促红细胞生成素预防人脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的 建立氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,探讨促红细胞生成素(EPO)对ox-LDL诱导HUVECs凋亡的影响.方法 取体外培养3～6代的HUVECs用于实验.实验分为两组:一组细胞予以不同浓度(6.25、50、100 kU/L)重组人促红细胞生成素(rhEPO)预处理24 h,再加入100 mg/L ox-LDL孵育48 h;另一组细胞加入反式或顺式LOX-1 mRNA预处理24 h,再加入 100 mg/L 的ox-LDL孵育12 h.采用存活率、凋亡率和Bcl-2/Bax比值评价细胞凋亡情况.结果 与ox-LDL组比较,随rhEPO浓度的递增,细胞存活率增高,细胞凋亡率降低,凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值增高(P均<0.05),呈剂量依赖性.反式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值较ox-LDL组明显增高(P<0.05);顺式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组Bcl-2/Bax比值与ox-LDL组则无明显差异.结论 ox-LDL可以诱导HUVECs凋亡,并且通过LOX-1 mRNA来调节,rhEPO可增高Bcl-2/Bax比值,抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡.     

促红细胞生成素及其检测

促红细胞生成素（erythropoietin EPO）,主要由肾脏近曲小管附近的细胞合成和分泌,它的基本生理功能是刺激骨髓红细胞的生成和释放。1985年,人们利用基因重组技术表达了重组人促红细胞生成素（rhEPo）,在临床上主要用于治疗肾性贫血以及肿瘤等各种慢性疾患所伴发的贫血。由于EPO能促进血液中红细胞数量的增加,从而提高血液的载氧能力,EPO也被竞技体育中某些耐力项目（如长跑、自行车、游泳、划船等）的运动员滥用,借以提高体能。而长期使用rhEPO对运动员来说,它可能会带来一时的荣誉,     

促红细胞生成素对尿毒症患者红细胞免疫功能的影响

本文应用重组人类促红细胞生成素治疗非透析患者，分别治疗前后红细胞Ｃ３ｂ受体花环率（Ｅ．Ｃ３ｂＲ）和红细胞免疫复合物花环率，结果表明，治疗后Ｅ．Ｃ３ｂＲ．Ｒ升高，Ｅ．ＩＣ．Ｒ下降，提示：ｒＨｕＥＰＯ可改善２尿毒症患者红细胞免疫功能。     

促红细胞生成素与红细胞生成的调控

促红细胞生成素 (Epo)是特异性作用于红系祖细胞的糖蛋白激素。近年来 ,重组人Epo已研究成功并应用于临床 ,加速了对Epo的基础及应用研究。本文综述了Epo的基因、蛋白质结构及生物学特性、Epo的产生部位与生成的可能调节机制 ;Epo受体的分子结构及Epo与受体结合后的信号传递途径     

雄性激素对促红细胞生成素疗效的影响

贫血是慢性肾功能不全患者常见的临床症状 ,通常采用注射促红细胞生成素 (以下简称促红素 )来治疗。为提高其治疗效果 ,我们于 1998年 1月～ 2 0 0 0年 8月对 5 4例慢性肾功能不全患者进行了雄性激素与促红素同用治疗肾性贫血的研究 ,以期提高促红素的疗效。1　资料与方法1.1　一般资料　 5 4例患者随机分为观察组和对照组。其中观察组 2 6例 ,男 18例 ,女 8例 ;平均年龄 39.2岁。 Hb(5 9.7± 5 .9) g/ L,红细胞压积 (Ht)为 (2 0 .7± 3.2 ) % ,BUN(2 8.7± 9.9) mmol/ L ,Cr (4 72 .1± 96 .2 )μmol/ L。对照组 2 8例 ,男 2 0例 ,女 8…     

促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡的影响

目的：观察给予外源性重组人红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后神经细胞凋亡的影响。 方法：实验于2005—03／06在解放军第四军医大学病理实验室进行。①取新生7dSD大鼠72只，随机分为3组（n=24），假手术组、模型组和促红细胞生成素组，各组又分为造模后6，24，48，72h组4个亚组，每组6只大鼠。②促红细胞生成素组和模型组大鼠结扎右颈动脉，手术后即刻分别腹腔内注射重组人红细胞生成素注射液（10U／g）及同体积生理盐水，手术后2h两组大鼠吸人体积分数为0．08氧气和体积分数为0.92氮气的混合气体2h，建立缺氧缺血脑损伤新生鼠模型及促红细胞生成素治疗模型。假手术组分离动脉不结扎，不缺氧。③各组大鼠在造模后相应时间点断头处死，采用TUNEL法检测大脑海马区神经细胞凋亡情况。 结果：经补充后72只进入结果分析。①模型组6h右侧海马CA1区出现凋亡细胞[（19．10&;#177;5．90）个]，24h显著增高，48h达高峰[（65．70&;#177;8．33）个]后逐渐下降，但72h仍高于假手术组[（28．70&;#177;5．74），（0．60&;#177;0．84）个，F=71．587，P〈0．01]。②促红细胞生成素组各个时间点CA1区的凋亡细胞数均少于模型组（P〈0．01），尤其在24h最明显[（28．20&;#177;7．77），（60．30&;#177;7．75）个，t=-9．251，P〈0．01]。 结论：外源性重组人红细胞生成素能抑制缺氧缺血性脑损伤后的神经细胞凋亡，对脑组织确有保护作用。     

促红细胞生成素对挫裂伤脑组织线粒体的影响

目的 探讨重组促红细胞生成素(rhEPO)对大鼠颅脑损伤后脑线粒体能量代谢以及线粒体呼吸功能的影响.方法 健康雄性SD大鼠63只,随机分为rhEPO治疗组(n=28):以自由落体法制作大鼠腑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射rhEPO 10 U/g,每10 h重复注射1次;对照组(n=28):同样脑挫裂伤模型,伤后立即腹腔注射相同剂量生理盐水;假手术组(n=7):只钻孔不致伤.采用生化检测的方法分别测定治疗组治疗后6 h、12 h、24 h和48 h及各自的对照组大鼠脑组织线粒体ATP酶和SOD的活性和MDA水平以及线粒体呼吸功能.各组数值进行F和t检验.结果 重组促红细胞生成素治疗后12 h、24 h和48 h治疗组大鼠脑组织线粒体ATP酶、SOD活性和呼吸功能均高于各自时间点对照组(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01),而MDA水平则明显低于各自对照组(P＜0.01).结论 重组促红细胞生成素可以通过影响线粒体能量代谢及呼吸功能而减轻大鼠创伤性脑损伤后的继发性脑损害.     

重组人促红细胞生成素对尿毒症患者血清瘦素水平的影响

目的观察重组人促红细胞生成素对尿毒症患者血清瘦素水平的影响.方法 30例尿毒症患者早八时抽空腹血,用酶标法测定重组人促红细胞生成素应用前及用药二周、四周、八周后的血清瘦素水平. 结果男(6.24±4.18)μg/L,女(9.86±5.86)μg/L;重组人促红细胞生成素应用前尿毒症患者血清瘦的水平为男(21.18±7.42)μg/L,女(29.04±6.48)μg/L;应用二周后为男(16.24±5.88)μg/L,女(20.28±6.36)μg/L;四周后为男(13.76±4.24)μg/L,女(16.82±5.25)μg/L;八周后为(14.84±6.496)μg/L,女(18.47±5.34)μg/L.结论尿毒症患者血清瘦素水平明显高于正常人;红细胞生成素的应用能够有效降低患者的血清瘦素水平、增加食欲、改善营养状态.     

维持性血液透析患者促红细胞生成素的应用

维持性血液透析患者均有不同程度的贫血，肾脏生成促红细胞生成素（EPO）的减少，是导致血透患者发生贫血的最主要原因。各种血液净化技术可以延长尿毒症患者的生命，但均不能明显改善贫血，而重组人促红细胞生成素（rHuEPO）在临床上的广泛使用，使肾性贫血得到了有效的病因治疗，是一种疗效确切的生物制剂。     

人脐静脉内皮胞细体外培养及鉴定

目的探索人脐静脉内皮细胞体外培养及鉴定的方法。方法采用0.1%Ⅰ型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,加入含10%胎牛血清及人AB血清的M1640培养基,在37℃,5%CO2孵箱中培养,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果原代培养细胞在接种4 h后开始贴壁生长,5～7 d后融合成单层,倒置相差显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,有接触抑制现象,免疫组化显示细胞胞浆中人Ⅷ因子相关抗原阳性。结论用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种可靠的方法,有助于体外研究血管内皮细胞模型的构建。     

银杏黄酮苷元对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素、LOX-1表达的影响

目的：探讨银杏黄酮苷元（ginkgetin aglycone,GA）对氧化低密度脂蛋白（oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素和植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（lectin—like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）表达的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分为对照组、ox-LDL组、LOX-1拮抗剂聚肌苷酸加ox-LDL混合刺激组（聚肌苷酸组）、不同含量GA加ox-LDL混合刺激组（GA6．25mg／L组、GA12．5mg／L组、GA25mg／L组和GA50mg／L）,通过逆转录聚合酶链式反应检测P-选择素mRNA和LOX-1mRNA表达,用ELISA检测各组培养基上清中P-选择素蛋白含量,辣根过氧化物酶免疫组织化学法检测LOX．1蛋白,并作比较。结果：OX-LDL上调内皮细胞P-选择素和LOX-1表达（P〈0．05）;6．25～50mg／LGA明显抑制OX-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA和LOX．1mRNA和蛋白表达（P〈0．05）;聚肌苷酸可部分或完全阻断OX-LDL诱导的内皮细胞P．选择素mRNA、LOX-1mRNA及其蛋白表达（P〈0．05）。结论：GA通过抑制LOX-1表达而降低内皮细胞合成和分泌黏附分子P-选择素,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

线粒体凋亡途经参与热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的研究

目的 观察细胞色素C、caspase-9和caspase-3在热应激后人脐静脉内皮细胞的表达及相互关系,阐明热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的信号转导机制,探讨重症中暑所致血管内皮损害的发病机理.方法 建立人脐静脉内皮细胞热应激模型,对照组将细胞置于标准37℃、5％ CO2细胞培养箱,热应激组将细胞置于39℃、41℃、43℃细胞培养箱中进行热应激2h,热应激后继续在细胞培养箱孵育24h.电子显微镜观察人脐静脉内皮细胞(37℃、43℃)线粒体改变,应用Annexin V-FITC/PI双染色方法检测不同温度热应激后细胞凋亡率、Western blot检测细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达.结果 电镜观察对照组(37℃)HUVEC细胞线粒体结构基本正常.热应激后(43℃)HUVEC细胞线粒体肿胀并出现结构改变;与对照组比较,39℃热应激对内皮细胞凋亡无明显影响(P＞0.05),随着热应激温度的增加人脐静脉内皮细胞凋亡明显增多(41℃17.8％,4 3℃25.6％)并且细胞色素C、caspase-9、caspase-3蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 线粒体通路的激活参与了热应激后人脐静脉内皮细胞凋亡的调控;血管内皮细胞凋亡可能与重症中暑的发病存在相关性.     

人脐静脉血管内皮细胞移植对脱细胞猪真皮早期血管化的影响

目的探讨脐带血管内皮细胞对脱细胞猪皮早期血管化的影响。方法将8只贵州小香猪的背侧去毛后对称性分为4个区,前后交叉分为两组:实验组(n=16),和对照组(n=16)。每个区均切除皮肤全层至深筋膜,造成大小为5cm×5cm的圆形皮肤缺损区域,然后移植脱细胞猪真皮封闭创口。实验组在脱细胞猪真皮下注射培养的人脐带静脉血管内皮细胞1ml,含2×106个细胞,对照组则不注射任何细胞。术后7d和14d分别在每个区切取脱细胞猪真皮不同部位的3个点以进行组织学和免疫组化检查,观察血管生成情况。结果第7天实验组血管数比对照组明显增加(P<0.01),第14天时实验组血管数仍然比对照组多,但没有统计学意义(P>0.05)。结论人脐静脉血管内皮细胞移植具有促进脱细胞猪真皮早期血管化的作用。     

烟酸抑制血管紧张素Ⅱ诱导的内皮细胞凋亡

目的探讨烟酸对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡的影响。方法分别使用不同浓度烟酸(0.25 mM,0.5 mM或1.0 mM)预处理HUVECs不同时间(1 h、3 h、6 h、12 h)后,使用血管紧张素Ⅱ(1μM)诱导HUVECs凋亡。终端转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL法)检测内皮细胞的凋亡指数;H2DCF-DA荧光标记法测定细胞内氧自由基(ROS)的生成。结果预处理一定时间后,烟酸能抑制血管紧张素II诱导的HUVECs的凋亡,而且这种抑制呈浓度依赖性。HUVECs在使用1 mM烟酸预处理6 h后,血管紧张素II加烟酸(AngII+Niacin)组与血管紧张素Ⅱ(AngII)组相比,ROS的生成有明显降低(P<0.05)。结论烟酸能抑制AngII诱导的HUVECs凋亡,抑制ROS生成是可能的机制之一。     

抑制胞浆型磷脂酶A2活性对内毒素诱导人脐静脉内皮细胞分泌瘦素的影响

目的 通过改变胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的活性,检测细菌脂多糖(LPS)及Ca2+载体A23187诱导的人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)上清液中瘦素(Leptin)水平的变化,探讨在体外炎症状态下cPLA2活性与细胞分泌Leptin的关系.方法 体外培养ECV-304细胞.实验1:将细胞分为空白对照组,LPS 3个浓度5、10、20 μg/ml刺激组,Ca2+载体A23187 3个浓度0.1、 1.0、10.0 μmol/L刺激组共7个组,分别作用6、12、24 h后收集上清液.实验2:根据实验1结果将细胞分为空白对照组,LPS 20 μg/ml刺激组,cPLA2特异性抑制剂AACOCF3 3个浓度0.1、1.0、10.0 μmol/L与LPS合用刺激组,丝裂素活化蛋白激酶上游激酶1/2(MEK1/2)抑制剂 U0126 3个浓度0.1、1.0、5.0 μmol/L与LPS合用刺激组共8个组,在LPS刺激前1 h加入AACOCF3或U0126,LPS刺激24 h后收集上清液.采用放射免疫分析法检测Leptin水平.结果 实验1:随LPS刺激浓度增加和时间延长,细胞释放Leptin浓度逐渐减少,LPS 20 μg/ml组作用24 h后Leptin浓度(ng/ml)较空白对照组显著下降(0.540±0.109比0.823±0.048,P<0.05).但A23187对细胞分泌Leptin并无显著影响.实验2:LPS刺激能使细胞分泌Leptin浓度(ng/ml)明显下降(0.558±0.069比0.825±0.067,P<0.05);而用不同浓度AACOCF3或U0126干预后,细胞分泌Leptin的浓度(ng/ml)有所回升,且呈浓度依赖性(AACOCF3 0.1、1.0、10.0 μmol/L组分别为0.673±0.135、 0.723±0.055、 0.797±0.062;U0126 0.1、 1.0、5.0 μmol/L组分别为0.698±0.112、 0.862±0.184、0.935±0.145),AACOCF3 1.0 μmol/L、10.0 μmol/L组和U0126 1.0 μmol/L、5.0 μmol/L组Leptin浓度均显著高于LPS 20 μg/ml刺激组(均P<0.05).结论 在由LPS诱导的体外炎症状态下,Leptin的分泌与cPLA2的活性具有一定的关系.

Abstract：

Objective To determine Leptin levels in supernatant fluid of culture of human umbilical vein endothelial cells (ECV-304) after being challenged by lipopolysaccharide (LPS) and calcium ion vector A23187, and to explore the possible relation between Leptin release and cytosolic phospholipase A2 (cPLA2) activity in an inflammatory cell model. Methods ECV-304 cells were cultured in vitro. Experiment 1: the cells were divided into seven groups: blank control group, LPS 5, 10, 20 μg/ml stimulation groups, A23187 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L stimulation groups. The supernatants were collected at 6, 12 and 24 hours. Experiment 2: according to the results of experiment 1, the cells were divided into eight groups: blank control group, LPS 20 μg/ml stimulation group, the inhibitor of cPLA2 AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, the inhibitor of mitogen-activated protein/extracellular signal-regulated protein kinase kinase 1/2 (MEK1/2) U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L plus LPS stimulation groups, with AACOCF3 or U0126 added 1 hour before the addition of LPS, and the supernatants were collected 24 hours after the addition of LPS. Leptin level was determined by radioimmunoassay. Results Experiment 1: with increase in LPS concentration and prolongation of time, Leptin release was decreased gradually. After 24 hours of interaction the concentration of Leptin (ng/ml) in LPS 20 μg/ml group was decreased significantly compared with the blank control group (0.540±0.109 vs. 0.823±0.048, P<0.05). However, A23187 had no significant effect on Leptin release. Experiment 2: LPS rendered cells to release less Leptin (ng/ml: 0.558±0.069 vs. 0.825±0.067, P<0.05); by adding AACOCF3 or U0126 in different concentration before adding LPS rendered the cells to release more Leptin (ng/ml), and it showed concentration-dependent (the AACOCF3 0.1, 1.0, 10.0 μmol/L groups were 0.673±0.135, 0.723±0.055, 0.797±0.062, respectively; the U0126 0.1, 1.0, 5.0 μmol/L groups were 0.698±0.112, 0.862±0.184, 0.935±0.145, respectively). The release of Leptin in AACOCF3 1.0 μmol/L, 10.0 μmol/L and U0126 1.0 μmol/L, 5.0 μmol/L groups was significantly higher than LPS 20 μg/ml stimulation group (all P<0.05). Conclusion There is a possible relation between Leptin release and cPLA2 activity in inflammatory cells induced by LPS.     

低密度、氧化低密度脂蛋白对内皮细胞分泌内皮素的影响

目的 观察低密度脂蛋白（LDL）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对内皮细胞分泌内皮素（ET）的影响，以及后者在体外是否对前者具有氧化修饰作用.方法 采用不同浓度的LDL、ox-LDL及LDL＋ox-LDL与脐静脉内皮细胞株ECV-304进行孵育，24 h后分别收集细胞和上清液，采用放免分析法测定ET含量.结果 LDL、ox-LDL均能促进内皮细胞合成、分泌ET，但ox-LDL的作用更显著，而LDL＋ox-LDL组上清ET浓度大于两者单独作用之和.结论 LDL、ox-LDL均能促进内皮细胞合成、分泌ET，但后者的作用更为明显，且在体外对LDL具有氧化修饰作用。     

红花黄色素对内皮细胞增殖及凋亡的保护作用

目的通过LPC诱导建立体外再狭窄内皮细胞模型并探讨红花黄色素对对血管内皮细胞的保护作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs）,分为：（1）正常对照组,（2）溶血卵磷脂（LPC）组,（3）低浓度红花黄色素组（50 mg/L）,（4）高浓度红花黄色素组组（100 mg/L）。分别观测内皮细胞增殖、凋亡及上清液一氧化氮（NO）浓度的的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,降低NO浓度。红花黄色素干预LPC对内皮细胞的作用,使内皮细胞增殖增强,细胞凋亡减少,NO浓度升高。结论红花黄色素可改善LPC对HUVECs的影响,使内皮细胞增殖增强,凋亡减少,升高NO浓度。     

尿毒症血清促进脐静脉内皮细胞活性氧、白介素-6的产生及左旋肉毒碱的干预作用

目的观察体外尿毒症血清环境诱导的脐静脉内皮细胞（HUVEC）活性氧（ROS）及白介素-6（IL-6）的产生及左旋肉毒碱（L—CN）对它们的影响。方法以2、7-二氢二氯荧光素染色（DCFH）和荧光分光光度计法检测ROS强度，RT—PCR和ELISA方法检测IL-6表达，观察尿毒症血清对HUVEC的影响和不同浓度L—CN（25μM．250μM，1000μM，2500μM）的干预作用。结果尿毒症血清环境能使细胞内ROS产生及IL-6表达明显增加；而L—CN可明显抑制尿毒症血清环境中细胞内ROS产生及IL-6表达，且有浓度依赖效应。结论尿毒症血清促使血管内皮微炎症状态的建立，L—CN可抑制其组织活性氧及白介素-6的产生，减轻尿毒症患者慢性炎症反应，对血管粥样硬化病变可能有延缓作用。