新型快速流行性感冒病毒抗原检测方法免疫荧光法在流行性感冒筛查中的应用价值研究

背景　与核酸检测相比,传统快速流行性感冒（流感）病毒抗原检测方法灵敏度偏低,因此需要探索新的流感快速检测方法。目的　探讨免疫荧光法流感病毒抗原检测在流感筛查中的临床应用价值。方法　分别于2017年7-12月、2019年1-2月选取北京大学第三医院感染疾病科发热门诊收治的患者472例,采集其鼻咽拭子。采用免疫荧光法流感病毒抗原检测试剂盒读取仪器（简称Sofia）和传统快速流感抗原检测方法（免疫渗滤法和胶体金法）、流感病毒核酸检测实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）进行病原学检测。结果　472例患者采用RT-PCR方法共检出甲型/乙型流感292例（61.9%）,其中甲型流感195例（41.3%）,乙型流感94例（19.9%）,另有3例同时检出甲型流感和乙型流感。472例患者采用免疫荧光法共检出甲型/乙型流感262例（55.5%）,其中甲型流感169例（35.8%）,乙型流感93例（19.7%）。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型/乙型流感的灵敏度依次为89.0%、82.9%、84.6%,特异度依次为98.9%、97.2%、93.3%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测甲型流感的灵敏度依次为85.4%、79.3%、79.3%,特异度依次为100.0%、99.3%、97.1%;免疫荧光法、免疫渗滤法、胶体金法检测乙型流感的灵敏度依次为93.8%、87.6%、89.7%,特异度依次为99.5%、99.2%、97.3%。以RT-PCR方法为金标准,免疫荧光法对甲型H1流感、甲型H3流感、乙型流感的检出阳性符合率分别为91.8%（56/61）、84.7%（111/131）、94.8%（91/96）。16~20岁、21~40岁、41~60岁、>60岁患者中,免疫荧光法对甲型/乙型流感检测的灵敏度依次为95.6%、90.2%、87.2%、78.4%,特异度依次为100.0%、98.2%、100.0%、100.0%。结论　与传统快速流感病毒抗原检测方法比较,免疫荧光法在甲型/乙型流感的检测中表现出更高的灵敏度,在流感筛查中有一定应用前景。     

免疫渗滤与胶体金快速检测在筛查甲型流感中诊断效率分析

目的 评价胶体金和免疫渗滤法在筛查临床甲型流感病毒感染中的诊断效率.方法 收集2009.6～2009.10我院发热门诊流感样病例咽拭子标本297例,分别用免疫渗滤法和胶体金法进行快速检测,同时采用实时荧光定量PCR和测序进行验证,以评价两种方法的诊断效率.结果 在实时荧光定量PCR法及测序证实为甲型流感166份,其中免疫渗滤法灵敏度为54.82%(91/166),与PCR法符合率为66.67%,Kappa值为0.35;胶体金法灵敏度为4.22%(7/166),符合率为45.79%,Kappa值为0.02;在131份甲型流感病毒阴性的标本中,免疫渗滤法特异性为81.68%(107/131),胶体金法特异性为98.47%(129/131);在实时荧光定量PCR检测为甲型H1N1阳性的99份标本中,免疫渗滤法检出率为67.3%,胶体金检出率为5.1%;在两种方法结果不符合108份标本中,免疫渗滤法阳性而胶体金阴性的标本107份,实时荧光定量PCR法并序列测定显示其中84份为甲型流感病毒阳性,23份为阴性:免疫渗滤法阴性而胶体金阳性的1份标本,甲型流感病毒实时荧光PCR检测为阴性.免疫渗滤法在甲型流感病毒的检出率和与PCR方法的符合率方面明显高于胶体金法(P＜0.05).结论 免疫渗滤法在甲型流感病毒筛查中优于胶体金法,显示出良好的临床应用前景.     

酶联免疫法和胶体金法测定HBsAg的比较

目的比较酶联免疫法和胶体金免疫层析法测定乙肝表面抗原的结果,为实验室工作提供参考。方法对我站10493份血清标本分别采用酶联免疫法和胶体金免疫层析法测定乙肝表面抗原,对结果进行比较分析。结果酶联免疫法和胶体金免疫层析法的检测阳性率分别为0.48%、0.40%,两者比较无显著性差异(χ2=0.6987,P0.05);两种方法检测标本符合率为99.81%,胶体金试纸法的灵敏度为72.00%,特异度为99.94%。结论酶联免疫法和胶体金免疫层析法均为测定乙肝表面抗原的可靠方法,但胶体金免疫层析法的灵敏度有待提高。     

一种快速检测甲型流感病毒的方法

目的 开发一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法（GICA）的试剂盒，以用于对甲型流感病毒的检测。方法以柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗甲型流感病毒内部抗原的单克隆抗体。硝酸纤维素膜上包被两种抗甲型流感病毒单克隆抗体的混合液，制成免疫层析试纸。待测样品中的甲型流感病毒首先与胶体金标记抗体结合，后移动至硝酸纤维素上与固定的单克隆抗体发生反应，形成肉眼可见的红色带。结果GICA试纸条与甲1型和甲3型流感病毒共16种毒株均能发生特异性反应，与乙型流感病毒、副流感病毒、腺病毒和呼吸道合胞病毒无交叉反应。用三种不同甲型流感病毒毒株的不同浓度标本与美国同类经过FDA批准的产品比较，灵敏度相同。结论GICA试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求，并具有简便快速、无需特殊仪器设备等优点，对甲型流感的诊断和流行病学调查具有十分重要的应用价值。     

人用甲型H1N1流感疫苗两种免疫方法动物免疫效果比较

目的：比较甲型H1N1流感疫苗0 d一针免疫方法与0、21 d二针免疫方法的免疫效果,同时观察季节性流感疫苗免疫后是否对甲型H1N1流感病毒具有交叉保护性。方法：用甲型H1N1流感疫苗分别按0 d一针及0、21 d二针2种免疫方法免疫BALB／c小鼠,首针免疫后14、21、28、35及42 d眼眶采血分离血清,用血凝抑制(HI)法测定小鼠血清中甲型H1N1特异性抗体滴度,比较2种免疫方法的免疫效果。用季节性流感疫苗免疫小鼠,14、28 d后采血分离血清,用甲型H1N1流感病毒特异性抗原采用HI法测定季节性流感疫苗抗血清是否能甲型H1N1流感病毒特异性抗原进行非特异性结合。结果：二针免疫的方法在第21天加强免疫一次后,第28、35及42天时抗体滴度明显高于一针免疫方法的抗体滴度,且第42天时的抗体滴度约为一针免疫方法抗体滴度的4倍。用甲型H1N1流感病毒特异性抗原采用HI法测定季节性流感疫苗抗血清,未测出甲型H1N1交叉抗体。结论：0、21 d二针免疫的方法在第28天后抗体滴度仍保持较高的水平,明显高于0 d一针免疫的方法。季节性流感疫苗对甲型H1N1流感病毒无交叉免疫保护性。     

常见市售流感病毒抗原试剂对 H6N2 H7N3 H9N2禽流感病毒检测效果的比较

目的：比较4种商品化的甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原的检测效果。方法：以H6N2、H7N3、H9N2禽流感毒株作为检测毒株,以倍比稀释法将毒液稀释成不同浓度,严格按照试剂盒说明进行操作,观察这4种试剂盒（3种胶体金法和1种免疫渗滤法）对甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒株的检出情况并比较其对毒株的检测下限。结果：4种试剂盒均可检测出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原,检测下限范围（ log10 TCID50/mL）分别为国产1：1．6～2．4,国产2：3．3～4．1,国产3：3．3～4．1,进口：2．3～2．8。结论：4种试剂盒均可检出甲型H6N2、H7N3和H9N2禽流感病毒抗原;国产1的检测效果较好,操作简便快捷。这些检测试剂都可考虑作为禽流感可疑病例的筛查使用。     

惠州市门诊流感患者病毒抗原流行特征分析

目的分析惠州市某三甲综合医院门诊患者流感病毒抗原快速检测结果,了解门诊患者流感病毒抗原流行特征,为医院流感诊治、疫情报疫和医院感染防控提供科学依据。方法收集门诊流感样病例胶体金免疫层析法流感病毒抗原检测结果及就诊数据。结果 49 401份咽拭子标本,流感病毒抗原阳性检出9 651份(阳性率19.54%),甲型、乙型和混合流感抗原阳性率分别为10.85%、5.43%和3.26%;不同性别流感病毒抗原检出率差异无统计学意义(P>0.05),但其抗原构成存在差异;不同年份的流感病毒抗原阳性检出率差异有统计学意义,2016、2017和2018年阳性率分别22.57%、19.32%和5.61%,呈逐年下降趋势;不同年龄段,流感病毒抗原阳性检出率差异有统计学意义(P<0.05),年龄段5～岁最高,为24.46%,15～岁次之,为21.66%,≥60岁最低为12.89%;混合流感抗原构成占比以年龄段0～最高,为33.42%,并随着年龄的增加,检出率下降,儿童混合流感病毒抗原检出率远超成年人;流感病毒抗原检出情况与流感流行趋势一致,呈现明显的季节性差异,存在交叉或共同流行的特征。结论应用胶体金免疫层析法检测流感病毒抗原结果,有利于为流感早期诊断和抗病毒用药提供临床依据,为医院流感疫情流行提供风险预警,对于医院流感诊治、疫情上报和预防控制具有重要意义。     

甲型H1N1流感病毒的分子特征

当前新型甲型H1N1流感病毒的暴发,引起全球的关注。本文对甲型H1N1流感病毒的分类地位、结构特征、基因复制、蛋白功能进行介绍,说明新型甲型H1N1流感病毒是甲型流感病毒通过抗原漂移和抗原转换所产生的,对奥塞米韦(达菲)敏感,但对金刚烷胺有抗药性。     

金免疫层析法检测人群甲型流感病毒抗原阳性率

目的:分析讨论金免疫层析法检测人群甲型流感病毒抗原阳性率。方法:本研究内所讨论的1000例患者均随机选取于2013年3月至2015年我院所收治的甲型流感病毒患中,1000例患者鼻咽拭子样品均接受金免疫层析法进行检测,分析其检测结果。结果:1000份样品中,经检测后共检出甲型流感病毒抗原阳性67份,阳性率为6.7%;1000份内包含女性阳性率为6.74%,男性阳性率为6.65%(29/436);将1000份标本依据年龄段分为五个阶段分别为:55岁为3.95%(6/152)、31-50岁为5.93%(16/270)、21-30岁组为7.93%(33/416)、11-20岁组为7.84%(12/153)、0-10岁组为0.00%(0/9)。结论:金免疫层析法检测人群甲型流感病毒抗原阳性状况具有快速性,在监测和筛查甲型流感病毒疾病预防控制蔓延上存在重要价值。     

甲型H1N1流感大流行期早期临床诊断的研究

目的:观察甲型H1N1流感大流行期早期临床诊断的问题。方法:在具有流感样症状的甲型流感病毒抗原检测阳性的患者200例中,按体温以38.0℃为界限分为两组,每组随机选择30例,采样送咸阳市疾控中心用RT-PCR(反转录聚合酶链反应)的方法行甲型H1N1流感的病毒核酸检测。结果:体温在38.0℃以上组甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性率100%,体温在38.0℃以下组甲型H1N1流感病毒核酸检测阳性率30%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:具有流感样症状的患者,甲型流感病毒抗原检测阳性加上体温在38.0℃以上可以作为大流行期甲型H1N1流感临床诊断,尽快采用奥司他韦进行抗病毒治疗,值得推广应用。     

荧光PCR仪检测甲型H1N1流感病毒DNA结果分析

目的探讨一种甲型H1N1流感病毒的快速检测方法。方法对650名疑似甲型H1N1流感病例采集鼻拭子、咽拭子混合标本,采用胶体金现场快速诊断法和核酸检测分析。结果共检测甲型H1N1流感疑似病例650例,其中经PCR确诊的甲型H1N1流感病例120例。部分确诊病例经复核准确率达100%。结论荧光PCR检测甲型H1N1流感病毒快速、准确,值得推广。     

2009年新型甲型H1N1流感病毒非结构蛋白基因进化分析

目的:探讨2009年新型甲型H1N1流感病毒的非结构蛋白(NS)基因进化规律。方法:从NCBI下载2009年新型甲型H1N1流感病毒以及北美、欧洲、亚洲地区以往流行的甲型H1N1流感病毒NS基因序列,利用Molecular Evolutionary Genetics Analysis version 4.0(MEGA 4.0)软件对所选序列进行基因进化分析,并用NJ法构建进化树;对2009年新型甲型H1N1流感病毒NS基因核苷酸序列同源性及编码蛋白氨基酸序列进行分析。结果:2009年新型甲型H1N1流感病毒NS基因来源于猪A/H1N1流感病毒,与2005~2007年猪A/H1N1流感病毒具有较高的同源性(97.5％~97.6％),与1930~2007年猪A/H1N1流感病毒具有明显的时间进化关系;其重要抗原及拮抗宿主抗病毒能力的氨基酸位点基本没有变异。结论:2009年新型甲型H1N1流感病毒NS基因来源于猪A/H1N1流感病毒,NS基因编码蛋白拮抗宿主抗病毒能力并没有改变。     

胶体金免疫层析法快速检测流感病毒应用研究

目的:观察胶体金免疫层析(GICA)法检测流感病毒的效果.方法:用间接免疫荧光法(IFA)作为"金标准",比较GICA与IFA两种方法对同一份标本甲型及乙型流感病毒检测效果,对GICA法诊断试验做出评价.结果:两种方法的检测结果有较好的一致性,GICA法检测流感病毒与IFA法检测结果之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:GICA法操作简单、方便、快速,特异、灵敏,在临床流感病毒抗原的检测中具有较好的应用价值.     

惠州市2009～2012年甲型H1N1流感流行状况调查

目的 了解惠州市甲型H1N1流感流行状况,为有效防控甲型H1N1流感提供参考依据. 方法 运用描述流行病学方法分析2009～2012年惠州市甲型H1N1流感流行状况;用血清流行病学方法调查惠州市人群甲型H1N1流感病毒的感染水平. 结果 2009 ～ 2012年惠州市流感监测哨点医院的平均ILI就诊百分比(ILI％)为7.88％,共报告甲型H1N1流感279例.采集鼻咽拭子2 230份,甲型H1N1流感核酸检测阳性219份,阳性率为9.82％,阳性率最高的年龄组为15～岁组(24.45％),最低的年龄组为0～岁组(3.43％).三次横断面调查共抽取调查对象480人,甲型H1N1流感病毒抗体阳性人数121人,阳性率为25.21％.三次调查抗体阳性率分别为30.0％,36.25％和9.38％,人群甲型H1N1流感抗体阳性率在年龄、性别及职业间差异有统计学意义(P＜0.05);接种过甲型H1N1流感疫苗和未接种过甲型H1N1流感疫苗之间的抗体阳性率差异有统计学意义(x2=71.76,P＜0.05). 结论 惠州市甲型H1N1流感疫情通过采取综合性措施得到有效防控,今后应定期在人群中开展流感病毒抗体监测,以便了解人群对流感流行株的免疫保护和病毒抗原变化,为防控流感提供重要依据.     

检测甲型H1N1流感病毒富集方法的初步探索

目的探索甲型H1N1流感病毒的富集方法,提高流感病毒核酸检测的灵敏度。方法分别用ProteinA/G及H1N1特异性血清处理流感病毒样品,根据国家流感中心设计的H1N1亚型检测通用引物,采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,扩增产物为527bp,来评价病毒的富集效果。结果两种富集方法均能提高检测灵敏度,用ProteinA/G富集处理后检测灵敏度可达10-6,用H1N1特异性血清沉淀富集处理后灵敏度为10-5。结论初步建立的富集甲型H1N1流感病毒方法,有效提高了流感病毒RT-PCR检测的灵敏度,可用于甲型H1N1流感病毒的检测。     

胶体金免疫层析法和ELISA法在HBsAg检测中的方法学评价

目的：对胶体金免疫层析法（GICA）和ELISA两种方法检测HBsAg进行方法学比较。方法：用胶体金纸条和ELISA试剂同时检测HBsAg血清标本。结果：与ELISA相比,胶体金免疫层析法检测HBsAg的灵敏度为96%,特异性为100%。胶体金免疫层析法与ELISA相比特异性基本一致,但胶体金免疫层析法灵敏度稍差。结论：HBsAg胶体金纸条与ELISA试剂相比有较高的特异性,但灵敏度有待于进一步提高。     

福州市甲型H1N1流感病毒血凝素基因遗传特性研究

目的探究福州市甲型H1N1流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因的遗传变异特点及种系进化分布,为研究甲型H1N1流感病毒进化、致病性和流行规律提供科学依据。方法采用MDCK细胞培养法和real-time PCR法进行流感病毒分离、鉴定。采用逆转录-聚合酶链反应扩增流感病毒血凝素基因,扩增产物经纯化后,进行血凝素基因HA区核苷酸序列测定并推导出其氨基酸序列,然后用DNASTAR MegAlign序列分析软件进行基因种系进化特性分析。结果福州市甲型H1N1流感病毒与参考株A/California/04/2009相比具有高度同源性,HA蛋白有4个位点氨基酸发生了替换,与猪流感代表株A/swine/Iowa/15/1930(H1N1)存在6个HA抗原决定簇位点变异。福州市甲型H1N1流感病毒株都有8个糖基化位点,其中6个位于HA1区,分离株HA蛋白不具有多碱基裂解位点,具有低致病性流感病毒特点。与美国流感病毒A/California/04/2009(H1N1)株共聚类为一个独立的小分支,进化关系最近,甲型H1N1流感病毒的HA源于古典型猪H1N1流感病毒,与A/swine/Iowa/1/1976(H1...     

对比3种不同免疫检验方法检测HIV抗体结果的可靠性

目的 对比酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测人体免疫缺陷病毒(HIV)抗体的可靠性.方法 选取2018年9月至2020年9月于本院检测确诊为HIV的143例患者,采集血液样本,分别行酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法、化学发光法检测,对比HIV抗体的检测结果.结果 酶联免疫吸附试验检测HIV抗体灵敏度为92.78％,特异度为93.48％,准确率为93.01％;胶体金免疫层析法检测HIV抗体灵敏度为91.75％,特异度为84.78％,准确率为89.51％;化学发光法检测HIV抗体灵敏度为98.97％,特异度为95.65％,准确率为97.90％;化学发光法检测HIV抗体的灵敏度高于酶联免疫吸附试验和胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05);酶联免疫吸附试验、化学发光法检测HIV抗体的特异度、准确率均高于胶体金免疫层析法,差异有统计学意义(P<0.05).结论 化学发光法检测HIV抗体效能更高,疾病筛查时可有效避免漏检发生,值得临床推广运用.     

江门市新会区居民甲型H1N1流感病毒抗体水平调查

目的了解新会区居民对甲型H1N1流感的免疫水平。方法采用多阶段分层随机抽样方法,三次分别在新会区的城镇和农村对不同年龄人群进行问卷调查并采集血清检测甲型H1N1流感病毒抗体。结果三轮调查共抽样480人,抗体阳性107人,阳性率为22.29%。不同年龄组中4~6和7~19岁阳性率分别为30.00%和31.77%,高于其他年龄组（χ2=26.75,P〈0.05）。疫苗接种组抗体阳性率高于未接种疫苗组。有症状和无症状者的抗体阳性分别为25.72%和18.83%,差异无统计学意义（χ2=3.47,P〉0.05）,抗体阳性者中42.06%没有出现过任何流感症状。结论新会区已经有22.29%人群具有甲型H1N1流感病毒抗体,人群中已经建立一定的免疫屏障。     

肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

目的采用ELISA技术,建立肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia)抗原检测方法。方法制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测。结果本方法可以检测毒株的1/212的稀释样品,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)、肺炎衣原体无特异性反应。结论本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断。