重组EBV-TK及DNase检测鼻咽癌血清相应抗体的比较研究

[目的]比较鼻咽癌(NPC)患者血清中EB病毒(EBV)胸苷激酶(TK)和DNA酶(DNase)抗体水平.[方法]用鼻咽癌血清中和Raji细胞产生的EBV DNase,抗酶率(AER)≥30%为EBV DNase抗体(EDAb)阳性.以大肠杆菌表达的重组EBV TK为抗原,用Western blot方法检测鼻咽癌血清中的EBV TK抗体(ETAb),显现棕褐色条带者为ETAb阳性.[结果]55例鼻咽癌患者血清,EDAb阳性率94.5%,ETAb阳性率89.1%,EDAb+/ETAb+、EDAb-/ETAb+、EDAb+/ETAb-、EDAb-/ETAb-的检出率分别为87.3%、1.8%、7.3%和3.6%,同时检测此两项指标可使EBV相关抗原抗体的阳性率提高至96.4%.[结论]大多数鼻咽癌血清均同时具有EDAb和ETAb,检测这两个酶的抗体是鼻咽癌临床辅助诊断的二个重要血清学指标,联合应用意义更大.     

酶联免疫吸附检测鼻咽癌方法的建立

目的：探讨检测鼻咽癌的酶联免疫吸附（ＥＬＩＳＡ）方法。方法：以正丁酸和巴豆油诱导Ｒａｊｉ细胞表达的ＥＢ病毒早期蛋白为抗原，用ＥＬＩＳＡ方法检测血清中抗ＥＢ病毒相关早期蛋白的ＩｇＧ抗体水平（吸光度Ａ４９０）。其中鼻咽癌４５４例，肝癌４０例，肺癌２３例，肠癌２０例，乳腺癌２３例，卵巢癌１６例，头颈肿瘤１５例和健康人５２４例。结果：在所有被检血清中鼻咽癌血清Ａ值最高（０．３３３±０．１００），（Ｐ＜０．００１）。以正常人９５％特异性Ａ４９０＜０．１８为界，ＥＬＩＳＡ方法诊断鼻咽癌的敏感性为８９％（４０５／４５４）特异性为９４％（４９３／５２４）。结论：用来自Ｒａｊｉ细胞内的ＥＢ病毒早期蛋白为抗原建立的ＥＬＩＳＡ方法可以应用于鼻咽癌的血清学诊断。     

EBV-EAIgG抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用

目的：探讨ＥＢ病毒早期抗原（ＥＡ）ＩｇＧ抗体测定在鼻咽癌诊断和筛查中的应用。方法：对４５４例鼻咽癌和３００例健康人的血清分别用免疫酶法测定抗ＥＡ抗原的ＩｇＡ／ＥＡ抗体,用ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ抗体,以及用抗酶率法测定抗ＥＢＶＤＮＡ酶抗体。并用免疫酶法测定ＩｇＡ／ＶＣＡ和ＥＬＩＳＡ法测定ＩｇＧ／ＥＡ的方法对鼻咽癌高发区人群的９５３６例血清进行鼻咽癌筛查。结果：３种方法中ＥＬＩＳＡ法检测ＩｇＧ／ＥＡ诊断鼻咽癌的效率最高（９２５％）。以双项检测阳性（ＩｇＧ／ＥＡＡ值≥０１８和ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度≥１∶８０）为标准,鼻咽癌筛查的阳性预示值（鼻咽癌数／阳性血清数）为１６５％（１３／７９）,高于单项阳性标准,Ｐ＜００５。结论：ＥＬＩＳＡ检测血清ＩｇＧ／ＥＡ的方法适用于鼻咽癌的血清学诊断,与检测ＩｇＡ／ＶＣＡ的免疫酶法联合应用的双阳性标准适合于在鼻咽癌筛查中采用。为了提高筛查的敏感性,建议将双项阳性标准中的ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度定为≥１∶５。ＩｇＡ／ＶＣＡ滴度从≥１∶８升高到≥１∶５。     

PCR扩增EBV－DNA酶及NA－1基因片段在鼻咽癌诊断上的应用

对６４例鼻咽部活检组织标本进行ＥＢ病毒（ＥＢＶ）特异性基因片段［ＤＮＡ酶、核抗原－１（ＮＡ－１）］的ＰＣＲ扩增，该结果与血清抗ＥＢＶ－ＤＮＡ酶抗体（ＥＢＶ－ＤＮａｓｅａｎｔｉｂｏｄｙ，ＥＤＡｂ）及初次细胞病理学结果对照，上述３种检测方法检出的阳性质例分别为：ＤＮＡ酶基因４０例（ＮＡ－１基因４１例），ＥＤＡｂ３７例，初次病理３５例，ｘ２检验表明３种检测方法结果相符。对ＤＮＡ酶基因和ＮＡ－１基因扩增阳性而初次病理阴性（诊断为慢性炎症）的８例中的６例（另２例因故未检）进行第２次活检，有５例病理确诊为原位低分化鳞癌。另对４２例头颈部肿大淋巴结的活检组织进行了上述基因片段的扩增，其中病理诊断为转移性低分化鳞癌的１０例中有６例为基因片段扩增阳性，该６例中４例后来在鼻咽部发现原发灶（２例为粘膜下型）。     

鼻咽癌病人放疗前后VCA-IgA抗体及EB病毒DNA水平变化

目的检测鼻咽癌病人放疗前、放疗1个疗程及放疗结束后血清EB病毒衣壳抗原IgA(VCA-IgA)抗体水平及EB病毒DNA(EBV DNA)载量的变化,探讨其在鼻咽癌疗效监测及预后评估中的价值。方法收集EBV阳性鼻咽癌病人放疗前、放疗1个疗程及放疗结束后的血清标本,提取外周血细胞DNA。应用ELISA试剂盒检测血清VCA-IgA抗体水平的变化,实时荧光定量PCR方法检测EBV DNA载量的变化。结果 22例鼻咽癌病人3个不同放疗阶段血清VCA-IgA抗体和EBV DNA水平比较差异均有显著性(F=3.305、9.461,P<0.05)。放疗结束后VCA-IgA抗体水平显著低于放疗前水平(t=2.081,P<0.05),而放疗1个疗程后与放疗前及放疗结束后相比差异均无显著性(P>0.05)。7例病人从治疗开始至治疗结束均未检测到EBV DNA,其余15例病人EBV DNA载量放疗前与放疗1个疗程及放疗结束后相比差异均有显著性(t=2.47、4.34,P<0.05),而放疗1个疗程和放疗结束后相比差异无显著性(P>0.05)。结论同时检测血清中EBV抗体及EBV DNA水平有助于鼻咽癌疗效监测及预后评估。     

重组EB病毒DNA酶的生物学特性及其应用的初步研究

经温度诱导含正向目的基因工程菌粗提液的ＤＮＡ酶活性比宿主菌本身的ＤＮＡ酶活性高７倍以上，且比等蛋白含量激发的Ｒａｊｉ细胞粗提液ＤＮＡ酶活性高２倍以上；阳性血清对重组ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＤＮＡ酶的中和率高达８３．５％；用重组酶粗提液和Ｒａｊｉ细胞ＤＮＡ酶检测的１０６例鼻咽癌（ＮＰＣ）病人血清抗ＥＢＶＤＮＡ酶抗体（ＥＤＡｂ）水平，结果无显著性差异，检出鼻咽癌的效率亦无显著性差异；表明重组酶经进一步提纯并标准化定量后可用于临床常规检测及大规模普查。     

鼻咽癌体外传代细胞株SUNE中EBV-LMP_1全基因的扩增

用长片段高保真度ＰＣＲ扩增系统（ｅｘｐａｎｄＴＭｈｉｇｈｆｉｄｅｌｉｔｙＰＣＲｓｙｓｔｅｍ）从鼻咽癌（ＮＰＣ）体外传代细胞株ＳＵＮＥ中扩增出ＥＢ病毒（ＥＢＶ）潜伏膜蛋白（ＬＭＰ１）全基因,经凝胶电泳分析和ＤＮＡ斑点杂交进行鉴定。扩增片段长度为３．４３ｋｂ,相当于Ｂ９５－８细胞ＥＢＶ基因序列位置为１７００３３～１６６６０８ｎｔ,包括ＬＭＰ１基因的上游启动子／增强子序列、ＬＭＰ１编码序列的３个外显子、两个内含子及下游ｐｏｌｙＡ信号序列。ＬＭＰ１全基因的扩增对于深入研究ＬＭＰ１基因的结构与功能以及ＬＭＰ１在ＮＰＣ发生发展中的作用机制具有十分重要的价值。     

鼻咽癌患者血清EB病毒DNA片段的检出及临床意义

目的：探讨鼻咽癌患者血清Epstein-Barr病毒(EBV)DNA片段检出率及其和EBV衣壳抗原IgA类抗体(VCA／IgA)的关系。方法：聚合酶链反应(PCB)加限制性内切酶酶切技术检测疱疹病毒的DNA，酶免疫组化技术检测EBV VCA／IgA抗体。结果：33例鼻咽癌患者中，抗体阳性率88％，DNA阳性率55％；对照组120例，仅1例检出EBV DNA片段。鼻咽癌患者中EBV DNA片段的检出率显著性高于对照组，但EBVDNA片段的检出率低于EBV VCA／IgA抗体的检出率。结论：进一步证实EBV与鼻咽癌有密切关系；EBV DNA片段及EBV VCA／IgA抗体检测，有利于鼻咽癌的辅助诊断。     

鼻咽癌高发区胃癌患者血清中EB病毒抗体水平分析

目的检测中山地区胃癌患者血清中爱泼斯坦-巴尔病毒(EB病毒)核抗原1-IgA(NA1-IgA)、EB病毒Zta蛋白IgA(Zta-IgA)、衣壳抗原-IgA(VCA-IgA),探讨EB病毒抗体在胃癌患者血清中的表达情况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对100例胃癌患者、200例健康体检者血清中NA1-IgA、Zta-IgA和VCA-IgA的水平进行测定。结果胃癌患者血清中三种EB病毒抗体总阳性率为21.00%,与健康体检者(7.00%)相比,差异具有统计学意义(P<0.001);EB病毒抗体阳性以低分化腺癌多见,双抗体(Zta-IgA和VCA-IgA)阳性的胃癌共有4例且均为低分化腺癌;在低分化腺癌与中高分化腺癌中,EB病毒抗体阳性率分别为25.00%(15/60)、16.67%(5/30)。结论胃癌患者血清中EB病毒抗体表达量升高,双抗体的阳性表达可能与胃癌的恶性程度相关,为EB病毒与胃癌的相关研究提供了参考依据。     

血清EB病毒抗体检测对鼻咽癌的临床诊断价值

0 引言 EB病毒是一种亲淋巴细胞的疱疹病毒,在人群中的感染很普遍,并与鼻咽癌的发病密切相关,绝大多数患者血清中有抗EB病毒抗体存在[1],抗体水平随着病情的发展和恢复而发生变化,是鼻咽癌的诊断、疗效判定和预后的可靠指标.     

人源性抗EB病毒IgG/VCA抗体在SCID小鼠中的诱导

将人外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）和腹腔淋巴结淋巴细胞（ＰＬＮＬ）移植入严重联合免疫缺陷疾病（ＳＣＩＤ）小鼠腹腔，２个月后，小鼠血清内产生人源性ＩｇＧ和抗ＥＢ病毒壳抗原ＩｇＧ抗体（ＩｇＧ／ＶＣＡ）。比较结果显示，用Ｂ９５－８细胞作为ＶＣＡ来源所诱导的实验组１０只小鼠，ＩｇＧ／ＶＣＡ阳性率为７０％（７／１０），对照组为１７％（２／１２）。ＩｇＧ／ＶＣＡ的几何平均滴度（ＧＭＴ）和血清ＩｇＧ浓度，在１４只ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠中为１∶１０８和（９６．２±５６．４）μｇ／Ｌ；在８只ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠为１∶７．８和（１３．８４±６．０）μｇ／Ｌ。该结果提示，ＳＣＩＤ－ＰＬＮＬ小鼠较ＳＣＩＤ－ＰＢＬ小鼠更适合用于人源性特异ＩｇＧ的诱导。     

鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的检测

目的探讨鼻咽癌患者外周血白细胞及血清中EB病毒DNA的分布及其与鼻咽癌的关系.方法采用多聚酶链反应检测24例鼻咽癌患者(实验组)及10例头颈部其它部位肿瘤(对照组-1)和10例慢性鼻咽炎患者(对照组-2)外周血白细胞及血清中EB病毒的DNA.同时采用免疫酶法检测以上各组患者血清中EB病毒VCA-IgA抗体的效价.结果发现实验组中10例患者外周血白细胞中EB病毒DNA为阳性,阳性率为41.67%(10/24).对照组-1阳性率为10%(1/10),对照组-2患者外周血白细胞中EB病毒DNA均为阴性.实验组与对照组-2比较阳性率差异有显著性(P＜0.05).在以上三组患者血清中EB病毒DNA均为阴性,三组间无差异.实验组VCA-IgA与对照组-1,对照组-2分别比较阳性率其差异均有显著性(P＜0.01).结论有些鼻咽癌患者外周血白细胞中可检测出EB病毒DNA.血清中未能检测出EB病毒DNA.鼻咽癌患者外周血白细胞EB病毒DNA的存在与血清VCA-IgA的效价之间有一定的关系.     

PCR法检测EB病毒基因及其与鼻咽癌发病的关系

目的　研究患者颈部转移性淋巴结中是否存在ＥＢ病毒。方法　①采用聚合酶链反应（ＰＣＲ） 技术检测５０ 例患者的颈部淋巴结穿刺液;②采用ＰＣＲ法检测１５ 例石蜡包埋鼻咽癌（ＮＰＣ） 组织;③对１２例ＥＢ病毒ＶＣＡＩｇＡ 抗体阳性患者血清进行ＥＢ 病毒基因检测。结果　①３０ 例ＮＰＣ 患者中,２７ 例ＥＢＶＤＮＡ 阳性（ 阳性率９０ ％ ） ;７ 例头颈部其他肿瘤患者中１ 例阳性（１４－３ ％ ） ;８ 例其他部位肿瘤患者中１ 例阳性（１２－５ ％ ） ;５ 例鼻咽部炎症患者ＥＢＶＤＮＡ 检测均为阴性。经χ２ 检验,ＮＰＣ 组与其他肿瘤及鼻咽部炎症组相比,阳性率差异有非常显著意义（ Ｐ＜ ０－００５） 。②１５ 例石蜡包埋ＮＰＣ 组织,ＥＢＶ基因阳性者有１２ 例（ 阳性率８０ ％ ） ;１ 例鼻咽部慢性粘膜炎石蜡包埋组织末检测到ＥＢＶＤＮＡ。③３ 例临床诊断为ＮＰＣ 的血清中均检测到ＥＢＶＤＮＡ（２５ ％ ） 。结论　对于隐性鼻咽癌和原发灶不明的颈部转移癌中确认是否为鼻咽癌,ＥＢ 病毒基因检测是有价值的,ＰＣＲ 技术可以为ＮＰＣ 的诊断和鉴别诊断提供参考依据。     

鼻咽癌患者外周血EB病毒抗体及DNA检测的研究

<正>鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国华南地区如广东、广西等地区。虽然目前采用放疗、化疗等综合治疗的方法可提高NPC病人的生存率,但大多数NPC患者就诊时就已出现颈淋巴结转移甚至远处转移,早期诊断和治疗非常重要。由于该病原灶病变隐蔽,易漏诊误诊,不易早期诊断,所以,筛选对诊断疾病、判断预后等具有较高敏感性和特异性的     

鼻咽癌患者外周血EB病毒DNA检测与肿瘤细胞凋亡的关系

[摘要] 目的 探讨用PCR方法从鼻咽癌外周血中检测EB病毒DNA的意义,以及与鼻咽癌组织凋亡之间的关系。方法 分别收集58例健康人外周血和50例鼻咽癌病人的外周血及其相应的肿瘤组织活检标本,用PCR方法分别检测血浆和单个核细胞中的EB病毒DNA,用TUNEL方法检测鼻咽癌细胞的凋亡情况。 结果 鼻咽癌患者外周血单个核细胞和血浆中的EB病毒阳性率均明显高于健康对照组。鼻咽癌患者外周血单个核细胞EB病毒阳性者的癌细胞平均凋亡指数明显高于阴性者,提示外周血单个核细胞中的EB病毒DNA与肿瘤细胞的凋亡有密切的联系。结论 鼻咽癌患者外周血EB病毒DNA可能为来源于局部肿瘤细胞的分子标记物,本研究为其进一步的的临床应用提供了理论基础。 [关键词] 疱疹病毒4型,人 鼻咽肿瘤 外周血 凋亡     

鼻咽癌患者血清中EB病毒四种特异性IgG抗体的测定

用间接免疫荧光法检测了２４例鼻咽癌患者与１１９例正常人血清中ＥＢ病毒４种特异性ＩｇＧ抗体，结果表明，正常人血清中ＥＢ病毒衣壳抗原（ＷＣＡ）的抗体效价为１：１６０以下，而鼻咽癌患者血清抗体效价为ｌ：１６０～１：５１２０，抗体阳性率均为１００％；正常人血清中ＥＢ病毒核抗原（ＥＢＮＡ）的抗体效价为１：８０以下，而鼻咽患者血清抗体价为１：８０～１：２５６０，阳性率均为１００％；正常人血清中ＥＢ病毒早期抗原（ＥＡ）的抗体效价为ｌ：１０，阳性率只有１３．３％，而鼻咽癌患者血清抗体效价为ｌ：２０～１：１２８０，阳性率为１００％；正常人血清中ＥＢ病毒抗原（ＭＡ）的抗体效价为１：１０～１：４０，阳性率为７１％，而鼻咽癌患者血清抗体效价为１：１０～１：３２０，阳性率为１００％．以上４种抗体中．ＶＣＡ、ＥＢＮＡ和ＥＡ抗体的效价和分布在正常人与鼻咽癌患者之间有明显差异（Ｐ＜姜勇男，男，３１岁，讲师．延吉市局子街２１号（１３３０００）０．０ｌ），ＥＡ抗体的阳性率也比正常人明显升高（Ｐ＜０．０ｌ），ＭＡ抗体的效价和阳性率与正常人相比无显著差异（Ｐ＞０．０５）。