± 2 .0 4 )个和 (2 5 .2 0± 5 .83)个。 3个时间组相应区域凋亡神经元数比较均存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变。结论　凋亡参与KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程。     

妥泰对海人酸致大鼠海马神经元线粒体损伤的保护作用

目的观察海人酸(KA)诱导的癫持续状态(SE)、大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤及妥泰(TPM)的保护作用。方法用TPM干预。用KA诱导大鼠SE 2h,并于癫终止后3h制作脑切片,用光镜观察神经元的大体损伤,并用电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果KA组和TPM组大鼠均出现了线粒体超微结构的损伤,TPM组大鼠的损伤明显减轻。结论KA诱导的SE可导致海马神经元线粒体损伤,妥泰对此具有保护作用。     

依达拉奉对海人酸致颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用

目的本实验观察依达拉奉对海人酸致痫大鼠海马神经元损伤的保护作用。方法选用成年健康雄性Wistar大鼠18只,体重260±20g。实验动物随机分为3组,①sham组(n=6):右侧海马CA3区注入等量的生理盐水;②KA模型组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl);③依达拉奉组(n=6):右侧海马CA3区注入KA 4μg.kg-1(4μg/μl)后,即刻给予依达拉奉10mg.kg-1.d-1腹腔注射。于大鼠注药或假手术后立即观察各组大鼠的行为学表现,于7d断头取脑,石蜡切片进行硫堇染色,于光学显微镜下观察注药对侧(左侧)海马CA1、CA3区及CA4门区组织形态学特征,并对其进行组织学分级。结果 Sham组大鼠注射对侧海马CA1、CA3和CA4门区无明显组织损伤,组织学分级多为0～1级,ND值为198±20.62和212±30.14;模型组KA致痫大鼠可见明显的组织损伤,组织学分级多为2～3级,ND值为79±13.72和90±14.98,与sham组相比,组织学分级显著升高(p<0.05),ND值显著降低(p<0.01)。依达拉奉组大鼠海马CA1区可见少量、散在性神经元坏死,组织学分级多1～2级,ND值为101±16.85和135±12.17。与模型组相比,组织学分级降低(p<0.05),ND值显著升高(p<0.05)。结论依达拉奉能够减轻KA致痫大鼠海马神经元的损伤,对神经元具有保护作用。     

雌激素影响海人酸杏仁核点燃大鼠癫(癎)发作机制的初步探讨

目的:探讨雌激素(E)和姜黄素(C)影响癫发作的机制。方法:用E和C单独及联用连续处理去势雌性大鼠5d,第6天以海人酸(KA)杏仁核点燃法制备癫大鼠模型,观察大鼠癫发作的行为学表现,用免疫组化方法检测海马组织c-Jun蛋白的表达。结果:E加C组(EC KA组)大鼠癫重度发作的严重程度较E组(E KA组)明显减轻(P<0.05)。E KA组海马中c-Jun蛋白表达最多,C组(C KA组)及对照组(KA组)均表达较少且没有任何差异;EC KA组海马的CA1区c-Jun蛋白表达较E KA组明显减少(P<0.05)。结论:C能一定程度上减轻E引起的癫发作加重,它可能通过抑制c-Jun/核转录因子激活蛋白-1(activate-protein1,AP-1)活性,使E作用的AP-1通路受阻,从而减轻了E的促神经元兴奋作用。     

海马神经元癫癎样放电模型中神经元凋亡的研究

目的通过检测体外海马神经元癫癎样放电后的细胞凋亡,旨在探讨颞叶癫癎病人海马神经元丢失的机制.方法首先制备Sombati神经元癫癎样放电模型,然后采用Tunel标记、荧光染色以及流式细胞技术对模型中的凋亡神经元作了定性和定量检祆测.结果发现神经元癫癎样放电后出现细胞凋亡,且随着放电时间的延长,凋亡细胞增加.结论反复癫癎样放电导致神经元凋亡,其发生可能与癫癎样放电的兴奋性毒性有关.     

天麻素对海人酸致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用

目的 探讨天麻素对海人酸致大鼠大脑皮质神经元损伤的保护作用及可能机制.方法 提取新生大鼠大脑皮质神经元体外培养,7d后随机分为对照组、海人酸模型组、不同浓度天麻素干预组(12.5、25、50mg/L);采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,AO/EB荧光染色检测神经元凋亡,LDH活性测定检测胞膜稳定性,CY3荧光染色检测EphA4表达变化.结果 与海人酸模型组相比,各天麻素干预组神经元凋亡率、LDH活性显著下降(P<0.01),EphA4表达上调显著受抑(P<0.01),以25mg/L天麻素效果最明显.结论 天麻素对海人酸诱导大鼠大脑皮质神经元损伤具有保护作用,以中浓度效果最佳,可能与抗凋亡、稳定细胞膜、抑制细胞活化蛋白EphA4的表达上调等因素相关.     

生酮饮食治疗成人难治性癫癎的研究进展

生酮饮食（KD）治疗儿童难治性癫癎（RE）已有近百年历史,其抗癫痫机制与抗癫癎药物的作用机制不同。近来出现改良的KD,并开始用于治疗成人RE,其有效率达41％,且与酮体水平不相关,而不良反应和儿童类似。     

戊四氮所致慢性癫癎大鼠海马神经元选择性凋亡的研究

目的 :探讨选择性凋亡在戊四氮所致慢性癫疒间形成中的作用。方法 :采用免疫组化及原位末端标记双标技术观察海马γ 氨基丁酸 (GABA)能神经元、谷氨酸 (Glu)能神经元各自凋亡情况。结果 :GABA能神经元凋亡数明显高于Glu能神经元凋亡数 ,两者比较有显著性差异。结论 :在癫形成期间脑内可能通过某种机制引发了细胞程序性死亡过程 ,选择性地引起GABA能神经元凋亡占优势 ,打破了兴奋与抑制性神经递质之间的平衡 ,从而促发癫     

雌激素和姜黄素对海人酸杏仁核点燃大鼠行为学、脑电图及海马神经元损伤的影响

目的了解雌激素和姜黄素对海人酸(kainic acid,KA)杏仁核点燃大鼠癫痫发作的影响。方法给去势的雌性大鼠添加雌激素治疗,添加姜黄素治疗,或添加雌激素和姜黄素治疗,比较各组大鼠致痫后癫痫发作的行为学、脑电图和海马神经元损伤的变化。结果给雌激素治疗的大鼠重型发作(Racine 4/5级)评分最高,而雌激素加姜黄素治疗组评分最低(P<0.05)。脑电图的变化与行为学的改变基本一致。致痫后大鼠注射KA侧海马CA3区、CA4区可见到明显的细胞损伤,而该侧海马CA1区、齿状回区(DG)及对侧海马CA3区、CA1区及DG区神经元损害不明显。雌激素组大鼠双侧海马CA3区均出现加重的神经元损害,姜黄素组及雌激素加姜黄素组大鼠海马注射对侧CA3区存活神经元较雌激素组明显增加(P<0.01)。结论高水平的雌激素可以加重癫痫的发作,给姜黄素治疗可以减轻大鼠海马CA3区神经元损害。     

钙离子在颞叶癫癎大鼠海马神经元内的动态变化

目的探讨海马神经元内钙离子浓度的动态变化在颞叶癫癎中的可能作用. 方法应用新一代钙荧光指示剂Fluo-3/AM,采用激光共聚焦扫描显微镜技术对颞叶癫癎大鼠海马神经元内的钙离子浓度变化进行动态观察. 结果各时间点癫癎组大鼠海马神经细胞的平均荧光像素数(3 h634 942±27 735;12 h697 066±14 863;7 d732 844±23 107;60 d800 030±16 450)均明显高于对照组(3 h396 499±31 951;12 h389 498±33 257;7 d389 809±29 486;60 d392 758±35 197),差异有统计学意义(P＜0.01);癫癎大鼠海马神经细胞内钙离子浓度的变化可分3个阶段急性期细胞内的钙离子浓度先急剧升高,然后缓慢升高;静止期开始时钙离子浓度较急性期后期先稍有下降,然后再次缓慢上升;到慢性复发期,钙离子浓度达到最高峰,并维持在高水平. 结论在颞叶癫癎的发生发展过程中海马细胞内存在钙稳态失调,该变化导致了神经元内游离钙离子浓度的急性和持久性升高,后者可能诱发了颞叶癫癎的自发性复发性发作.     

戊四氮点燃癫癎大鼠海马5-羟色胺能神经递质的动态研究

目的：观察戊四氮（PTZ）点燃癫癎形成过程中大鼠海马5-羟色胺（5-HT）能神经递质的变化。方法：用PTZ制作癫癎大鼠模型,将造模成功大鼠分为戊四氮急性发作组（PTZ 1组）和戊四氮慢性点燃组（PTZ 2组）,同时设立对照组（腹腔注射生理盐水）。在体微透析取样,观察大鼠行为、脑电图（EEG）和海马5-HT能神经递质的变化。结果：PTZ 1组癫癎发作时EEG自发放电逐级加重;癫癎发作时海马5-HT水平与对照组、发作前和发作后比较显著升高（P〈0.05）;海马5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）水平差异无统计学意义;5-HT转化率（5-HIAA/5-HT）降低,差异有统计学意义（P〈0.05）。PTZ 2组点燃后大鼠出现自发癫癎发作,EEG在发作间期出现自发放电;5-HT和5-HIAA水平在点燃期、维持点燃期、对照组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：大鼠癫癎发作时海马5-HT水平显著升高,发作后恢复正常;在癫癎形成过程中,早期5-HT水平一过性升高、PTZ点燃后和发作间期海马5-HT水平逐渐降低。     

雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马神经元的保护作用及相关PUMA蛋白表达的影响

目的探讨雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马神经元的保护作用及对海马神经元PUMA(P53上调的细胞凋亡调控因子)蛋白表达的影响。方法 30只SD大鼠随机分成3组,其中对照组10只,海人酸组10只,雷公藤内酯干预组10只。结晶紫染色观察海马神经元的形态变化,免疫组化染色法检测海马神经元PUMA蛋白的表达。结果结晶紫染色结果显示,海人酸组中,海马神经元变性或丢失,胞体皱缩,形态不规则。而雷公藤内酯干预组中海马神经元的数量和形态与对照组相似,胞浆清晰淡染,核仁清楚。免疫组化染色结果显示,海人酸组中海马神经元PUMA蛋白表达水平与对照组比较显著增多(P<0.05);雷公藤内酯干预组中海马神经元PUMA蛋白表达水平与海人酸组比较显著减少(P<0.05)。结论雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠海马神经元具有保护作用;其可下调海马神经元PUMA蛋白的表达,抑制海人酸致痫大鼠海马神经元凋亡。     

建立海人酸颞叶癫模型的实验研究

目的建立用立体定向技术制作大鼠海人酸颞叶癫癎模型的方法,并对模型永久癫癎敏感性的原因进行研究。方法将海人酸通过立体定向手术注入大鼠的海马组织,于不同的时间观察大鼠的癫癎发作情况和海马组织的病理学改变。结果大鼠在经历“湿狗样抖动”、口唇和头的自运动症、前肢抽搐、后肢抽搐后,进入强直-阵挛性全身发作,之后,每周均有自行发作,表现与人类颞叶癫癎极为一致。海马神经元的缺失、胶质细胞增生是模型长期癫癎敏感性的基础。结论立体定向方法建立的大鼠颞叶癫癎模型的发作形式及病理学改变与人类的颞叶癫癎极为一致,并且具有长期的癫癎敏感性。另外,立体定向局部注药所用海人酸的量较系统给药明显减少,花费显著减少。因此,该模型即可靠又经济。     

冷却对大鼠难治性癫癎模型海马神经细胞存活率的影响

目的:探讨不同冷却温度和冷却时间对大鼠难治性癫癎模型海马神经细胞存活率的影响。方法:①6μmol.L-1荷包牡丹碱(Bic)+4-氨基吡啶(4-AP)联合刺激培养的大鼠海马组织切片(OHS)诱发癎样放电,制作难治性癫癎OHS模型;②在36℃和25℃培养1~24 h;③在36℃、30℃、25℃、20℃和15℃培养6 h;④分别测定OHS神经细胞的碘化丙啶(PI)摄取量。结果:Bic+4-AP联合刺激3 h后,摄取PI的神经细胞首先出现在海马的CA2区。随着刺激时间的延长,摄取PI神经细胞的分布范围扩散到其他区域,以CA3区最为明显。25℃冷却处理可以显著抑制神经细胞的PI摄取,然而,20℃、15℃深低温冷却处理可进使神经细胞的PI摄取。结论:①培养的大鼠海马组织CA2区的神经细胞对Bic+4-AP联合刺激最敏感,神经细胞的损伤与兴奋性刺激时间和海马的区域有关;②冷却处理神经细胞的保护作用与冷却的温度和时间有关。     

喹啉对癫(癎)大鼠海马神经元连接蛋白36表达的影响

目的:探讨喹啉对癫癎大鼠海马神经元连接蛋白36(Cx36)表达的影响.方法:64只SD大鼠随机分为正常对照组、癫癎模型组、地西洋治疗组和喹治疗组,每组16只大鼠.采用氯化锂-匹罗卡品诱导制作癫癎大鼠模型,地西泮治疗组子以1mg/kg地西泮治疗,喹啉治疗组予以60mg/kg喹啉治疗.术后分别采用Racine评分和脑电图检查判断癫癎发作情况.分别用免疫荧光染色法、Western blot法检测各组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36的表达.结果:与正常对照组比较,癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著升高(均P<0.01).癫癎模型组和地西泮治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平比较差异无统计学意义.与癫癎模型组及地西泮治疗组比较,喹啉治疗组大鼠术后2h、4h时海马神经元Cx36表达水平显著降低(均P<0.01).结论:癫癎大鼠海马神经元Cx36表达水平升高,喹啉能抑制这一变化.     

海人酸致癎大鼠海马CA_3区神经元线粒体与细胞核损伤及caspase-3表达的研究

目的观察海人酸(KA)诱导的癫疒间持续状态(SE)大鼠海马CA3区神经元线粒体与细胞核超微结构的损伤及caspase-3表达的变化。方法用KA诱导大鼠SE 2 h。分别于SE终止后第3 h、12 h、24 h取海马CA3区制作切片,光镜下观察神经元的变化,电镜下观察线粒体和细胞核的超微结构;免疫组化方法检测相同部位caspase-3的表达变化。结果光镜下SE后24 h神经元出现排列散乱、胞体皱缩、胞浆红染以及胞核固缩。电镜下SE后3 h,可见线粒体嵴肿胀及膜的崩解;SE后24 h细胞核染色质明显边聚。Caspase-3平均阳性细胞数及灰度值于SE后12 h较正常对照组显著增加(均P<0.05);24 h出现极显著增加(均P<0.01)。结论SE后早期海马神经元线粒体损伤可能是神经元损伤的关键环节。     

大黄素对海人酸致痫小鼠海马神经细胞的保护作用

目的探讨大黄素对海人酸诱导的小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞的保护作用。方法 90只ICR雄性小鼠随机分为对照组、癫痫持续状态组、大黄素治疗组(分为100、200和400 mg/kg组),每组18只。采用海人酸建立小鼠癫痫持续状态模型。通过HE染色和TUNEL染色观察大黄素对癫痫鼠海马神经细胞的形态学变化和凋亡情况;比色法测定谷苷胱肽(GSH)和丙二醛(MDA)的含量以及超氧化物歧化酶(SOD)的活力; RT-PCR和Western blot检测海马组织中IL-1β、TNF-α、caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果大黄素(200和400 mg/kg组)可显著减轻癫痫所致的海马神经细胞的损伤和凋亡,提高GSH和SOD的活性,降低MDA的活性(P 0. 05);同时抑制海马中IL-1β、TNF-α及caspase-3mRNA和蛋白的表达量(P 0. 05)。结论大黄素对小鼠癫痫持续状态后海马神经细胞具有抗氧化、抗炎和抗凋亡等神经保护作用,其作用机制可能与提高GSH和SOD的活性,降低MDA的含量,并抑制IL-1β、TNF-α及caspase-3的表达有关。